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实训二 大豆磷脂的提取、分析及卵磷脂咀嚼片的的制备与检验

大豆磷脂的提取及含量测定

一、 试剂与仪器

1、试剂

⑴ 氯化锌溶液：精确称取氯化锌6.86g，定容于500ml容量瓶中。

⑵ 大豆市售

⑶ 无水乙醇------10瓶

⑷ 磁力搅拌器

⑸ 对苯二酚溶液：取对苯二酚0.5g，加水适量使溶解，加硫酸1滴，加水稀释成100ml。

⑹ 钼酸铵硫酸试液：取钼酸铵2.5g，加硫酸15ml，加水使溶解成100ml，即得。本液配制后两周即不适用。

⑺ 亚硫酸钠试液：取无水亚硫酸钠20g，加水100ml使溶解，即得。本液应临用新制。⑻ 磷酸二氢钾

⑼ 浓硫酸

⑽ 过氧化氢

⑾ 石油醚、

⑿ 氯仿、甲醇、冰乙酸

⒀ 20％硫酸铵

⒁ 羧甲基纤维素钠

⒂ 硅胶GF254

⒃ 载玻片

2、仪器

凯氏烧瓶，恒温水浴锅， 滤纸 ； 电热恒温鼓风干燥箱；电热套，天平，分光光度计，刻度比色管，硅胶G板 ，抽滤装置

二、实验操作

㈠、大豆磷脂的提取及含量测定

1、5斤大豆用粉碎机粉碎得大豆粉

2、卵磷脂的提取

⑴ 称取一定质量的大豆粉末，加入一定体积95%的乙醇，置于不同温度的水浴锅内，一定时间后取出，减压过滤。见下表

料液比 提取时间 提取温度 氯化锌

1:20 2.5 35 10

1:20 1.5 40 15

1:15 2.5 40 5

1:15 2 35 15

1:15 1.5 45 10

1:10 2.5 45 15

1:10 1.5 35 5

1:20 2 45 5

1:10 2 40 10

(2) 试验步骤：将溶有卵磷脂的乙醇溶液置于磁力搅拌器下，一边搅拌一边加入一定量ZnCl2溶液，继续搅拌20min;取出，减压过滤，并将滤液置于蒸发皿上蒸干;取出产品进行定性检测。

㈡ 磷含量测定

标准溶液的制备：取105℃干燥至恒重的磷酸二氢钾约0.13g，精密称定，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，精密量取10ml置100ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，每1ml中含磷（P)约为30ug。

样品溶液的制备：取本品约0.15g，精密称定，置凯氏烧瓶中,加硫酸20ml与硝酸50ml，缓缓加热至溶液呈淡黄色，小心滴加过氧化氢溶液，使溶液褪色，继续加热30分钟，冷却后，转移至100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。

测定方法：精密量取对照品溶液与样品溶液各2ml，分别置50ml量瓶中,各依次加入钼酸铵硫酸试液4ml，亚硫酸钠试液2ml与新鲜配制的对苯二酚溶液2ml，加水稀释至刻度，摇匀,暗处放置40分钟，照可见-紫外分光光度法,在620nm的波长处分别测定吸光度，计算含磷量。

硅胶薄层板的制备

【实验材料】

1．器材

玻板（5cm×20cm或10cm×20cm，厚度5mm）、直径10cm乳钵、烘箱、干燥器。

2．试剂与试药

硅胶G，羧甲基纤维素钠。

3．0.4%羧甲基纤维素钠的配制：取4g羧甲基纤维素钠加纯净水使成1000ml，室温浸泡过夜，煮沸使其溶解，补足溶剂减少量，即得。

4、药棉

5、漏斗

6、烧杯

7、拉板器（药匙）

【实验方法】

1、临用前将，0．4%羧甲基纤维素钠先用棉花过滤，以除去其中的沉淀不溶物(否则铺板有麻点)。

2、按硅胶G-0.4%羧甲基纤维素钠溶液（1：2.5）的比例配好研磨均匀，注意不要有气泡，研磨时向一个方向研磨，然后用机械搅拌一段时间除去里面的气泡，再静置半小时就可以铺板了。

3、铺板：将研磨均匀的硅胶倾倒于铺板器内，匀速拉过玻璃板。铺板时，拉铺板器的速度不要过快，也不要太慢。（或者将载玻片置于平台上，用药匙舀取糊状硅胶，均匀地铺在载玻片表面。铺板时，可以顺着板中间倒，也可以顺着某个边缘倒，也可以用玻璃棒引着溶液平铺在玻璃板上，倒时也要注意不要引入小气泡。如有需要，可以双手10个指头托住玻璃板，有节奏的颠簸，使得糊状硅胶分布匀称。）

4、涂好薄层的玻璃板，置水平台上于室温下晾干后，在120℃烘30分钟（105℃烘120分钟），取出，置干燥器中贮存，临用时取出。

卵磷脂薄层色谱实验

【实验材料】

1．器材

10ml量筒、层析缸（大小与所所铺的薄层板相配）、点样毛细管、硅胶G薄层板、显色喷雾瓶、台称、水浴锅、烘箱。

2．试剂与试药

氯仿、甲醇、冰乙酸、甲醇、95%乙醇、硫酸等。

3．10%硫酸乙醇溶液的配制：用量筒量取硫酸10ml，缓慢加至100ml 95%乙醇中，摇匀，放冷，即得。

【实验方法】

1．硅胶薄层板划线；

2、取磷脂样品50mg，加入2～3滴石油醚使之溶解，

3、照薄层色谱法，用毛细管吸取上述溶液于硅胶G薄层板上；以在氯仿：甲醇：乙酸：水(85：15：10：3， V/V)为展开剂，展开，取出，记录展开剂的前沿位置，晾干，记下展开剂的位置。

4、显色

向干燥的薄板喷洒20％硫酸铵(加入4ml浓硫酸)，直到薄板变得透明，在220℃下烘烤20min。

5、测算Rf值

溶质在纸上的移动速度率可用迁移率Rf值表示，Rf值主要决定于被分离物质在两相间的分配系数。在同一条件下，Rf值是个常数， 不同物质的Rf值不同，这一性质可作为混合物分离鉴定的依据。薄板显色成功后，对不同斑点进行Rf值测算。

6、层析结果

显色之后每块板上出现的点，其Rf值与文献值相比较，便可知每个点对应的磷脂。 文献中溶血磷脂酰胆碱、鞘磷脂、磷脂酰胆碱以及磷脂酰乙醇胺的Rf值分别约为0.1、0.2、0.4和0.9.

【注意事项】

1、点样基线距底边2.0cm，点样直径为2-4mm，点间距离约为1.5-2.0cm，点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。点样时必须注意勿损伤薄层表面；

2、展开室需预先用展开剂饱和；

3、将点好样品的薄膜放入层析缸的展开剂中，浸入展开剂的深度为距薄膜底边0.5-1.0cm（切勿将样点浸入展开剂中），密封室盖，等展开至规定距离（一般为8-15cm）。

卵磷脂咀嚼片的的制备与检验

一、仪器及试剂

1、试剂

⑴ 乳糖------------1000g

⑵ 淀粉 ---------------1500g

⑶ 微粉硅胶[二氧化硅（药用）]

⑷ 硬脂酸镁----500g

⑸ 卵磷脂粉----1000g（自制）

⑹ 维生素E-----1g

2、实验仪器

药筛（16目），单冲压片机，脆碎度测定仪，电子天平，智能崩解时限测试仪;

药物溶出度仪

二、片剂的制备

卵磷脂维E咀嚼片配方如下 （2g／片）

卵磷脂粉+稀释剂共90g 稀释剂选用甘露醇和淀粉；

香精5g

助流剂+润滑剂 5g

采用正交设计，选用稀释剂比例、稀释剂含量、助流剂与稀释剂比例为三因素，进行正交设计，正交试验表如下：

卵磷脂维E咀嚼片配方

乳糖：淀粉 稀释剂含量 微粉硅胶：硬脂酸镁

5:1 70% 1:2

1:2 50% 5:1

5:1 30% 5:1

1:2 70% 1:5

1:5 70% 5:1

5:1 50% 1:5 1:5 50% 1:2

1:5 30% 1:5

1:2 30% 1:2

制法：

将卵磷脂粉、甘露醇、淀粉、微晶纤维素混合后，以无水乙醇制成颗粒（16目），44℃

干燥，16目整粒，颗粒加入维生素E、香精、微粉硅胶、硬脂酸镁混合后，压片。

4、片剂的检查

⑴、外观检查随机抽取100片，平铺在白瓷板，置于白炽灯下，用肉眼观察30s，色泽一致，

80-100目大小的杂色点不得超过5%，麻点小于5%，并不得有严重花斑或异物。

⑵ 硬度检查按《中国药典》2010版规定，用硬度计测定。将药片垂直固定在微调夹头与定头之间，待药片破碎读取指示读数，共测6片，取其平均值。

⑶ 脆碎度检查按《中国药典》2010版规定，取药片20片，精密称定后置脆碎度测定仪中，振动4min，除去细粉和碎粒，称重后与原药片比较，其减重率不得超过0.8%。

⑷ 片重差异检查按《中国药典》2010版规定

片剂的平均重量 重量差异限度

0.3g 以下 +7.5%

0.3g 或0.3g 以上 +5.0%

检查方法：取药片20 片，精密称定总重量，求得平均片重后，再分别精密称定各片的重

量。每片重量与平均片重相比较，超出重量差异限度的药片不得多于2 片，并不得有1 片超出限度1 倍。

⑸ 崩解时限检查 按《中国药典》2005版规定，取药片6片分别置于吊蓝的玻璃管中，启动崩解仪进行检查，一般在15min内全部崩解，如有1片不能完全崩解，应另取6片进行复试，均应符合规定。

卵磷脂维生素E片物理质量检测结果及分析

配方 麻面（%） 外观杂色点（%） 畸形（%） 重量差异限度（%） 硬度（kg/m3） 崩解时限