氨氮、残糖的检测
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糖的测定
1 总糖的测定(铜量法)
1.1 原理:还原性糖类的醛基在碱性溶液中能将Cu2+还原成Cu+,过量的铜在酸性溶液中
与KI反应而析出I2,根据I2的消耗量即可算出糖含量。
1.2 操作方法:
取上层清液1ml于三角瓶中,加水4ml,加6mol/L Hcl 5ml加热至沸,水解3分钟,
冷却,加酚酞指示剂2-3滴,用4mol/L NaoH中至红色,加斐林A10ml,斐林B10ml然后
加热煮沸3分钟,冷却,加30%KI 5ml,加2mol/L H2SO4 15ml。析出的碘用0.1mol/L Na2S2O
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滴定,淀粉为指示剂,滴定至兰色消退。同时加斐林A10ml,斐林B10ml作一空白。
计算:空白一样品=0.1mol/L Na2S2O3ml数查1ml表即得。
液糖消后总糖的测定方法同上。
2 比色法测糖(残糖)
2.1 原理:糖类与H2SO4脱水生成甲基呋喃,再与蒽酮的醇式异构物蒽酚缩合成兰绿色化
合物,其显色程度与其含量成正比。
2.2 测定方法:
取滤清后的发酵液1ml于100ml容量瓶中,定容摇匀。取出1ml于试管中加入蒽酮试
剂6ml摇匀后,置于沸水中加热10分钟显色,冷却,进行比色。检测波长为580mn,用
1ml水及6ml蒽酮试剂同样操作,作为空白。
氨氮的测定
1 原理:发酵液中的铵盐在用碱处理后析出NH3加热将NH3蒸出,并用硼酸吸附,根据所
消耗的酸量,即可求得样品中氨氮的含量。
(NH4)2SO4+K2CO3=2NH3 +K2SO4+H2O+CO2
3NH3+H3BO3=(NH4)3BO3
(NH4)2BO3+3HCI=3NH4CI+H3BO3
2 测定方法:
在一磨口计量锥形瓶A中加入30ml 2%H3BO3溶液,然后加入甲基红-溴甲酚绿混合
指示剂3-4滴,连接冷凝装置。
在烧瓶B中吸入25ml发酵过滤清液,150ml蒸馏水,再加入有机硅消沫剂1-2滴,
然后后加入10ml 10%氢氧化钠溶液,迅速连接冷凝器,烧瓶B置电热套中加热,控制温度
至蒸馏状态,待收集瓶A中液体至150ml停止蒸馏。用少量蒸馏水冲洗冷凝管内壁及插管
头,清洗液合并到收集瓶,摇匀。
用0.02mol/L Hcl滴定,由蓝色滴至浅黄红色为止。
3 注意事项:
A 蒸馏过程注意控制温度,防止爆沸,冷凝水流量适中,冷凝充分。
B 滴定终点PH约在4.5~5,近终点时控制滴定速度,注意色泽瞬间变化。
4 工艺要求:
4.1 中间样品测定误差上下± 0.5,超过规定误差要复试原样品。
4.2 所用容器必须干净,上一班应为下一班做好准备工作。
4.3 计算公式:
HCLml×0.02×14
25ml
=0.0112×滴定ml数(g/L)
氨基氮的测定
1 原理:
样品中加入甲醛,使氨氮与甲醛结合,而使氨基酸的碱性消失,用碱来滴定羧基消耗的
NaoH ml数计算氨基氮的含量
NH2 O N=CH2
P-CH +HC RCH +H2O
CooH H CooH
N CH2 N=CH2
R·CH +NaoH RCH +H2O
CooH CooNa
2测定方法:
准确吸取样品5ml于三角瓶中,加水20ml左右,甲基红为指示剂加2滴,用0.05mol/L
H2SO4调至红色,放置3分钟,再用0.07138mol/L NaoH,调至刚呈桔黄色,加入18%中性
甲醛溶液10ml,放置10分钟,加酚酞4-5滴,用0.07138mol/L NaoH滴定至终点(本法测
定结果包括氨基氮和铵氮)。
3计算结果:
mol/L Naoh×NaoH×0.014×100
ml样品
=NH2-N%