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改良大鼠海马透射电镜快速取材方法
田香勤;李新娟;徐晶;蔡新华
【期刊名称】《新乡医学院学报》
【年(卷),期】2009(26)1
【摘要】目的探讨一种改良的大鼠海马透射电镜(以下简称电镜)快速取材方法.方法 16只SD大鼠被随机分为常规灌注固定取材组(常规组)和改良取材组(改良组).改良组从动物断头处死、颅骨剥离及海马取出方式等操作方面进行了改进,对2组取材时间和取材效果进行比较.结果改良组和常规组平均取材时间分别为
(1.27±0.07)min、(21.67±0.88)min,改良组明显短于常规组(P<0.01).电镜下观察2种取材方法均保证了大鼠海马超微结构完整无损伤.结论改良法缩短了取材时间,提高了取材效率,尤其适用于大批样本量的取材.
【总页数】2页(P23-24)
【作者】田香勤;李新娟;徐晶;蔡新华
【作者单位】新乡医学院医学研究中心,河南,新乡,453003;新乡医学院生理学与神经生物学教研室,河南,新乡,453003;新乡医学院医学研究中心,河南,新乡,453003;新乡医学院医学研究中心,河南,新乡,453003
【正文语种】中文
【中图分类】Q336
【相关文献】
1.改良取材方法与传统宫颈刮片结果分析 [J], 俞飞;陈维忠;王玉娣;郝吉琴;黄桂兰
2.大鼠卵泡颗粒细胞透射电镜制样的简便取材方法 [J], 项晓人;马红;陈义芳
3.透射电镜电子染色方法的改良 [J], 孟丽;崔芳;龚淼;武惠珍
4.一种大鼠腰膨大背根神经节取材的改良方法 [J], 崔媛媛;王兰;赵璇;徐浩;张婷;史娟
5.微小昆虫透射电镜样品制备方法的改良 [J], 郭付振;高继华;张国云
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一种小鼠或大鼠真皮成纤维细胞的分离培养方法真皮成纤维细胞是一种重要的细胞类型，其在生物医学研究、组织工程和再生医学等领域具有广泛的应用前景。
以下是一种常用的小鼠或大鼠真皮成纤维细胞的分离培养方法：1. 实验前准备：- 小鼠或大鼠- 麻醉剂，如异氟醚等- 消毒剂- 必需的培养基和培养液2. 小鼠/大鼠的取材：- 麻醉小鼠或大鼠，确保其在实验过程中不会感到疼痛或不适。
- 消毒动物的表面，以减少细菌或其他微生物的污染。
- 取下小鼠/大鼠的皮肤。
使用消毒剪刀和镊子将皮肤切割成小块，以便后续的分离过程。
3. 细胞的分离和培养：- 将皮肤块转移到含有酶解消化液（如胰蛋白酶）的培养皿中，并在37°C的恒温搅拌器上进行酶解（通常为1-2小时）。
- 将酶解后的皮肤块过滤，移至新的培养皿中，加入培养基和培养液，如DMEM/F12或RPMI-1640，并添加10%胎牛血清。
- 将培养皿放在37°C的细胞培养箱中，保持适当的温度、湿度和CO2浓度。
- 培养皿中的细胞会开始生长和扩增。
定期更换培养基，并进行细胞的孵育以保持其正常生长。
4. 细胞的传代：- 当细胞密度达到80-90%时，使用胰蛋白酶或胰蛋白酶-EDTA溶液将培养皿中的细胞与培养皿底部松散的连接断开。
- 将细胞计数，并根据需要的细胞数量进行传代。
一般情况下，将细胞按照1:3或1:4的比例重新分装到新的培养皿中。
- 重复上述步骤，直到获得足够数量且健康的细胞。
这种方法能够有效地分离和培养小鼠或大鼠真皮成纤维细胞，为相关研究提供了重要的细胞资源。
通过优化培养条件和细胞的传代方法，可以获得高质量和稳定的细胞群体，以支持各种实验或应用的需要。
实验大鼠取材方案［取材内容］1。
取大鼠静脉血分离血浆、血清-80℃保存。
2。
取大鼠门静脉血分离血清-80℃保存.3. 取大鼠甲状腺组织制备甲状腺电镜观察标本其余组织液氮冰冻保存备用。
4。
取大鼠胸腺组织制备胸腺组织电镜观察标本、免疫组化观察标本其余组织液氮冰冻保存备用。
5. 取大鼠肺组织制备肺组织电镜观察标本、免疫组化观察标本其余组织分装液氮冰冻保存备用。
6. 取大鼠肝脏组织制备肝脏组织电镜观察标本、免疫组化观察标本其余组织分装液氮冰冻保存备用。
7. 取大鼠胰腺组织制备胰腺组织电镜观察标本、免疫组化观察标本其余组织分装液氮冰冻保存备用。
8。
取大鼠肠系膜淋巴结组织制备肠系膜淋巴结免疫组化观察标本其余组织液氮冰冻保存。
9。
取大鼠胃部组织制备胃粘膜组织电镜观察标本、免疫组化观察标本其余组织分装液氮冰冻保存备用。
10. 取大鼠空肠组织制备肠道粘膜组织电镜观察标本、免疫组化观察标本其余组织分装液氮冰冻保存备用.11. 取大鼠回肠组织制备肠道粘膜组织电镜观察标本、免疫组化观察标本其余组织分装液氮冰冻保存备用。
12。
取大鼠肾组织制备左肾组织电镜观察标本、免疫组化观察标本右肾组织液氮冰冻保存备用。
13. 取大鼠肾上腺组织左侧制备肾上腺组织免疫组化观察标本右侧肾上腺液氮冰冻保存备用.14. 取大鼠睾丸组织左侧制备电镜观察标本、免疫组化观察标本右侧睾丸液氮冰冻保存备有。
［试剂及药品]戊巴比妥钠或10％水合氯醛、75％酒精、生理盐水、多聚甲醛或福尔马林液、3戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4戊二醛、肝素钠、器械液器械清洗消毒液［器材］备皮刀、解剖台、弯盘、组织剪、眼科剪、手术刀柄、刀片、小号弯式血管钳、蚊式血管钳、眼科镊、无损伤血管夹、聚乙烯管、三通管、丝线、培养皿、天平、一次性离2ml、1.5ml 、冻存管、肝素锂真空采血管、微量移液器、高速离心机、注射器10ml、5ml、2ml、无菌手套、冰箱、冰盒、液氮罐［取材动物］Wistar大鼠[取材步骤]1。
大鼠滑膜取材
1、造模分数达到最高峰，将大鼠脱颈处死，消毒，仰面固定，沿膝关节为中心的区域，用镊子提起髌骨，沿髌骨上沿约0.3-0.4cm处向下切割至股骨，再分别沿着髌骨两侧分离至胫骨，然后在体视镜下使用显微镊显微剪从关节腔中分离滑膜组织。
2、立即将滑膜组织浸泡在含有双抗的D-hank液里洗四次，用显微剪将脂肪组织去除，并将组织反复剪成1cm3左右的小块，加入配置好的含有0.4％II型胶原酶培养基置于37℃培养箱内消化2h，将未贴壁的细胞移入离心管内，1500rpm离心10min。
3、弃上清，加入4ml 0.25无EDTA胰酶37℃消化30min，期间每10min 吹打一次，将细胞消化开，加入8ml完全培养基终止消化，1500rpm 离心10min，弃上清。
4、加3ml完全培养基悬浮细胞，200目不锈钢筛网过滤细胞，在加入2ml完全培养基冲洗离心管中的细胞，用6cm培养皿培养。
配制0.4％II型胶原酶（4mg/ml）。
称200mg II型胶原酶溶于25ml的D-hanks中，在加入25ml完全培养基配制。
实验大鼠取材方案引言：实验大鼠作为研究生物学和医学领域的重要动物模型，广泛用于疾病机制研究、药物毒理学评价以及创伤修复等实验中。
为了保证科学合理、可靠可重复的实验结果，大鼠取材方案的制定十分重要。
本文将详细介绍一个实验大鼠取材方案，包括大鼠的选择与购买、饲养与管理、实验前准备及取材方法。
一、大鼠的选择与购买实验大鼠的选择应该根据研究的目的和要求，选用符合实验条件和研究对象的品种，如Sprague Dawley大鼠、Wistar大鼠等。
同时，购买大鼠的时候需要注意以下几个方面：2.注意大鼠的种类、性别、年龄等信息，确保符合实验需求；3.检查大鼠的体表特征，确保健康、无畸形、无伤口等；4.购买大鼠前可以进行一定的初检，如测量体重、观察活动情况等。
二、大鼠的饲养与管理实验大鼠的饲养与管理是保证实验结果可靠性的重要环节。
1.饲养环境：-温度：保持恒温（20-25度），避免极端温度的影响；-湿度：保持适宜湿度（40-70%），避免湿度过高导致疾病的发生；-光照：保持适宜光照，如12小时昼光与12小时黑暗的交替；-通风：保持通风良好，避免污浊空气对大鼠健康的影响。
2.饲料与水：-提供优质饲料，如标准饲料或专门配制的实验饲料；-饲料的存放应防潮、通风，保证其营养成分的稳定性；-提供清洁、安全的饮用水，确保水质的卫生。
3.健康监测：-定期检查大鼠的健康状况，观察是否存在异常行为或症状；-定期测量大鼠的体重、体温等生理指标。
三、实验前准备在进行实验前，需要对大鼠进行一些必要的准备工作：1.环境适应：-将大鼠从饲养环境转移到实验环境前，应进行适应期的过渡；-适当调整温度、湿度和光照等条件的过渡，减少对大鼠的应激。
2.实验前禁食：-固定禁食时间，如12小时或更长时间；-禁食能够减少胃肠道内容物对实验结果的影响。
3.麻醉和体表消毒：-根据实验需要选择合适的麻醉方式，如乙醚麻醉、氧化氮麻醉等；-在取材前进行局部体表消毒，减少感染风险。
取材：120-160g雄性清洁级SD大鼠主要仪器设备：超净台、手术剪、眼科剪、镊子、注射器、无菌培养皿、25 cm2培养瓶、25ml 烧杯、CO2培养箱（37℃，5%CO2，湿度95%）、弯头吸管、移液器、10ml尖底离心管、普通离心机、0.22μm滤膜过滤器、倒置相差显微镜。
（50ml培养瓶、100目不锈钢筛、6孔板[3]）（24、96孔板，25 cm2、75cm2塑料培养瓶、100目不锈钢筛、离心管用15ml/50ml[4]）（恒温震荡箱，离心管用50ml）培养：选择120-160g雄性清洁级SD大鼠，局麻后无菌取大网膜，在pbs中洗去红细胞，然后用含0.125%胰蛋白酶、0.01%EDTA的PBS液消化（37℃）20-25分钟，之后弃去消化液再加入胎牛血清（FBS）终止消化，吹打收集消化下来的单个细胞，4℃下离心（800r/min，5min）得到细胞团，用DMEM/F12培养液（含青、链霉素100U/ml及20%FBS）重悬细胞，接种于25cm2的培养瓶中，在CO2孵箱中培养24h后首次换液，以后每2-3d换液一次。
待细胞融合达80%时传代，用PBS洗一次后，加0.125%胰蛋白酶2ml室温消化3min，用FBS终止消化，4℃离心，细胞团用DMEM/F12生长液重悬，以2×106个细胞/ml的密度接种于25 cm2的培养瓶中，在CO2孵箱中培养24h后首次换液，以后每2-3d换液一次。
第二代被培养的细胞汇合至90%时经倒置相差显微镜观察并用细胞角蛋白抗体及波形蛋白抗体行免疫组化染色进行鉴定，明确其为PMC（腹膜间皮细胞），纯度达到99%以上。
第三代细胞用于实验。
参考文献：[1]马姝琛，严海东，庄守纲等.大鼠腹膜间皮细胞的分离培养方法[J].同济大学学报.2012年12月第33卷第6期[2] 曾莉，毛春芹，陆兔林等.大鼠腹膜间皮细胞的培养与鉴定[J].南京中医药大学学报. 2012年7月第28卷第4期[3]曾莉，徐庆，金桂兰等.大鼠腹膜间皮细胞的原代培养与鉴定[4]杜伟伟，杨洪涛.大鼠腹膜间皮细胞原代培养方法[J].中国中西医结合肾病杂志. 2012年8月第13卷第8期[5]樊敏，刘伏友，段绍斌等.改良法培养鼠腹膜间皮细胞[J].湖南医科大学学报.2002，27（6）细胞原代培养及传代一、腹腔外消化1、明胶铺备培养瓶：2-3ml明胶液体加入25cm2培养瓶，平放培养瓶，使液体全部覆盖瓶底，放入37℃培养箱中静止30min，倾出瓶中多余液体，干燥备用。
第1篇一、实验目的1. 掌握大鼠肌肉取材的方法和技巧。
2. 学习组织学、病理学等基本知识，提高实验操作能力。
3. 了解大鼠肌肉的解剖结构和生理功能。
二、实验原理大鼠肌肉取材实验是生物学、医学等领域的基础实验之一。
通过取材大鼠肌肉，可以观察肌肉的微观结构，了解肌肉的生理功能，为相关研究提供实验材料。
三、实验材料1. 实验动物：成年大鼠，体重约200-300g。
2. 实验仪器：解剖显微镜、手术刀、剪刀、镊子、解剖盘、生理盐水、冰块等。
3. 实验试剂：10%甲醛固定液、苏木素、伊红、酒精、蒸馏水等。
四、实验步骤1. 实验动物处死：采用颈椎脱位法处死大鼠，迅速取出肌肉组织。
2. 肌肉组织固定：将大鼠肌肉组织放入10%甲醛固定液中，固定24小时。
3. 肌肉组织切片：将固定好的肌肉组织用手术刀切成约1mm厚的薄片。
4. 肌肉组织染色：将切片放入苏木素染液中染色5分钟，然后用蒸馏水洗去多余染料。
5. 肌肉组织脱色：将切片放入酒精溶液中脱色，直至切片呈淡黄色。
6. 肌肉组织复染：将脱色后的切片放入伊红染液中复染1分钟。
7. 肌肉组织封片：将染色后的切片用中性树胶封片。
8. 显微镜观察：在解剖显微镜下观察肌肉组织的微观结构，记录实验结果。
五、实验结果1. 肌肉组织切片呈淡黄色，结构清晰。
2. 观察到肌肉组织由肌纤维组成，肌纤维呈长条状，相互平行排列。
3. 肌纤维由肌原纤维组成，肌原纤维由肌丝构成，肌丝分为粗肌丝和细肌丝。
4. 粗肌丝主要由肌球蛋白组成，细肌丝主要由肌动蛋白和肌联蛋白组成。
5. 肌纤维之间有肌束膜、肌内膜等结缔组织分隔。
六、实验讨论1. 本实验通过取材大鼠肌肉，观察了肌肉组织的微观结构，了解了肌肉的组成和功能。
2. 肌肉组织切片的厚度和质量对实验结果有很大影响，本实验切片厚度约为1mm，切片质量较好。
3. 实验过程中，注意无菌操作，避免污染切片。
4. 实验结果可作为相关研究的参考，为肌肉生理、病理等方面的研究提供实验依据。
大鼠小胶质细胞原代培养及分离纯化实验方案经过相关文献阅读，参考了众多对于小胶质细胞培养方案，对比了不同方案的利弊优缺，整合了相对符合本实验室条件和实验要求的方法，如有其他变更方案，以修改后为准。
1.实验材料剪刀、小镊子、小毛刷、DMEM/F12培养液、胎牛血清、0.05% 胰蛋白酶、PBS液、恒温细胞培养箱、倒青霉素、链霉素、培养皿离心管、50 mL 细胞培养瓶、CO2置相差显微镜、细胞板、小鼠抗大鼠OX42单克隆抗体、SP免疫组化试剂盒和新生SD大鼠等2.实验步骤2.1小胶质细胞的混合培养取新生SD大鼠若干只(出生24h内),在无菌条件下断头, 迅速剪开颅骨, 取出脑组织至盛有冷PBS 液的培养皿中反复冲洗以去除血污; 再把全脑移入另一盛有PBS 液的培养皿中, 用小毛笔轻轻刷去脑表面的脑膜和血管, 用PBS液冲洗后剪去脑干仅留大脑半球; 用小剪刀充分剪碎脑组织, 加入比组织块总量多30~50倍的0.05% 胰酶, 再移入50 mL 离心管, 用吸管反复吹打消化至肉眼观察无明显的脑组织团块; 加入DMEM/F12 完全培养基(含10%胎牛血清、100U/mL 青霉素和100 ug/mL 链霉素) 终止消化, 再次反复吹打制成单细胞悬液, 配平, 1000 r/ min, 离心5min, 弃上清; 加定量完全培养液再次制成细胞悬液, 更具实验需要接种入若干个50 mL细胞培养瓶或者培养皿中, 置于5%CO恒温细胞培养箱( 372度) 培养; 3 h 后更换1 次培养液, 以后每3 d 换1 次液, 并在镜下观察细胞的生长和存活情况。
2.2小胶质细胞的分离和纯化细胞培养18 d~20d左右, 在倒置相差显微镜下可观察到混和胶质细胞培养物中出现细胞分层现象, 即底层为扁平、多种形状的、具有多个突起的大细胞(星型胶质细胞) , 而上层细胞明显偏小呈类圆形、折光性强, 附着于星型胶质细胞表面生长(小胶质细胞) ; 倒掉培养液, 用0.05%胰酶2~ 3 mL 消化, 边观察边轻轻晃动培养瓶, 等到贴附在星形胶质细胞上的小胶质细胞脱离下来, 将含漂浮的小胶质细胞的消化液转入10 mL离心管, 立刻用完全培养基终止消化。
实验大鼠取材方案[取材内容]1. 取大鼠静脉血分离血浆、血清-80℃保存。
2. 取大鼠门静脉血分离血清-80℃保存。
3. 取大鼠甲状腺组织制备甲状腺电镜观察标本其余组织液氮冰冻保存备用。
4. 取大鼠胸腺组织制备胸腺组织电镜观察标本、免疫组化观察标本其余组织液氮冰冻保存备用。
5. 取大鼠肺组织制备肺组织电镜观察标本、免疫组化观察标本其余组织分装液氮冰冻保存备用。
6. 取大鼠肝脏组织制备肝脏组织电镜观察标本、免疫组化观察标本其余组织分装液氮冰冻保存备用。
7. 取大鼠胰腺组织制备胰腺组织电镜观察标本、免疫组化观察标本其余组织分装液氮冰冻保存备用。
8. 取大鼠肠系膜淋巴结组织制备肠系膜淋巴结免疫组化观察标本其余组织液氮冰冻保存。
9. 取大鼠胃部组织制备胃粘膜组织电镜观察标本、免疫组化观察标本其余组织分装液氮冰冻保存备用。
10. 取大鼠空肠组织制备肠道粘膜组织电镜观察标本、免疫组化观察标本其余组织分装液氮冰冻保存备用。
11. 取大鼠回肠组织制备肠道粘膜组织电镜观察标本、免疫组化观察标本其余组织分装液氮冰冻保存备用。
12. 取大鼠肾组织制备左肾组织电镜观察标本、免疫组化观察标本右肾组织液氮冰冻保存备用。
13. 取大鼠肾上腺组织左侧制备肾上腺组织免疫组化观察标本右侧肾上腺液氮冰冻保存备用。
14. 取大鼠睾丸组织左侧制备电镜观察标本、免疫组化观察标本右侧睾丸液氮冰冻保存备有。
[试剂及药品]戊巴比妥钠或10%水合氯醛、75%酒精、生理盐水、多聚甲醛或福尔马林液、3戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4戊二醛、肝素钠、器械液器械清洗消毒液[器材]备皮刀、解剖台、弯盘、组织剪、眼科剪、手术刀柄、刀片、小号弯式血管钳、蚊式血管钳、眼科镊、无损伤血管夹、聚乙烯管、三通管、丝线、培养皿、天平、一次性离2ml、1.5ml 、冻存管、肝素锂真空采血管、微量移液器、高速离心机、注射器10ml、5ml、2ml、无菌手套、冰箱、冰盒、液氮罐[取材动物]Wistar大鼠[取材步骤]1. 取材大鼠前夜禁食自由饮水。
2. 腹腔注射戊巴比妥钠(45mg/kg) 或10%水合氯醛(300mg/kg)将动物麻醉。
用5ml的注射器配合5.57号针头。
腹腔注射时右手持注射器左手的小指和无名指抓住大鼠的尾巴另外三个手指抓住大鼠的颈部使大鼠的头部向下。
这样腹腔中的器官就会自然倒向胸部防止注射器刺入时损伤大肠、小肠等器官。
进针的动作轻柔防止刺伤腹部器官。
尤其是对于体重较小的大鼠腹腔注射时针头可以在腹部皮下穿行一小段距离最好是从腹部一侧进针穿过腹中线后在腹部的另一侧进入腹腔注射完药物后缓缓拔出针头并轻微旋转针头防止漏液。
待动物麻醉成功后仰卧位固定于解剖台。
3. 修剪去颈部及腹部毛发75%酒精消毒。
4. 沿腹侧正中线自阴茎上缘由下而上剪开腹部皮肤直至剑突向两侧钝性剥开皮肤与皮下组织暴露腹壁浅肌层。
沿白线钝性分离腹壁肌肉剪开腹膜暴露腹腔将肝脏向上翻起显露门并游离静脉将剪成斜口的聚乙烯管尖端背向肝门方向插入门静脉抽取门静脉血2ml无创血管夹夹闭门静脉止血。
将抽取门静脉血加入一次性离心管低温静置过夜4℃离心3000-3500/min10分钟吸出上清液分装-80摄氏度保存备用。
5. 把胃与脾之间的薄膜除去可见到在其下方有如树枝状的肉色组织分为左、右两叶钝锐结合整体取下胰腺组织及脾脏组织结扎止血。
胰腺放置于盛有无菌生理盐水的培养皿中涮洗去血迹。
①切取胰腺体部约1mm×1mm×1mm组织3块3戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4戊二醛固定②胰腺体部相邻部位组织浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定③其余组织全部液氮冰冻保存备用。
生理盐水冲洗操作器械。
6. 剔除脾周组织放置脾脏于盛有无菌生理盐水的培养皿中涮洗去血迹。
①从脾脏一端切取5×5mm脾组织浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定②继续切取脾约1mm×1mm×1mm 组织3块3戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4戊二醛固定③其余组织液氮冰冻保存备用。
7. 从剑突继续向上剪开皮肤自颌下向两侧钝性剥开皮肤与皮下组织暴露胸廓及颈浅肌层。
沿正中剪开胸廓、胸膜避免损伤胸腺的胸腔脏器。
暴露心脏找到上下腔静脉后确认右心房5ml注射器直接穿刺右心房最大量抽取外周回心静脉血。
加4ml静脉血入肝素锂真空采血管摇匀室温静置10分钟4℃离心3000-3500/min5分钟吸出上清液分装-80摄氏度保存备用。
2ml加入普通真空采血管低温静置过夜4℃离心3000-3500/min5分钟吸出上清液分装-80摄氏度保存备用。
8. 展开肠系膜于肠系膜根部寻找淡蓝色结节样淋巴结组织剔取肠系膜淋巴结数枚放置于盛有无菌生理盐水的培养皿中涮洗去血迹。
①取部分淋巴结组织浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定②其余组织放置于无菌冻存管液氮冰冻保存备用。
心管5ml、9. 上端于贲门上端结扎食管下端于直肠远端结扎直肠末端钝锐结合完整取下胃肠道。
10. 离断胃放置于无菌培养皿残端结扎。
①沿胃大弯剖开生理盐水洗涤切取约1mm ×1mm×1mm胃窦和胃体黏膜组织各3块3戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4戊二醛固定②剪取宽约0.5-1.0cm包含胃窦、胃体组织1条浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定③其余胃组织放置于无菌冻存管液氮冰冻保存备用。
11. ①距treitz韧带10cm处切取空肠10cm距回盲部10cm处切取回肠10cm生理盐水洗涤切取约1mm×1mm×1mm空肠和回肠黏膜组织各3块3戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4戊二醛固定②剪取宽约0.5-1.0cm包含全层的空肠和回肠组织各1条做标记浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定③其余空肠和回肠组织全部放置于无菌冻存管液氮冰冻保存备用。
12. 结扎剪断肝门管道系统钝锐结合完整取出大鼠肝脏放置于无菌培养皿生理盐水冲洗称重并记录。
①切取肝左叶约1mm×1mm×1mm组织3块3戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4戊二醛固定②左叶肝组织浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定③右叶肝组织称重记录分装后全部放置于无菌冻存管液氮冰冻保存备用。
13. 于腹膜外腰部脊柱两侧寻找到肾脏表面光滑、背腹略扁呈蚕豆形。
在肾脏的前方内侧和腰下肌的腹面相接处寻找到肾上腺。
右侧肾上腺呈豆状长轴指向后内侧左侧呈卵圆形长轴指向腹外侧。
钝锐结合摘取两侧肾上腺。
①左侧肾上腺浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定②右叶肾上腺放置于无菌冻存管液氮冰冻保存备用。
14. 剪开后腹膜结扎剪断双侧肾门钝锐结合取下双侧肾脏剔除肾周筋膜组织放置于盛有无菌生理盐水的培养皿中涮洗去血迹。
①于中间肾门部横行切开左侧肾脏切取上端肾脏1mm×1mm×1mm组织3块3戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4戊二醛固定②下端脾脏浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定③右侧肾脏放置于无菌冻存管液氮冰冻保存备用。
15. 大鼠的阴囊是由肛门腹侧会阴部皮肤下垂所形成的囊袋。
性成熟的大鼠睾丸和附睾下降入阴囊使表面凸出并突向后方。
小心剪开双侧阴囊可见椭圆形睾丸钝锐结合摘取双侧睾丸、附睾放置于盛有无菌生理盐水的培养皿中涮洗去血迹。
16. 颈白线钝锐结合分离颈前肌群直至气管向上显露甲状腺。
仔细操作切取包括甲状软骨在内的甲状腺。
①切取约1mm×1mm×1mm组织各3块3戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4戊二醛固定②其余组织全部浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定。
切取左侧睾丸下端1mm×1mm×1mm组织3块3戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4戊二醛固定②余左侧睾丸组织浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定③右侧睾丸组织放置于无菌冻存管液氮冰冻保存备用。
17. 大鼠胸腺由两叶组成似等边三角形。
大部分位于胸腔前纵膈顶端近喉部基底部附着于心包腹面的前上方。
钝锐结合完整取下胸腺放置于盛有无菌生理盐水的培养皿中涮洗去血迹。
①切取胸腺1mm×1mm×1mm组织3块3戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4戊二醛固定②切取胸腺5mm×5mm×5mm组织1块浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定③其余组织置于无菌冻存管液氮冰冻保存备用。
18. 整体取下大鼠心肺组织剪开分离双侧肺脏置于盛有无菌生理盐水的培养皿中涮洗去血迹。
①切取左肺1mm×1mm×1mm组织3块3戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4戊二醛固定②余左肺浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定冻存管液氮冰冻保存备用。
19. 各取样标本细致编号登记。
20. 大鼠废弃尸体处理。
[注意事项1. 戊巴比妥钠配成1%生理盐水溶液平均每只大鼠用量12.6mg 1.2ml左右。
2. 大鼠腹腔注射可以大鼠腹腔注射的给药容积一般为510ml/kg。
3. 完整取下胃肠道后已将肠系膜撕碎不易寻找肠系膜淋巴结所以先取淋巴结。
取下胃肠道由专人操作取胃肠道及胃肠道取下后取材的操作器械单用一套。
4.取材时三人同时操作取一只大鼠结合取材方案多脏器并行取材缩短取材时间。
③右肺组织置于无菌1、解剖后应迅速将脏器称重，以免水分蒸发造成差异，特别是肾上腺等小器官的称重。
2、脏器称重前应尽量将周围脂肪组织和结缔组织剔除，并用滤纸吸去脏器表面血液及体液，特别是肾上腺、甲状腺、前列腺等较小的器官，更要新鲜称重，防止器官干燥失水而重量减轻。
3、空腔器官称重前，应清除其腔内液体，如心脏应除去血块。
