葡萄酒中乙醇含量的气相色谱法测定

葡萄酒中有害成分及其检测方法随着人民生活水平的日益提高，葡萄酒因具有现代人追求的口味以及具有的多种保健功能，越发受到广大消费者的青睐。

然而，在巨大的市场利益驱动下，一些不法商贩则通过使用较少的葡萄原料，在葡萄汁中添加色素、甜味剂、防腐剂等制成葡萄酒诓骗消费者，此举导致如今的葡萄酒市场鱼龙混珠，真假难辨。

此外，也有一些葡萄酒企业为了节约成本，在葡萄酒检测方面节约成分，且在质检方面蒙混过关，这使得葡萄酒中存在一些有害成分（如甲醇、氰化物、重金属、农药残留等），这也对消费者构成极大的健康威胁。

所以，为了保证葡萄酒行业的健康发展，对葡萄酒中有害成分进行分析及检测至关重要。

根据国家标准规定，及质检部门在对一些企业葡萄酒进行检测时，发现在不合格葡萄酒中可能存在或者含量超标的有以下几种物质：添加剂（包括色素、甜味剂、防腐剂等）、甲醇、氰化物、重金属、农药残留等。

下面就每种物质的存在形式及检测方法分别阐述：1.添加剂GB2760-2011《食品添加剂使用标准》对食品添加剂的定义是：“为改善食品品质和色、香、味，以及为防腐、保鲜和加工工艺的需要而加入食品中的人工合成或者天然物质。

营养强化剂、食品用香料、胶基糖果中基础剂物质、食品工业用加工助剂也包括在内”。

我国国家标准GB15037-2006《葡萄酒》规定葡萄酒中不得添加：合成着色剂、甜味素、香精、增稠剂。

2007 年中央电视台曝光的《变了味的葡萄酒》以及2010年底中央电视台“焦点访谈”曝光的河北省昌黎县葡萄酒制假售假事件，更是暴露出葡萄酒行业中存在滥用食品添加剂的现象。

因此，需要我们重视葡萄酒中添加剂的使用情况，建立葡萄酒中添加剂的检测体系，保证葡萄酒的安全。

目前常用对葡萄酒中添加剂的检验主要的方法有：紫外可见分光分光光度法、薄层色谱法、高校液相色谱法、气相色谱分析法、极谱分析法。

2.甲醇甲醇是一种对人体健康有严重危害的物质，甲醇在体内分解较慢，有蓄积作用，视神经对甲醇的毒性很敏感，7-8mL即可引起失明，30-100mL可能使人致死。

气相色谱定量分析葡萄酒的样品处理方法葡萄酒中一些高挥发性物质和含量足够大的物质，可用直接注射酒样的方法定量，但对分子量再大一些且含量不太大的物质来说，就必须进行样品的制备。

下面简要介绍一些常用的样品处理方法。

一、用通氮气法定量酯研究葡萄酒的芳香物质，必然要分析游离于酒液表面上的蒸气，然而这些自然挥发物质绝大部分含量很小，虽然人的嗅觉器官能感觉到它，但对采用直接注射法来进行气相色谱分析而言，不具备足够大的浓度，我们可以用一种叫“空腔”（hand space）技术，即於酒中通氮气，使那些蒸气压较高的物质被带出来，然后被收集在一个冷却捕集器中，这就有足够大的浓度进行气相色谱分析了。

这种技术也称惰性气体萃取技术。

采用惰性气体技术，与惰性气体性质、气体流量、完成萃取的负压、酒样的体积、酒样的温度、捕集器的类型及数目、萃取持续的时间等因素有关。

一般来说，用氮气作为载体来萃取比用氦气和二氧化碳气好；酒样的酒精度调整为10度；萃取时间不宜过长，半小时或一小时即可；捕集器用0℃和－80℃两个冷阱；用磷酸氢二钠饱和酒样比用氯化钠饱和对酯类的萃取更准确；对六个碳以上的乙酯定量，需用分子量较高的第二个内标准，选用célanèse柱，用2－甲基丙基2－甲基丙酯做内标。

用氮气萃取酒中的挥发性物质是不能全部被萃取出来的，萃取物浓度和在酒中它的原始浓度之间有一个浓度系数，需要配制对照液来测定这一浓度系数。

二、用溶液分层法（Demixtion）定量高级醇用通氮气法定量挥发性物质，对10个碳的乙酯来说，可以获得足够的浓度，但它不适合于定量高级醇。

对高级醇还是采用老的溶液分层法，并可同时定量己酸乙酯和丁二酸二乙酯。

一般溶液分层法是加入有机溶液和盐类，使酒样分成有机相和水相，其实对含有10%乙醇的酒，不加有机溶剂也可得到溶液分层，但要用盐来调节酒的pH，所用盐是铵的中性硫酸盐和钠的酸性磷酸盐。

在50ml的直长颈容量瓶中，加入37ml的乙醇浓度被调为10%的酒，而且已加入2%体积的内标溶液（浓度为5g/L的5－甲基己醇－2），加入5g无水磷酸氢二钠，溶解后，加入20g中性硫酸铵，用5mm的搅拌器在电磁搅拌下完全溶解，在这一操作过程中，容量瓶被浸入25℃的水溶中，分层从开始到结束用2小时，有机相聚集在容量瓶的颈部，抽取2µl的有机相直接注入F.F.A.P 4米柱进行分析。

测验科目：遗传学〔答案必需写在答题纸上，写在试题上不给分〕一、名词解释(每题2分，共20分)1．同源重组(homologous recombination)2．外显子捕获(exon trapping)3．反式剪切〔trans splicing〕4. 营养缺陷型〔auxotrophy〕5.细菌人工染色体〔bacterial artificial chromosome, BAC〕6.渗漏突变〔leaky mutation〕7．非保守性替代〔non-conservative substitution〕Bp4298.亚倍体〔hypoploid〕9.表不雅遗传学〔(epigenetics)10. DNA解旋酶〔helicase〕…………………………..…………………………..二、填空题〔每空2分，共30分〕1．染色质是指真核生物细胞核分裂期间能被＿＿染料着色的物质, 是由＿＿、＿＿＿、＿＿＿＿和少量＿＿＿所组成的复合物，是细胞分裂间期＿＿＿物质的存在形式。

2．SOS修复系统是一种旁路修复系统。

它允许新生的DNA链越过＿＿＿＿＿＿而发展，其代价是＿＿＿复制的＿＿＿的极大降低，是一个＿＿＿的暗藏过程。

3．反转录酶〔reverse transcriptase〕是一类很独特的＿＿聚合酶，它是以＿＿为模版来指导＿＿＿的合成，因此又称为依赖于＿＿＿的＿＿＿聚合酶。

…………………………………..………………………………….三、简答题(每题8分，共40分)1．解释基因步查〔gene walking〕的根本道理和主要应用。

2．试述大肠杆菌乳糖把持子的主要正负调控道理。

3．原核生物基因表达的极性现象及其呈现的原因。

4．真核生物mRNA后加工过程形成的5‘帽子和3’poly〔A〕尾布局的功能？5．何为分子进化的中性学说？…………………………………………………………………..四、阐述题(共60分)1．反义RNA作为基因及其产品表达合成的主要调节方式(15分)。

气相色谱法测定酒中乙醇含量一、实验目的1、学习气相色谱法测定溶液中的乙醇含量2、学习气相色谱的使用、掌握其内标定量方法二、实验原理内标定量法是一种准确而应用广泛的定量分析方法，操作条件和进样量不需要严格控制，限制条件较少。

内标法就是将准确称量的纯物质作为内标物，加入到准确称取的样品中，根据内标物的质量与样品的质量及相应的峰面积A 求出待测组的含量。

例如，用质量（或体积）计算内标物和待测物时，待测组分的质量（或体积V i ）与内标物质量m s （或体积V s ）之比等于相应的峰面积之比。

= = ( ) ( ) （1）待测组分含量可表示如下：质量分数ωi = =，（2）质量浓度ρ==，（3）体积分数φ=* 100%=( ) ( ) （4）式中： i ， s ——分别为组分i 和内标物s 的相对质量校正因子；i（V），s（V）——分别为组分i 和内标物s 的相对体积校正因子；A i ，A s ——分别为组分i 和内标物s 的峰面积（mm 2）；m，V——分别为待测样品的质量和体积（g 和mL）。

实验八：气相色谱法测定酒中乙醇含量三、实验步骤1、色谱操作条件柱温90摄氏度，汽化室温度150摄氏度，检测器温度130，N 2 （载气）流量40mL/min，记录仪纸速600mm/h。

2、标准溶液的测定准去移去2.50mL 无水乙醇于50mL 容量瓶中，加入2.50mL 内标物无水1-丙醇，用蒸馏水稀释至刻度线，摇匀。

用微量注射器吸取0.5uL 标准溶液，注入色谱仪，记录各峰的保留时间t R ，测量各峰的峰高和半峰宽，计算以1-丙醇为标准的相对校正因子。

3、样品溶液的测定准确移去5.00mL 样品与50mL 容量瓶中，加入2.50mL 内标物无水1-丙醇，用蒸馏水稀释至刻度线，摇匀。

用微量注射器吸取0.5uL 样品溶液注入色谱仪内，记录各峰值保留时间t R ，以标准溶液与样品溶液的t R 对照定性样品中的醇、1-丙醇的峰值及半峰宽，计算样品中的乙醇含量。

葡萄酒分析检验实验葡萄酒学院二OO八年《葡萄酒分析检验》实验教学大纲学时：36学时实验一：葡萄酒分析常用试剂的配制及标定、葡萄酒pH值的测定掌握分析常用试剂的配制和标定的方法，学会使用pH计。

实验二：液相色谱仪的使用及葡萄酒酒度、比重的测定（3学时）了解液相色谱仪原理及基本操作技术，掌握比重瓶测定酒度的方法，掌握酒精计测定酒度技术，能正确使用酒精表及比重计。

实验三：气相色谱仪测定葡萄酒的酒度（3学时）了解气相色谱仪原理及基本操作技术、学会使用气相色谱仪测定葡萄酒酒度的方法，能正确操作气相色谱仪。

实验四：葡萄酒干浸出物、可溶性固形物的测定（3学时）掌握干浸出物测定方法及实际操作技术，学会使用手持糖量计。

实验五：葡萄酒糖的测定（3学时）了解液相色谱仪测定糖的原理及方法，掌握斐林试剂滴定法测定糖的原理、技术方法以及注意事项。

实验六：葡萄酒总酸、挥发酸的测定（3学时）了解电位滴定法测定总酸的原理，掌握总酸的测定方法及各类酒终点的确定方法及掌握挥发酸的测定原理及其实际操作技术。

实验七：葡萄酒二氧化硫的测定（3学时）掌握游离二氧化硫、总二氧化硫的测定原理、技术及终点的确定方法。

实验八：葡萄酒中苹果酸－乳酸层析分析（3学时）熟悉有机酸组分的测定原理。

掌握用纸层析法分离鉴定葡萄酒中主要有机酸的技术与方法。

实验九：葡萄酒中铁的测定（3学时）掌握邻菲啰啉比色法测定铁的原理与操作技术。

实验十：白葡萄酒中蛋白质的测定（3学时）掌握考马斯亮兰法测定白葡萄酒中蛋白含量的方法实验十一：葡萄酒综合分析实验（6学时）掌握葡萄酒分析检验的一般方法及主要指标的检测方法，要求学生能独立完成葡萄酒某项指标的检测。

实验一 葡萄酒分析常用试剂的配制标定及pH 计的使用一、实验目的：学会斐林试剂A 、B 液，氢氧化纳标液的配制及氢氧化纳的标定，熟练掌握pH 计的使用 二、试验试剂NaOH 、苯二甲酸氢钾、酒石酸钾纳、硫酸铜、氢氧化纳、酚酞 三、操作步骤⑴、斐林试剂A 、B 液的配制斐林试剂A 液：称取34.7g 硫酸铜 定溶至500ml 容量瓶中。

葡萄酒果酒通用分析方法葡萄酒和果酒是两种不同的酿造类型酒品，但它们都可以通过一些通用的分析方法进行分析。

以下是葡萄酒和果酒通用分析的一些方法：1.酒精含量分析：酒精含量是衡量酒品的重要指标之一、通常可以使用比重计或气相色谱法来测定酒精含量。

比重计是测量液体密度的仪器，通过测量样品的密度来计算酒精含量。

而气相色谱法则是将样品挥发成气体，然后通过气相色谱仪来分离和测定酒精含量。

2.pH值测定：pH值可以反映酒品的酸度和碱度，对于葡萄酒和果酒的品质及稳定性有很大影响。

常见的测定方法是使用pH电极或pH试纸来测试样品的pH值。

3.总酸测定：总酸是葡萄酒和果酒中的一个重要成分，它可以影响酒品的口感和储存稳定性。

常见的总酸测定方法是使用酸碱滴定法，通过滴加一定量的碱溶液至样品中，然后根据酸碱反应的终点变化量来计算总酸含量。

4.还原糖含量测定：还原糖是指葡萄酒和果酒中可被酵母菌发酵转化成酒精的糖类物质。

常见的测定方法是使用还原糖计来测量样品中的还原糖含量。

5.多酚类物质测定：多酚类物质是葡萄酒和果酒中的主要抗氧化成分，对于酒品的色泽和品质起到重要作用。

常见的多酚类物质测定方法包括：费林试剂法、双酚A法和巯基试剂法等。

6.挥发性成分分析：挥发性成分是葡萄酒和果酒中的主要香气成分，对于酒品的风味和特征起到关键作用。

挥发性成分可以通过气相色谱-质谱联用技术来分析，该方法可以对挥发性成分进行定性和定量分析。

7.残留农药分析：葡萄酒和果酒的原料可能受到农药的污染，残留农药分析可以确保酒品的安全性。

常见的残留农药分析方法包括高效液相色谱法（HPLC）和气相色谱法（GC）等。

8.微生物分析：酿酒过程中可能存在细菌和酵母等微生物，微生物分析可以评估酒品的卫生质量。

常见的微生物分析方法包括菌落计数法和肉眼观察法等。

综上所述，葡萄酒和果酒的通用分析方法可以从酒精含量、pH值、总酸、还原糖、多酚类物质、挥发性成分、残留农药和微生物等多个方面进行分析和评估。

气相色谱法测定酒中乙醇含量黎海华，罗尔伦，李　芸，蓝勇波*（深圳市计量质量检测研究院，广东深圳 518000）摘　要：本文建立了用正丙醇作内标测定葡萄酒、果酒及啤酒乙醇浓度的气相色谱方法。

结果表明，乙醇浓度在0.10%～2.00%，方法的线性关系良好，相关系数r大于0.999 9，RSD 在0.196%～0.648%，加标回收率在98.2%～100.0%，方法比对中t-检验的t值在0.60～1.52。

该方法准确度高、精密度好，适用于葡萄酒、果酒及啤酒乙醇浓度的检测。

关键词：气相色谱法；乙醇浓度；葡萄酒；果酒；啤酒Determination of Ethanol Content in Alcoholic Beverages byGas ChromatographyLI Haihua, LUO Erlun, LI Yun, LAN Yongbo*(Shenzhen Academy of Metrology & Quality Inspection, Shenzhen 518000, China) Abstract: A gas chromatographic method for the determination of ethanol concentration in wine, fruit wine and beer with n-propyl alcohol as internal standard was established. The results show that the linear relationship of the method is good, the correlation coefficient r is greater than 0.999 9, the RSD is 0.196%～0.648%, and the recoveries are 98.2%～100.0%. The t values of the medium t-test are 0.60～1.52. The method has high accuracy and precision, and is suitable for the determination of alcohol concentration in wine, fruit wine and beer.Keywords: gas chromatography; ethanol concentration; wine; fruit wine; beer酒中乙醇浓度是评价饮料酒质量的重要指标之一，强制性食品安全标准《食品安全国家标准蒸馏酒及其配制酒》（GB 2757—2012）规定了氰化物和甲醇的限量指标，氰化物和甲醇均需要用到产品的乙醇浓度进行折算。