中药芪红合剂对肺间质纤维化模型大鼠肺组织中TGF-β1表达的影响
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单味中药及其提取物治疗矽肺的研究进展孙雪鹏【摘要】Silicosis is one of the most serious occupational diseases. There is still lack of effective drugs to control the de-velopment of the disease. In recent years, the single Chinese medicinal and its extracts have made some progress in treatment of silicosis. This study reviewed the recent research progress and provided a basis for the clinical treatment of silicosis.%矽肺是危害最严重的一种职业病,目前临床上仍缺乏有效的药物控制该病的发展.近年来单味中药及其提取物治疗矽肺取得了一定的进展.本文就近年来的研究进展做一综述,为临床治疗矽肺提供依据.【期刊名称】《中医药学报》【年(卷),期】2018(046)004【总页数】4页(P127-130)【关键词】中药;提取物;矽肺;研究进展【作者】孙雪鹏【作者单位】同济大学附属杨浦医院,上海200090【正文语种】中文【中图分类】R259矽肺是尘肺病中危害最严重的一种,是由于长期吸入大量游离二氧化硅粉尘所致的以肺组织进行性弥漫性纤维化为主的全身性疾病。
然而由于其发病机制极其复杂,至今尚未完全阐明,目前仍缺乏有效的药物控制该病的进展。
近年来单味中药及其提取物治疗矽肺取得了一定的进展。
本文就其近年来的研究进展做一综述。
1 补虚药及其提取物1.1 黄芪及其提取物黄芪的药用迄今已有2000多年的历史,其具有补气固表、托毒排脓、利尿、生肌等功效。
药理研究发现黄芪总苷及黄芪多糖是其主要有效成分,黄芪及其提取物对肝纤维化、肾纤维化、心肌纤维化以及肺纤维化等均具有明显的防治效应。
中医药治疗肺间质纤维化的进展刘景峰;郭静波;赵品;李亮;王坤;武慧娟【摘要】@@ 肺间质纤维化系免疫和呼吸系统之常见病,目前尚无准确的流行病学资料.美国新墨西哥州报道特发性纤维化的患病率为男性20.2/10万,女性7.4/10万.欧洲和日本报道的患病率为3~8/10万.患病率随着年龄增加,男性多于女性.【期刊名称】《临床荟萃》【年(卷),期】2011(026)009【总页数】5页(P820-824)【关键词】肺纤维化;中草药;激素类;治疗结果【作者】刘景峰;郭静波;赵品;李亮;王坤;武慧娟【作者单位】白求恩国际和平医院256临床部中医科,河北,石家庄,050800;白求恩国际和平医院256临床部中医科,河北,石家庄,050800;白求恩国际和平医院256临床部中医科,河北,石家庄,050800;白求恩国际和平医院256临床部中医科,河北,石家庄,050800;白求恩国际和平医院256临床部中医科,河北,石家庄,050800;白求恩国际和平医院256临床部中医科,河北,石家庄,050800【正文语种】中文【中图分类】R563.9肺间质纤维化系免疫和呼吸系统之常见病,目前尚无准确的流行病学资料。
美国新墨西哥州报道特发性纤维化的患病率为男性20.2/10万,女性7.4/10万。
欧洲和日本报道的患病率为3~8/10万。
患病率随着年龄增加,男性多于女性。
从发病原因分为特发、继发两种。
特发病因不明;继发性肺间质纤维化常见于硬皮病、类风湿性关节炎、皮肌炎等结缔组织疾病。
病理特征是肺泡上皮损伤、成纤维细胞灶的形成以及细胞外基质的过度沉积,最终导致肺组织结构的异常重塑[1]。
西医以糖皮质激素和免疫抑制剂治疗为主,长期治疗不但不良反应大,且仅有10%~30%的患者病情改善或稳定[2]。
迄今,尚无一种令人满意的治疗方案。
中医药治疗采用辨证施治,标本兼治,脏腑分型论治,活血化瘀祛痰等疗法,结合现代的药理研究,对本病的治疗及提高生活质量具有一定优势,值得进一步深入探讨研究。
转化生长因子-β1(TGF-β1)与肺纤维化研究的进展陈刚;余民浙【摘要】转化生长因子-β1(Transformating Growth Factorbetal,TGF-β1)是一种多功能的细胞因子,是由2条分子量为11Kd有112个氨基酸构成的单链通过二硫键结合而成的分子量为25Kd的多肽。
它在细胞的生长、分化、免疫调节、调节细胞外基质(Extracellular matrix,ECM)合成及损伤后的修复方面发挥着重要的作用。
在哺乳动物中。
TGF—β家族有3个亚型TGF—β1、TGF-β2、TGF—β3,它们通过与相应的受体结合而发挥生物作用。
活化的TGF—β过度表达对肺、【期刊名称】《中国疗养医学》【年(卷),期】2007(016)001【总页数】3页(P3-5)【关键词】转化生长因子-β1;TGF-β2;肺纤维化;细胞因子;免疫调节;细胞外基质;哺乳动物【作者】陈刚;余民浙【作者单位】066104,国家煤矿安全监察局尘肺病康复中心;066000,秦皇岛市海港医院【正文语种】中文【中图分类】R5转化生长因子-β1(Transformating Growth Factor beta1,TGF-β1)是一种多功能的细胞因子,是由 2条分子量为 11Kd有 112个氨基酸构成的单链通过二硫键结合而成的分子量为 25Kd的多肽。
它在细胞的生长、分化、免疫调节、调节细胞外基质(Extracellular matrix,ECM)合成及损伤后的修复方面发挥着重要的作用[1,2]。
在哺乳动物中,TGF-β 家族有3个亚型TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3,它们通过与相应的受体结合而发挥生物作用。
活化的 TGF-β 过度表达对肺、肝、肾等组织病理改变的影响非常显著,特别是致纤维化方面。
在体内试验中,TGF-β1对纤维化的作用明确、TGF-β2作用不明确、TGF-β3无作用;然而体外试验发现 TGF-β 的 3个亚型都有促进纤维化的作用。
中药治疗肺纤维化研究进展胡芳【摘要】肺纤维化是由多种弥慢性肺间质疾病引起的一种病理改变,是对损伤的过度修复,晚期多引起心肺功能衰竭而死亡,近年来其发病率有上升趋势,严重威胁着人们的生命健康.该文回顾近年来有关肺纤维化的中医临床研究文献,认为中医药对该病的认识和研究日趋成熟,取得一定的进展,对临床和实验防治肺纤维化有效的药物和方法进行了总结.【期刊名称】《医药导报》【年(卷),期】2011(030)011【总页数】4页(P1471-1474)【关键词】中药;肺纤维化【作者】胡芳【作者单位】南京中医药大学附属苏州市中医医院药剂科,215009【正文语种】中文【中图分类】R286;R563肺纤维化是由多种病因引起的一组间质性肺疾病,可由多种疾病及药物或放射线等引起,是许多疾病在病情发展过程中的共同病理过程,预后较差。
其患病率和病死率在呼吸系统疾病中日趋增长,目前临床上缺乏有效的治疗方法。
1 发病机制肺纤维化的确切发病机制目前尚不清楚,目前被广泛接受的发病机制包括自由基损伤、细胞外基质代谢失衡、肺泡上皮细胞过度凋亡、炎性递质作用等。
中医认为肺纤维化的主要病机为热毒、痰瘀阻滞肺络,肺失清肃。
病之初以邪实为主,后期则以正虚为关键。
治疗多采用清热解毒、活血化瘀、补肺益气养阴之法。
2 中药提取物2.1 葛根素陈珍旭等[1]经实验研究发现,葛根素可抑制炎症和成纤维细胞增殖,抑制转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)mRNA表达,并可减少肺胶原纤维的形成,起到抑制和延缓实验大鼠肺纤维化的作用。
2.2 昆布提取物J201张正寿等[2]研究显示,多糖类药物J201对实验性大鼠肺纤维化有一定的保护作用,抗氧化作用及抑制脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,Fas)、乙型跨膜糖蛋白(fatty acid synthase ligand,FasL)、金属蛋白酶9(matrix metallopro teinase-9,MMP-9)、金属蛋白酶抑制因子-2(tissue inhibitor of metallo proteinase-2,TIMP-2)的表达是其可能的机制之一。
58第23卷 第1期 2021 年 1 月辽宁中医药大学学报JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCMVol. 23 No. 1 Jan .,2021基于TGF-β1/Smads 信号通路中医药抗纤维化研究进展戚潇禹1,刘璐佳1,杨阳1,于海洋1,王有鹏2(1.黑龙江中医药大学,黑龙江 哈尔滨 150040;2.黑龙江中医药大学附属第二医院,黑龙江 哈尔滨 150001)基金项目:国家自然科学基金(81874485)作者简介:戚潇禹(1993-),女,黑龙江哈尔滨人,博士研究生,研究方向:中医药防治小儿呼吸系统疾病。
通讯作者:王有鹏(1964-),男,黑龙江哈尔滨人,教授、主任医师,博士,研究方向:中医药防治小儿呼吸系统疾病。
摘要:组织器官纤维化是多种细胞因子、多条信号通路共同作用的产物,转化生长因子β1(TGF-β1)几乎参与了纤维化发生进展的全过程,是当前最强促纤维化细胞因子之一。
TGF-β1主要通过TGF-β1/Smads 信号通路发挥促纤维化作用,近年来关于该信号通路的研究成果不断增多。
中医药因其成分复杂、靶点多样、不良反应少等优势被广泛应用于临床相关疾病的防治。
中药复方、中药单体化合物的分子生物学研究也在如火如荼地开展,通过借助现代科学技术手段阐释中药的具体作用靶点及信号通路调控方式,可进一步明确中药疗效机理,对于中医药的科普与推广具有促进推动作用。
该文阐述了TGF-β1/Smads 信号通路的结构及其对纤维化的调控机制,并系统总结了近年来中医药通过干预TGF-β1/Smads 信号通路改善、延缓多种脏器及组织纤维化的具体作用方式和可能机制,为今后纤维化性疾病的中医药靶向精准治疗提供参考。
关键词:TGF-β1/Smads 信号通路;纤维化;中药中图分类号:R961 文献标志码:A 文章编号:1673-842X (2021) 01- 0058- 05Research Progress of Anti-fibrosis of Traditional Chinese Medicine Based onTGF-β1/Smads Signaling PathwayQI Xiaoyu 1,LIU Lujia 1,YANG Yang 1,YU Haiyang 1,WANG Youpeng 2(1.Heilongjiang University of Chinese Medicine,Harbin 150040,Heilongjiang,China;2.The Second Affiliated Hospital of Heilongjiang University of Chinese Medicine,Harbin 150001,Heilongjiang,China)Abstract:Fibrosis of tissues and organs is the product of multiple cytokines and multiple signaling pathways. Transforming growth factor β1 is almost involved in the entire process of fibrosis progression,and is one of the strongest cytokines to promote fibrosis. TGF-β1 mainly plays a role in promoting fibrosis through the TGF-β1/Smads signaling pathway,and the research achievements on this signaling pathway have been increasing in recent years. TCM is widely used in the prevention and treatment of clinical related diseases due to its advantages of complex ingredients,diverse targets,and few side effects. The molecular biology research of TCM compound and monomer compound is also in full swing. By using modern scientific and technological means to explain the specific action targets of TCM and the control methods of signal pathways,the mechanism of the efficacy of TCM can be further clarified,which can promote the popularization and popularization of Chinese medicine. This article describes the structure of TGF-β1/Smads signaling pathway and its regulation mechanism on fibrosis,and systematically summarizes the specific role of TCM in improving and delaying various organ fibrosis by intervening TGF-β1/Smads signaling pathway in recent years,which would provide a reference for future targeted and precise treatment of Chinese medicine for fibrotic diseases.Keywords:TGF-β1/Smads signaling pathway;fibrosis;traditional Chinese medicine 纤维化是指机体在受到多种内外界因素刺激后,体内成纤维细胞出现以细胞外基质(extracellular matrix,ECM)过度分泌、沉积为特征的病变过程。
黄芪多糖活性的研究进展作者:王丞姚坪陈惠丽来源:《中国动物保健》2024年第06期摘要:黄芪多糖是中药黄芪的主要活性物质,通过黄芪根茎萃取、提纯得到。
黄芪多糖成分多样,由己糖醛酸、果糖、鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖醛酸和葡糖醛酸等组成,颜色棕黄,粉末状,味微甜。
当前黄芪多糖已广泛应用于畜禽生产中,但由于黄芪多糖活性功能多样,其实际应用有待深入研究和发掘。
本文对黄芪多糖活性的研究进行梳理汇总,为黄芪多糖在畜禽行业的应用提供帮助。
关键词:黄芪多糖;活性黄芪是一种中医上常用的补气类中药,具有甘温补升、益气固表、生举清阳、利水消肿等功效,入脾、肺经。
黄芪多糖(astragalus polysaccharide,APS)中的多糖类、皂苷类、黄酮类等活性成分,具有增强机体免疫力、保护器官等作用,还具有抗氧化、抗病毒、抗细菌、造血等活性,在生产上可以调节肠道益生菌、提升屠宰性能、避免应激反应等,常用于饲料添加剂、微生物发酵、疫苗佐剂、精液冷冻、抗生素配伍等。
1 黄芪多糖活性概述1.1 抗氧化活性黄芪多糖的抗氧化活性,功能全面、安全无毒,而且其抗氧化活性对各种动物和各类器官均能产生明显功效。
APS主要通过增强体内抗氧化酶的活性,来产生抗氧化作用,其效果往往与APS的浓度呈正比。
比如,在对淇河鲫的研究中,用APS投喂后,其肝脏中SOD、CAT、GPx活性显著增加,MDA降低,淇河鲫的抗氧化性能增强[1]。
APS具有抗衰老作用,APS可显著延缓秀丽线虫[2]、果蝇[3]、大鼠[4]等多种动物的衰老,其主要机制是APS抑制了骨髓间充质干细胞的凋亡和衰老,减少了线粒体ROS5以及促进抗氧化基因dFOXO和4E-BP的表达,激活IGF-1信号通路实现抗衰老活性[5]。
黄芪甲苷(AS-IV)还可以通过干预机体氨基酸代谢、能量代谢等发挥延缓秀丽隐杆线虫衰老的作用[6]。
此外,APS的氧化性能够有效减轻替米考星对动物心血管系统的毒性,实验表明小鼠在摄入APS后,通过其抗氧化和抗应激作用提升了SOD和GPx活性,显著抑制了心跳过速和收缩力减弱的情况[7]。
8种中药有效成分治疗肺纤维化的研究进展庞宇涵;王彤【摘要】肺纤维化是一种难治愈的疾病,其主要症状表现为呼吸困难、干咳、少痰,部分患者出现消瘦、食欲不振、乏力等现象.与西医治疗方法相比,中医治疗此类疾病有着疗效确切,副作用小的优势.为了探讨中药中有效成分对肺纤维化的治疗作用,本文对常用中药的有效成分在治疗肺纤维化方面的研究现状进行整理和分析,发现这些有效成分在治疗该病时显示出明显的作用,提示中药有效成分在治疗肺纤维化有着广泛的研究和应用前景.【期刊名称】《人参研究》【年(卷),期】2017(029)004【总页数】4页(P37-40)【关键词】肺纤维化;中药;有效成分【作者】庞宇涵;王彤【作者单位】长春中医药大学吉林长春·130117;长春中医药大学吉林长春·130117【正文语种】中文肺纤维化是成纤维细胞增多和大量细胞外基质聚集同时有炎性反应、组织结构破坏为特征的肺系疾病,近年来发病率逐年上升,且尚未有学者能够阐明明确的发病机制。
其症状以劳力性呼吸困难、干咳、少痰为主,部分患者出现形体消瘦、食欲不振、乏力等,疾病严重时可能导致呼吸衰竭的发生[1]。
针对此类疾病的治疗,目前西医还没有理想的药物,而中医中药在防治过程中取得了不少成果,较有优势。
中医认为以咳嗽喘息、恶寒发热为主要症状的疾病属于肺痹,进而发展为肺痿。
肺纤维化属于“肺痹”和“肺痿”的范畴。
“肺痹”以益气活血为治疗原则,“肺痿”以补肺生津为治疗原则。
笔者以“肺痿”、“治疗”为主题,检索2010~2016年中国期刊全文数据库(CNKI),检索到220篇文章,筛选出与中药治疗相关的文献150篇。
其中,黄芪、甘草、人参、当归分别在71、104、73、79篇文献中提到,属于补益类高频用药。
丹参、川芎、红花、三七分别在78、44、39、38篇文献中提到,属于活血类高频用药。
根据《中药学》[2]中的分类方式,本文对治疗肺痿的补益类和活血类中的8种常用中药的有效成分在治疗肺纤维化方面的研究进展进行整理和分析。
中药益气化纤汤抗大鼠肺纤维化的实验研究(作者:___________单位: ___________邮编: ___________)作者:蔡望喜,尹杉杉,常建方【摘要】[目的] 观察益气化纤汤对肺纤维化模型大鼠肺泡巨噬细胞(AM)和肺间质巨噬细胞(IM)中转化生长因子β1(TGFβ1)mRNA 表达的影响。
[方法]选用Wistar大鼠96只,随机分为假手术组、模型组、益气化纤汤组(剂量为4g·kg-1·d-1)、氢化可的松组(剂量为20mg·kg-1·d-1);采用博莱霉素A5(剂量为6mg/kg)气管注入法复制肺纤维化模型;分别于造模第7、28天分离培养AM、IM,采用分子原位杂交法(ISH)检测TGFβ1mRNA的表达。
[结果]模型组AM、IM中TGFβ1mRNA表达阳性细胞百分率及积分光密度(D)值显著升高(均P0.01);益气化纤汤可显著降低AM、IM中TGFβ1mRNA表达阳性细胞百分率及D值(均P0.01),其作用与氢化可的松相仿。
[结论]益气化纤汤治疗肺纤维化的作用可能与其能降低TGFβ1的表达,抑制纤维化的发展进程有关。
【关键词】益气化纤汤/药理学肺纤维化/中药疗法转化生长因子β肺泡巨噬细胞/病理学肺间质巨噬细胞/病理学疾病模型动物大鼠肺纤维化进程中转化生长因子β1(TGFβ1)的作用极为关键。
TGFβ1是致纤维化关键性的细胞因子,它可以通过自分泌、旁分泌等不同的方式,调节细胞增殖、分化、移行,促进成纤维细胞对胶原蛋白、纤维连结蛋白、蛋白多糖等细胞外基质的合成和沉积,从而导致脏器纤维化的形成[1]。
益气化纤汤为我院治疗特发性肺纤维化的验方。
本实验依据病理进程,分别收集实验第7 天肺泡巨噬细胞(AM)、第28 天肺间质巨噬细胞(IM)标本,采用分子原位杂交法(ISH)观察不同时间点巨噬细胞中TGFβ1 mRNA的表达情况,探讨益气化纤汤治疗肺纤维化的作用机制,现报道如下。
红芪黄酮对肺纤维化模型大鼠肺组织转化生长因子—β1表达及超微结构的影响作者:张毅李娟苏韫李金田刘光炜刘永琦蔺兴遥李雪燕来源:《中国中医药信息》2014年第03期摘要:目的观察红芪黄酮对肺间质纤维化模型大鼠转化生长因子-β1(TGF-β1)蛋白表达及肺组织超微结构的影响,并探讨其作用机理。
方法 Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、强的松组及红芪黄酮高、中、低剂量组,采用气管内滴注博莱霉素方法建立肺纤维化模型,造模后第2日起,各给药组分别给予相应剂量药物,连续灌胃治疗,于第7、14、28日采用免疫组化法检测各组大鼠肺组织TGF-β1的含量表达,透射电镜观察第28日各组大鼠肺组织超微结构变化。
结果空白组少数细支气管黏膜上皮细胞胞浆内可见少量TGF-β1蛋白表达;第7、14、28日模型组大鼠支气管、细支气管黏膜上皮细胞TGF-β1表达与空白组比较明显增强(P关键词:肺纤维化;红芪黄酮;转化生长因子-β1;超微结构;大鼠DOI:10.3969/j.issn.1005-5304.2014.03.014中图分类号:R285.5 文献标识码:A 文章编号:1005-5304(2014)03-0047-03在参与肺纤维化的细胞因子网络中,转化生长因子-β1(TGF-β1)是研究最深入最重要的细胞因子[1],它是迄今发现的最强的细胞外基质沉积促进剂,同时也是细胞外基质降解的强力抑制剂,其对细胞外基质具有重要的调节作用。
如何有效抑制TGF-β1等因子的表达,从而改善肺组织代谢状况来治疗肺纤维化以成为当前该领域研究的热点[2]。
结合本课题前期研究成果[3-4],筛选出红芪有效部位黄酮,观察红芪黄酮对肺纤维化过程中TGF-β1含量及病理形态的影响,并探讨其作用机理。
1 实验材料1.1 动物SPF级Wistar大鼠216只,雌雄各半,体质量(200±20)g,甘肃中医学院科研实验中心提供。
实验动物质量合格证号:SCXK(甘)2011-0001-0000614;动物实验设施使用证号:SCXK(甘)2011-0001- 0000362。
中药芪红合剂对肺间质纤维化模型大鼠肺组织中TGF-β1表达的影响(作者:___________单位: ___________邮编: ___________)【摘要】目的:探讨中药芪红合剂在肺间质纤维化过程中的作用及其机理。
方法:采用气管内注射博来霉素A5建立肺间质纤维化的大鼠模型。
将40只Wistar大鼠随机分为4组:假手术组、模型组、泼尼松治疗组、芪红合剂治疗组,每组10只。
给各组大鼠灌胃相应的生理盐水或药物,术后15 d处死各组大鼠,取两肺组织,一部分行石蜡包埋切片,HE染色,观察病理改变,另一部分采用ELISA法定量测定TGF-β1。
结果:与假手术组比较,模型组大鼠肺组织有明显的纤维化改变,TGF-β1的含量显著升高(P0.01);与模型组比较,泼尼松治疗组和芪红合剂治疗组大鼠肺组织中TGF-β1含量显著下降(P0.01)。
结论:中药芪红合剂可能通过降低肺组织中TGF-β1的含量而减轻肺间质损伤及纤维化改变。
【关键词】芪红合剂TGF-β1 间质纤维化Abstract Objective:To study the effect of Qihong decoction on rats with pulmonary fibrosis and its mechanism. Methods:Modelrats were induced by injecting bleomycin A5 into trachea. 40 Wistar rats were randomized into sham operation control group(given saline),model group(given saline),prednisone treatment group,Qihong decoction treatment group(n=10). The lung tissues were collected after 15 days treatment. The level of TGF-β1 was measured by ELISA,and the level of fibrosis was observed by HE stain. Results:Compared with sham operation control group,the change of pulmonary fibrosis and the level of TGF-β1 in model group rats were obviously increase(P<0.01). Compared with model group,the levels of TGF-β1 in two treatment groups were obviously decreased(P<0.01). Conclusion:Qihong decoction can alleviate lung tissue damage and pulmonary fibrosis through down-regulating TGF-β1 expression.Key words Qihong decoction; Transforming Growth Factor-β1; pulmonary fibrosis特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)是由弥漫性间质性肺疾病引起、以弥漫性肺泡单位慢性炎症和间质纤维化为主要病理特征的一大疾病[1]。
该病发病率约为5/10万人,近年来有上升趋势。
统计资料显示其5年生存率低于50%,目前临床治疗常用的药物是糖皮质激素、免疫抑制剂和一些抗纤维化制剂,这些治疗尚不能使患者的生存率有所改善。
中药制剂芪红合剂是我们在临床上治疗各种肺脏疾病的基础方剂,常与他药配用治疗各种慢性肺脏疾病。
经临床观察,他能有效保护慢性肺病患者的肺功能,延缓肺病的发展。
在长期临床实践的基础上,我们通过气管内注射博来霉素A5建立肺间质纤维化的大鼠模型,以芪红合剂进行干预治疗,观察致纤维化因子TGF-β1在肺组织的表达,旨在探讨芪红合剂能否有效保护受损肺组织及其可能的作用机制,以明确芪红合剂的抗纤维化功效。
1 材料与方法1.1 实验材料1.1.1 实验动物选用健康雄性Wistar大鼠40只(由山西医科大学实验动物中心提供,二级),体重(200±20)g。
1.1.2 实验仪器酶标比色仪(美国宝特公司生产,ELX800型);石蜡切片机(德国Leica公司生产);超声波细胞粉碎机(宁波新芝科器研究所生产);恒温孵育箱(Hirasawa公司生产);光学显微镜(日本Olympus公司生产);全自动照相系统(日本Olympus公司生产)。
1.1.3 药品与试剂中药芪红合剂由黄芪、红花、大黄、地龙等组成,上药按比例称取后,煎制浓缩为含生药4.4 g/mL的合剂(山西医科大学第二医院中药制剂室制备)。
泼尼松片:5 mg/片,批号:060423,浙江仙琚制药有限公司生产。
博来霉素A5:8 mg/支,批号:060401,天津太河制药有限公司生产。
大鼠TGF-β1酶联免疫吸附法(ELISA)检测试剂盒(通用型),购自上海轩昊科技发展有限公司;HE染色剂(由山西医科大学医学实验中心新鲜配制);10%水合氯醛(山西医科大学生理实验室新鲜配制)。
1.2 实验方法1.2.1 动物分组40只Wistar大鼠常规适应性饲养3 d,将大鼠随机分为4组:假手术组、模型组、泼尼松治疗组、芪红合剂治疗组,每组10只。
1.2.2 造模及给药根据文献[2]制备肺间质纤维化大鼠模型,气管内注射5 mg/kg博来霉素A5溶液建立肺纤维化动物模型。
假手术组动物在同样麻醉条件下气管内注入0.2 mL生理盐水。
术后第2天开始每天给大鼠灌胃给药,假手术组和模型组予2 mL生理盐水;沷尼松治疗组予30 mg/kg泼尼松片;芪红合剂治疗组予2 mL中药芪红合剂(用药剂量相当于成人每天每公斤体重的20倍)。
1.2.3 标本采集术后15 d处死所有大鼠采集标本。
以10%水合氯醛0.3 mL/100 g体重腹腔注射麻醉大鼠,剖取两肺,剪除气管、主支气管,将右肺组织用冰盐水冲洗3遍,滤纸吸干水分,-70 °C冻存,待做肺组织匀浆,用于蛋白指标检测;左肺组织用10%的中性甲醛溶液固定,石蜡包埋切片,以4 μm石蜡切片,常规行HE染色,待做病理形态学观察。
1.2.4 指标观察1.2.4.1 肺组织病理观察将HE染色后的石蜡切片置于光镜下观察肺组织病理变化。
1.2.4.2 肺组织TGF-β1检测采用酶联免疫吸附法(ELISA)进行测定,取右侧肺组织,常温下解冻,吸去血迹,称取300 mg相同部位组织,分别装入EP管,加入PBS液1 mL,冰水中用超声波细胞粉碎机做组织匀浆,离心15 min,取上清液,按照试剂盒说明操作。
1.2.5 统计学处理所有数据均以均数±标准差(x±s)表示,采用SPSS11.5统计软件分析,多组间采用单因素方差分析。
2 结果2.1 肺组织病理观察肉眼观察结果见图1~图4。
假手术组肺组织结构正常,双肺呈粉红色,表面光滑;模型组可见肺组织体积缩小,表面有片状凹凸不平的苍白灶,也有个别灰黑色病灶。
沷尼松治疗组、芪红合剂治疗组均有不同程度的苍白灶,但较模型组明显减少。
肺组织HE染色光镜下观察结果见图5~图8。
假手术组肺组织形态学结构无明显改变;模型组肺组织可见明显的肺间质病变,肺泡隔增宽,间质水肿,炎性细胞浸润增多,成纤维细胞和肌成纤维细胞增殖;沷尼松治疗组和芪红合剂治疗组上述病理改变有所减轻,但较假手术组仍明显。
2.2 肺组织中TGF-β1检测结果结果见表1。
由表可见,与假手术组比较,其余3组大鼠肺组织中TGF-β1含量显著升高(P0.01);与模型组比较,两治疗组TGF-β1含量显著降低(P0.01);而两治疗组间比较无显著差异(P>0.05)。
3 讨论肺间质纤维化是多种相关和触发性因素参与的慢性肺疾病的共同结局,早期常常表现为肺泡炎,肺泡内有大量炎症细胞浸润,随后在炎症细胞、血小板等分泌的致纤维化因子的作用下,细胞外基质(ECM)成分合成降解失衡,间质胶原增生、沉积,最终导致肺纤维化。
根据中医理论,结合现代医学的发病机理,从中西医结合的角度,我们认为肺纤维化时,患者出现的进行性呼吸困难,肺顺应性降低,肺容量减少,通气/血流比例失调和弥散功能障碍,这些表现与中医学中的气虚血瘀、气虚生痰、痰瘀互结,不荣肺络,久而渐致肺络枯萎,痰瘀阻结肺络成毒为害的病机理论相符。
因此,临床上我们配用益气活血化瘀、解毒通络的黄芪、红花、大黄等治疗多种肺系疾病,取得了满意疗效。
芪红合剂中黄芪扶正顾本,能够抗炎抗病毒,是一种肯定的免疫功能调节剂,还能够抑制血小板聚集,对血小板聚集有一定的解聚作用[3]164。
有研究报道,黄芪能抑制人胚肺成纤维细胞表达细胞间黏附分子-1及白介素-6受体,进而减少ECM的合成[4]。
红花活血化瘀,可使全血凝固时间延长,研究表明红花所含成分红花黄色素具有抑制血小板聚集和增加纤溶酶活性的作用,如果以胶原诱导血小板聚集,则红花黄色素有明显的拮抗作用[3]164。
大黄解毒泻热,多方研究表明他能够通过多种途径对纤维化疾病起一定的防治作用,如保护细胞,减轻组织损伤,抑制ECM产生细胞的增殖,并诱导其凋亡等[5~6]。
地龙清热平喘通络,并能“搜剔络邪”;芦根味甘性寒,凉润爽口,清热生津,养阴润肺。
综观全方,黄芪以补气之虚、红花以通络之瘀、地龙以平肺之喘、大黄以泻热之毒、芦根以润肺之阴,补通兼施,补中有泻,共促肺之阴阳调和,窍络贯通,其翕辟(呼吸)之力自适均也。
在本研究中,我们在肉眼直视下将博来霉素A5缓慢注入大鼠气管内制造模型,然后检测了致纤维化因子TGF-β1的表达变化。
大鼠肺组织经博来霉素作用15 d后取材,可见明显的肺间质病变。
HE染色肺组织学改变显示肺泡隔明显增宽,间质水肿,炎性细胞浸润增多,成纤维细胞和肌成纤维细胞增殖。
模型组肺组织中的TGF-β1表达明显增强,此结果与国内外文献报道一致。
而经过药物干预后的两治疗组TGF-β1表达均有所下降,与模型组相比有统计学意义(P0.01),且中药芪红合剂的作用与泼尼松相比无显著性差异(P0.05)。
这一结果提示中药芪红合剂与泼尼松均能够有效缓解肺纤维化的早期病变进展,而且可能通过抑制TGF-β1在模型大鼠病变早期肺组织中表达的上调来延缓病变的进展。
中药芪红合剂能够抑制TGF-β1在博来霉素诱发肺间质纤维化模型大鼠肺组织中表达的上调,推测其抑制TGF-β1表达上调的作用可能是其抗肺间质纤维化的作用机制之一。