血涂片制备染色及白细胞形态(ZCG)

XXXX医院血涂片制备及染色操作规程一、载玻片的清洁二、血涂片制备三、血细胞常用染色方法1、瑞士染色法2、染色原理3、吉姆萨染色法4、瑞士-吉姆萨符合染色法血涂片染色显微镜检查是血液细胞形态学检查的基本方法，主要用于红细胞、白细胞、血小板形态等检查，还可以用于白细胞、血小板的数量评估。

在临床应用极为广泛，特别是对于各种血液病的诊断和鉴别诊断，具有重要价值。

如果血图片制备不良，染色不佳，常使血细胞的形态学鉴别和诊断发生困难，甚至导致错误的结论。

如果血膜过厚则使细胞重叠缩小，血膜太薄易导致细胞分布不匀，白细胞多集中于边缘。

因此，制备厚薄适宜、头体尾分明、染色良好的血涂片，是血细胞形态学检查最基本的要求，必须以认真负责的态度注意操作过程中的每一个环节。

一、载玻片的清洁新购置的载玻片常带有游离碱质，必须用浓度约1mol/L HCL 浸泡24小时后，再用清水彻底冲洗，干燥后备用。

用过的载玻片可放入适量肥皂或其他洗涤剂的清水中煮沸20分钟，趁热将血膜刷洗干净，再用清水反复冲洗，必要时用蒸馏水最后浸洗后干燥备用。

使用载玻片时，切勿用手触及拨片表面，以保持玻片清洁诶、干燥、中性、无油渍。

二、血涂片制备血图片的制备方法很多，有手工推片法、载玻片压拉法及棕黄层涂片法等。

血液涂片既可直接用非抗凝的静脉血或毛细血管血，也可以用经EDTA抗凝的血液制备。

由于EDTA能阻止血小板聚集，显微镜下观察血小板形态时长采用，但EDTA抗凝血有时能引起红细胞皱缩和白细胞聚集，因此最好使用非抗凝血制备血涂片。

一张好的血涂片，要求厚薄适宜、头体尾分明、边缘整齐、两侧应留有空隙。

临床上用的普通手工推片法是取血标本一滴置载玻片的一端，从血滴前沿方向接触血液，使血液沿方向接触血液，使血液沿推片散开，通常推片与载玻片保持30度~45度夹角，平稳地向前推动，血液即在载玻片上形成薄层血膜。

图片侯宝与血滴大小、推片与载玻片间夹角、推片速度、血细胞比容有关。

血涂片制备与染色血涂片是通过特定的方法将血液按一定方向均匀涂开的过程，微观上使细胞是由球形变为平面形或近平面形平铺在载玻片上。

血涂片的显微镜检查是血液细胞形态学检查的基本步骤，特别是对于各种血液病的诊断和鉴别诊断，具有重要价值。

血涂片制备是否合格、染色的好坏直接关系到检验结果的质量。

（一）血涂片制备1.载玻片的准备新载玻片常带有游离碱质，须用浓度为lmol/L的HCl浸泡24h，再用清水彻底冲洗，干燥后备用。

旧载玻片要用含洗涤剂的清水中煮沸20min，洗掉血膜，再用清水反复冲洗，最后用0.95L/L乙醇浸泡1h，干燥备用。

使用载玻片时，不要用手触及玻片表面，保持玻片清洁、干燥、中性、无油腻。

2.血涂片制作方法取血液标本一滴置载玻片的一端，以边缘平滑的推片一端，从血滴前沿方向接触血液，使血液沿推片散开，推片与载玻片保持30～45○夹角，平稳地向前推动，血液即在载玻片上形成薄层血膜。

涂片的厚薄与血滴大小、推片与载玻片之间的角度、推片时的速度及血细胞比容有关。

血滴大、角度大、速度快则血膜越厚；反之则血膜越薄。

一张良好的血涂片，要求厚薄适宜，头体尾明显，细胞分布均匀，血膜边缘整齐并留有的空隙。

（二）血涂片染色染色的目的是使细胞的主要结构，如细胞膜、细胞质、细胞核等染上不同的颜色，以便于镜下观察识别。

血涂片染色包括两个过程：固定和染色。

固定是将细胞蛋白质和多糖等成分迅速交联凝固，以保持细胞原有形态结构不发生变化。

常用的染色方法有瑞特染色法（Wright）、姬姆萨染色法（Giemsa）等。

1.瑞特（Wright）染色法为发观察细胞内部结构，识别各种细胞及其异常变化，血涂片必须嘲行染色。

血涂片的各种染色方法大多是罗氏染色法衍变来的。

目前常用瑞特染色法。

（1）瑞特染料是由酸性染料伊红和碱性染料亚甲蓝组成有复合染料。

亚甲蓝为四甲基硫堇染料，有对醌型和邻醌型两种结构。

通常为氯盐，即氯化美蓝。

美蓝容易氧化为一、二、三甲基硫堇等次级染料。

血涂片的制备及染色血涂片的制备及染色摘要血涂片是世界上使用最广泛的实验室检测方法之一，应用于疾病的筛查，发现，诊断以及监控。

本文提供了在临床检验中制备及染色出优质血涂片的一种参考。

虽然在如何人工制备血涂片上仍存在某些“工艺”，但是已尽可能采用了客观标准使得临床实验室能准备和染色出优质血片。

本参考中包含固定和染色手工工艺中的问题解决方法。

关键词：血涂片制备，染色前言血涂片是世界上使用最广泛和最频繁的检测方法之一，但似乎没有关于血涂片制备要求，程序及潜在问题等的综合性文献。

虽然血涂片的制备是个简单的过程，但作为一种检测方法，有很多因素可导致检测失败或比其预期低效。

本文应国际血液学标准化委员会的请求所写，并作为实验室血细胞计数板的指导方针。

本文旨在提供临床检验中用于形态评价的血涂片制备及其染色的指导和标准化。

显微镜分析过程和解释不在本文的范围内。

列举的方法中包括最先进的技术以及发展中国家实验室的适用方法。

发展中国家不具备最高水平的指标，但应在所有条件下可达到其规定的指标，以确保诊断测试的质量，以免降低病人护理。

这点尤其重要，因为无论对于病例发现，诊断或疾病监测，血涂片显微镜分析所得数据通常在临床情况中起最终和决定性的作用。

为了方便参考使用，本文采用一种特殊的格式来描述涉及血涂片制备和染色的各个步骤。

血涂片制备载玻片载玻片应由最高纯度的耐腐蚀玻璃制成；通常不可接受其他材料如塑料。

典型玻片为75×25mm，约有1mm 厚度，必须平整，无扭曲和波痕，而且必须澄清无色（“水白，无色透明”）。

荧光显微镜检测必须使用无自发荧光的玻片。

最好使用预洗过的载玻片，但至少实验室必须确保载玻片无划痕，干净无尘、绒线，油脂（指纹），而且必须干燥。

这就意味着在潮湿环境中，载玻片必须能抗水。

在所处密闭容器开启后，载玻片必须保存于干燥器或装有无水（甲基）乙醇或乙醇与丙酮混合液（3:1）的容器内直至被使用。

载玻片需一直保存于密闭容器中，只能在立即使用前开启。