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肺腺癌与肺鳞癌胸腔积液差异蛋白质组学分析

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肺腺癌与肺鳞癌胸腔积液差异蛋白质组学分
析
作者：施孟如，林全，郑易，王良兴
【摘要】 目的 ：建立肺腺癌与肺鳞癌胸腔积液的双向电泳图谱，
分析二者蛋白质表达的差异和特点。方法：选取肺腺癌伴胸腔积液标
本12例，肺鳞癌伴胸腔积液标本8例，以固相pH梯度等电聚焦为第
一向，垂直板SDS-PAGE为第二向分离胸水蛋白质，银染显色，扫描仪
获取凝胶图像并对其进行分析。结果：同组实验重复3次，其中肺腺
癌胸腔积液蛋白质点平均(376±17)个，同组匹配率为88.3%;肺鳞癌
胸腔积液蛋白质点平均(383±21)个，同组匹配率为86%。经软件分析，
肺腺癌胸腔积液中表达增高2倍的差异蛋白点29个，降低50%的蛋白
质点50个。有3个点仅在肺腺癌胸腔积液表达，5个点仅在肺鳞癌胸
腔积液中表达。结论 ：肺腺癌与肺鳞癌胸腔积液差异蛋白可能是不同
病理类型的肺癌细胞分泌的特殊蛋白或特异性蛋白标志物。
【关键词】 胸腔积液;肺腺癌;肺鳞癌;双向电泳;蛋白质组
肺癌是引起胸腔积液最常见的原因之一[1]。目前临床上主要采用
胸水脱落细胞以及实验室生化检查等方法来鉴别胸腔积液的原因。 利
用双向电泳分离蛋白质，能够从大量蛋白质中直接筛选出特异蛋白质，
为很多疾病的发病机制研究和临床诊断提供依据[2-3]。本研究利用双
向凝胶电泳技术分析肺腺癌与肺鳞癌胸水的蛋白质组，试图为寻找不
同类型肺癌相关蛋白或特异性蛋白标志物打下基础，为肿瘤的诊断、
分型、药物研究带来新的思路和途径。
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1 材料和方法
1.1 主要试剂和仪器 丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺、超纯尿素
(ultraurea)、硫脲(thiourea)、3-[3-(胆酰胺基丙基)二甲氨基]丙磺
酸盐(CHAPS)、四甲基乙二胺(TEMED)、二硫苏糖醇(DTT)、碘乙酰氨、
固相pH干胶条(17 cm，pH 4～7)，Bio-lyte pH 3～10，2-D clean up
试剂盒等(Bio-Rad公司);蛋白酶抑制剂混合液protase inhibitor
cocktail(Sigma公司)，所有溶液均用MilliQ水配制。
PROTEAN IEF CELL等电聚焦仪，PROTEAN Ⅱ Xi垂直板电泳
仪及其附件，GS-800扫描成像系统，PDQuest凝胶图像分析软件
(Bio-Rad公司)，UV2800紫外可见分光光度计(上海尤尼柯公司)。
1.2 标本来源 温州医学院附属第一医院2007年11月-2008
年6月门诊及住院患者20例，年龄32～78岁。肺腺癌伴胸腔积液12
例，肺鳞癌伴胸腔积液8例，所有病例均经支气管镜组织活检和刷取
涂片细胞学检查所确诊。
1.3 实验方法
1.3.1 标本制备：每例胸腔积液标本各取10 mL，同组标本
混合后4 ℃，4 000 r/min 离心10 min，取上清液。所有标本按照
1:4(V/V)比例加入10% TCA-丙酮溶液，混匀后于-20 ℃放置过夜，
4 ℃，14 000 r/min，离心30 min，弃上清，沉淀用预冷的丙酮，4 ℃，
14 000×g，离心5 min，洗2次，弃上清，沉淀用裂解液(8 mol/L
尿素，4% CHAPS，50 mmol/L DTT，0.2% Bio-Lyte )重悬后用Bradford
法[4]测蛋白质浓度，-80 ℃冰箱保存备用。
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1.3.2 双向凝胶电泳：参考文献[5]方法，根据样品情况适当
改进。第一向——固相pH梯度等电聚焦凝胶电泳，采用低电压胶内泡
胀法，将200μg蛋白样品与上样缓冲液(8 mol/L尿素，2% CHAPS，
50 mmol/L DTT，0.2% Bio-Lyte，0.001%溴酚蓝)共300μL混合后加
入聚焦盘中，选用pH4～7线性17 cm胶条，IPG胶条胶面朝下放入水
化液，加盖3 mL矿物油。聚焦参数见表1。等电聚焦后的IPG胶条依
次在含1% DTT和2.5%碘乙酰胺的平衡缓冲液(6 mol/L尿素，2% SDS，
50 mmol/L Tris-HCl pH 8.8，20%甘油)中各平衡15 min，转移至8%～
16% 线性梯度SDS-聚丙烯酰胺凝胶的上端，琼脂糖封顶。
第二向——SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)：以恒流10
mA/gel电泳15 min，再加大电流至30 mA/gel直至溴酚蓝达到胶的底
端。按照文献[6]方法进行高灵敏度的银染。
1.3.3 凝胶图像的采集和分析：凝胶用GS-800图像扫描仪透
射扫描，分辨率为：63.5×63.5 microns。图像配比分析采用
2 结果
2.1 肺腺癌胸腔积液组和肺鳞癌胸腔积液蛋白质双向电泳图
谱的建立 在相同条件下，同组实验重复3 次。用PDQuest软件分析，
其中肺腺癌胸腔积液蛋白质点平均(376±17)个，同组匹配率为88.3%;
肺鳞癌胸腔积液蛋白质点平均(383±21)个，同组匹配率为86%。蛋白
质双向电泳图谱(见图1)，从左到右等电点增加，从下往上分子质量
增加。
2.2 肺腺癌胸腔积液和肺鳞癌胸腔积液双向电泳图谱蛋白质

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肺鳞癌蛋白质组学研究现状

肺鳞癌蛋白质组学研究现状

肺鳞癌蛋白质组学研究现状曾剑;金龙玉;刘建新【摘要】肺鳞癌的蛋白质组研究是探析肺鳞癌发病机理的重要方法之一,能为肺鳞癌的临床诊断、治疗以及预后判断提供重要信息.目前对肺鳞癌的蛋白质组研究取得了许多成果,本文就此做一综述.【期刊名称】《当代医学》【年(卷),期】2010(016)012【总页数】3页(P33-35)【关键词】肺癌;鳞状细胞癌;蛋白质组;诊断;预后【作者】曾剑;金龙玉;刘建新【作者单位】410013,中南大学湘雅三医院胸外科;410013,中南大学湘雅三医院胸外科;410013,中南大学湘雅三医院胸外科【正文语种】中文肺癌是目前全球发病率最高的恶性肿瘤之一，其中以鳞癌最为常见，约占全部肺癌例数的30%～50%。

随着蛋白质组学技术的发展及其在肺癌研究中的应用，对肺癌的蛋白质组学研究取得了许多重要的成果。

肺癌包括多种类型，每种类型的病因、机理及其分子生物学行为均有所不同，须分别予以研究探讨，本文就现阶段肺鳞癌的蛋白质组学研究的现状进行综述。

肺鳞癌的蛋白质组学研究是指应用大规模蛋白质分离和鉴定技术，研究肺鳞癌癌细胞在特定时间和空间上表达的基因组编码的全部蛋白质及其组成成分、表达水平和修饰状态，以及蛋白质与蛋白质的相互作用和联系，从蛋白质水平了解肺鳞癌的发生发展机理，诊断、治疗及其预后判断提供客观依据，主要包括结构蛋白质组学和功能蛋白质组学研究。

目前研究主要集中在前者，标本大多取自活体肺鳞癌组织、体外培养的肺鳞癌细胞和人体血清。

肺鳞癌的蛋白质组学研究技术包括蛋白质分离技术、蛋白质鉴定技术和生物信息学技术。

蛋白质分离技术常用的有双向凝胶电泳(twodimensional gel electrophoresis，2-DE)；二维液相色谱(two-dimensional liquid chromatography，2D-LC)、二维毛细管电泳(two-dimensional capillary electrophoresis，2D-CE)、液相色谱—毛细管电泳(liquid chromatographycapillary electrophoresis，LC-CE)等技术，其主流技术是双向凝胶电泳；蛋白质鉴定技术主要有质谱分析法(mass spectrometry,MS),窄pH梯度胶分离以及高灵敏度蛋白质染色技术，其中质谱分析法包括电喷雾质谱技术(electrospray ionization,ESI)、基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization-time of flight-massspectrometry,MALDI-TOF-MS)、表面增强激光解析电离飞行时间质谱(surface-enhanced laser desorption/ionization-time of flight-mass spectrometry,SELDI-TOFMS)，生物信息学是由计算机技术、网络技术和生命科学技术研究发展相互融合而成的一门新学科,主要用于数据的收集、存储、处理、构建、搜索及研发等[1-2]。

胸腔积液分型标准

胸腔积液分型标准

胸腔积液分型标准全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：胸腔积液是指胸腔内积聚的液体，可以是炎症、感染、恶性肿瘤等疾病引起的结果。

根据积液的特征和组成物质，可以对胸腔积液进行分型，从而更好地指导临床治疗。

下面我们将介绍一下关于胸腔积液分型的标准。

一、按照积液的性质分型1. 清澈胸腔积液：通常是由于心包炎、脓胸、急性胸膜炎等引起，积液通透性较高，液体中无明显炎症渗出物质。

2. 混浊胸腔积液：积液中含有细胞、蛋白、细菌以及其他炎症渗出物质，是由于感染、炎症、恶性肿瘤等疾病引起。

在临床上需要及时进行细菌培养和细胞学检查，以帮助做出正确的诊断和治疗方案。

1. 淋巴细胞为主的积液：这类积液通常是由肺癌、淋巴瘤、结核等引起的。

淋巴细胞数量较高，需要进行淋巴细胞亚群分析，有助于明确病因。

2. 中性粒细胞为主的积液：这类积液通常是由于感染引起的，如肺炎、结核性胸膜炎等。

中性粒细胞增多，提示有细菌感染的可能性。

三、按照积液的蛋白含量分类2. 清澈高蛋白胸腔积液：这类积液的蛋白含量较高，通常是由于肿瘤、结核、其他炎症等疾病引起。

在治疗过程中需要关注其腫瘤标志物等重要指标。

胸腔积液的分型对于准确诊断和治疗具有重要意义。

医生需要结合临床症状、实验室检查结果和影像学表现等信息，综合判断胸腔积液的性质和病因，从而选择合适的治疗方法。

希望通过以上介绍，能够帮助大家更加了解和认识胸腔积液分型标准，促进临床诊疗工作的进展和提高。

第二篇示例：胸腔积液是一种临床常见的病态体征，指在胸腔腔隙内积聚液体。

在临床实践中，对胸腔积液的类型进行分类有助于医生判断疾病的病理过程并进行合理的治疗。

根据不同的病因和液体性质，胸腔积液分型标准主要包括渗出液和漏出液两种类型。

一、渗出液渗出液是由于胸腔内血管以及间质受损导致的炎症性渗出性胸腔积液。

渗出液的特点是具有高蛋白质、高白细胞计数和低葡萄糖。

在实际检查中，医生主要根据液体的生化指标以及细胞学检查结果来判断是否为渗出液。

肺腺癌和癌旁组织蛋白质表达谱差异的研究

肺腺癌和癌旁组织蛋白质表达谱差异的研究

肺腺癌和癌旁组织蛋白质表达谱差异的研究时晓华;张旭华【期刊名称】《生物医学工程研究》【年(卷),期】2007(026)003【摘要】通过比较肺癌患者癌组织和癌旁组织的二维凝胶电泳图谱(two-dimensional electrophoresis,2DE),以寻找肺癌相关蛋白、肺癌患者癌组织和癌旁组织,采用固相pH梯度(immobilized pH gradient,IPG)2DE分离总蛋白质,凝胶经银染显后,ImageMaster 2D图像分析软件进行比较分析、识别差异表达的蛋白质并进行质谱鉴定获取肺癌相关蛋白信息.结果分析得到肺癌组织蛋白点709个,癌旁组织蛋白点722个,选择表达量差异达3倍以上的40个,进行胶内酶解,基质辅助电离解析飞行时间质谱(MALDI TOF MS)获得肽质量指纹图谱(PMF),搜寻蛋白质数据库,得到7个肺癌标志物的候选蛋白,但这些差异蛋白点在肺癌发生发展中的作用需要进一步研究.【总页数】3页(P288-290)【作者】时晓华;张旭华【作者单位】山东大学第二医院检验科,济南,250033;山东大学第二医院检验科,济南,250033【正文语种】中文【中图分类】R318【相关文献】1.食管鳞状细胞癌与癌旁组织蛋白表达谱的差异 [J], 熊刚;黄志勇;张军;王武军2.基因芯片的Meta分析和组织芯片分析表明AXL在肺腺癌(LAD)癌旁组织中的表达高于肺腺癌组织 [J], 朱杏丽;陈诚文;杨秀方;褚凯丽;李瑶;黄燕3.不同分期胃腺癌及癌旁组织蛋白质表达谱的研究 [J], 褚美芬;陈毓;郭剑民;吴怡春4.人肺腺癌及癌旁组织的差异蛋白质组学分析 [J], 李晓亮;杨志刚;马希涛;王朝杰5.中分化肺腺癌及癌旁组织中差异蛋白质组学分析 [J], 李晓亮;杨志刚;马希涛;王朝杰因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

肺鳞癌原发灶和淋巴结转移灶的差异蛋白质组研究

肺鳞癌原发灶和淋巴结转移灶的差异蛋白质组研究

中南大学硕士学位论文肺鳞癌原发灶和淋巴结转移灶的差异蛋白质组研究姓名：邓瑰申请学位级别：硕士专业：病理学与病理生理学指导教师：陈主初20070501硕士学位论文实验结果实验结果１肺鳞癌原发灶组织及淋巴结转移灶切割前后的比较肺鳞癌原发灶组织及淋巴结转移灶组织的癌巢被完整地从问质细胞中分离出来，切割后的目的细胞被完全从切片上转移至ＬＣＭ专用Ｅｐｐｅｎｄｏｆｆ管的ｃａｐ上，无问质细胞的混杂，经ＬＣＭ后的细胞形态未发生变化（图１，图２）。

图１肺鳞癌原发灶组织（甲基绿染色ｌＯｘｌＯ）Ａ：切割前Ｂ：切割后ｃ：ｃａｐ图２淋巴结转移灶组织（甲基绿染色ｌＯｘｌｏ）Ａ：切割前Ｂ：切割后Ｃ：ｅｎｐ硕士学位论文实验结果３肺鳞癌原发灶组织及淋巴结转移灶组织的２一ＤＥ的建立及差异分析为了消除个体差异，将３例病人标本的蛋白混合，应用同一实验条件和参数对纯化的肺鳞癌原发灶组织和淋巴结转移灶组织进行２次双向凝胶电泳。

考染显色后后得到背景清晰、分辨率较高、重复性较好的２－ＤＥ图谱各２块（总蛋白质上样量为１０００９）。

应用ＰＤＱｕｅｓｔ软件对凝胶图谱进行分析，选择最弱点、最小点及最强点后，ＰＤＱｕｅｓｔ软件能够自动过滤背景，将识别获得的蛋白质点的面积、灰度等数据拟合成一张新的凝胶，在拟合凝胶图谱的基础之上对各胶进行匹配分析。

ＰＤＱａｅｓｔ软件的分析结果显示，每张２．ＤＥ图谱分别可检测到大约１１５０土５０个蛋白质点，平均匹配率９１４－２％。

蛋白质表达变化差异大于２倍以上的蛋白质点５８个。

图４为肺鳞癌原发灶组织和淋巴结转移灶组织的典型的双向电泳图谱。

图５为局部放大的部分差异表达的蛋白质点。

图４肺鳞癌原发灶组织（ｃａ）和淋巴结转移灶组织皿）的２－ＤＥ图谱（箭头所示为得到鉴定的２６个差异蛋白质点＇，蛋白质１０００１ｘｇ经一相ｐＨ３・１０ＮＬ等电聚焦，二相１２．ｓ％ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分离后，考马新亮兰染色。

图５部分差异表达蛋白质点的局部放大图。