水的细菌学检查

实验十水的卫生细菌学检验（综合）a)水中大肠菌群数的测定一、目的要求学习大肠菌群数的检测原理和方法。

二、实验材料样品: 水样2.培养基: 乳糖胆盐发酵管(单料及双料), 伊红美兰琼脂(EMB)平板, 乳糖发酵管。

3.其他：显微镜，酒精灯，无菌吸管(10m1、1m1)，接种环，载玻片等三、基本原理水中的病原菌多数来源于病人和病畜的粪便。

由于病原菌的数量少, 检测过程复杂, 因此, 直接测它们的存在是非常困难的专业化工作。

由于大肠菌群在粪便中数量大, 在体外存活时间与肠道致病菌相近, 且检验方法比较简便, 因此一般采用测定大肠菌群或大肠杆菌的数量来作为水被粪便污染的标志。

如果水中大肠菌群的菌数超过一定的数量, 则说明此水已被粪便污染, 并有可能含有病原菌。

大肠菌群的定义是指一群好氧和兼性厌氧、革兰氏阴性、无芽孢的杆状细菌, 并能在乳糖培养基中, 经37℃24~48h培养能产酸产气。

我国规定每升自来水中大肠菌群不得超过3个。

检测大肠菌群的方法有稀释培养法和膜滤法两种, 其中稀释培养法是标准分析法, 为我国大多数卫生单位和水厂所使用。

它包括初发酵试验、平板分离和复发酵试验三个部分。

四、方法与步骤采样: 取100ml磨口带塞玻璃瓶, 包扎后, 干热灭菌备用。

1.取自来水样时, 至少应先放水5min, 以冲去龙头口所带的微生物, 获得主流管中有代表性的水样。

取样时, 用右手握瓶, 左手启开瓶塞, 用覆盖瓶口的纸托住瓶塞, 收集样品后, 连同覆盖纸一起将瓶口塞好, 并用线绳在原处扎好。

注意手指不得触及瓶口内部。

在静水中取样时, 先用右手揭去塞子, 瓶口朝下浸入水下约30cm处, 然后将瓶子反转过来, 待水注满后, 取出塞好瓶口。

如果水在流动, 瓶口必须迎着水流, 以免手上的细菌被水冲进瓶子。

2.水样放置过程中, 内含的细菌数目和类型会发生变化, 所以要求水样品应于6~10℃贮存,并不超过6h。

3.初发酵试验：吸取待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内, 10ml接种量采用双料发酵管, 而lml及lml以下接种量采用单料管。

水质细菌总数的测定菌落计数1.适用范围本方法适用于测定饮用水、水源水、地表水细菌总数的测定。

2.原理平板计数法是测定水中需氧菌、兼性厌氧菌和异养菌密度的方法。

因为细菌在水中能以单独个体、成双成对、链状、成簇等形式存在，而且没有任何单独一种培养基或一套物理、化学条件能满足一个水样中所有细菌的生理要求。

所以，由此法所得的菌落数可能要低于真正存在的活细菌的总数。

3.仪器高压蒸汽灭菌器电热干燥箱恒温培养箱冰箱解剖镜。

采样瓶、三角烧瓶、试管、平皿（直径9cm）、刻度吸管等器皿121°C（20min）高压蒸汽灭菌后于电热干燥箱中烘干。

培养基营养琼脂培养基：市售营养琼脂培养基，按说明配制，装于三角烧瓶中，经121C高压蒸汽灭菌15min,经无菌性检验和标准菌株检验后，贮存于暗处备用。

4.步骤4.1选择稀释度稀释度要选择适宜，以期在平皿上的菌落总数介于30〜300之间。

大多数饮用水水样，未经稀释直接接种1mL,所得的菌落总数可适于计数。

4.2水样的稀释方法①将水样用力振摇20〜25次，使可能存在的细菌凝团成分散状。

②以无菌操作方法吸取1mL充分混匀的水样，注入盛有9mL灭菌水的试管中，混匀成1：100稀释液。

按同法依次稀释成1：1000、1：10000稀释液（稀释倍数按水样污浊程度而定）。

注意：吸取不同浓度的稀释液时，必须更换吸管。

4.3操作方法①以无菌操作方法用1mL灭菌吸管吸取充分混匀的水样或2〜3个适宜浓度的稀释水样ImL，注入灭菌平皿中，倾注约15mL已融化并冷却到45°C左右的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。

每个水样应倾注两个平皿。

②待琼脂冷却凝固后，翻转平皿，使底面向上，置于37C恒温箱内培养24h,进行菌落计数。

4.4菌落计数培养之后，立即进行平皿菌落计数。

如果计数必须暂缓进行，平皿需存放于5〜10C冰箱内，且不得超过24h。

但是不可以使这种做法成为常规的操作方式。

水中细菌总数的检测1.实验目的1、学习并掌握水的细菌学检测方法2、了解水质状况与细菌数量在饮用水检测中的重要性。

2.菌落总数standard plate-count bacteria水样在营养琼脂上、有氧条件下37°C培养48 h后,所得1 mL水样所含菌落的总数.细菌总数是评价水质污染程度的主要卫生指标，所测定的细菌总数增多说明水被生活废弃物污染。

由于结果不能说明污染的来源，因此必须结合总大肠菌群数来判断污染源和安全程度。

3.培养基与试剂2.1 营养琼脂成分2.2 制法：根据实际需要量,按照上述配方称取各成分混合后，加热溶解，调整pH为7.4～7。

6,分装于玻璃容器中（如用含有较多杂质的琼脂，应先过滤.），经103。

43 kPa（121°C，15 lb）湿热灭菌20 min，储存于冷暗处备用。

4.仪器和材料4.1仪器:高压蒸汽灭菌器、干热灭菌箱、水热恒温培养箱、电炉、天平、冰箱.4.2材料：灭菌平皿（直径9 cm）、灭菌试管、刻度吸管、三角烧瓶、采样瓶、酒精灯、消毒水、镊子、试管架等。

4.3放大镜或菌落计数器、pH计或精密pH试纸、火柴或打火机。

5.样品采集5.1自来水的取样：先将自来水龙头用酒精棉擦拭，再用酒精灯火焰灭菌，打开龙头放水3—5 min，用无菌空三角瓶接取水样200 ml.5.2纯净水取样:用消毒酒精棉擦拭纯水机出口后，先放走部分水，再用无菌空三角瓶接取水样200毫升.5.3地表水的取样:应取距水面10-15 cm的深层水样，先将灭菌的带玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中,然后翻转过来，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛满后,将瓶塞盖好，再从水中取出，最好立即检查,否则需放入冰箱中保存。

6.检验步骤6.1生活饮用水（自来水、纯净水）：以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1 mL充分混匀的水样，注入灭菌培养皿中，倾注约15 ml已融化并冷却到45°C左右的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。

（新编）自来水中菌落总数的测定一、实验目的1.学习水的细菌学检查方法，看其是否合乎饮用标准。

2.了解水源的平板菌落计数的原则二、实验原理饮用水是否合乎标准，通常通过水中细菌总指数和大肠菌群数来确定。

细菌总指数是指lml水样在普通肉膏蛋白琼脂培养基中，37℃24小时培养后所生长的菌落数。

一般规定，1ml自来水的总菌数不得超过100个。

三、实验器材肉膏蛋白琼脂培养基、灭菌水、灭菌三角烧瓶、灭菌的带玻璃塞瓶、灭菌培养皿、灭菌吸管、灭菌试管等。

四、实验步骤1．水样的采取(1)先将自来水龙头用火焰烧灼三min灭菌，再开放水龙头使水流5min后，以无菌容器接取水样。

以待分析。

(2)池水、河水或湖水应取距水面10～15cm的深层水样，先将无菌的带瓶塞的小口瓶，口向下浸入水中，然后翻转过来，除去玻塞，水即流入瓶中，盛满后，将瓶塞盖好，再从水中取出，样品最好立即检查，否则须放入冰箱中保存。

2．细菌总数测定(1)自来水1)用灭菌吸管吸取1ml水样，注入灭菌培养皿中。

共做2份样品。

2)分别倾注约15ml已溶化并冷却到45℃左右的普通琼脂培养基，并立即在桌上作平面旋摇，使水样与培养基充分混匀。

3)另取一空的灭菌培养皿，倾注普通琼脂培养基15m1，作空白对照。

4)培养基凝固后，翻转，置37℃培养箱中，培养24h，进行菌落计数。

两个培养皿的平均菌落数即为lml水样中的细菌总数。

(2)池水、河水或湖水等1)稀释水样取3个灭菌空试管，分别加入9ml灭菌水。

取1ml 水样注入第一管9ml灭菌水内，摇匀；再自第一管摇匀的水样中取1ml至下一灭菌水内，如此稀释到第三管，稀释度分别为10-1、10-2与10-3。

稀释度倍数看水样污浊程度而定，以培养平板的菌落数在30～300个之间的稀释度最为合适，若三个稀释度的菌数均多到无法计数或少到无法计数，则需进一步稀释或减小稀释倍数。

一般中等污秽水样，取10-1、10-2与10-3三个连续稀释度，污秽严重的取10-2、10-3与10-4三个连续稀释度。

水质检测菌落总数标准导言水质检测是评估水体健康状况的重要方法之一。

其中，检测菌落总数是一种常用的指标，用于评估水体中细菌和其他微生物的含量。

菌落总数是指在固定条件下，培养基上形成的可见菌落数目，它反映了水体中菌落的数量和密度。

检测方法常用的菌落总数检测方法是通过培养基培养水样中的微生物，以得到可见的菌落。

通常，使用接种柄在培养基上接种水样，然后将培养基放入恒温箱中适宜的温度下培养一段时间，一般为24-48小时。

在此期间，微生物会逐渐生长并形成可见的菌落。

最后，通过目测或显微镜观察，记录菌落的数量。

检测标准菌落总数的检测结果可以用于评估水体的微生物污染程度，以及是否符合相关的水质标准。

不同国家和地区对菌落总数的限制标准可能不同，一般可根据国际上通用的标准进行判断。

在中国，根据《生活饮用水卫生标准》，菌落总数的标准如下：•水源地进水、水厂出厂水：每毫升不得超过100个菌落形成单位(CFU/ml)；•供水管网、集中供水系统出水：每毫升不得超过100个菌落形成单位(CFU/ml)；•居民家庭自来水：每毫升不得超过100个菌落形成单位(CFU/ml)；菌落总数的标准可以根据水体的用途和领域的要求进行调整。

例如，在某些特定的行业中，如食品生产或医疗机构，对水体的微生物污染准则要求更为严格。

影响因素菌落总数的检测结果可能受到以下因素的影响：•水样采集与保存条件：采样时的卫生条件和保存方式可能导致菌落总数异常增加或减少；•培养基的选择：不同的培养基适用于不同类型的微生物，使用不当可能导致不准确的结果；•培养条件的控制：培养箱的温度、湿度等培养条件的控制是否准确，会影响微生物的生长和形成菌落的数量。

因此，在进行菌落总数检测时，需要注意以上因素以获得准确和可靠的结果。

结论菌落总数是评估水体微生物污染程度及水质的重要指标之一。

不同国家和地区对菌落总数的标准可能有所不同，而菌落总数的影响因素也多种多样。

在进行菌落总数检测时，应严格遵守相应的标准和规范，并注意采样、保存和培养条件的控制，以获得准确、可靠的结果。

水中检测细菌的实验原理实验所需材料及设备：1.水样：待检测的水样（例如自来水、河水、湖水等）；2.培养基：含有营养物质的液体或固体培养基；3.培养皿：用于培养细菌的平板状容器；4.培养箱：提供合适的温度和湿度条件，促进细菌生长；5.显微镜：用于观察细菌的形态和结构；6.毛细管或塑料平板：用于从水样中吸取适量的样品。

实验步骤：1.样品采集：首先需要采集待检测的水样。

可以从水源中直接取样或者从自来水龙头中采集。

2.稀释：取一定量的水样，进行适当的稀释。

这是因为水样中的细菌数量通常非常庞大，稀释可以使细菌数量降低到可以计数的范围内。

3.培养：将稀释后的水样均匀地分布在培养基的表面上。

对于液体培养基，可以用毛细管从水样中吸取适量的样品滴入培养基中。

对于固体培养基，可以使用塑料平板，将样品均匀地涂抹在培养基表面上。

4.培养条件：将培养基置于培养箱中，在适当的温度和湿度下培养一定的时间。

细菌通常在合适的温度和湿度下生长得更快。

5.观察：将培养后的培养皿置于显微镜下观察细菌的形态和结构。

通过观察细菌的形态可以初步判断细菌的种类。

6.计数：使用显微镜、计数盘或其他适当的方法统计培养皿上的细菌数量。

这可以帮助测定水样中细菌的浓度。

7.标识：根据初步的形态观察和计数结果，可以将不同形状、颜色等特征的细菌标记出来。

实验原理解释：在实验中，将采样的水样分布在含有营养物质的培养基上，并提供适当的温度和湿度条件，以促进细菌的生长。

培养基中的营养物质为细菌提供生长所需的营养元素。

根据细菌的不同需求，可以选择不同的培养基。

经过一段时间后，细菌会在培养基上生长形成可见的菌落。

根据菌落数量的多少，可以初步判断水样中的细菌浓度。

在观察菌落后，可以通过显微镜观察细菌的形态和结构，并进一步确定细菌的种类。

值得注意的是，细菌只占水样中微生物的一小部分，仍然存在许多其他的微生物如真菌和病毒等。

因此，细菌检测只是微生物检测的其中一种方法。

为了全面评估水质，常常需要采用更多的方法和技术。

水中细菌总数的检测之吉白夕凡创作一、二、实验的目的要求1、学习并掌握水的细菌学检测方法2、了解水质状况与细菌数量在饮用水检测中的重要性.二、实验原理细菌总数是指1ml水样在营养琼脂培养基中, 于37℃经24h培养后, 所生长的细菌菌落的总数. 细菌总数是评价水质污染水平的主要卫生指标.我国现行的生活饮用水标准检验方法GB5750—85规定水样中细菌总数测定是1ml水样在普通营养琼脂培养基中37℃经24小时培养所生长的细菌菌落的总数.所测定的细菌总数增多说明水被生活废弃物污染, 但不能说明污染的来源.因此必需结合总年夜肠菌群数来判断水污染的来源和平安水平.本实验应用平板计数技术测定水中细菌总数.由于水中细菌种类繁多, 它们对营养和其他生长条件的要求分歧很年夜, 不成能找到一种培养基在一种条件下, 使水中所有的细菌均能生长繁殖, 因此, 以一定的培养基平板上生长出来的菌落, 计算出来的水中细菌总数仅是一种近似值.目前一般是采纳普通牛肉膏卵白胨琼脂培养基.平板菌落计数法的优点：能测出样品中的活菌数.此法经常使用于某些制品和生物制品检定以及食品、水源的污染水平的检定等.缺点：手续较繁, 而且测定值常受各种因素的影响.生活饮用水细菌卫生标准我国饮用水卫生标准：≤ 3个年夜肠菌群/1L饮水 , ≤ 100个细菌总数/1ml饮水三、实验仪器和资料1、高压蒸汽灭菌锅、恒温箱、冰箱、无菌接种间.2、消鸩酒精、消毒水.3、试管、三角瓶、平皿、刻度吸管、涂布器等（实验前包扎灭菌处置好备用）4、培养基卵白胨10g牛肉膏3g氯化钠5g琼脂10~20g蒸馏水1000ml制备方法：依照实际的需要量, 按上述配方称取各成份混合后, 加热溶解, 调整pH为, , 分装于玻璃容器中, 用高压蒸汽灭菌锅121℃灭菌20min, 倒制成平板后贮存于冷处备用.5、水样：自来水、中水.四、实验内容：（一）、培养基的制备：实验前事先准备好培养基平板（方法见上）, 每小组2-4个平板.（二）、取水样：1、自来水的取样：先将自来水龙头用酒精棉擦拭, 再用酒精灯火焰灭菌, 翻开龙头放水1-2分钟, 用无菌空三角瓶接取水样200毫升.2、纯洁水取样：用消鸩酒精棉擦拭纯水机出口后, 先放走部份水, 再用无菌空三角瓶接取水样200毫升.3、池水、河水或湖水应取距水面10—15cm的深层水样, 先将灭菌的带玻璃塞瓶, 瓶口向下浸入水中, 然后翻转过来,除去玻璃塞, 水即流入瓶中, 盛满后, 将瓶塞盖好, 再从水中取出, 最好立即检查, 否则需放入冰箱中保管.（三）、接种培养：（要求无菌把持）用无菌吸管吸取1毫升水样, 加入平板中（每个水样平行做两个平板）, 用无菌涂布器涂抹均匀, 在培养皿正面标注清楚后, 置于37℃恒温箱内经24h-48小时培养后, 统计细菌菌落的总数.（四）、菌落记数：菌落计数及陈说方法作平皿菌落计数时, 可用眼睛直接观察, 需要时用放年夜镜检查以防遗漏.在记下各平皿的菌落数后, 应求出同稀释度的平均菌落数, 供下一步计算时应用.在求同稀释度的平均数时, 若其中一个平皿有较年夜片状菌落发生时, 则不宜采纳, 而应以无片状菌落发生的平皿作为该稀释度的平均菌落数.若片状菌落不到平皿的一半, 而其余一半中菌落数分布又很均匀, 则可将此半皿计数后乘2以代表全皿菌落数.然后再求该稀释度的平均菌落数.五、实验注意事项六、实验陈说内容；1、记录实验方法和步伐.2、列表说明检测结果.（1）自来水（2）饮用水3、思考题：（1）从自来水的细菌总数结果来看, 是否合乎饮用水的标准？（2）你所测的水样污秽水平。

水质的细菌学检查水质的细菌学检查一、目的要求(一)学习水质的细菌学检查法(二)了解水质状况同细菌数量的关系及大肠菌群的数量在饮水中的重要性。

二、基本原理检测水中的细菌数量是评价水质状况的重要指标之一。

饮水是否合乎卫生标准，需要进行水中细菌数量及大肠菌群数量的测定。

大肠菌群是肠道最普遍存在和数量最多的一群细菌，由于大肠菌群是一群能发酵乳糖的革兰氏阴性、无芽孢杆菌，它们在乳糖培养基中经37℃培养24小时即能产酸、产气，所以常将其作为粪便污染的标志。

饮用水一般规定：1毫升自来水中总菌数不得超过100个；1000毫升自来水中大肠菌群数不得超过3个。

三、实验材料培养基及器皿、牛肉膏蛋白胨培养基、乳糖蛋白胨发酵管（内倒置小管）、三倍乳糖蛋白胨发酵管（内倒置小管）、伊红美蓝琼脂培养基、无菌空瓶、无菌水、无菌培养皿、移液管、试管。

四、实验内客(一)采取水样1、自来水：从学校各生活区取样。

先将自来水龙头用火焰灭菌,再开放水龙头使水流1—2分钟后，用无菌空瓶接取水样。

2、池水、湖水或河水：用无菌空瓶取距水面10—15厘米深层水样。

水样采取后应立即检验，不得超过4小时。

(二）水中细菌总数测定l、自来水：稀释水样：原水样和10-1 水样，用无菌移液管分别吸取l毫升原水样和10-1水样，分别注入二个无菌培养皿中。

每皿各加13--15毫升已融化并冷却到4 5-- 50℃的牛肉膏蛋白胨培养基，轻轻旋转，使培养基与水样充分混匀，待凝固后，将平板倒置于37℃恒温箱内，培养24小时进行菌落计数。

制作培养基方法、消毒灭菌、接种、计数皆参照参微生物学实验指导，具体如下：培养基制作：实验五、培养基的制备培养基配方：附录二、常用培养基之一培养基灭菌：实验六、灭菌与消毒水样接种：实验七、土壤微生物的分离与测数细菌总数测定：实验七、土壤微生物的分离与测数2、池水、湖水或河水等。

稀释水样：稀释倍数视水样污浊程度而定，使水样培养后每个平板中的菌落数在30--300之间的的稀释度最为合适。