白血病微小残留检测及其质量控制

急性髓系白血病微小残留病灶的检测袁靖;朱明清;戴兰;沈文红;金力蕾;白霞;阮长耿【期刊名称】《检验医学与临床》【年(卷),期】2015(12)A01【摘要】目的探讨流式细胞术（FCM）检测急性髓系白血病（AML）患者微小残留病灶的特点及临床意义。

方法对60例急性髓系白血病（AML）患者采用CD45／SSC双参数散点图设门的方法进行四色流式细胞术微小残留病灶的动态监测。

结果60例急性髓系白血病（AML）患者异常免疫表型的出现频率为：交叉系列抗原表达占35％，抗原缺失占55％，抗原过度表达占6．7％，不同期抗原共表达仅占3．3％。

结论利用流式细胞术（FCM）能够对AML患者进行MRD动态监测，对治疗评估、预测预后及提示复发有重要意义。

【总页数】3页(P163-165)【关键词】急性髓系白血病;流式细胞术;微小残留病灶;免疫表型【作者】袁靖;朱明清;戴兰;沈文红;金力蕾;白霞;阮长耿【作者单位】苏州大学附属第一医院江苏省血液研究所,江苏苏州215006【正文语种】中文【中图分类】R733.71【相关文献】1.多参数流式细胞仪在检测急性髓系白血病微小残留病灶中的运用 [J], 魏佳(综述);李惠民(审校)2.CD7抗原在急性髓系白血病微小残留病灶检测中的应用研究 [J], 栾春来;孟君霞;何孜岩;张晓南;唐广;陈杰甫;武永强3.流式细胞术动态监测微小残留病灶在急性髓系白血病中的意义 [J], 孙丽丽;李慧波;孔德胜;陈文佳;徐秉岐;李英花4.急性髓系白血病微小残留病灶检测方法的建立及其应用 [J], 赵佳琪;李伟静;王旭;郑亮亮;宋玉国5.急性髓系白血病患者WT1基因表达水平及其在微小残留病灶监测中的临床意义[J], 宁可;王海峰;徐莉;李丽宁因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

404复2孝旅（医学版）F u d an U n iv J M ed S ci2019 May, 46(3)微小残留病灶(MRD)监测在慢性淋巴细胞白血病(CLL)中的应用进展任雨虹(综述）刘澎△(审校）(复旦大学附属中山医院血液科上海200032)【摘要】慢性淋巴细胞白血病（chronic lymphocytic leukemia,CLL)是西方国家最常见的成人白血病，在我国的 发病率也日益增加。

近年来针对CLL的新药层出不穷，微小残留病灶(minimal residual disease，MRD)监测逐渐 成为评估疗效的重要手段。

本文总结了目前常用的MRD检测方法，包括流式细胞学和基于PCR法的分子学检 测，并介绍了其在初治CLL疗效评价、预后评估和在移植后CLL复发预警方面的应用进展。

【关键词】慢性淋巴细胞白血病(CLL);微小残留病灶(MRD);监测【中图分类号】R733, 72 【文献标识码】B doi： 10. 3969/j.issn.1672-8467. 2019. 03. 019 Progress of minimal residual disease (MRD) monitoring inchronic lymphocytic leukemia (CLL)REN Yu-hong, LIU PengA(Department o f Hematology，Zhongshan H ospital，Fudan University ’Shanghai 200032,China)【Abstract】Chronic lymphocytic leukemia (CLL) is the commonest adult leukemia in Western countries. Recent years has witnessed an increasing incidence rate in China. Since new agents have been developed over the decades»minimal residual disease (MRD) monitoring became an efficient way to assess the treatment effect. Here we reviewed the common methods to test MRD including flow cytometry and molecular detection methods based on PCR technique. Also we introduced the progress of MRD monitoring in response and prognostic assessment in newly-treated CLL patients and early relapse detection in CLL patients after allogenic stem cell transplantation.【Key words】chronic lymphocytic leukemia (CLL) ；minimal residual disease (MRD) ; monitoring * This work was supported by the National Natural Science Foundation of China (81570123).慢性淋巴细胞白血病（chronic lymphocyticleukemia，CLL)是一种成熟B淋巴细胞克隆增殖性 肿瘤，以淋巴细胞在外周血、骨髓、脾脏和淋巴结聚 集为特征，在西方国家的年发病率为4.2/10万，80 岁以上人群年发病率甚至超过30/10万[1]。

白血病/淋巴瘤免疫分型检测质量控制指南中国免疫学会血液免疫分会临床流式细胞术学组基金项目：上海市自然科学基金资助项目（14ZR1436100）； 上海市公共卫生三年行动计划（15GWZK0301）通信作者：刘艳荣，E-mail ：yrliu163@ ；邵宗鸿，E-mail ：shaozonghong@ ；徐翀，E-mail ：xuchong@文章编号：1673-8640（2019）04-0285-15 中图分类号：R446.1 文献标志码：A DOI ：10.3969/j.issn.1673-8640.2019.04.001目前，我国开展白血病/淋巴瘤免疫分型检测项目的实验室日益增多，但尚未建立相关质量控制规范。

本指南参考CLSI H43-A2[1]及相关标准和指南[2-7]，制定白血病/淋巴瘤免疫分型检测分析前、分析中和分析后各环节的质量控制规则，为临床医生、护理人员、样本运送人员、检测人员和检测报告审核人员提供可操作的实施细则。

1 分析前质量控制分析前阶段包括检验申请、患者的准备、原始样本的采集及运送，由医师、护士和样本运送人员在实验室以外完成，涉及人员众多，是最容易出现问题和最难控制的环节，做好分析前质量控制至关重要。

1.1 样本的标记所有送检样本都必须在采集后立即贴上标签或电子申请单的条形码、二维码。

标签应包括患者的唯一识别码，样本采集日期、时间、种类（如骨髓穿刺物或脑脊液）。

所有样本必须随附包括患者唯一识别码、初步诊断、年龄、性别、相关用药方案或最近的治疗措施（如化疗或放疗日期）、样本采集日期和时间、样本种类及医师姓名的项目申请单。

1.2 样本检测前时长 样本检测前时长指样本从采集到检测开始所经历的时间，是保证流式细胞术分析质量的关键，主要由抗凝剂的保存时间决定，通常以48 h 为界限值。

对于不可替代样本，即使超过48 h 也不应拒收，应尽一切可能获取有用的信息，并在最终报告中注明，如某些抗原（CD138、CD16）不够稳定[8]，更容易受到样本检测前时长的影响，在解释其抗体染色模式时应注明不稳定抗原存在假阴性的可能。

儿童急性淋巴细胞白血病微小残留病的流式细胞术检测分析目的探讨流式细胞术检测微小残留病（MRD）在儿童急性淋巴细胞白血病（ALL）治疗中的临床价值。

方法用多种四色荧光抗体组合检测50例正常儿童骨髓，据此建立双参数点图分析模型，500例ALL初发患儿行流式细胞分析，选出异于正常骨髓细胞免疫表型组合来检测MRD，根据确定好的免疫表型组合对105例患儿诱导治疗结束及后续治疗中的骨髓标本行MRD监测，同步行细胞形态学检测和PCR检测。

结果流式细胞术检出462例有效MRD免疫表型组合，PCR检出142例判断MRD的融合基因或IgH/T淋巴细胞受体基因重排；细胞形态学对诱导治疗后的患儿的MRD阳性检出率为66.67%，流式细胞术的MRD阳性检出率为91.43%。

结论流式细胞术能对ALL患儿治疗期间的MRD 作出准确评估，具有较好的覆盖面和敏感性，值得临床应用。

标签：急性淋巴细胞白血病；微小残留病；流式细胞术急性淋巴细胞白血病（acute lymphoblastic leuke- mia，ALL）严重影响患儿健康发育，3～4岁是其高发年龄，发热、贫血、肝脾肿大等是其早期症状。

临床报道指出个体化治疗对ALL患者尤为重要[1]，治疗强度应当同其复发风险相适应。

微小残留病（minimal residual disease，MRD）是经过诱导化疗或骨髓移植治疗后体内仍残留的白血病细胞形态，它是诱发白血病复发的根源，逐渐被纳入指导个体化治疗的关键性指标[2]。

目前聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）和流式细胞术是MRD两种检查方法，本研究探讨分析流式细胞术检测MRD在儿童ALL治疗中的临床价值，现报道如下。

1 资料与方法1.1 一般资料随机选取2009年1月～2012年12月于本院接受诱导缓解治疗的500例ALL 患儿，男性296例，女性204例，年龄1～8岁，平均（4.2±1.2）岁，上述病例经细胞形态学、免疫学、遗传学和分子生物学等方法确诊，B淋巴细胞白血病465例，T淋巴细胞白血病35例。

矿产资源开发利用方案编写内容要求及审查大纲
矿产资源开发利用方案编写内容要求及《矿产资源开发利用方案》审查大纲一、概述
㈠矿区位置、隶属关系和企业性质。

如为改扩建矿山, 应说明矿山现状、
特点及存在的主要问题。

㈡编制依据
(1简述项目前期工作进展情况及与有关方面对项目的意向性协议情况。

(2 列出开发利用方案编制所依据的主要基础性资料的名称。

如经储量管理部门认定的矿区地质勘探报告、选矿试验报告、加工利用试验报告、工程地质初评资料、矿区水文资料和供水资料等。

对改、扩建矿山应有生产实际资料, 如矿山总平面现状图、矿床开拓系统图、采场现状图和主要采选设备清单等。

二、矿产品需求现状和预测
㈠该矿产在国内需求情况和市场供应情况
1、矿产品现状及加工利用趋向。

2、国内近、远期的需求量及主要销向预测。

㈡产品价格分析
1、国内矿产品价格现状。

2、矿产品价格稳定性及变化趋势。

三、矿产资源概况
㈠矿区总体概况
1、矿区总体规划情况。

2、矿区矿产资源概况。

3、该设计与矿区总体开发的关系。

㈡该设计项目的资源概况
1、矿床地质及构造特征。

2、矿床开采技术条件及水文地质条件。

MRD：微小残留病灶血液肿瘤看MRD⑴MRD是一个术语，在治疗患有血液肿瘤（例如白血病，淋巴瘤或多发性骨髓瘤）的患者时，医生通常会使用此术语；⑵MRD（Minimal Residual Disease），即微小残留病灶，是指癌症治疗后残留在体内的少量癌细胞（对治疗无反应或耐药的癌细胞）。

残留的癌细胞数量可能很少，不会引起任何体征或症状（但它们有可能导致癌症复发），甚至无法通过传统方法检测到，例如在显微镜下观察细胞和/或追踪血液中的异常血清蛋白标志物（肿瘤标志物）；注意的是，现在NCCN指南和欧洲专家共识中MRD有时也指Measurable Residual Disease，即可测量残留病灶；⑶MRD是一种生物标志物，阳性结果意味着癌症治疗后仍可检测到残留（剩余）病灶（发现癌细胞，癌症治疗后残留的癌细胞会变得活跃并开始繁殖，导致疾病复发），阴性结果表示癌症治疗后未检测到残留（剩余）病灶（未发现癌细胞，对血癌患者来说是好事，研究表明MRD阴性与某些血癌更长的缓解期和更长的生存率有关）；⑷医生可使用MRD来衡量治疗的有效性，并预测哪些患者有复发的风险：可帮助医生动态监测和确认疾病的缓解情况，早期发现复发迹象，并尽早开始治疗；可告诉医生初始治疗效果如何，如果标准治疗方案效果不佳，医生会更改治疗方案，以更有效地获得疾病缓解；⑸何时检测MRD？何时检测MRD有不同的标准，应根据患者疾病的特定因素来决定。

患者可以在联合治疗的最后一个周期后进行检测，可以在骨髓移植后进行检测，可以在治疗期间进行检测确定缓解深度，可以在一年的维持治疗后进行检测，也可以在治疗结束后定期进行检测或在其他特定时间进行检测；⑹MRD检测样本？为了检测MRD，医生通常使用血液样本（静脉）或骨髓样本（抽吸）；⑺MRD检测技术？MRD检测应使用高灵敏度的检测方法，如此才能更有效地在众多健康细胞中发现少量癌细胞。

最广泛使用的检测方法是：1）流式细胞术（FC，通过检测细胞表面是否存在某些蛋白质标记物来评估某个细胞的技术；为了得到可靠的结果，需要新鲜的骨髓抽吸样本，然后使用特殊的抗体处理，这种抗体只粘附在带有特定蛋白的细胞上，该检测方法可以在10万个骨髓细胞中发现一个癌细胞，检测结果一天内可以得到）；2）聚合酶链式反应（PCR，可以根据其特有的遗传变异，如突变或染色体变异识别恶性肿瘤细胞；PCR 本质上是增加或放大少量的特定DNA或RNA片段，使它们更容易检测和计数，因此即使癌细胞数量非常少，也能通过PCR检测出基因异常，该检测方法可以在骨髓或血液样本的10万-100万个正常细胞中识别出一个癌细胞，检测结果可能需要几天或几周）；3）二代测序（NGS，可以快速检测DNA或RNA片段；NGS可以检测从骨髓抽吸样本中提取的DNA突变和其他遗传变异，该检测方法可以在100万个骨髓细胞中检测出一个癌细胞，检测结果一周内可以得到；2018年美国FDA“批准”了一款名为clonoSEQ的检测，基于NGS方法，检测急性淋巴细胞白血病（ALL）和骨髓瘤中的MRD（特异性基因组重排））；实体肿瘤看MRD⑻如上所述，MRD是血液肿瘤临床标准实践的一部分。