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实验三 大、小鼠的基本操作技术
[实验目的]： 通过大鼠、小鼠的抓取固定、性别辨认、灌胃、注射、采血、麻醉、标记、安乐死、动物剖检、脏器摘除与检查等实际操作，掌握大、小鼠动物实验的基本操作技术。
[实验动物]：大鼠、小鼠
[材料与器材]：大、小鼠饲养盒（带面罩）、大鼠和小鼠手术固定台，常规手术器械、大鼠灌胃针、小鼠灌胃针、lml注射器、5ml注射器、l0ml注射器、烧杯、75％酒精及酒精棉，干棉球。生理盐水、20％乌拉坦溶液（或3％戊巴比妥钠）、乙醚、新洁尔灭、3—5％苦味酸溶液、0.5％中性红或品红溶液、
[实验内容]：
一 、 实验动物标记编号的方法一染色法
（一）被毛染色法
1、单色涂染法；（3—5％苦味酸溶液，可染成黄色）。
2、双色涂染法：苦味酸（黄色）—为个位数；品红（红色）—为十位数．
（二）耳缘打孔法：适于做长期实验用。、
（三）刺数钳烙印法：适用于长期或慢性实验的大动物编号。
（四）号牌法：用于大动物实验。
二、实验动物被毛的去除方法
（一）剪毛法；（二）拔毛法；（三）剃毛法；（四）脱毛法；
三、大鼠、小鼠性别的鉴定
方法步骤：
1、将动物抓取后，腹部朝上，观察肛门与生殖器之间的距离，距离近的为雌性，距离远的为雄性，
2、成年雌性大小鼠有12个乳头。
3、天热时或性成熟后，雄性动物的睾丸一般会从腹腔降至阴囊内，此时易于区别。
四、大鼠、小鼠的抓取和固定
（一）小鼠的抓取固定：
[实验器材]：小鼠饲养盒(带面罩)1套，小鼠防护手套若干。
[方法步骤]：
1、用右手拇指和食指捏住小鼠尾巴中部将小鼠提起，放在饲养盒面罩上。 2 2、用左手拇指和食指迅速、准确地捏住小鼠的两耳后、颈背部的皮肤，将小鼠提起。
3、翻转左手掌，以左手掌心和中指夹小鼠背部的皮肤，使小鼠整个呈一条直线。
4、用左手无名指压住小鼠背部的皮肤，小指压住小鼠的尾巴根部。
5、松开捏住小鼠尾巴的右手拇指和食指。
大鼠取血方法
1. 割（剪）尾采血：当所需血量很少时采用本法。 每鼠一般可采血10余次以上。小鼠每次可取
血 0.1ml，大鼠 0.3〜0.5ml。
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2. 鼠尾刺血法：大鼠用血量不多时（仅做白细胞计数或血红蛋白检查 ），可采用本法。先将鼠 尾用温水擦拭，再用酒精消毒和擦拭，使鼠尾充血。用7号或8号注射针头，刺入鼠尾静脉, 拔出针头时即有血滴出，一次可采集 10〜50mm3。如果长期反复取血，应先靠近鼠尾末端
穿刺，以后再逐渐向近心端穿刺。
3. 眼眶静脉丛采血： 体重20-25g的小鼠每次可采血 0.2-0.3ml ;体重200-300g大鼠每次可采 血0.5-1.0ml，可适用于某些生物化学项目的检验。
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大鼠取血方法
1、割(剪)尾采血：当所需血量很少时采用本法。每鼠一般可采血10余次以上。小鼠每次可取血0、1ml，大鼠0、3～0、5ml。
2、鼠尾刺血法：大鼠用血量不多时(仅做白细胞计数或血红蛋白检查)，可采用本法。先将鼠尾用温水擦拭，再用酒精消毒与擦拭，使鼠尾充血。用7号或8号注射针头，刺入鼠尾静脉，拔出针头时即有血滴出，一次可采集10～50mm3。如果长期反复取血，应先靠近鼠尾末端穿刺，以后再逐渐向近心端穿刺。
3、眼眶静脉丛采血：体重20-25g得小鼠每次可采血 0、2-0、3ml；体重200-300g大鼠每次可采血0、5-1、0ml，可适用于某些生物化学项目得检验。
4、断头取血：采血者得左手拇指与食指以背部较紧地握住大(小)鼠得颈部皮肤，并作动物头朝下倾得姿势。右手用剪刀猛剪鼠颈，约1/2-4/5得颈部前剪断，让血自由滴入盛器。小鼠可采用约0、8～1、2ml;大鼠约5-10ml。
5、心脏采血：鼠类得心脏较小，且心率较快，心脏采血比较困难，故少用。若做开胸一次死亡采血，先将动物作深麻醉，打开胸腔，暴露心脏，用针头刺入右心室，吸取血液。小鼠约0、5-0、6ml；大鼠约0、8-1、2ml。
1、浅麻醉大鼠
2、四肢展开固定在平板上
3、按常规碘酒、酒精消毒后
4、用食指感觉心博最动处
5、大约在胸骨下缘1/3处、稍偏左0、2-0、5左右得地方垂直进针（1/4号）
6、针头抵心脏有明显得搏动感，再稍进针，有空虚感，血液跳跃而上针腔
7、从血液得颜色很容易判断在心室还就是心房，一般都在心室
8、多次同一大鼠得心脏采血，切记初次进针得位置及深度，不要随意更换固定姿势！
9、我每次取1ml血液，大约可操作4-5次（200g大鼠）
6、颈动静脉采血：先将动物仰位固定，切开颈部皮肤，分离皮下结缔组织，使颈静脉充分暴露，可用注射器吸出血液。在气管两侧分离出颈动脉，离心端结扎，向心端剪口将血滴入试管内。离心取上清后，余下得红细胞加适量生理盐水从尾静脉中回输给大鼠，这样可能对大鼠得血量、体内药物得浓度等影响均小些。
生理学实验动物的取血方法
（一）大鼠、小鼠
1、尾静脉
使鼠尾静脉充分充血后，用剪刀剪去尾尖，尾静脉知即可流出，用手轻轻从尾根部向尾尖部
挤几下，可以取到数滴血。
2．眼眶动脉和静脉
用左手抓住鼠，拇指和食指尽量将鼠头部皮肤捏紧，使鼠眼球突出。右手取一无钩弯小镊，
在鼠右侧眼球根部将眼球摘去，关将鼠倒置，头向下，此法由于取过程动物未死，心脏不断
在跳动，因此取血量比断头法多，一般约可取出4-5%鼠体重的血液量。
1－27 切破鼠尾静脉方法
1－28 鼠尾静脉取血方法
3．后眼眶静脉丛连续穿刺
穿刺部位是在眼球和眼眶后界之间的后眼眶静脉丛。采用特制的硬玻璃吸管，管长15厘米，
前端拉成毛细管。
取血时，用手从背部捉住动物，同时用食指和拇指握住颈部，利用对颈部所加的轻压力，使
头部静脉淤血，将消毒的吸管用抗凝剂湿润其内壁，从内侧眼角将吸管转向前，并轻压刺入，
深约4-5mm就达到后眼眶静脉丛，血液自然进入吸管内。 在得到所需血量后，除去加于颈部的压力，同时抽出吸管。
1－29 小鼠后眼眶静脉丛取血方法
1－30 大鼠后眼眶静脉丛取血方法
4．断头
用大鼠断头器或粗剪刀在鼠颈部将鼠头剪掉，实验者立即将鼠颈向下，提起动物，对准准备
好的容器，鼠血即可从颈部滴入容器内。
如图1－31
5．心脏
左手固定鼠，在左侧第3-4肋间，用左手食指摸到心搏，右手取注射器选择心搏最强处穿刺。
如图1－32
1－31 小鼠断头取血方法
1－32 小鼠心脏取血方法
6． 颈静脉
作一般颈外静脉分离手术。颈静脉暴露楚后，用注射器针头沿静脉平行方向刺入，抽取所需
血量，采用此法取血，体重20克的小鼠可取0.6ml左右，体重300克的大鼠可取血8ml左
右。
1－33 大鼠颈静脉取血方法
（二）家兔和豚鼠 1、心脏： 将兔仰卧固定在手术台上，把左侧胸部相当于心脏的部位的被毛剪去，用碘伏、酒精消毒皮肤。实验者用左手触摸左侧第3-4肋间，选择心跳最明显处作穿刺。一般由胸骨左缘外3mm处将注射针头插入第三肋间隙。穿刺时最好用左手触诊心跳，在触诊的配合下穿刺。 经6-7天后，可以重复进行心脏穿刺术。家兔一次可采取全血量的1/6-1/5。 2、耳缘静脉： 同耳缘静脉注射法。
