dna的粗提取与鉴定PPT课件

DNA的析出用的是与滤液体积相等的冷却的酒精溶 液（体积分数为95 ％） ，静置2－3min，溶液中
会出现白色丝状物，这就是粗提取DNA。用玻 璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸
取上面的水
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第十六页，编辑于星期三：一点 三分。
2、 DNA的鉴定
鉴定DNA时在试管中先加入物质的量的浓度为 2mol/L 的NaCl溶液5ml于两只试管中，其中一只加
答： DNA分子直径只有2 nm。丝状物是多个 DNA子聚在一起形成的
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【实验总结】
此实验过程中有几次使用蒸馏水？几次过滤？几次 析出？几次搅拌？分别在哪一步？
答：整个实验共
两次蒸馏水：
三次过滤：
两次析出：
六次搅拌：
两次蒸馏水： 第1次： 步骤1.细胞吸水胀破
物理性质
溶解性： ➢ 在0.14mol/L NaCl溶液中溶解度最小 ➢ 不溶于酒精
耐受性： ➢80℃以上高温变性 ➢被DNA酶分解，而不被蛋白酶分解 ➢洗涤剂可以溶解细胞的细胞膜，去除脂 质和蛋白质,但对DNA没有影响
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思考：
如何利用DNA的物理化学性质 提取和鉴定DNA？ 1.洗涤剂能溶解细胞膜，但不会破坏DNA 将DNA从细胞中提取出来
DNA的粗提取与鉴定
第一页，编辑于星期三：一点 三分。
DNA从哪
儿提取？
DNA的提取和鉴定
怎样将DNA与 细胞中的其他
物质分离？
怎样鉴定
我们提取
的DNA？
第二页，编辑于星期三：一点 三分。
基础知识

③鉴定
在沸水浴的条件下，DNA被二苯胺染成蓝色。 DNA 没有影响。 洗涤剂 能够瓦解细胞膜，但对________ (3)________
专题五
课题1
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二、实验设计 DNA 的生物材料都可 1 ．实验材料的选取：凡是含有 ________ DNA含量相对较高 的生物组织，成功 以考虑，但是选用含 ___________________ 的可能性更大。
专题五 课题1
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DNA的粗提取与鉴定实验的过程分析
1.方法步骤(以鸡血细胞为例)
专题五
课题1
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专题五
课题1
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专题五
先回顾相关基础知识，然后预习相关课题，并根据课题所需，
广泛查阅搜索相关资料，真正做到了解实验原理、熟悉操作步 骤后，再动手操作具体实验步骤。
专题五
DNA和蛋白质技术
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专题五
DNA和蛋白质技术
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专题五
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温馨提示： ①利用 DNA 随 NaCl 溶液浓度的不同而溶解度 不同作为原理可粗提取DNA。 ②利用DNA不溶于酒精，而细胞内的其他许多物质则溶于
酒精作为原理可进一步提纯DNA。
专题五
课题1
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为深入学习习近平新时代中国特色社 会主义 思想和 党的十 九大精 神,贯彻 全国教 育大会 精神,充 分发挥 中小学 图书室 育人功 能
【进一步提纯DNA的原理】 DNA不溶于酒精溶液，但细胞内 的某些蛋白质则溶于酒精。利 用该原理，可将DNA与蛋白质进 一步分离。
DNA 丝状物
95% 冷酒精
①蛋白酶能水解蛋白质， 但是对DNA没有影响
为深入学习习近平新时代中国特色社 会主义 思想和 党的十 九大精 神,贯彻 全国教 育大会 精神,充 分发挥 中小学 图书室 育人功 能
1、破碎动物细胞，滤取含DNA的滤液
（1）鸡血的离心（静止）分层 操作： 在500mL大烧杯中，加入10%
的柠檬酸钠100ml,注入新鲜 鸡血180mL，边加边搅拌，以 免凝血。4000r/min离心2min 或放入冰箱中静置1d. 柠檬酸钠的作用？ 防止血液凝固 静置分层的目的? 获得鸡血细胞液
当NaCl的溶液浓度大于0.14mol/L时，
DNA的溶解度随着NaCl溶液浓度的增 加而逐渐增加。
DNA在NaCl溶液中的 溶解度曲线
蛋白质等其它生物大分子，在0.14mol/L的NaCl溶
液中的溶解度，也是ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ低的吗？
蛋白质在低浓度的盐溶液中，溶解度增高，叫蛋白质的盐溶。
蛋白质在高浓度的盐溶液中，溶解度降低而析出，叫盐析。
SDS：使蛋白质变性 瓦解细胞膜
EDTA：抑制DNA酶活性 防止DNA被水解
过滤
1.5mol/L NaCl 溶解DNA
细胞核物质滤液
破碎细胞、获得匀浆
2mol/L NaCl 溶解细胞核物质
过滤、离心
加蒸馏水、搅拌
滤液：含DNA
析出DNA粘稠物

问题探究
1.DNA溶解性原理 (1)结合DNA在NaCl溶液中的溶解度曲线，分析DNA在不同浓度NaCl溶 液中的溶解度有何特点。
项目
溶解规律
2 mol/L NaCl溶液 0.14 mol/L NaCl溶液
DNA
溶解
析出
蛋白质在NaCl溶液浓度从2 mol/L
蛋白质
部分发生盐析沉淀 溶解
降低过程中，溶解度逐渐增大
DNA尽量的多；
C项是让DNA充分沉淀，保证DNA的量；
D项的道理同C项；
而B项的操作并不能使DNA增多或减少。
解析 答案
4.下图所示为DNA的粗提取与鉴定实验的实验步骤，请据图回答下列问题：
(1)请写出①②③④的实验步骤名称
① 提取细胞核物质 ；
② 析出DNA的黏稠物 ；
③ 用冷却的酒精析出DNA；
(2)植物细胞的破碎 ①方法：需要先用洗涤剂 溶解细胞膜。 ②过程：以提取洋葱的DNA为例。 在切碎的洋葱中加入一定的 洗涤剂和食盐 ，进行充分地搅拌和 研磨 ， 过滤后收集研磨液。
3.去除滤液中的杂质
利用DNA在不同浓度的NaCl溶液中 溶解度 不同，通过控制 方案一 NaCl溶液的 浓度 去除杂质
①低于0.14 mol/L时：_D_N_A__的__溶__解__度__随__N_a_C__l溶__液__物__质__的__量__浓__度__增__加__而__逐__ 渐降低 。 ②高于0.14 mol/L时：_D_N_A__的__溶__解__度__随__N_a_C__l溶__液__物__质__的__量__浓__度__增__加__而__逐__ 渐升高 。
(2)结合图表分析，如何通过控制NaCl溶液的浓度使DNA在盐溶液中溶 解或析出，以达到去除杂质的目的？ 答案 提取获得的DNA滤液中含有蛋白质、多糖和RNA等多种杂质，用 2 mol/L的NaCl溶液溶解DNA，然后过滤获得滤液，能够去除该条件下不 能溶解的杂质；调节NaCl溶液的物质的量浓度为0.14 mol/L，使DNA析 出，然后过滤获得析出物，能够去除该条件下仍然能够溶解的杂质。 (3)DNA不溶于酒精溶液，而细胞中的某些蛋白质则溶于酒精溶液，此特 点对于提取DNA有什么作用？ 答案 可以将DNA和蛋白质进一步分离。

高中生物DNA的粗提取与鉴定
21、没有人陪你走一辈子，所以你要 适应孤 独，没 有人会 帮你一 辈子， 所以你 要奋斗 一生。 22、当眼泪流尽的时候，留下的应该 是坚强 。 23、要改变命运，首先改变自己。
24、勇气很有理由被当作人类德性之 首，因 为这种 德性保 证了所 有其余 的德性 。--温 斯顿． 丘吉尔 。 25、梯子的梯阶从来不是用来搁脚的 ，它只 是让人 们的脚 放上一 段时间 ，以便 让别一 只脚能 够再往 上登。
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29、勇猛、大胆和坚定的决心能够抵得上武器的精良。——达·芬奇
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30、意志是一个强壮的盲人，倚靠在明眼的跛子肩上。——叔本华
谢谢！
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26、要使整个人生都过得舒适、愉快，这是不可能的，因为人类必须具备一种能应付逆境的态度。——卢梭
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27、只有把抱怨环境的心情，化为上进的力量，才是者不如乐之者。——孔子

思维导图：
深度剖析
题图A、B、C所示为本实验的三个关键步骤。图A通
过添加蒸馏水，血细胞与蒸馏水相混合而使血细胞处于低渗的环
境之中，细胞因大量吸水而最终破裂，并释放出胞内物。图B通 过纱布过滤使血细胞释放出的DNA滤入收集的滤液中(将大量胶状
物滤出)，再在滤液中加入质量浓度为2 mol/L的NaCl溶液使DNA
4．DNA的进一步提纯 利用DNA不溶于冷却的 酒精溶液 这一原理，可从溶液中析出 白色丝状物 。
较纯净的DNA，此时DNA的状态为
5．DNA的鉴定
将呈丝状物的DNA溶解于5 mL质量浓度为 2mol/L的NaCl 溶 液中，再加入4 mL的 二苯胺 试剂， 沸水 加热5 min，冷却 后观察溶液的颜色。注意要同时设置 对照 实验。
物大分子。
2．提取DNA的思路：利用DNA与 RNA 、 蛋白质 和 脂质 等在 物理 分。 和 化学 性质方面的差异，提取DNA，去除其他成
3．原理
(1)DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的 NaCl 溶液中溶解
度不同。利用这一特点，选择适当的 盐浓度 就能使DNA充分 溶解，而使杂质沉淀，或者相反，以达到分离的目的。 (2)DNA不溶于 酒精 ，但是细胞中的某些蛋白质则溶于此溶液。 (3) 蛋白酶 能水解蛋白质，但对DNA没有影响。大多数蛋白质
(2)二苯胺试剂要现配现用，否则二苯胺会变成浅蓝色，影响鉴定
效果。
【巩固1】 蛋白酶能将蛋白质水解而使染色质中的DNA分离出来。
下列药品可达到上述同一目的的是
A．蒸馏水 C．NaOH溶液 解析 B．NaCl溶液 D．盐酸
(
)。
蛋白酶是利用酶的专一性将 DNA 和蛋白质分离，而
NaCl溶液则是利用 DNA和蛋白质在该溶液中的溶解度不同将

.
⑵ DNA不溶于酒精溶液
DNA不溶于酒精溶液， 但细胞中某些蛋白质则溶于酒精。 将DNA与蛋白质进一步分离。
⑶ DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性
① 蛋白酶——水解蛋白质， 对DNA没有影响
② 高 温——大多数蛋白质不能忍受60～80℃ 而DNA在80℃以上才会变性
③ 洗涤剂——溶解细胞膜，去除脂质和蛋白质 但对DNA没有. 影响
观察现象：解丝状物的溶液变为蓝色
.
四、课题成果评价：
是否提取出了DNA
观察你提取的DNA颜色， 如果不是白色丝状物， 说明DNA中的杂质较多； 二苯胺鉴定出现蓝色 说明实验基本成功， 如果不呈现蓝色， 可能所提取的DNA含量低， 或是实验操作中出现错误， 需要重新制备
.
课题延伸
本课题使用的洗涤剂是多组分的混合物，在严格的 科学实验中很少使用。实验室提取高纯度的DNA时， 通常使用十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）、十二烷 基硫酸钠（SDS）或吐温等化学试剂。
答：前者是溶解DNA，后者是使DNA析出
.
3.DNA遇二苯胺(沸水浴)会染成( ) A.砖红色 B.橘黄色 C.紫色 D.蓝色
答：D
4.提取鸡血中的DNA时，为什么要除去血液 中的上清液?
答：DNA的提取，关键是对杂质的去除，由于 上清液是血液中的血浆部分，不含DNA，所以 要除去上清液(含有蛋白质)。
讨论1：构成生物体的遗传物质是什么？ 讨论2：如何证明他们是遗传物质？ 讨论3：怎样才能将细胞内的这些物质分离出来？
.
§5.1 DNA的粗提取与鉴定
.
一、基础知识
（一）提取DNA的方法
1.提取生物大分子的基本思路
选用一定的物理或化学方法，分离具有不 同物理或化学性质的生物大分子

•
20、没有收拾残局的能力，就别放纵善变的情绪。
•
1、想要体面生活，又觉得打拼辛苦；想要健康身体，又无法坚持运动。人最失败的，莫过于对自己不负责任，连答应自己的事都办不到，又何必抱怨这个世界都和你作对？人生的道理很简单，你想要什么，就去付出足够的努力。
•
2、时间是最公平的，活一天就拥有24小时，差别只是珍惜。你若不相信努力和时光，时光一定第一个辜负你。有梦想就立刻行动，因为现在过的每一天，都是余生中最年轻的一天。
•
29、人生就像一道漫长的阶梯，任何人也无法逆向而行，只能在急促而繁忙的进程中，偶尔转过头来，回望自己留下的蹒跚脚印。
•
30、时间，带不走真正的朋友；岁月，留不住虚幻的拥有。时光转换，体会到缘分善变；平淡无语，感受了人情冷暖。有心的人，不管你在与不在，都会惦念；无心的情，无论你好与不好，只是漠然。走过一段路，总能有一次领悟；经历一些事，才能看清一些人。
为了纯化提取的DNA需要 将滤液作进一步处理
讨论：此步骤获得的滤液中可 能含有哪些细胞成分？
答：可能含有核蛋 白 、 多 糖 和 能够去除杂质
（四） DNA的析出与鉴定
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1、以血液为实验材料时，每100ml血 液中需要加入3g柠檬酸钠，防止血液 凝固。 2、加入洗涤剂后，动作要轻缓、柔和， 否则容易产生大量的泡沫，不利于后 续步骤的操作。加入酒精和玻璃棒搅 拌时，动作要轻缓，以免加剧DNA分 子的断裂，导致DNA分子不能形成絮 状沉淀。 3、二苯胺试剂要现配现用，否则会影 响鉴定的效果。
主要指蛋白质、 酶和核酸
3、提取DNA的基本思路
利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的 差异，提取DNA，去除其他成分

13、遵守纪律的风气的培养，只有领 导者本 身在这 方面以 身作则 才能收 到成效 。—— 马卡连 柯 14、劳动者的组织性、纪律性、坚毅 精神以 及同全 世界劳 动者的 团结一 致，是 取得最 后胜利 的保证 。—— 列宁 摘自名言网
15、机会是不守纪律的。——雨果
31、只有永远躺在泥坑里的人，才不会再掉进坑里。——黑格尔 32、希望的灯一旦熄灭，生活刹那间变成了一片黑暗。——普列姆昌德 33、希望是人生的乳母。——科策布 34、形成天才的决定因素应该是勤奋。——郭沫若 35、学到很多东西的诀窍，就是一下子不要学很多。——洛克
高中生物DNA的粗提取与鉴定
11、战争满足了，或曾经满足过人的 好斗的 本能， 但它同 时还满 足了人 对掠夺 ，破坏 以及残 酷的纪 律和专 制力的 欲望。 ——查·埃利奥 特 12、不应把纪律仅仅看成教育的手段 。纪律 是教育 过程的 结果， 首先是 学生集 体表现 在一切 生活领 域—— 生产、 日常生 活、学 校、文 化等领 域中努 力的结 果。

a
9
讨论：加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？
答：洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜， 有利于DNA的释放；食盐的主要成分是NaCl， 有利于DNA的溶解
②实例：提取洋葱DNA时，在切碎的洋葱中加 入一定的洗涤剂和食盐，进行充分的搅拌和研 磨，过滤后收集研磨液
a
10
讨论：如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样 的影响？ 答：研磨不充分会使细胞核内的DNA释放不完全， 提取的DNA量变少，影响实验结果，导致看不到 丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等
氯化纳溶液；二苯胺试剂。铁架台；铁环；镊子；
三角架；酒精灯；石棉网；载玻片；玻璃棒；滤 纸；滴管；量筒（100ml，一个）；烧杯； （100ml，一个，50ml、500ml各二个）；试 管（20ml，二个）；漏斗；试管夹；纱布。
a
20
4、课前准备鸡血细胞液
①过程
取质量浓度为0．1g/ml的柠檬酸纳溶液（抗凝
a
6
提取DNA的实验步骤 选取实验材料
破碎细胞，获取含DNA的滤液
Hale Waihona Puke 去除滤液中的杂质 析出DNA
鉴定DNA
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二、DNA的粗提取与鉴定的实验设计
（一）实验材料的选取
材料：鱼卵、猪肝、菜花、香蕉、鸡血、哺乳 动物的红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、在 液体培养基中培养的大肠杆菌。（从中选取2～3 种实验材料）
去离心管上部的澄清液，就可以得到鸡血细胞
液。）
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22
②柠檬酸钠作用 防止血液凝固
③作用机理
柠檬酸钠能与血浆中的Ca2+发生反应，生成柠 檬酸钙络合物，血浆中游离的Ca2+大大减少， 血液就不会凝固