异基因造血干细胞移植后巨细胞病毒感染的探究

Ｔｈｅｓｔｕｄｙ

ｏｆｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎｉｎ

ｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈａｌｌｏｇｅｎｅｉｃｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌ

ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ

ＡＴｈｅｓｉｓＳｕｂｍｉｔｔｅｄｔｏ

ＳｏｕｔｈｅａｓｔＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ

ＦｏｒｔｈｅＡｃａｄｅｍｉｃＤｅｇｒｅｅｏｆＭａｓｔｅｒ

ＢＹＨｅＪｕｎ

ＳｕｐｅｒｖｉｓｅｄｂｙＰｒｏｆＣｈｅｎＢａｏ．．ａｎ

ＳｃｈｏｏｌｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＳｏｕｔｈｅａｓｔＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ

Ｎｏｖｅｍｂｅｒ２０１４

万方数据东南大学学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得东南大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。

研究生签名：弓刁孝日期：ｗｆ舻．，，．砂≯

东南大学学位论文使用授权声明东南大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆有权保留本人所送学位论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容一致。除在保密期内的保密论文外，允许论文被查阅和借阅，可以公布（包括刊登）论文的全部内容。论文的公布（包括刊登）授权东南大学研究生院办理。

研究生签名：弓而左导师签名：日期：劫／矽．／『’％

万方数据目录目录

中文摘要………………………………………………………………………………………．ＩＡｂｓｔｒａｃｔ……………………………………………………………………………………………………………………ＩＶ中英文缩略词对照表………………………………………………………………………ＶＩＩＩ２宗ｉ苤……………………………………………………………………………………………………………………１前言……………………………………………………………………………………………………………………１６第一部分异基因造血干细胞移植后受者…………………………………………………１９ＣＭＶ感染的非细胞免疫性相关研究…………………………………………………………１９第一章研究内容……………………………………………………………………一１９第二章研究方法……………………………………………………………………一２８第三章结果…………………………………………………………………………２９第二部分异基因造血干细胞移植后受者…………………………………………………３４细胞免疫状态对造成早期ＣｍＶ—ＤＮＡ阳性的影响…………………………………………一３４第一章材料…………………………………………………………………………。３４第二章方法…………………………………………………………………………．．３６第三章结果…………………………………………………………………………。３７第三部分讨论………………………………………………………………………………３９问题与展望……………………………………………………………………………………４４／Ｊ、结……………………………………………………………………………………………………………………一４５参考文献…………………………………………………………………………………４６作者简介……………………………………………………………………………………．．５１

致谢…………………………………………………………………………………………………………………………５２

万方数据中文摘要中文摘要

异基因造血干细胞移植后巨细胞病毒感染的研究

研究目的：第一部分：巨细胞病毒（Ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ，ＣＭｖ）是造血干细胞移植后最常见机会性感染源之一，在造血干细胞移植早期ＣＭＶ疾病的死亡率达８０％以上，早期预防和诊断是减少ＣＭＶ疾病发生的关键。ＣＭＶ感染和致病受到病毒本身基因、宿主基因和机体免疫因素的影响。本研究目的是探讨异基因造血干细胞移植（Ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ

ｓｔｅｍｃｅｌｌｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，Ａｌｌｏ—ＨＳＣＴ）术后受者ＣＭＶ—ＤＮＡ阳性率（本文称ＣＭＶ感染率），

ＣＭｖ—ＤＮＡ首次检出阳性的中位时间，ＣＭＶ－ＤＮＡ阳性病例的分布及疑是ＣＭＶ病的病死率，并分析ＣＭＶ感染相关危险因素，为合理选择供体，制定合适的移植预处理方案和病毒防治方案提供参考价值。第二部分：本部分研究通过对移植后受者Ｔ细胞亚群和ＮＫ细胞重建，初步探索Ａｌｌｏ—ＨＳＣＴ后受者的免疫重建状态对ＣＭｖ激活的影响。研究方法：第一部分：回顾性分析２００４年１月至２０１４年３月在东南大学附属中大医院血液科１０８例行Ａｌｌｏ—ＨＳＣＴ患者临床资料及术后ＣＭｖ感染情况。随访日期截止至２０１４年４月３１日，随访中位时间１４９２（５１～３４８４）ｄ。详细记录纳入病例的性别、年龄、原发疾病名称及诊断时间、危险度分层（标危、高危）、ＡＢＯ血型配型和人类白细胞抗原（Ｈｕｍａｎｌｅｕｃｏｃｙｔｅａｎｔｉｇｅｎ，ＨＬＡ）配型相合情况、供者与受者关系、预处理方案、移植

时间、抗人胸腺细胞免疫球蛋白（Ａｎｔｉ—ｈｕｍａｎｔｈｙｍｕｓｇｌｏｂｕｌｉｎ，ＡＴＧ）使用情况、造血重建时间、急性移植物抗宿主病（ａｃｕｔｅＧｒａｆｔ—ｖｅｒｓｕｓ—ｈｏｓｔｄｉｓｅａｓｅ，ａＧＶＨＤ）及慢性移

植物抗宿主病（ｃｈｒｏｎｉｃＧｒａｆｔ—ｖｅｒｓｕｓ—ｈｏｓｔｄｉｓｅａｓｅ，ｃＧＶＨＤ）分度及预后等情况，在随访期内采用荧光定量聚合酶链反应法（ＦｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎ

万方数据东南大学硕士学位论文Ｒｅａｃｔｉｏｎ，ＦＱ—ＰＣＲ）定期检测Ａｌｌｏ—ＨＳＣＴ术后受者尿ＣＭＶ—ＤＮＡ，记录尿中首次检出ＣＭＶ—ＤＮＡ

阳性的时间、ＣＭＶ－ＤＮＡ阳性分布及预后等情况。第二部分：选择２０１０年１月～２０１４年３月行ＡＩＩｏ－ＨＳＣＴ受者５４例，利用ＦＱ—ＰＣＲ定期检测移植后９０ｄ内受者尿液中ＣＭＶ－ＤＮＡ，根据检测结果将５４例分为Ｃｆｆ＼『一ＤＮＡ阳性组（简称ＣＭＶ阳性组）和ＣＭＶ－ＤＮＡ阴性组（简称ＣＭＶ阴性组），同时选取３０例尿ＣＭＶ—ＤＮＡ阴性的健康供者作为本部分的实验参考，采用流式细胞仪（Ｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，ＦＣＭ）检测技术连续检测５４例Ａｌｌｏ—ＨＳＣＴ术后３０ｄ，６０ｄ和９０ｄ受者和３０例健康供者外周血ＣＤ３＋，ＣＤ３＋ＣＤ４＋，ＣＤ３＋ＣＤ８＋以及ＣＤ３－ＣＤｌ６＋ＣＤ５６＋（即ＮＫ细胞）重建情况，比较ＣＭＶ阳性组与阴性组免疫状态的差异。结果：第一部分：按纳入标准入选的１０８例接受Ａｌｌｏ—ＨＳＣＴ的受者，尿ＣＭＶ－ＤＮＡ阳性率为５２．７８％（５７／１０８），首次尿中检出ＣＭＶ—ＤＮＡ阳性的中位时间为４４（３～３０８）ｄ，主要集中在移植后３０～ｌＯＯｄ。截止随访期，发展疑是为ＣＭＶ病１７例，分别分布在肺、肠、膀胱、肝脏以及口腔等部位；移植后疑是因ＣＭＶ病而死亡的病例为１０例，占ＣＭＶ－ＤＮＡ阳性病例数的１７．５４％（１０／５７），其中疑是ＣＭＶ间质性肺炎（ＣＭＶ—Ｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌｐｎｅｕｍｏｎｉａ，Ｃ肌工Ｐ）病死率最高，占死亡病例的３５．２９％（６／１７）。单因素分析显示ＣＭＶ－ＤＮＡ

阳性率与供、受者ＨＬＡ配型、预处理方案中是否使用ＡＴＧ、移植后粒细胞缺乏（简称粒缺）时间＞ｌＯｄ及ＧＶＨＤ等因素有关；与受者年龄，性别，原发疾病种类，原发疾病到移植间隔时间，原发疾病分级，干细胞来源，供者性别，供、受者ＡＢＯ血型是否相同及移植季节均无关。多因素分析显示粒缺时间＞ｌＯｄ和ＧＶＨＤ是ＣＭＶ－ＤＮＡ阳性率增高的高危因素。第二部分：纳入研究的５４例患者均获得造血重建，粒系造血重建（＞０．５ｘ１０９／Ｌ）的中位时间为１２（９～２０）ｄ，血小板造血重建（＞２０ｘ１０９）中位时间为２２（１２－４６）ｄ。３２例患者在移植９０ｄ内出现ＣＭＶ—ＤＮＡ阳性，ＣＮＭｖ—ＤＮＡ阳性检出的中位时间为４３（３～７６）ｄ；Ｉｌ万方数据中文摘要移植后３０ｄＣＭＶ－ＤＮＡ阳性组ＣＤ３＋Ｔ细胞比例低于ＣＭＶ—ＤＮＡ阴性组，差异有统计学意义，

６０ｄ，９０ｄ两组差异无统计学意义。移植后３０ｄＣＭＶ—ＤＮＡ阳性组ＣＤ３＋ＣＤ４＋Ｔ细胞比例低于ＣＭＶ—ＤＮＡ阴性组，两组差异有统计学意义，移植后６０ｄ，９０ｄ两组差异无统计学意义。在移植后９０ｄ内两组ＣＤ３＋ＣＤ８＋Ｔ细胞比例均无统计学差异。移植后６０ｄＣＭＶ—ＤＮＡ阳性组ＣＤ３一ＣＤｌ６＋ＣＤ５６＋ＮＫ细胞比例高于ＣＭＶ—ＤＮＡ阴性组，差异有统计学意义。结论：第一部分：ＣＭＶ是Ａｌｌｏ－ＨＳＣＴ术后常见的感染病毒之一，预处理方案中加用ＡＴＧ，移植后将粒缺时间控制在ｌＯｄ以内以及预防ＧＶＨＤ的发生均可以降低ＣＭＶ－ＤＮＡ阳性率。虽然本组研究发现ＣＭＶ－ＤＮＡ阳性率与干细胞来源无关，但综合其他文献的报道，作者主张移植时选择亲缘、ＨＬＡ配型全相合的供者；积极加强ＣＭＶ—ＤＮＡ阳性病例的抢先治疗可能减少ＣＭＶ病的发生率和病死率。第二部分：造血干细胞移植后Ｔ淋巴细胞重建缓慢，ＮＫ细胞持续高比例存在，初步证明其与ＣＭＶ—ＤＮＡ阳性率增高有关。

关键词异基因造血干细胞；移植；巨细胞病毒；免疫因素；危险因素

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