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LA检测隐球菌荚膜多糖抗原在隐球菌性脑膜炎诊断中的应用

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・
实验研究 ・
Ｌ Ａ检测 隐球 菌荚膜 多糖抗原在 隐球菌性脑膜辛茶 香
（ 江 西 省 胸 科 医 院 检验 科 ， 江西 南 昌 ３ ３ ０ ０ ０ ６ ）
摘要：目的 探讨乳胶凝集试验ｆ Ｌ Ａ １ 在 隐球菌性脑膜炎 中的早期诊断价值 。方法 收集 ５ ６例确诊 的隐球菌性脑膜炎患
ｔ ｈ ｅ Ｃ Ｓ Ｆ ｆ ｒ ｏ ｍ ５ ６ ｐ ａ ｔ ｉ ｅ ｎ ｔ ｓ ｗｉ ｔ ｈ ｃ ｒ ｙ ｐ ｔ ｏ ｃ ｏ ｃ ｃ ａ ｌ ｍｅ ｎ ｉ ｎ ｇ ｉ ｔ ｉ ｓ ， ａ ｎ ｄ ２ ５ ｐ ａ ｔ ｉ ｅ ｎ ｔ ｓ ｗ ｉ ｔ ｈ ｔ ｕ ｂ ｅ ｒ ｃ ｕ ｌ ｏ ｕ ｓ ｍｅ ｎ ｉ ｎ ｇ ｉ ｔ ｉ ｓ ｏ ｒ ｖ ｉ ｒ ａ ｌ ｍｅ ｎ ｉ ｎ ｇ ｉ ｔ ｉ ｓ ． Ｔ ｈ ｅ ｓ ｅ ｎ ｓ ｉ — ｔ ｉ ｖ ｉ ｔ ｙ ａ ｎ ｄ ｓ ｐ ｅ ｃ ｉ ｉ ｆ ｃ ｉ ｔ ｙ ｗ ｅ ｒ ｅ ｃ ｏ ｍｐ ａ ｒ ｅ ｄ ｉｔ ｗ ｈ ｆ ｕ ｎ ｇ ａ ｌ ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ｅ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ａ ｎ ｄ ｄ ｉ ｒ ｅ ｃ ｔ ｍｉ ｃ ｒ ｏ ｓ ｃ ｏ ｐ ｙ ｅ ｘ ａ ｍｉ ｎ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ． Ｒｅ ｓ ｌｔ ｕ ｓ Ｔ ｈ ｅ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｅ ｎ ｓ ｉ ｔ ｉ ｖ ‘
者和 ２ ５例 结 核性 脑 膜 炎 、 病 毒 性 脑 膜 炎 患 者 的 脑脊 液 ． 采 用 乳 胶凝 集试 验检 测 隐球 菌 荚 膜 多 糖 抗 原 ， 并 与 真 菌 培 养 和 直 接
镜 检 方 法 相 比较 ， 评 价其 诊 断 的灵 敏 度 和 特异 度 。结 果 乳 胶 凝 集 试 验 、 真 菌 培 养 和直 接 镜 检 ３ 种 方法 诊 断 的灵 敏 度 分 别 为 ９ １ ． １ ％、 ６ ９ ． ６ ％ 和７ ３ ． ２ ％， 乳 胶凝 集 试 验 特 异 度 分别 为 ９ ６ ． ０ ％、 １ ０ ０ ％、 １ ０ ０ ％。 结 论 乳 胶 凝 集 试 验 检测 隐球 菌 荚 膜 多糖 抗 原 可
．
４ ４ ６ ・
实 验 与检 验 医 学 ２ ０ １ ３年 １ ０月 第 ３ １ 卷 第 ５期 Ｅ ｘ ｏ ｅ ｒ ｉ ｍ ｅ ｎ ｔ ａ ｌ ａ ｎ ｄ Ｌ ａ ｂ ｏ ｒ ａ ｔ ｏ ｒ ￣Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎ ｅ ， Ｏ ｃ ｔ １ １ ， ！ １ ３ １ ， １
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作 为 隐 球 菌 性 脑 膜 炎 的早 期 诊 断 方法
关键 词： 乳 胶疑 集 试 验 ： 隐球 菌 性 脑 膜 炎 ： 隐 球 菌荚 膜 多 糖 抗 原
中图分类号 ： Ｒ ４ ４ ６ ． ６ ２ ． Ｒ ５ １ ９ ． ４ ． Ｒ ３ ７ ９ ． ５
文献标识码 ： Ａ 文章编号 ： １ ６ ７ ４ 一 ｌ １ ２ ９ （ ２ ０ １ ３ ） ０ ５ — ０ ４ ４ ６ — ０ ２
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隐球菌的实验室鉴定方法

隐球菌的实验室鉴定方法

隐球菌的实验室鉴定方法：
隐球菌的实验室鉴定方法主要包括以下几种：
1.墨汁染色法：取新鲜标本（如脑脊液）少许，置于载玻片上，滴加印度墨汁或优质
国产墨汁并覆以盖玻片，显微镜暗视野下找见圆球形菌体，菌体周围有一圈肥厚荚膜，折光性强，即为阳性。

多次查找可提高阳性率。

2.尿素酶试验：新型隐球菌可产生尿素酶，而白色念珠菌为阴性。

3.糖同化及发酵试验：新型隐球菌、浅白隐球菌等可同化纤维二糖、肌醇等，但均不
能发酵糖类。

4.酚氧化酶试验：接种左旋多巴-枸橼酸铁和咖啡酸培养基，经2～5d，新型隐球菌呈
棕黑色菌落。

5.真菌培养：将新鲜标本接种于沙保弱培养基中，在适宜温度下培养3-4d可形成肉眼
可见的菌落。

可进一步挑取菌落做质谱鉴定，从而确证是否为隐球菌。

6.血清学检查：由于患者血清中可测到的抗体不多，因此检测抗体阳性率不高，特异
性不强，仅作辅导诊断。

通常检测新型隐球菌荚膜多糖体抗原，以乳胶凝集试验灵敏而特异，且有估计预后和疗效的作用。

7.病理学检查：视病期及受累器官而异。

在脑组织内可以无组织反应而仅见胶样黏液
性水肿。

脑膜呈慢性、非特异性化脓性炎症反应，伴大量淋巴细胞及浆细胞浸润。

慢性病灶中可见结核性肉芽肿样表现。

组织内可见菌体。

传染病学 第五章 深部真菌病 第一节 新型隐球菌病

传染病学 第五章 深部真菌病 第一节 新型隐球菌病


（四）病原学检查
凡从人体的各种组织活检标本、尿液、血液、骨髓或脑脊液中发现新型隐球菌， 均提示有侵袭性隐球菌感染。 1. 直接检查 脑脊液墨汁涂片直接镜检是隐球菌脑膜炎最简便、最快速的诊断方法。
脑脊液隐球菌暗视野显微镜观察
脑脊液隐球菌墨汁染色
（四）病原学检查
2. 分离培养 从脑脊液、痰液、皮肤病灶的分
六
实验室及其他检查
（一）血常规检查 血常规多正常，部分患者可出现淋巴细胞比例增高，轻至中度贫血。
（二）T淋巴细胞检测 T淋巴细胞绝对计数降低，CD4+T淋巴细胞计数下降，CD4+/CD8+＜1。
（三）脑脊液检查 脑脊液压力明显升高，脑脊液外观澄清或稍为混浊，细胞数一般在（40～
400）×106/L之间，以淋巴细胞为主，蛋白水平轻至中度升高，葡萄糖和氧化 物水平下降。
➢ 采用葡萄糖蛋白胨琼脂37℃培养，新型隐球菌新型变种在几天内可形成光 滑的褐色菌落，非致病性的隐球菌菌种生长不良或几乎不生长。
➢ 隐球菌对紫外线敏感，日晒可以杀死隐球菌。
经由腰椎穿刺的脑脊液,包围新型隐球菌的白色荚膜使新型隐 球菌突出,它的中央是一圆的白的核。这里可见两个隐球菌
肺隐球菌病HE染色1000倍
离到，并被认为是人和动物最主要的传染源 ➢ 该菌主要引起人的脑膜炎和肺炎 ➢ 鸽是隐球菌的自然宿主，但并不引起发病
二
病原学
二、病原学
➢ 隐球菌属于酵母型真菌，至少有38个种。呈圆形或卵圆形，直径为5～ 10µm，外周围绕着一层宽厚的多糖荚膜。根据荚膜多糖抗原特异性的差 异可分为A、B、C、D和AD五种血清型，以A型最常见。
隐球菌阿申蓝染色
隐球菌PAS染色
（六）血清学检查 新型隐球菌荚膜抗原检测
隐球菌性脑膜炎护理

隐球菌性脑膜炎护理


03 腰穿术护理
• 术前护理: 向患者及家属说明腰椎穿刺术的必要性，腰椎 穿刺术目的取得患者及家属的信任和配合，并 签署知情同意书。嘱患者排空大小便。 • 术后护理: 指导患者绝对卧床，去枕平卧6小时，告知卧 床期间不可抬高头部，以防发生头痛、腰痛、 脑疝等并发症。适量饮水补充水分，告知患者 及家属穿刺口防污染、潮湿，且24小时内不宜 碰水，以免引起穿刺口局部皮肤软组织、椎管 或颅内感染。
2 诊断治疗
诊断
流行病学资料 • 了解是否存在暴露于鸟类，特别是鸽类病史 • 了解是否存在影响免疫防御功能的基础疾病和因素
中枢神经系统感染临床表现 • 发热、颅内高压症状、脑膜刺激征，甚至出现颅神经受损、精神异 常、意识障碍等
新型隐球菌感染证据 • 脑脊液病原学检查发现新型隐球菌
相关检查
脑脊液检查 （腰穿术）
04 一般护理
① 头痛评估及护理 ——由于颅内高压引起
1、评估工具 评估头痛的部位、性质、程度、持续时间及伴随症状。
面部表情疼痛量表 （FPS-R）
数字评分法 （NRS）
04 一般护理
① 头痛评估及护理
• 缓解头痛主要还是依靠病因治疗， 除了积极进行的抗真菌治疗之外， 使用甘露醇脱水是降低颅内压以 缓解头痛的主要手段。
隐球菌性脑膜炎观察与护理
1 疾病概述 2 诊断治疗 3 护理措施
疾病概述1
定义
隐球菌性脑膜炎是由新型隐球菌感
染脑膜和(或)脑实质所致。主要侵犯 中枢神经系统，多数发生在全身免疫 功能极度低下的患者。
流行病学
传染源
主要是鸽 （鸽粪）
传播途径
易感人群
多数有呼吸道吸 入 ，另有1/3患 者经皮肤、黏膜、 消化道传染
隐球菌实验室检测

隐球菌实验室检测

优点和缺点：减少了人 initiative (EAPCRI)
Page 23
Rhein et al., OFID, 2014, 1-7
不同菌量的隐脑病人中的G试验敏感性
Page 24
Rhein et al., OFID, 2014, 1-7
CSF中BDG水平随抗真菌治疗快速下降
抗真菌治疗
隐脑(-)
隐脑(+)
Page 25
Rhein et al., OFID, 2014, 1-7
KOH 10-20%：皮肤标本/痰 革兰染色：多染为革兰阳性 六胺银染色 墨汁染色

真菌镜检
真菌镜检
W7612 CSF 墨汁染色， 隐球菌
W7612 CSF 革兰染色， 隐球菌
真菌镜检
某些真菌病可通过显微镜直接检查确诊 如：卡氏肺孢子菌孢囊的检测


错误的阳性结果也会出现： 如：墨汁染色中溶解的淋巴细胞错误认 为新型隐球菌 脂肪滴容易与出芽酵母细胞混淆
[1]. Burgener-Kairuz P, et al. J Clin Microbiol, 1994, 32:1902–7. [2]. Kermekchiev MB, et al. Nucleic Acids Res, 2009, 37:e40. [3]. Bernal-Martinez Let al. J Clin Microbiol, 2011, 49:3596–9.
EORTC/MSG 2008

GM试验阳性—Probable invasive fungal disease 血清、血浆、BAL、CSF
De Pauw B., et al., CID, 2008, 46:1813-21
GM试验假阳性