水的卫生细菌学

2.2 平板涂布法
先制作平板；
取样品（无菌水）0பைடு நூலகம்1ml放入平板 上，涂抹棒均匀涂抹平板表面，直至 无残存样品（无菌水）；
翻转放置。
平板涂布
2. 3注意事项
保证无菌操作要求，同时注意不得影响样品中的微生物（培养基不得 太烫，取样时不要离火焰太近）；
制作平板时培养基不得沾附底面之外的侧面甚至盖上，未凝固前不得 翻转；
混匀器
四、接种培养
1.培养数量
不稀释样：样品、无菌水（无菌对照），共2 个培养，每个培养需培养3个平板（重复）；
需稀释样：最大稀释样及前两个稀释样、无 菌水，共4个培养，每个培养需培养3个平板 （重复）；
预先在培养皿底面标记清楚培养稀释度、操 作人、时间等信息。
培养皿标记
2. 接种平板
2.1 混合平板法
三、样品的稀释
主要针对样品中含较多微生物的水样（水源水、污水）；
自来水、饮用水一般不需稀释，可直接取样培养。
1. 分装无菌水 取数支无菌试管，标记10－1、10－2、……,每试管分装9ml无菌水 或无菌生理盐水。 （也可分装好后再灭菌）
稀释所需的数量级根据样品中微生物量的估计而定，一般轻度 污染水稀释到10－3，重度污染水可稀释到10－5、10－6。
对于不利于细菌生长的污染物，常需检测对应专门微生物及污染 物含量的直接检测。
二、稀释平板培养计数法
细菌的个体微小，直接观察、计数困难； 单个细菌经过培养可长成肉眼可见的菌落； 要设法避免多个细菌长成1个菌落，常需对 样品进行稀释处理。
稀释平板培养菌落
1.测定的程序：
样品稀释 接种平板 培养 菌落计数 报告
不同稀释度不得使用同一移液管，防止交叉影响及污染；

病原细菌疾病防治措施

保持食品和饮用水清洁 ； 食用煮沸水和煮熟食物； 勤洗手，注意个人卫生及保持室内清洁 ； 消灭苍蝇及其孳生地 ； 与病菌携带者保持距离。
☞寄生虫
种类：蛔虫、血吸虫 防治： a、使用粪便施肥前，应暴晒或堆肥； b、生活污水灌溉前经沉淀等处理； c、饮用水处理； d、加强水源保护。
一、细菌总数的测定
水样接种 推算
37 ℃温度下培养24h 数出生长的菌落数
二、大肠菌群的测定方法： ⑴发酵法（基本方法） 此法分三步：①初步发酵试验； ②平板分离； ③复发酵试验。 ⑵滤膜法 发酵法完成全部检验需72h，滤膜法检验大肠 菌群，只需30h左右。
§4 水中微生物的控制
4.1 病原微生物的去除 自来水厂常用的方法有：⑴加氯消毒；⑵臭氧消 毒；⑶紫外线消毒。 其中，加氯消毒最常用。可使用液氯，也可使用 漂白粉（其中含有25％～35％的有效氯）。
（2）痢疾杆菌 分痢疾杆菌和副痢疾杆菌两种； 革兰氏染色阴性菌 ，无芽孢和荚膜，一般无鞭毛； 适宜的温度为37℃ ；耐寒能力强，在阴暗潮湿及冰 冻环境下能生存数周 ； 不耐热及干燥，阳光直射即有杀灭作用，加热60℃10 分钟即死亡；对1％的石炭酸，可抵抗30min。 传播方式：取食污染的食物和水；蝇类传播
2.3 生活饮用水细菌卫生标准
我国《生活饮用水卫生标准》GB5749－2001 中关于生活饮用水的细菌标准的具体规定如 下： ⑴细菌总数：小于100(CFU/mL) ⑵总大肠菌群：每100mL水样中不得检出 ⑶粪大肠菌群：每100mL水样中不得检出 （注：CFU为菌落形成单位）
§3 水的卫生细菌学 检验
2.1 大肠菌群作为卫生指标的意义 肠道正常细菌有 3 类：大肠菌群、肠菌球和 产气荚膜杆菌。 大肠菌群作为卫生指标的原因： ⑴该细菌生理习性与肠道病原菌类似，因而它 们在外界的生存时间基本一致； ⑵该种细菌在粪便中的数量较多； ⑶检验技术较简单。

水的卫生细菌学
保证供给人们的 生活饮用水必须是 清洁、安全且没有 病原微生物。
知道水中有哪些 常见的病原微生物。
学习检测它们的 方法
本章内容：
第一节 水中的细菌及其分布 第二节 水中的病原细菌 第三节 大肠菌群和生活饮用水的细菌标准★ 第四节 水的卫生细菌学检验★ 第五节 水中微生物的控制方法★ 第六节 水中的病毒及其检验 第七节 水体污染的生物监测
代谢的极限速度
自净的过程
水体自净过程大致如下
a.污水排入河流的混合过程 b.持久污染物的稀释扩散 物理作用 有机污染物排入水体后被水稀释，有机和无机固体沉降到河底； c.非持久污染物的稀释扩散 d.水体的氧平衡
生物作用
溶氧↓
溶解氧↑
好氧菌↑ 好氧菌↓
有机物降解
厌氧菌↑ 自然溶氧、藻类产氧
河流污染和自净过程图
厌氧层
表层输出
产氧光合 蓝细菌、藻、水生植物 蓝细菌、藻、水生植物
动物、原生动物、好氧细菌 嗜甲烷菌、无机化能细菌
发酵
不产氧光合
厌氧呼吸菌 沉积物
产甲烷菌
（二）海洋微生物 1、种类：多数是嗜盐菌 2、分布： （1）平面分布：近海数量很高 （2）垂直分布：
表层：好氧性微生物 中层：紫硫细菌 底层：厌氧菌及硫酸还原菌
污
水
自净
被污染的水体都是自净水体！ 但自净恢复的程度不同，或称污染现状
不同。
2．衡量水体污染与自净的指标
用什么指标可以衡量河段水体污染与自净所处的阶段?
水体外观、化学 指标、生物种类、 数量及比例关系、 溶解氧等等
A．P／H指数与BIP指数
P代表光合自养型微生物（如藻类） H代表异养型微生物（如细菌等），两者的比即P／H指

实验十水的卫生细菌学检验（综合）a)水中大肠菌群数的测定一、目的要求学习大肠菌群数的检测原理和方法。

二、实验材料样品: 水样2.培养基: 乳糖胆盐发酵管(单料及双料), 伊红美兰琼脂(EMB)平板, 乳糖发酵管。

3.其他：显微镜，酒精灯，无菌吸管(10m1、1m1)，接种环，载玻片等三、基本原理水中的病原菌多数来源于病人和病畜的粪便。

由于病原菌的数量少, 检测过程复杂, 因此, 直接测它们的存在是非常困难的专业化工作。

由于大肠菌群在粪便中数量大, 在体外存活时间与肠道致病菌相近, 且检验方法比较简便, 因此一般采用测定大肠菌群或大肠杆菌的数量来作为水被粪便污染的标志。

如果水中大肠菌群的菌数超过一定的数量, 则说明此水已被粪便污染, 并有可能含有病原菌。

大肠菌群的定义是指一群好氧和兼性厌氧、革兰氏阴性、无芽孢的杆状细菌, 并能在乳糖培养基中, 经37℃24~48h培养能产酸产气。

我国规定每升自来水中大肠菌群不得超过3个。

检测大肠菌群的方法有稀释培养法和膜滤法两种, 其中稀释培养法是标准分析法, 为我国大多数卫生单位和水厂所使用。

它包括初发酵试验、平板分离和复发酵试验三个部分。

四、方法与步骤采样: 取100ml磨口带塞玻璃瓶, 包扎后, 干热灭菌备用。

1.取自来水样时, 至少应先放水5min, 以冲去龙头口所带的微生物, 获得主流管中有代表性的水样。

取样时, 用右手握瓶, 左手启开瓶塞, 用覆盖瓶口的纸托住瓶塞, 收集样品后, 连同覆盖纸一起将瓶口塞好, 并用线绳在原处扎好。

注意手指不得触及瓶口内部。

在静水中取样时, 先用右手揭去塞子, 瓶口朝下浸入水下约30cm处, 然后将瓶子反转过来, 待水注满后, 取出塞好瓶口。

如果水在流动, 瓶口必须迎着水流, 以免手上的细菌被水冲进瓶子。

2.水样放置过程中, 内含的细菌数目和类型会发生变化, 所以要求水样品应于6~10℃贮存,并不超过6h。

3.初发酵试验：吸取待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内, 10ml接种量采用双料发酵管, 而lml及lml以下接种量采用单料管。