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RP_HPLC加校正因子的主成分_省略_定普罗布考片中3种有关物质的含量_安珍珍

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收稿日期：2015-01-11作者简介：安珍珍（1988-），女（汉族），河北衡水人，硕士研究生，E-mail anzhenzhen2721@126.con ；*通讯作者：于治国（1958-），男（汉族），山东莱西人，教授，博士生导师，主要从事药品质量控制与药代动力学研究，Tel ．024-********，E-mail zhiguo-yu@ 。

文章编号：1006-2858（2015）12-0951-05DOI ：10．14066/j．cnki．cn21-1349/r．2015．12．008ＲP-HPLC 加校正因子的主成分自身对照法测定普罗布考片中3种有关物质的含量安珍珍，荣荣，张启丽，于小涵，段玺玉，于治国*（沈阳药科大学药学院，辽宁沈阳110016）摘要：目的建立ＲP-HPLC 法同时测定普罗布考片中3种有关物质的含量。

方法采用ＲP-HPLC 加校正因子的主成分自身对照法，以普罗布考为参照物，分别测定其与有关物质A 、B 、C 间的相对保留时间及相对校正因子，以校正因子对普罗布考片中的3种有关物质进行定量分析，并与外标法测定结果比较，以验证方法的准确性。

结果有关物质A 、B 、C 相对于主成分普罗布考的相对保留时间分别为1.46、0.93和1.40；相对校正因子分别为0.23、1.10和1.55；校正因子法与外标法测定的结果无显著性差异。

结论本方法能够准确测定普罗布考片中3种有关物质的含量。

关键词：普罗布考片；有关物质；校正因子；反相高效液相色谱法中图分类号：Ｒ917文献标志码：A普罗布考（probucol ，结构式见图1）片于20世纪70年代首先于美国上市并应用于临床，临床主要用于治疗高胆固醇血症。

近年来研究发现，普罗布考除具有降脂作用外，还具有抗动脉粥样硬化、抗氧化应激、保护血管内皮、抗心律失常等作用，且能够预防经皮冠状动脉介入治疗术后再狭窄［1］。

目前，原料药与制剂已收载于《美国药典》［2］、《日本药局方》［3］以及《中华人民共和国药典》［4］中。

《中华人民共和国药典》收载标准中未对特定杂质进行限量检查，仅采用主成分自身对照法检查杂质总量，限度质量分数为1.0%。

本文作者旨在结合《美国药典》及《日本药局方》原料药测定有关物质的方法，采用加校正因子的主成分自身对照法，同时测定普罗布考片中3种有关物质A 、B 、C （结构式见图1）的含量，用于普罗布考片的质量控制及稳定性研究。

Fig．1Structures of probucol and related substance A ，B and C 图1普罗布考和有关物质A 、B 、C 的结构1仪器与材料PerkinElmer Series 200高效液相色谱仪（包括四元梯度泵、在线脱气机、自动进样器和可变波长紫外检测器，美国PerkinElmer 公司），Total-Chrom 色谱工作站（美国PerkinElmer 公司），BS-110S 电子分析天平（德国Sartorius 公司），AB135-S 十万分之一天平（瑞士METTLEＲ-TOLEDO 公第32卷第12期2015年12月沈阳药科大学学报Journal of Shenyang Pharmaceutical UniversityVol.32No.12Dec．2015p.951司），KQ-250E超声波清洗仪（江苏昆山超声仪器有限公司）普罗布考片（规格：250mg；批号：S2*******，自制），普罗布考对照品（批号：56330，美国药典委员会），有关物质A对照品（批号：1563302，美国药典委员会），有关物质B对照品（批号：56333，美国药典委员会），有关物质C对照品（批号：56334，美国药典委员会），乙腈（梯度级，天津市康科德科技有限公司），水（纯净水，杭州娃哈哈集团有限公司）2方法与结果2.1色谱条件色谱柱：CAPCELL PAK C18柱（150mmˑ4.6 mm，5μm，日本Shiseido公司）；SecurityGuard Car-tridges C18保护柱（4.0mmˑ3.0mm，美国Phe-nomenex公司）；流动相A：乙腈，流动相B：水，按表1进行梯度洗脱；检测波长：242nm（普罗布考、有关物质B），420nm（有关物质A、C）；流速：1.0mL·min－1；柱温30ħ；进样量：15μL。

Table1Mobile phase elution procedure表1流动相洗脱程序t/minφ（acetonitrile）/%φ（water）/%Curve0.568320158515160991170991075683202.2溶液的制备2.2.1对照品储备液普罗布考储备液：取普罗布考对照品约10mg，精密称定，置于10mL量瓶中，加稀释剂［V（正己烷）：V（乙醇）=2ʒ8］溶解并稀释至刻度，摇匀，作为普罗布考一级储备液（1g·L－1）；取普罗布考一级储备液1mL，置于10mL量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，作为普罗布考二级储备液（100mg·L－1）。

杂质对照品储备液Ⅰ：取有关物质A对照品约5mg，精密称定，置于100mL量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为有关物质A一级储备液（50mg·L－1），分别取有关物质A一级储备液2mL和普罗布考二级储备液1mL，置于50mL量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，作为杂质对照品储备液Ⅰ（2mg·L－1）。

杂质对照品储备液Ⅱ：取有关物质B对照品约5mg，置于50mL量瓶中，加普罗布考一级储备液5mL，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为杂质对照品储备液Ⅱ（100mg·L－1）。

杂质对照品储备液Ⅲ：分别取有关物质C对照品和普罗布考对照品各约5mg，置于同一5mL 量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为杂质对照品储备液Ⅲ（1g·L－1）。

2.2.2对照品溶液分别精密称取普罗布考对照品、有关物质A、B、C对照品各适量，置于同一10mL量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，制成质量浓度分别为40、0.2、10和100mg·L－1的混合溶液，作为对照品溶液。

2.2.3供试品溶液取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于普罗布考200mg），置10mL量瓶中，加稀释剂适量，超声处理（频率：40kHz，功率：250W）30min，使普罗布考溶解，放冷，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，离心，取上清液滤过（0.22μm），取续滤液，作为供试品溶液。

2.2.4空白辅料溶液按普罗布考片的处方称取各种辅料，混合，称取适量（约相当于含普罗布考200mg），按“2.2.3”条下供试品溶液的制备方法操作，制备空白辅料溶液。

2.3系统适用性试验取普罗布考对照品约15mg，置于50mL量瓶中，加甲醇适量，超声处理，使溶解，加5mol·L－1氢氧化钠溶液2mL，于室温放置1h，用5mol·L－1盐酸溶液中和，用甲醇稀释至刻度，摇匀，离心，滤过，取续滤液，按“2.1”条下色谱条件进样分析，记录色谱图（见图2），相对保留时间为约0.93的色谱峰与普罗布考峰的分离度大于Fig．2The chromatogram of system sutability solution图2系统适用性色谱图259沈阳药科大学学报第32卷4，理论板数按普罗布考峰计算不低于10000。

2.4专属性试验分别吸取空白辅料溶液、对照品溶液、供试品溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图（见图3）。

由图可见，空白辅料溶液在与杂质对照品相应的保留时间处，无色谱峰出现，表明处方辅料不干扰杂质的测定。

2.5线性范围和相对校正因子精密量取对照品储备液Ⅰ0.4、0.8、1.0、1.5、2.0和2.5mL，分别置10mL量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得系列标准溶液Ⅰ；精密量取对照品储备液Ⅱ0.1、0.4、0.8、1.0、1.5和2.0mL，分别置10mL量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得系列标准溶液Ⅱ；精密量取对照品储备液Ⅲ0.2、0.4、0.5、0.8和1.0mL，分别置5 mL量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得系列标准溶液Ⅲ。

按“2.1”条色谱条件进样分析，测定保留时间和峰面积。

以各浓度点色谱峰的相对保留时间（tＲＲ）的平均值，作为3种有关物质相对于普罗布考的相对保留时间tＲＲ，tＲＲ=tＲ有关物质/ tＲ普罗布考；以峰面积A为纵坐标，质量浓度ρ（mg·L－1）为纵坐标，分别用最小二乘法计算普罗布考和3种有关物质的线性方程及回归系数r，以各有关物质与普罗布考线性方程的斜率计算各有关物质相对于普罗布考的校正因子（f），f=k普罗布考/k有关物质，结果表明，普罗布考及3种有关物质的质量浓度在相应的范围内线性关系良好，r均达到0.9990，有关物质A、B、C相对于普罗布考的相对保留时间分别为1.46、0.93和1.40，校正因子分别为0.23、1.10和1.55（见表2）．2.6定量限与检测限取“2.5”条下标准溶液，用逐步稀释法测定定量限（S/N=10）与检测限（S/N=3），结果显示普罗布考与有关物质A、B、C的定量限质量浓度分别为20、120、250和600μg·L－1，分别相当于1—Probucol；2—Ｒelated substance B；3—Ｒelated substance C；4—Ｒelated substance AFig．3HPLC chromatograms of blank excipients solu-tion（a），standard solution（b）and test solution（c）图3空白辅料溶液（a）、对照品溶液（b）和供试品溶液（c）的色谱图主成分的1.0ˑ10－4%、6.0ˑ10－4%、1.2ˑ10－3%和3.0ˑ10－3%，检测限质量浓度分别为7、40、80和200μg·L－1，分别相当于主成分的3.0ˑ10－5%、2.0ˑ10－4%、4.0ˑ10－4%和1.0ˑ10－3%。

Table2Linear regression equation，relative retention times and relative correction factors（n=6）表2普罗布考及其有关物质的线性回归方程、相对保留时间及相对校正因子（n=6）Compound tＲ/minＲＲT Linear equation rρlinear range/（mg·L－1）f A59.99 1.46A=12.4024ˑ104ρ－1.661ˑ1030.99910.08－0.500.23 Probucol41.12A=2.8526ˑ104ρ－2.765ˑ1030.99940.08－0.50B38.370.93A=2.8150ˑ104ρ－1.880ˑ1030.9996 1.0－20.0 1.10 Probucol41.12A=3.0965ˑ104ρ+6.756ˑ1030.9996 1.0－20.0C57.81 1.40A=1.9070ˑ104ρ－4.276ˑ1030.999240.0－200 1.55 Probucol41.12A=2.9558ˑ104ρ+4.896ˑ1030.999540.0－200359第12期安珍珍等：ＲP-HPLC加校正因子的主成分自身对照法测定普罗布考片中3种有关物质的含量2.7精密度取对照品溶液，按“2.1”条色谱条件，连续进样5次，计算有关物质A、B、C和普罗布考的峰面积的ＲSD分别为 1.7%、0.9%、0.5%和0.3%，表明色谱系统重复性良好。

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HPLC法测定对乙酰氨基酚片中有关物质的含量

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HPLC法测定对乙酰氨基酚片中有关物质的含量作者：杨莉梅勇龙涛罗磊陈小雪来源：《中国药房》2020年第10期中图分类号 R917 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2020）10-1233-06DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2020.10.15摘要目的：建立测定对乙酰氨基酚片中有关物质含量的方法。

方法：采用高效液相色谱法。

色谱柱为Agilent 5HC-C8，流动相A、B分别为甲醇-水-冰醋酸（50 ∶ 950 ∶ 1，V/V/V）和甲醇-水-冰醋酸（500 ∶ 500 ∶ 1，V/V/V）（梯度洗脱），流速为0.9 mL/min，检测波长为254 nm，柱温为40 ℃，进样量为5 μL。

结果：该色谱条件下，对乙酰氨基酚片中的主药（对乙酰氨基酚）、6个已知杂质（对氨基酚、对氯苯乙酰胺和杂质A、B、D、F）、3个制剂特定辅料（羟苯甲酯、羟苯乙酯和羟苯丙酯）和1个未知杂质的分离度均大于1.5。

6个已知杂质检测质量浓度的线性范围分别为0.539～1.617、0.026～0.384、0.237～17.799、0.257～19.271、0.239～17.955、0.246～18.462 μg/mL（r≥0.999 8），杂质A、B、D、F的校正因子分别为2.9、1.0、1.2、6.2;检测限分别为0.009 6、0.024 2、0.164 0、0.051 1、0.055 9、0.422 0 ng，定量限分别为0.032 0、0.080 6、0.546 0、0.170 0、0.186 0、1.406 0 ng;平均回收率为95.96%～111.09%（RSD为0.05%～2.42%）;精密度试验的RSD均小于15%，且耐用性良好。

3批样品均检出了对氨基酚（均为0.006%）、杂质B（0.016%～0.017%）、未知杂质（0.002 0～0.002 1%），未检出对氯苯乙酰胺和杂质A、D、F。

RP-HPLC法测定瑞格列奈原料药含量及其有关物质

RP-HPLC法测定瑞格列奈原料药含量及其有关物质

RP-HPLC法测定瑞格列奈原料药含量及其有关物质张婷;陈淑娴;吴司琪;彭红【期刊名称】《药品评价》【年(卷),期】2024(21)1【摘要】目的通过RP-HPLC法对瑞格列奈原料药的含量和其有关物质进行分析。

方法采用J&K WpHC18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),使用0.1%甲酸溶液-甲醇(32∶68)作为流动相,流速为1.0 mL/min,检测波长为243 nm,柱温为20℃,进样量为20μL。

结果瑞格列奈浓度在10.06~80.72μg/mL范围内线性相关性良好(Y=0.0121X+0.0107,r=0.9997),重复性试验RSD值为1.01%(n=6),平均回收率为99.2%,检测限为4.0 ng,定量限为11.5 ng。

外标法测定瑞格列奈原料药平均含量为99.6%。

主峰和其他杂质峰明显区别,三个批次的瑞格列奈样品有关物质的含量分别为0.17%、0.14%和0.15%。

结论RP-HPLC法操作便捷、专属性好、精密度高、结果可靠,可用于瑞格列奈原料药的检测。

【总页数】5页(P36-40)【作者】张婷;陈淑娴;吴司琪;彭红【作者单位】萍乡卫生职业学院;兴化市中医院;江西中医药大学【正文语种】中文【中图分类】R28【相关文献】1.RP-HPLC法测定甘氨酸原料药有关物质研究2.RP-HPLC法测定吲哚美辛5-氟尿嘧啶甲酯原料药含量及有关物质3.RP-HPLC法测定盐酸纳洛酮原料药含量及相关物质4.RP-HPLC法测定DHDK原料药中11种有关物质的含量5.RP-HPLC法测定替勃龙原料药有关物质及含量因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

RP-HPLC法同时测定防己中3种生物碱类成分的含量

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RP-HPLC法同时测定防己中3种生物碱类成分的含量马悦;李凯;崔娜;刘华;王知斌【摘要】目的:建立同时测定防己药材中3种生物碱类成分含量的HPLC.方法:采用高效液相色谱法,XbridgeTMBEH300 C18色谱柱(4.6×150mm,5μm),流动相为甲醇(A)-0.015％二乙胺水(B),流速1.0mL·min-1,检测波长245 nm,进样量10μL,柱温25℃.结果:在40min内3种生物碱成分完全分离,呈现良好的线性关系(r=-0.9997-0.9999);平均加样回收率在93.03％～97.56％;不同产地的药材中3种成分含量有明显差异,陕西防己中汉防己甲素、汉防己丙素含量最高,江西防己中的汉防己乙素含量最高.结论:建立的多成分含量测定方法可用于防己药材的质量控制.【期刊名称】《化学工程师》【年(卷),期】2019(033)002【总页数】4页(P24-26,12)【关键词】防己;生物碱;含量测定;HPLC【作者】马悦;李凯;崔娜;刘华;王知斌【作者单位】黑龙江中医药大学教育部北药基础与应用研究重点实验室;黑龙江省中药天然药物药效物质基础研究重点实验室,黑龙江哈尔滨150040;黑龙江中医药大学教育部北药基础与应用研究重点实验室;黑龙江省中药天然药物药效物质基础研究重点实验室,黑龙江哈尔滨150040;黑龙江中医药大学教育部北药基础与应用研究重点实验室;黑龙江省中药天然药物药效物质基础研究重点实验室,黑龙江哈尔滨150040;黑龙江中医药大学教育部北药基础与应用研究重点实验室;黑龙江省中药天然药物药效物质基础研究重点实验室,黑龙江哈尔滨150040;黑龙江中医药大学教育部北药基础与应用研究重点实验室;黑龙江省中药天然药物药效物质基础研究重点实验室,黑龙江哈尔滨150040【正文语种】中文【中图分类】R284防己为防己科植物粉防己Stephaniatetrandra S.Moore的干燥根[1]，始载于《神农本草经》记述为：“防己气平，禀金之气，味辛无毒，得金之味入手太阴肺经”。

RP-HPLC法测定甘氨酸原料药有关物质研究

RP-HPLC法测定甘氨酸原料药有关物质研究

- 1 -高 新 技 术甘氨酸（Glycine，缩写Gly）又名氨基乙酸，甘氨酸是内源性抗氧化剂还原性谷胱甘肽的组成氨基酸，机体发生严重应激时常用外源补充，有时也称为半必需氨基酸[1]。

甘氨酸在食品、医药等领域应用广泛[2]。

在医药行业中可以用作氨基酸制剂、抗胃酸冲剂以及其他赋形剂[3]。

甘氨酸的工业生产方法主要有3种，天然蛋白质水解法、氯乙酸氨解法和Strecker 法。

目前国内普遍采用氯乙酸氨解法，国外则以Strecker 法为主。

甘氨酸的原料药中可能会产生甘氨酸酐、亚氨基二乙酸、2-氯乙酸、双甘氨肽、三甘氨肽等杂质，但是国内尚未有关于测定甘氨酸原料药中这些杂质的报道。

为了有效控制甘氨酸原料药的质量，保证用药安全，该实验采用HPLC 法同时测定甘氨酸原料药中的上述5种杂质，为原料药的质量控制提供参考。

１　试验部分１．１　仪器与试剂岛津LC-20AT 高效液相色谱仪；梅特勒320pH 酸度计；奥豪斯EX225DZH 十万分之一天平；抽滤装置、微孔滤膜（硝化纤维型，φ50 cm，孔径0.22 μm ）；上海一恒科学仪器有限公司[4]。

甘氨酸3批：由湖南宝利士生物技术有限公司提供，甘氨酸酐（含量≥98%，标准物质），亚氨基二乙酸（含量≥98%，标准物质，），2-氯乙酸（含量≥98%，标准物质），双甘肽（含量≥98%，标准物质），三甘氨肽（含量≥98%，标准物质），以上标准物均有Sigma 公司提供。

庚烷磺酸钠、磷酸（均为分析纯）：天津科密欧化学试剂有限公司，超纯水：由DZG-303A 艾科超纯水机制得，乙腈（HPLC 级）：Merck 公司[5]。

１．２　溶液的配制流动相溶液：称取庚烷磺酸钠2.24 g，加水975 mL 溶解后，用磷酸调节pH 值至2.2，过滤后，再加入25 mL 乙腈，超声。

稀释剂溶液：同流动相溶液。

对照品储备溶液：称取各组分杂质对照品约25 mg，精密称定，置50 mL 量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度。