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肺鳞癌蛋白质组学研究现状曾剑;金龙玉;刘建新【摘要】肺鳞癌的蛋白质组研究是探析肺鳞癌发病机理的重要方法之一,能为肺鳞癌的临床诊断、治疗以及预后判断提供重要信息.目前对肺鳞癌的蛋白质组研究取得了许多成果,本文就此做一综述.【期刊名称】《当代医学》【年(卷),期】2010(016)012【总页数】3页(P33-35)【关键词】肺癌;鳞状细胞癌;蛋白质组;诊断;预后【作者】曾剑;金龙玉;刘建新【作者单位】410013,中南大学湘雅三医院胸外科;410013,中南大学湘雅三医院胸外科;410013,中南大学湘雅三医院胸外科【正文语种】中文肺癌是目前全球发病率最高的恶性肿瘤之一，其中以鳞癌最为常见，约占全部肺癌例数的30%～50%。
随着蛋白质组学技术的发展及其在肺癌研究中的应用，对肺癌的蛋白质组学研究取得了许多重要的成果。
肺癌包括多种类型，每种类型的病因、机理及其分子生物学行为均有所不同，须分别予以研究探讨，本文就现阶段肺鳞癌的蛋白质组学研究的现状进行综述。
肺鳞癌的蛋白质组学研究是指应用大规模蛋白质分离和鉴定技术，研究肺鳞癌癌细胞在特定时间和空间上表达的基因组编码的全部蛋白质及其组成成分、表达水平和修饰状态，以及蛋白质与蛋白质的相互作用和联系，从蛋白质水平了解肺鳞癌的发生发展机理，诊断、治疗及其预后判断提供客观依据，主要包括结构蛋白质组学和功能蛋白质组学研究。
目前研究主要集中在前者，标本大多取自活体肺鳞癌组织、体外培养的肺鳞癌细胞和人体血清。
肺鳞癌的蛋白质组学研究技术包括蛋白质分离技术、蛋白质鉴定技术和生物信息学技术。
蛋白质分离技术常用的有双向凝胶电泳(twodimensional gel electrophoresis，2-DE)；二维液相色谱(two-dimensional liquid chromatography，2D-LC)、二维毛细管电泳(two-dimensional capillary electrophoresis，2D-CE)、液相色谱—毛细管电泳(liquid chromatographycapillary electrophoresis，LC-CE)等技术，其主流技术是双向凝胶电泳；蛋白质鉴定技术主要有质谱分析法(mass spectrometry,MS),窄pH梯度胶分离以及高灵敏度蛋白质染色技术，其中质谱分析法包括电喷雾质谱技术(electrospray ionization,ESI)、基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization-time of flight-massspectrometry,MALDI-TOF-MS)、表面增强激光解析电离飞行时间质谱(surface-enhanced laser desorption/ionization-time of flight-mass spectrometry,SELDI-TOFMS)，生物信息学是由计算机技术、网络技术和生命科学技术研究发展相互融合而成的一门新学科,主要用于数据的收集、存储、处理、构建、搜索及研发等[1-2]。
胸腔积液分型标准全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：胸腔积液是指胸腔内积聚的液体，可以是炎症、感染、恶性肿瘤等疾病引起的结果。
根据积液的特征和组成物质，可以对胸腔积液进行分型，从而更好地指导临床治疗。
下面我们将介绍一下关于胸腔积液分型的标准。
一、按照积液的性质分型1. 清澈胸腔积液：通常是由于心包炎、脓胸、急性胸膜炎等引起，积液通透性较高，液体中无明显炎症渗出物质。
2. 混浊胸腔积液：积液中含有细胞、蛋白、细菌以及其他炎症渗出物质，是由于感染、炎症、恶性肿瘤等疾病引起。
在临床上需要及时进行细菌培养和细胞学检查，以帮助做出正确的诊断和治疗方案。
1. 淋巴细胞为主的积液：这类积液通常是由肺癌、淋巴瘤、结核等引起的。
淋巴细胞数量较高，需要进行淋巴细胞亚群分析，有助于明确病因。
2. 中性粒细胞为主的积液：这类积液通常是由于感染引起的，如肺炎、结核性胸膜炎等。
中性粒细胞增多，提示有细菌感染的可能性。
三、按照积液的蛋白含量分类2. 清澈高蛋白胸腔积液：这类积液的蛋白含量较高，通常是由于肿瘤、结核、其他炎症等疾病引起。
在治疗过程中需要关注其腫瘤标志物等重要指标。
胸腔积液的分型对于准确诊断和治疗具有重要意义。
医生需要结合临床症状、实验室检查结果和影像学表现等信息，综合判断胸腔积液的性质和病因，从而选择合适的治疗方法。
希望通过以上介绍，能够帮助大家更加了解和认识胸腔积液分型标准，促进临床诊疗工作的进展和提高。
第二篇示例：胸腔积液是一种临床常见的病态体征，指在胸腔腔隙内积聚液体。
在临床实践中，对胸腔积液的类型进行分类有助于医生判断疾病的病理过程并进行合理的治疗。
根据不同的病因和液体性质，胸腔积液分型标准主要包括渗出液和漏出液两种类型。
一、渗出液渗出液是由于胸腔内血管以及间质受损导致的炎症性渗出性胸腔积液。
渗出液的特点是具有高蛋白质、高白细胞计数和低葡萄糖。
在实际检查中，医生主要根据液体的生化指标以及细胞学检查结果来判断是否为渗出液。
基于蛋白质组学的胸腔积液蛋白标志物筛选与验证李志斌;束军;孟静【期刊名称】《安徽医科大学学报》【年(卷),期】2017(052)005【摘要】目的用蛋白质组学技术对比分析良、恶性胸腔积液标本,寻找蛋白标志物为其鉴别诊断提供帮助和新线索.方法采用双向电泳分离、搜寻蛋白,基质辅助激光解吸飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定蛋白,ELISA验证蛋白在良恶性胸腔积液样本中具体含量.结果恶性组胶图对比良性组共显示明显差异蛋白点(上调或下调≥2倍)43个,上调9个,下调34个;对其中7个显著差异点(上调或下调≥3倍)质谱鉴定明确了具体类型;挑选显著差异点中免疫球蛋白λ(Igλ)、结合珠蛋白(Hp)进行ELISA验证,结果表明Igλ在良、恶性胸腔积液中含量差异无统计学意义,Hp含量组间差异有统计学意义(P<0.05).进一步评估显示诊断标准为胸腔积液中Hp<389.02 μg/L时,诊断恶性胸腔积液灵敏度为75.00%,特异度为52.38%.结论蛋白质组学技术的应用对胸腔积液蛋白标志物搜寻具有较大帮助,本研究搜寻到的标志物Hp对于良、恶性胸腔积液鉴别诊断具有一定价值,值得进一步研究.%Objective Through analyzing benign and malignant pleural effusion samples by proteomic techniques, finding protein biomarkers to provide help and new clues for effusion differential diagnosis.Methods Two-dimensional electrophoresis(2-DE) and matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight-mass spectrometry(MALDI-TOF-MS) were used to search and identify protein biomarkers, enzyme linked immunosorbent assay(ELISA) was to validate the biomarkers.Results By comparingmalignant group with benign group, 43 significantly different protein spots(Up or down regulated≥2 times) were found.Including 9 up regulated spots and 34 down regulated spots.And 7 spots were identified(Up or down regulated≥3 times) by MALD I-TOF-MS and validated 2 spots immunoglobulin λ(Igλ) and haptoglobin(Hp) by ELISA.The results showed that Igλ showed no statistical significance between two groups, while Hp showed the statistical significance(P<0.05).The diagnostic sensitivity and specificity of Hp in malignant pleural effusion were 75.00% and 52.38% at diagnostic cut-off point of 389.02 μg/L.Conclusion The application of proteomics technology has a great help with protein biomarkers searching in pleural effusion.HP has a certain value for the differential diagnosis of benign and malignant pleural effusionand and worthy of further study.【总页数】5页(P700-704)【作者】李志斌;束军;孟静【作者单位】安徽医科大学第四附属医院呼吸内科,合肥 230032;安徽医科大学第四附属医院呼吸内科,合肥 230032;安徽医科大学第四附属医院呼吸内科,合肥230032【正文语种】中文【中图分类】Q51;R561.3【相关文献】1.基于蛋白质组学筛选获得的乙型肝炎病毒相关肝癌诊断标志物的研究进展 [J], 张丽军;贾小芳;滕珍林;程能能2.蛋白质组学研究中生物标志物的验证 [J], 赵红梅3.基于稳定同位素标记和平行反应监测的蛋白质组学定量技术用于肝癌生物标志物的筛选和验证 [J], 王素兰;高华萍;张菁;叶翔4.基于蛋白质组学筛选单肺通气潜在肺损伤标志物 [J], 张叶;黎阳;彭丹晖;老启芳;陈肖东;黄冰5.蛋白质组学RPPA技术筛选乳腺癌患者预后相关血清分子标志物的研究 [J], 张爽;林冰;周平;刘沙;刘玉;罗志飞因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
肺腺癌和癌旁组织蛋白质表达谱差异的研究时晓华;张旭华【期刊名称】《生物医学工程研究》【年(卷),期】2007(026)003【摘要】通过比较肺癌患者癌组织和癌旁组织的二维凝胶电泳图谱(two-dimensional electrophoresis,2DE),以寻找肺癌相关蛋白、肺癌患者癌组织和癌旁组织,采用固相pH梯度(immobilized pH gradient,IPG)2DE分离总蛋白质,凝胶经银染显后,ImageMaster 2D图像分析软件进行比较分析、识别差异表达的蛋白质并进行质谱鉴定获取肺癌相关蛋白信息.结果分析得到肺癌组织蛋白点709个,癌旁组织蛋白点722个,选择表达量差异达3倍以上的40个,进行胶内酶解,基质辅助电离解析飞行时间质谱(MALDI TOF MS)获得肽质量指纹图谱(PMF),搜寻蛋白质数据库,得到7个肺癌标志物的候选蛋白,但这些差异蛋白点在肺癌发生发展中的作用需要进一步研究.【总页数】3页(P288-290)【作者】时晓华;张旭华【作者单位】山东大学第二医院检验科,济南,250033;山东大学第二医院检验科,济南,250033【正文语种】中文【中图分类】R318【相关文献】1.食管鳞状细胞癌与癌旁组织蛋白表达谱的差异 [J], 熊刚;黄志勇;张军;王武军2.基因芯片的Meta分析和组织芯片分析表明AXL在肺腺癌(LAD)癌旁组织中的表达高于肺腺癌组织 [J], 朱杏丽;陈诚文;杨秀方;褚凯丽;李瑶;黄燕3.不同分期胃腺癌及癌旁组织蛋白质表达谱的研究 [J], 褚美芬;陈毓;郭剑民;吴怡春4.人肺腺癌及癌旁组织的差异蛋白质组学分析 [J], 李晓亮;杨志刚;马希涛;王朝杰5.中分化肺腺癌及癌旁组织中差异蛋白质组学分析 [J], 李晓亮;杨志刚;马希涛;王朝杰因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
百科名片肺腺癌肺腺癌（adenocarcinoma of lung）大多起源于较小的支气管粘膜分泌粘液的上皮细胞，因此大多数腺癌位于肺的周围部分，呈球形肿块，靠近胸膜。
女性病人较为多见，发病年龄亦较小。
在各类肺癌中约占２０~ 30 ％。
腺癌与吸烟无密切关系，一部分病例癌肿发生在肺纤维疤痕病变的基础上。
腺癌在早期一般没有明显的临床症状，往往在胸部Ｘ线检查时发现。
癌肿生长较缓慢，但有的病例较早即发生血道转移，较常在呈现脑转移症状后才发现肺部原发癌肿。
目录简介定义流行病学影像学细胞学巨检和部位肿瘤扩散和分期组织病理学胎儿型腺癌粘液（胶样）腺癌粘液性囊腺癌印戒细胞腺癌透明细胞癌免疫组化鉴别诊断分级组织发生体细胞遗传学分子遗传学表达谱遗传预测因素肺腺癌的存活率肺腺癌治疗简介流行病学影像学细胞学巨检和部位肿瘤扩散和分期组织病理学胎儿型腺癌粘液（胶样）腺癌粘液性囊腺癌印戒细胞腺癌透明细胞癌免疫组化鉴别诊断分级组织发生体细胞遗传学分子遗传学表达谱遗传预测因素肺腺癌的存活率肺腺癌治疗展开编辑本段简介分化程度较好的腺癌主要由腺体结构组成，具有腺腔或分泌粘膜，有时呈乳头状结构。
分化程度低的腺癌可无腺腔结构，癌细胞集聚，呈片状或索状。
腺癌细胞一般较大，胞浆丰富，含有分泌颗粒或粘液泡，胞核较大，癌细胞表面可见到丰富的微绒毛。
腺癌对放射治疗敏感度差。
肺腺癌女性多见，在男性亦有增多的趋势。
与吸烟关系不大，多生长在肺边缘小支气管的粘液腺，因此在周围型肺癌中以腺癌最为常见。
腺癌约占原发性肺癌的25%。
腺癌倾向于管外生长，但也循泡壁蔓延，常在肺边缘部形成直径2～4cm的肿块。
腺癌富血管，故局部浸润和血行转移较鳞癌早。
易转移至肝、脑和骨，更易累及胸膜而引起胸腔积液。
肺腺癌早期症状：肺腺癌在早期并没有什么特殊症状，仅为一般呼吸系统疾病所共有的症状，如咳嗽、痰血、低热、胸痛、气闷等，很容易被病人和医生所忽略。
腺癌编辑本段定义具有腺样分化或粘液分泌的恶性上皮肿瘤，表现为腺泡状、乳头状、细支气管肺泡性或实性伴有粘液的生长方式，或者上述表现混合存在。
中南大学硕士学位论文肺鳞癌原发灶和淋巴结转移灶的差异蛋白质组研究姓名：邓瑰申请学位级别：硕士专业：病理学与病理生理学指导教师：陈主初20070501硕士学位论文实验结果实验结果１肺鳞癌原发灶组织及淋巴结转移灶切割前后的比较肺鳞癌原发灶组织及淋巴结转移灶组织的癌巢被完整地从问质细胞中分离出来，切割后的目的细胞被完全从切片上转移至ＬＣＭ专用Ｅｐｐｅｎｄｏｆｆ管的ｃａｐ上，无问质细胞的混杂，经ＬＣＭ后的细胞形态未发生变化（图１，图２）。
图１肺鳞癌原发灶组织（甲基绿染色ｌＯｘｌＯ）Ａ：切割前Ｂ：切割后ｃ：ｃａｐ图２淋巴结转移灶组织（甲基绿染色ｌＯｘｌｏ）Ａ：切割前Ｂ：切割后Ｃ：ｅｎｐ硕士学位论文实验结果３肺鳞癌原发灶组织及淋巴结转移灶组织的２一ＤＥ的建立及差异分析为了消除个体差异，将３例病人标本的蛋白混合，应用同一实验条件和参数对纯化的肺鳞癌原发灶组织和淋巴结转移灶组织进行２次双向凝胶电泳。
考染显色后后得到背景清晰、分辨率较高、重复性较好的２－ＤＥ图谱各２块（总蛋白质上样量为１０００９）。
应用ＰＤＱｕｅｓｔ软件对凝胶图谱进行分析，选择最弱点、最小点及最强点后，ＰＤＱｕｅｓｔ软件能够自动过滤背景，将识别获得的蛋白质点的面积、灰度等数据拟合成一张新的凝胶，在拟合凝胶图谱的基础之上对各胶进行匹配分析。
ＰＤＱａｅｓｔ软件的分析结果显示，每张２．ＤＥ图谱分别可检测到大约１１５０土５０个蛋白质点，平均匹配率９１４－２％。
蛋白质表达变化差异大于２倍以上的蛋白质点５８个。
图４为肺鳞癌原发灶组织和淋巴结转移灶组织的典型的双向电泳图谱。
图５为局部放大的部分差异表达的蛋白质点。
图４肺鳞癌原发灶组织（ｃａ）和淋巴结转移灶组织皿）的２－ＤＥ图谱（箭头所示为得到鉴定的２６个差异蛋白质点＇，蛋白质１０００１ｘｇ经一相ｐＨ３・１０ＮＬ等电聚焦，二相１２．ｓ％ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分离后，考马新亮兰染色。
图５部分差异表达蛋白质点的局部放大图。
Fascin蛋白在原发性肺癌所致恶性胸腔积液中的表达及临床意义姚欣;赵磊;杨进【摘要】目的探讨Fascin蛋白在原发性肺癌所致恶性胸腔积液(MPE)中的表达及其临床意义.方法收集45例原发性肺癌所致MPE和30例肺部良性疾病所致胸腔积液标本,ELISA法检测胸腔积液中Fascin蛋白的表达,分析Fascin蛋白表达与临床特征、疗效之间的关系.结果 Fascin蛋白在肺癌组胸腔积液中的浓度[(31.21±2.06) μg/L]明显高于对照组[(9.12 ±0.57) μg/L],差异有统计学意义(P＜0.05).Fascin蛋白在MPE中的浓度在不同淋巴结转移、远处转移、分化程度间差异有统计学意义(P＜0.05),但在不同性别、年龄、肿瘤大小、病理类型、吸烟史间差异无统计学意义.结论 Fascin蛋白在原发性肺癌所致MPE中高表达,与肺癌的分化、淋巴结转移及远处转移有关,胸腔积液中Fascin蛋白与细胞学联合检测可提高MPE诊断的阳性率,并有一定的鉴别诊断价值.【期刊名称】《安徽医科大学学报》【年(卷),期】2016(051)002【总页数】5页(P239-243)【关键词】原发性肺癌;恶性胸腔积液;Fascin蛋白;酶联免疫吸附试验【作者】姚欣;赵磊;杨进【作者单位】安徽医科大学第二附属医院呼吸内科,合肥230601;安徽医科大学第二附属医院呼吸内科,合肥230601;安徽医科大学第二附属医院呼吸内科,合肥230601【正文语种】中文【中图分类】R734.2;R561.3;R341;R446.6恶性胸腔积液（malignant pleural effusion，MPE）是指原发于胸膜的恶性肿瘤或其他部位的恶性肿瘤转移至胸膜引起的胸腔积液。
继发于原发性肺癌的胸膜转移癌是引起 MPE最常见的病因。
MPE患者的中位生存期8个月，故早期诊断及治疗对延长生存期、改善预后至关重要［1-2］。
114CARCINO GENESIS ，TERATO GENESIS &MUTA GENESISVol.34No.2Mar.2022收稿日期：2021-03-26；修订日期：2021-09-21基金项目：河北省财政厅政府资助专科能力建设和专科带头人培养项目(361006)作者信息：王蕊，E-mail ：**********************。
*通信作者，杜芸，E-mail ：183****************胸腔积液肺腺癌细胞中CXCR4、Ki67、MDM2、N-cadherin 的表达及其与EGFR 突变状态的关系王蕊，刘颖，吴娟，纪晓坤，马阳，郭晓，杜芸*(河北医科大学第四医院癌检中心，河北石家庄050011)CXCR4,Ki67,MDM2and N-cadherin expressions in lung adenocarcinoma pleural effusion cells and their correlation withEGFR mutation statusWANG Rui,LIU Ying,WU Juan,JI Xiaokun,MA Yang,GUO Xiao,DU Yun *(Cancer Detection Center,the Fourth Hospital of Hebei Medical University,Shijiazhuang 050011,Hebei,China)【摘要】目的：研究胸腔积液肺腺癌细胞中趋化因子受体4(CXCR4)、增殖细胞核抗原Ki67、鼠双微体2(MDM2)和N-钙黏蛋白(N-cadherin)的表达与表皮生长因子受体(EGFR )突变状态的相关性。
方法：收集46例晚期肺腺癌患者的胸腔积液，采用HE 染色联合免疫细胞化学染色(ICC)法检测胸腔积液中是否含肿瘤细胞，突变扩增系统(ARMS)检测胸腔积液中癌细胞的EGFR 基因突变状态，将癌细胞分为EGFR -TKI 敏感突变组和EGFR 野生型组。
胸水分析报告摘要本文档是对胸水分析的报告，旨在通过对胸水样本的分析，提供有关胸水的信息和诊断结果。
胸水是指积聚在胸膜腔内的液体，可以是炎症性、恶性或其他病因所致。
本文档将介绍胸水分析的目的、方法和结果，并对常见的胸水疾病进行讨论。
胸水分析的目的胸水分析的主要目的是通过检测和分析胸水样本来确定其病因和病理特征。
在胸水分析中，可以检测和测定多种生物学和化学物质，如细胞计数、蛋白质浓度、pH值等。
通过分析这些指标，可以帮助医生确定病因，评估疾病的严重程度，并指导治疗方案的制定。
胸水分析的方法胸水分析一般包括以下步骤：1.胸水样本采集：通过穿刺或抽吸胸膜腔获取胸水样本。
2.细胞计数：使用显微镜对胸水中的细胞进行计数，并对细胞类型进行分类和鉴定。
3.化学分析：测定胸水中的化学物质浓度，如蛋白质、乳酸脱氢酶(LDH)等。
4.微生物学检测：对胸水进行微生物学检测，以排除感染的可能性。
5.细胞学检查：通过染色和显微镜观察胸水中的细胞形态和结构特征。
6.其他辅助检查：根据需要，还可以进行其他辅助检查，如免疫学检查和分子生物学检测。
胸水分析的结果及其临床意义胸水分析的结果可以提供诊断和治疗的依据。
根据分析结果，可以将胸水分为不同的类型，并确定其病因和病理特征。
常见的胸水类型包括：渗出液渗出液是由于胸膜炎症或其他炎症性疾病引起的胸水。
在渗出液中，细胞计数增加、蛋白质浓度升高，并且存在白细胞、中性粒细胞和红细胞等。
渗出液的疾病可能包括结核性胸膜炎、肺炎、纤维胸膜炎等。
漏出液漏出液是由于淋巴回路堵塞或胸膜恶性肿瘤浸润引起的胸水。
在漏出液中，蛋白质浓度显著升高，但细胞计数不多。
常见的原因包括恶性胸膜肿瘤、淋巴瘤等。
血性胸水血性胸水是由于胸膜血管破裂或其他出血原因引起的胸水。
血性胸水的特点是红细胞计数增加、蛋白质浓度升高，并可见到红细胞及其降解产物。
常见的原因包括创伤、肺栓塞、恶性肿瘤等。
乳糜胸水乳糜胸水是由于淋巴回路阻塞导致胸膜淋巴液积聚引起的胸水。
肺腺癌与肺鳞癌胸腔积液差异蛋白质组学分析作者：施孟如，林全，郑易，王良兴【摘要】目的：建立肺腺癌与肺鳞癌胸腔积液的双向电泳图谱，分析二者蛋白质表达的差异和特点。
方法：选取肺腺癌伴胸腔积液标本12例，肺鳞癌伴胸腔积液标本8例，以固相pH梯度等电聚焦为第一向，垂直板SDS-PAGE为第二向分离胸水蛋白质，银染显色，扫描仪获取凝胶图像并对其进行分析。
结果：同组实验重复3次，其中肺腺癌胸腔积液蛋白质点平均(376±17)个，同组匹配率为88.3%;肺鳞癌胸腔积液蛋白质点平均(383±21)个，同组匹配率为86%。
经软件分析，肺腺癌胸腔积液中表达增高2倍的差异蛋白点29个，降低50%的蛋白质点50个。
有3个点仅在肺腺癌胸腔积液表达，5个点仅在肺鳞癌胸腔积液中表达。
结论：肺腺癌与肺鳞癌胸腔积液差异蛋白可能是不同病理类型的肺癌细胞分泌的特殊蛋白或特异性蛋白标志物。
【关键词】胸腔积液;肺腺癌;肺鳞癌;双向电泳;蛋白质组肺癌是引起胸腔积液最常见的原因之一[1]。
目前临床上主要采用胸水脱落细胞以及实验室生化检查等方法来鉴别胸腔积液的原因。
利用双向电泳分离蛋白质，能够从大量蛋白质中直接筛选出特异蛋白质，为很多疾病的发病机制研究和临床诊断提供依据[2-3]。
本研究利用双向凝胶电泳技术分析肺腺癌与肺鳞癌胸水的蛋白质组，试图为寻找不同类型肺癌相关蛋白或特异性蛋白标志物打下基础，为肿瘤的诊断、分型、药物研究带来新的思路和途径。
1 材料和方法1.1 主要试剂和仪器丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺、超纯尿素(ultraurea)、硫脲(thiourea)、3-[3-(胆酰胺基丙基)二甲氨基]丙磺酸盐(CHAPS)、四甲基乙二胺(TEMED)、二硫苏糖醇(DTT)、碘乙酰氨、固相pH干胶条(17 cm，pH 4～7)，Bio-lyte pH 3～10，2-D clean up 试剂盒等(Bio-Rad公司);蛋白酶抑制剂混合液protase inhibitor cocktail(Sigma公司)，所有溶液均用MilliQ水配制。
PROTEAN IEF CELL等电聚焦仪，PROTEAN Ⅱ Xi垂直板电泳仪及其附件，GS-800扫描成像系统，PDQuest凝胶图像分析软件(Bio-Rad公司)，UV2800紫外可见分光光度计(上海尤尼柯公司)。
1.2 标本来源温州医学院附属第一医院2007年11月-2008年6月门诊及住院患者20例，年龄32～78岁。
肺腺癌伴胸腔积液12例，肺鳞癌伴胸腔积液8例，所有病例均经支气管镜组织活检和刷取涂片细胞学检查所确诊。
1.3 实验方法1.3.1 标本制备：每例胸腔积液标本各取10 mL，同组标本混合后4 ℃，4 000 r/min 离心10 min，取上清液。
所有标本按照1:4(V/V)比例加入10% TCA-丙酮溶液，混匀后于-20 ℃放置过夜，4 ℃，14 000 r/min，离心30 min，弃上清，沉淀用预冷的丙酮，4 ℃，14 000×g，离心5 min，洗2次，弃上清，沉淀用裂解液(8 mol/L 尿素，4% CHAPS，50 mmol/L DTT，0.2% Bio-Lyte )重悬后用Bradford 法[4]测蛋白质浓度，-80 ℃冰箱保存备用。
1.3.2 双向凝胶电泳：参考文献[5]方法，根据样品情况适当改进。
第一向——固相pH梯度等电聚焦凝胶电泳，采用低电压胶内泡胀法，将200μg蛋白样品与上样缓冲液(8 mol/L尿素，2% CHAPS，50 mmol/L DTT，0.2% Bio-Lyte，0.001%溴酚蓝)共300μL混合后加入聚焦盘中，选用pH4～7线性17 cm胶条，IPG胶条胶面朝下放入水化液，加盖3 mL矿物油。
聚焦参数见表1。
等电聚焦后的IPG胶条依次在含1% DTT和2.5%碘乙酰胺的平衡缓冲液(6 mol/L尿素，2% SDS，50 mmol/L Tris-HCl pH 8.8，20%甘油)中各平衡15 min，转移至8%～16% 线性梯度SDS-聚丙烯酰胺凝胶的上端，琼脂糖封顶。
第二向——SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)：以恒流10 mA/gel电泳15 min，再加大电流至30 mA/gel直至溴酚蓝达到胶的底端。
按照文献[6]方法进行高灵敏度的银染。
1.3.3 凝胶图像的采集和分析：凝胶用GS-800图像扫描仪透射扫描，分辨率为：63.5×63.5 microns。
图像配比分析采用2 结果2.1 肺腺癌胸腔积液组和肺鳞癌胸腔积液蛋白质双向电泳图谱的建立在相同条件下，同组实验重复3 次。
用PDQuest软件分析，其中肺腺癌胸腔积液蛋白质点平均(376±17)个，同组匹配率为88.3%; 肺鳞癌胸腔积液蛋白质点平均(383±21)个，同组匹配率为86%。
蛋白质双向电泳图谱(见图1)，从左到右等电点增加，从下往上分子质量增加。
2.2 肺腺癌胸腔积液和肺鳞癌胸腔积液双向电泳图谱蛋白质点的差异分析两组胸腔积液双向电泳图谱经软件分析，肺腺癌胸腔积液中表达增高2倍的差异蛋白点29个，降低50%的蛋白质点50个。
有 3个点仅在肺腺癌胸腔积液中表达，5个点仅在肺鳞癌胸腔积液中表达具有较好的重复性。
A，B，C三图为点SSP5204，SSP1307，SSP3114放大图，图中可见3个蛋白质点在鳞癌胸腔积液中的表达明显高于腺癌。
C，D二图为点SSP4003，SSP3115放大图，图中可见在鳞癌胸腔积液中的表达明显低于腺癌。
3 讨论蛋白质组(proteome)是指在特定的时间和空间上，一个细胞或一个组织基因组所表达的全部相应蛋白质，包括各种亚型及蛋白质修饰，它随着时间和外周因素的影响而呈动态变化[7-8]。
不同的疾病或同一疾病不同的发展阶段，其细胞内和体液中蛋白质表达存在差异，这些差异表达的蛋白质往往与疾病的发生和发展有着直接或间接的关系[9]。
双向电泳作为目前蛋白质研究中最为广泛应用的技术平台，可以被用来分析疾病的蛋白质表达差异及其特异标志物，也可以根据蛋白质的差异程度对疾病进行诊断[10]。
目前临床上主要采用胸水脱落细胞以及实验室生化检查等方法来鉴别胸腔积液的原因，但是仍有相当一部分恶性胸腔积液不能被明确。
直接胸腔积液进行蛋白质表达的差异分析，是通过非损伤途径识别肿瘤标志物的更佳途径[11]。
通过分析、比较肺腺癌和肺鳞癌胸腔积液中的差异蛋白质，可能发现不同病理类型肺癌的相关蛋白质以及特异性蛋白标志物[12]。
本实验结果中，肺腺癌胸腔积液图谱经扫描分析发现本组独有蛋白质点为3个，肺鳞癌胸腔积液独有蛋白质点为5个，这些蛋白质点很可能是不同类型肺癌细胞分泌的特有蛋白质。
部分蛋白质点应该是已知的肿瘤标志物，部分蛋白质很可能是尚未发现的肿瘤标志物，这对寻找未知的肺癌肿瘤标志物具有重要的意义。
肺腺癌胸腔积液组和肺鳞癌组相互匹配的蛋白质点中，其腺癌组比鳞癌组上调大于2倍的蛋白质点有29个，下调大于50%的蛋白质点有50个。
说明两组胸腔积液中某些相同的蛋白标志物，在其功能和数量上仍有一定的差别，通过测量蛋白质点的染色强度来获得蛋白质定量信息，这可作为鉴别以上两组胸腔积液的另一指标。
但是利用双向电泳差异蛋白质分析作为技术平台，只能获得蛋白质的初步信息，而蛋白质的具体结构和功能必须经质谱或其他分析手段作进一步分析，并结合western璪lot或基因组等其他实验技术来进行验证。
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