戊四氮点燃大鼠海马突触体素表达的变化

戊四氮点燃大鼠海马突触体素表达　的变化　杨改清　。方树友　（１郑州市中心医院，河南郑州４５００００；２郑州大学第一附属医院）　山东医药２００８年第４８卷第７　

［摘要］建立戊四氮点燃癫痫模型，用免疫组化方法检测海马突触体素（ＳＹＮ）表达的变化，并用ＨＰＩＡＳ一１０００　多媒体病理图文分析系统对其定量。结果点燃组海马ＣＡ３区苔藓纤维层，齿状回颗粒细胞层，齿状回分子层内带　突触体素免疫反应产物光密度值与对照组相比显著增加（Ｐ＜０．０５）。认为点燃组海马突触体素较正常表达增加，　提示突触前终末囊泡数目增加，反应了轴突增生与突触形成。　［关键词］　癫痫；点燃；戊四唑；海马；突触体素；大鼠　［中图分类号】Ｒ７４２．１　［文献标识码］Ｂ　［文章编号］　１００２－２６６Ｘ（２００８）０７－００４０－０２　突触体素（ＳＹＮ）与神经递质的释放、突触形成　及突触小泡离子通道密切相关，是突触功能的物质　基础。测定ＳＹＮ含量变化是监测神经系统突触形成　和功能状态的方法之一。本实验建立大鼠戊四氮　（　）点燃癫痫模型－Ｉ　Ｊ，以探讨癫痫形成过程中海　马轴突增生和突触形成的变化。　１材料与方法　１．１　主要试剂和仪器ＰＴＺ粉剂，美国Ｓｉｇｍａ公司　产品，用前配成１％生理盐水溶液，以３５　ｍｇ／ｋｇ腹腔　注射，给药容积为３．５　ｍＬ／ｋｇ。鼠抗ＳＹＮ单克隆抗　体，美国Ｓｉｇｍａ公司产品，用前配成１：２００溶液。即　用型超敏ＳＰ免疫组化检测试剂盒，二氨基联苯胺　（ＤＡＢ），均购自北京中山生物技术有限公司。Ｌｅｉｃａ—　ＲＭ２０２５型石蜡切片机，ＯＬＹＭＰＵＳ　ＨＢ一２光学显微　镜，ＨＰＩＡＳ一１０００高清晰度彩色病理图文报告管理系　统，日本光电４３１７Ｆ脑电图机。　１．２　动物模型制作及免疫组化检测　健康成年雄　性ＳＤ大鼠２Ｏ只，随机分为两组，每组ｌＯ只。Ｉ组为　生理盐水对照组；Ⅱ组为　点燃组。根据Ｄｉｅｈｌ　Ｒ．Ｇ．等的方法制作动物模型。点燃组胃管内注人　生理盐水１０　ｍｌ／ｋｇ后ｌｈ腹腔注射　３５　ｍｇ／ｋｇ；对　照组于胃管和腹腔内分别注人１０　ｍｌ／ｋｇ和３．５　ｍｌ／　ｋｇ的生理盐水，间隔１　ｈ。均每日１次。注射完ＰＴＺ　后观察１　ｈ，记录痫性发作级别。点燃组点燃成功后　６　ｈ处死动物，灌注固定，断头取脑，修切组织，石蜡　包埋，切片。免疫组化染色主要步骤按ＳＰ法。应用　ＨＰＩＡＳ一１０００多媒体彩色病理图文报告管理系统对海　马ＣＡ３区苔藓纤维层，齿状回分子层内带、齿状回颗　４０　粒细胞层进行图像分析。ＳＹＮ免疫反应光密度值减　去背景的光密度值得到校正光密度值。　１．３统计学处理用ＳＰＳＳ　１０．０进行统计分析，结　果用　±ｓ表示。各组ＳＹＮ免疫反应产物光密度值的　比较用ｔ检验。Ｐ≤Ｏ．０５为有统计学差异。　２　结果　点燃组海马结构内ＳＹＮ免疫反应产物的密度　普遍较高，尤其在ＣＡ３区苔藓纤维层内，颗粒状免疫　反应产物着色较浓，分布均匀，呈弯月状；在齿状回　分子层内带染色较深，粗大浓染的颗粒状免疫反应　产物排布在树突干周围并因此映衬出颗粒细胞顶树　突的轮廓；在齿状回颗粒细胞层，颗粒细胞体周围有　深染的点状免疫反应产物沉积。和点燃组相比，对　照组海马结构内ＳＹＮ免疫反应产物的密度较低，免　疫反应产物颗粒细小淡染、稀疏。图像分析结果显　示，点燃组海马ＣＡ３区苔藓纤维层、齿状回分子层内　带及齿状回颗粒细胞层ＳＹＮ免疫反应产物光密度　值显著增加（Ｐ＜０．０５）。见表ｌ。　表１　不同处理组８ＹＮ免疫反应产物校正　光密度值的比较（　－Ｉ－ｓ）　注：与对照组比较，’Ｐ＜０．０５　３讨论　突触体素是一种特异性分布于突触前囊泡膜上　的钙结合糖蛋白，参与突触小泡膜与突触前膜的融　合和神经递质的释放，还与突触形成密切相关　。　

是一种准确的突触标志物，它的定位和定量可以准　维普资讯 http://www.cqvip.com 山东医药２００８年第４８卷第７期　确地反应突触的分布，从而反应其可塑性。在颞叶　癫痫患者齿状回上颗粒层ＳＹＮ免疫反应增强，同时　观察到齿状回上颗粒层生长相关蛋白Ｂ－５Ｏ免疫反　应增强以及伴随有突触密度增加的苔藓纤维出芽，　表明功能性的神经终末已经建立并可能参与了痫性　发作的起始　］。在边缘癫痫模型慢性期癫痫自发发　作过程中海马内ＳＹＮ表达增强，且与Ｔｉｍｍ染色显　示的苔藓纤维的分布一致　Ｊ。本试验中戊四氮点燃　大鼠海马结构内突触体素免疫反应产物密度普遍增　加，特别是在ＣＡ３区苔藓纤维层和齿状回分子层内　带，光密度值显著增加，且与戊四氮点燃大鼠海马　结构内生长相关蛋白ＧＡＰ－４３免疫反应增强的分布　一致，进一步表明在慢性期出现了轴突增生和突触　重组。但突触体素在癫痫发作中与突触重组之间的　关系尚不清楚，阐明其确切机制，调控癫痫发作后突　触体素的表达将是研究癫痫后突触可塑性的方向之　’’一Ｏ　［参考文献］　［１］许莉，王为民，王天成．”鸡尾酒”疗法对戊四氮致痫大鼠神经元　损伤的保护作用［Ｊ］．山东医药，２００６，４６（１１）：１９－２０．　［２］Ｔａｒｓａ　Ｌ，Ｇｏｄａ　Ｙ．Ｓｙｎａｐｔｏｐｈｙｓｉｎ　ｒｅｇｕｌａｔｅｓ　ａｃｔｉｖｉｔｙ—ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｓｙｎａｐｓｅ　ｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｃｕｌｔｕｒｅｄ　ｈｉｐｐｏｅａｍｐａｌ　ｎｅｕｒｅｎ［Ｊ］．Ｐｒｏｅ　Ｎａｔｌ　Ａｃａｄ　Ｓｃｉ　ＵＳＡ，２００２，９９（２）：１０１２—１０１６．　［３］Ｐｒｏｐｅｒ　ＥＡ，Ｏｅｓｔｒｅｉｅｈｅｒ　ＡＢ，Ｊａｎｓｅｎ　ＧＨ，ｅｔ　ａ１．Ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｅｈｅｍｉｃａｌ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｏｓｓｙ　ｆｉｂｅｒ　ｓｐｒｏｕｔｉｎｇ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ　ｏｆ　ｐａ—　ｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ｐｈａｒｍａｃｏ—ｒｅｓｉｓｔａｎｔ　ｔｅｍｐｏｒａｌ　ｌｏｂｅ　ｅｐｉｌｅｐｓｙ［Ｊ］．Ｂｒａｉｎ，　２０００，１２３（１）：１９－３０．　［４］李国良，肖波，谢光洁，等．边缘癫痫实验模型海马内突触体素表　达［Ｊ］．中国神经免疫学和神经病学杂志，２００４，１１（１１）：２２０—　２２３．　（收稿日期：２００７—１１－２３）　去白细胞血浆预防非溶血性发热性输血反应的观察　张月华。赵林园　（东营市中心血站，山东东营２５７０９１）　非溶血性发热性输血反应（ＦＮＨＴＲ）是临床常见的输血　反应之一，其发生主要是由于输注含有白细胞的血液成分产　生ＨＬＡ抗体，引起同种免疫反应，导致发热等临床不良症状。　近年来，随着去白细胞滤器在血站及临床逐渐普及应用，　ＦＮＨＴＲ的发生率明显降低。现对２００６年１２月我站新鲜冰　冻血浆（ＦＦＰ）的ＦＮＨＴＲ发生情况总结如下。　材料与方法：本中心血站签约供血医院的患者２６１例，　随机分为应用普通ＦＦＰ组和去白细胞ＦＦＰ组。其中ＦＦＰ组　１５３例，男８５例，女６８例；去白细胞ＦＦＰ组１０８例，男６２例，　女４６例。ＦＦＰ组为采用威高集团生产的三联袋制备的合格　ＦＦＰ，血袋批号为２００５１００６３、２００６０４２５２、２００６０９３０２、　２００６１１１２１；去白细胞ＦＦＰ组为采用威高集团生产的一次性　去白细胞塑料血袋（血库型去白细胞四联袋）制备的合格　ＦＦＰ，血袋生产批号为２００６０２０６２。对两组患者分别输注普通　ＦＦＰ和去白细胞ＦＦＰ，于输注前，输注后１５、３０　ｍｉｎ，１…２　４　８、　１２，２４　ｈ记录患者的体温（腋窝温度），观察有无恶寒、寒战等　症状的发生，再按输注前是否使用糖皮质激素（地塞米松为　主）、抗组胺药及阿司匹林等药物分为使用药物组（１３３例）　和未使用药物组（１２８例）进行对照观察。输注血浆前无发　热，输注中或输注后２４　ｈ内体温＞３８　ｏＣ，且较输注前升高＞　１　ｏＣ，或伴有恶寒、寒战、出汗、皮肤潮红等症状，不能为患者　・经验交流・　的病情所解释，可判定为ＦＮＨＴＲ。　结果：普通ＦＦＰ组发生ＦＮＨＴＲ　２２例，ＦＮＨＴＲ发生率　１４．３８％（２２／１５３）；去白细胞ＦＦＰ组发生ＦＮＨＴＲ　３例，　ＦＮＨＴＲ发生率２．７８％（３／１０８）；两组ＦＮＨＴＲ发生率比较差　异有显著统计学意义（　＝９．８３８，Ｐ＜０．０１）。输注血浆前用　药组发生ＦＮＨＴＲ　１３例，ＦＮＨＴＲ发生率９．７８％（１３／１３３）；未　用药组发生ＦＮＨＴＲ　１２例，ＦＮＨＴＲ发生率９．３８％（１２／１２８）。　用药组与未用药组比较ＦＮＨＴＲ发生率差异无统计学意义　（　＝０．０１２，Ｐ＞０．０５）。　讨论：本文结果说明使用去白细胞四联袋对红细胞和血　浆中的白细胞都产生了明显的滤除效果，减少了ＦＮＨＴＲ发　生，且大大减少了经白细胞传播疾病的机率，使血浆的临床　应用更加安全。因为去除了保存前的白细胞，大大减少了受　者抗体与供者的白细胞发生同种免疫反应的机会。另外血　库型白细胞滤器减少了白细胞在保存过程中可能产生的白　细胞介素１　Ｂ、肿瘤坏死因子等细胞因子，显著降低了ＦＮＨＴＲ　的发生率。本文用药组与未用药组比较ＦＮＨＴＲ发生率差异　无统计学意义，表明糖皮质激素（地塞米松为主）不能抑制白　细胞抗体的产生，对ＦＮＨＴＲ无明显的预防作用。　（收稿日期：２００７．１２．１３）　

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