第二节血涂片制备与染色

血涂片制备与染色一、血涂片制备【器材】清洁、干燥、无尘、无油脂的载玻片(25 mm x75 mm ，厚度为0.8-1.2mm) 。

【操作】血涂片制备方法很多，目前临床实验室普遍采用的是手工推片法，在玻片近端1/3 处，加一滴(约0.05 ml) 充分混匀的血液，握住另一张边缘光滑的推片，以30°- 45°角使血滴沿推片迅速散开，快速、平稳地推动推片至载玻片的另一端。

【附注】1. 血涂片通常呈舌状或楔形，分头、体、尾三部分。

2. 推好的血涂片应在空气中晃动，使其尽快干燥。

天气寒冷或潮湿时，应于37℃恒温箱中保温促干，以免细胞变形缩小。

3. 涂片的厚薄、长度与血滴的大小、推片与载玻片之间的角度、推片时的速度及红细胞比容有关。

一般认为血滴大、角度大、速度快则血膜厚;反之则血膜薄。

红细胞比容高于正常时，血液黏度较高，保持较小的角度，可得满意结果;相反，红细胞比容低于正常时，血液较稀，则应用较大角度、推片速度应较快。

4. 血涂片应在1 h 内染色或在1 h 内用无水甲醇(含水量<3% )固定后染色。

5. 新购置的载破片常带有游离碱质，必须用浓度约1 mol/LHCL浸泡24 h 后，再用清水彻底冲洗，擦干后备用。

用过的载玻片可放人含适量肥皂或其他洗涤剂的清水中煮沸20 min ，洗净，再用清水反复冲洗，蒸馆水最后浸洗，擦干备用。

使用时，切勿用手触及玻片表面。

二、血涂片染色(一)瑞氏( Wright) 染色法【原理】瑞氏染色法使细胞着色既有化学亲和反应，又有物理吸附作用。

各种细胞由于其所含化学成分不同，对染料的亲合力也不一样，因此，染色后各种细胞呈现出各自的染色特点。

【试剂】1.瑞氏染液(1)瑞氏染料0.1 g(2)甲醇(AR) 60.0 ml 。

瑞氏染料由酸性染料伊红和碱性染料美蓝的氧化物(天青)组成。

将瑞氏染料放人清洁干燥研钵里，先加少量甲醇，充分研磨使染料溶解，将己溶解的染料倒人棕色试剂瓶中，未溶解的再加少量甲醇研磨，直至染料完全溶解，甲醇全部用完为止。

血涂片的制备与染色实验报告血涂片的制备与染色实验报告简介本报告旨在介绍血涂片的制备与染色实验方法及步骤，以及相关注意事项和结果分析。

实验步骤1.准备所需材料：–血液样本–血涂片载玻片–血液涂片器–双氧水–细胞染色剂–拖尾液–显微镜片2.制备血涂片：–取一滴血液样本，滴于载玻片中。

–使用血涂片器，将血液涂片器顶端垂直贴附在载玻片上。

–慢慢向后移动血涂片器，使血液样本均匀地涂布于载玻片上。

3.干燥血涂片：–将制备好的血涂片放置于通风处，自然晾干。

4.染色处理：–将已干燥的血涂片浸入双氧水中，浸泡5分钟，用来溶解红细胞。

–用显微镊子夹取血涂片，轻轻晃动10次，使红细胞充分分散。

–轻轻将血涂片冲洗干净，以去除残留的双氧水。

–将血涂片浸入细胞染色剂中，染色1分钟。

–将血涂片冲洗干净，确保没有染色剂残留。

5.拖尾处理：–取适量拖尾液滴在盖玻片上。

–将染色好的血涂片倒置放在盖玻片上，使其与拖尾液接触。

–轻轻拖动血涂片，使细胞核进入拖尾液。

6.结果观察与分析：–将染色好的血涂片放置在显微镜下进行观察。

–分析细胞形态、染色程度等指标，记录结果。

注意事项•实验过程中需戴好实验手套，避免直接接触血液。

•制备血涂片时，务必将血液涂布均匀，以免影响结果。

•双氧水具有漂白作用，使用时需小心避免溅到衣物或皮肤上。

•染色剂使用过程中，应注意避免吸入或误食。

•结果分析时，应根据实验要求和标准参考范围进行判断。

结论通过本实验，我们成功制备了血涂片并进行了染色处理。

观察结果可为后续血液相关研究提供重要数据和参考。

在实验过程中，我们严格遵守实验室操作规程，并注意了安全事项。

希望本报告对今后的血涂片制备与染色实验有所帮助。

参考文献：无。

实验二血涂片的制备Preparation of Blood Smear实验原理使用推片将血液在载玻片制成血膜。

试剂器材载玻片（清洁、干燥、无尘、无油脂、25cm×75cm，厚度0.8mm~1.2mm）、推片。

操作步骤（1）采血静脉采血后，使用玻璃棒、毛细管、注射针头等在距载玻片一端1cm处加1滴（约0.05ml）抗凝血，如果使用手指采血则直接用洁净玻片蘸1 滴血。

坦地方，右手持推片从后方或前方接近血滴，使血液沿推片边缘展开成适当的宽度，立即将推片与载玻片呈30。

~45。

角，轻压推片边缘将血液推制成厚薄适宜的血涂片（图1-6），血涂片应呈舌状，头、体、尾清晰可见。

（3）干燥将推好的血涂片在空气中晃动，使其迅速干燥。

天气寒冷或潮湿时，应于37 ℃温箱中保温促干，以免细胞变形缩小。

图1-6 推片（4）标记在载玻片的一端用记号笔编号。

注意事项1．要制备良好的血细胞涂片，玻片必须干净。

新购置的载玻片常带有游离碱质，必须用约1mol/L HCl浸泡24h后，再用清水彻底冲洗，擦干后备用。

用过的载玻片可放入含适量肥皂或其他洗涤剂的清水中煮沸20min，洗净，再用清水反复冲洗，蒸馏水最后浸洗后擦干备用。

边缘破碎、玻面有划痕的玻片不能再用。

使用玻片时，只能手持玻片边缘，切勿触及玻片表面，以保持玻片清洁、干燥、中性、无油腻。

2．最好使用非抗凝血制备血涂片，也可用EDTA抗凝血制备。

使用抗凝血标本时，应充分混匀后再涂片。

抗凝血标本应在采集后4h内制备血涂片，时间过长可引起中性粒细胞和单核细胞的形态学改变。

制片前标本不宜冷藏。

涂片的厚度、长度与血滴的大小、推片与载玻片之间的角度、推片时的速度及红细胞比容有关。

一般认为血滴大、血粘度高、推片角度大、速度快则血膜厚，反之则血膜薄。

故针对不同病人应有的放矢，对血细胞比容高、血粘度高的病人应采用小血滴、小角度、慢推；而贫血患者则应采用大血滴、大角度、快推。

3．血膜应厚薄均匀适度，头尾及两侧有一定的空隙。

血涂片制备与染色临床应用血涂片制备是临床实验室中常见的实验操作，用于观察和诊断患者的血液情况。

正确的血涂片制备与染色技术将有助于提高血涂片的质量，为临床医生提供准确的诊断信息。

本文将介绍血涂片制备的步骤以及常用的染色方法，并探讨其在临床应用中的意义。

一、血涂片制备步骤1. 准备工作：首先需要准备好检测所需的材料，包括玻璃片、无菌注射器、消毒酒精、无纺布等。

确保工作台面整洁，无尘无菌。

2. 采集血液样本：选择合适的采血部位，用无菌注射器采集血样，并将血样滴在玻璃片上。

3. 制备血涂片：将另一块玻璃片平行放在血样上，以45度角倾斜，缓慢向前移动，使血涂片的宽度均匀。

4. 干燥固定：将制备好的血涂片晾干，或者用火焰烘干，使细胞固定在玻璃片上。

5. 染色处理：根据需要选择合适的染色方法进行处理，使细胞核、胞质等结构清晰可见。

二、血涂片染色1. Giemsa染色：是血涂片最常用的染色方法之一，可用于观察红细胞形态、白细胞分类及寄生虫等。

染色时间和比例需控制好，避免染色过度或不足。

2. Wright染色：适用于白细胞分类和形态分析，特别是嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞的染色效果较好。

3. 厌氧染色：用于观察寄生虫、真菌等微生物，需要较长的染色时间和特殊的操作条件。

三、血涂片在临床应用中的意义1. 诊断疾病：通过观察血涂片中各种细胞的数量、形态、分布等特征，可以帮助医生诊断贫血、感染、白血病等疾病。

2. 指导治疗：血涂片可以反映患者的血液情况，指导医生制定合理的治疗方案，监测治疗效果。

3. 预后评估：血涂片中某些指标的变化可以反映患者病情的进展和预后情况，有助于医生及时调整治疗策略。

综上所述，正确的血涂片制备与染色技术对于临床医学具有重要意义。

通过规范操作和严格控制，可以提高血涂片的质量，为临床诊断提供可靠的依据。

希望本文对于血涂片制备与染色临床应用有所帮助，谢谢！。

血涂片制作与染色1.血涂片的制备血涂片的制备需要用到标本采集工具如无菌化的注射器、针头、试管、硅化玻璃片以及一些实验室试剂如无菌生理盐水、巴氏溶液和电解溶液等。

具体步骤如下：（1）将患者指尖的表面清洁卫生。

（2）选择一个适合的静脉穿刺点，通常是患者的中指或无名指。

（3）用酒精棉球清洁穿刺点，使其干燥。

（4）将无菌化的注射器连接到无菌生理盐水的瓶口上，并抽取一定量的生理盐水。

（5）将针头插入穿刺点后，将生理盐水匀速注射入患者的静脉内。

（6）在生理盐水滴入试管的同时，用眼微观检查，如果有血液进入注射器和管道内，即可采集。

宜用自来水洗净试管外表面，先不带盖座放倾空液。

（7）用试管夹夹住注射针，将针头推入试管内，然后轻轻射入试管底部液面下，同时向上抽手，保持抽液缓慢，可避免气泡产生。

（8）将采集到的血液缓缓带走，同时注入试管内，让其与100ml巴氏溶液进行搅拌。

（9）将混合液倾入瓷漏斗中，从中取出干燥了的血细胞。

2.血涂片的染色血涂片染色可使用湿涂片法或干涂片法，其中湿涂片法应用更广泛。

下文将以湿涂片法为例进行介绍。

（1）取一根硅化玻璃片，用纸巾或棉球擦拭干净。

（2）用血涂片染色钳将准备好的血涂片床放在玻璃片上。

（3）将一滴适量的Wright液倒在血涂片的中段。

Wright液包含了染色剂和辅助剂，其中主要成分是吡啶基甲重氮盐和三氧二氮菲盐。

（4）用另一根玻璃片的尾部将液滴均匀地扩开，并迅速在血涂片上来回涂抹，在染液与血涂片上充分接触并混合。

（5）保持血涂片在室温下静置5-10分钟，以促进染色反应的进行。

（6）用蒸馏水冲洗玻璃片上的染料，并将其晾干。

3.血涂片的观察与分析观察血涂片需用光学显微镜，常规放大倍数为1000倍。

观察血涂片时，应注意血细胞的形态、大小、核形态、细胞质染色情况及相关细胞间的比例等。

根据各种细胞的数量和比例，可以初步评估出是否存在异常细胞，及其可能的病理性质，如感染、贫血等。

总结：血涂片制作与染色是血液检查中重要的步骤之一，它能够帮助医生判断病情，制定治疗方案。