内皮细胞的培养

小鼠肝脏窦状内皮细胞分离及培养的一种新方法小鼠肝脏窦状内皮细胞是肝脏微环境中的一种重要细胞类型，能够分泌多种生物活性物质，对肝脏功能的维持和调控起着重要作用。

为了研究小鼠肝脏窦状内皮细胞的生理功能以及相关疾病的发生发展机制，研究人员提出并优化了一种新的肝脏窦状内皮细胞的分离及培养方法。

该方法主要包括以下几个步骤：1.小鼠肝脏收集：选择4-6周龄的健康小鼠，进行麻醉后，用消毒好的手术刀进行腹部切口，取出肝脏后放入含有PBS缓冲液的培养皿中。

2. 肝脏组织分离：将肝脏分成小块，用显微镊子和剪刀细致地分离组织。

将分离好的肝脏组织放入50 ml离心管中。

3. 细胞悬浮：将分离好的肝脏组织用离心管尖端碾碎，加入含有PBS缓冲液的培养皿中，并用5 ml移液器不断悬浮，使细胞充分分散。

4.细胞预培养：将悬浮的细胞转移到一个新的含有PBS缓冲液的培养皿中，在37℃的恒温培养箱中进行预培养，以去除不能黏附的细胞。

5.分离窦状内皮细胞：将预培养的细胞转移到含有相应酶切剂的培养液中，如胰酶或胰酶/利巴韦林混合液，用37℃恒温培养箱恒温消化。

消化时间根据实验需要进行调整，通常为30-60分钟。

6. 细胞收获：将消化后的细胞和消化液转移到含有培养基的离心管中，用离心机进行离心，将上清液抽出。

重悬细胞并加入适量培养基，细胞密度通常为2-4×10^5个/ml。

7.细胞培养：将收获的窦状内皮细胞转移到预先涂覆了基质（如胶原、明胶、陶瓷片等）的培养皿中，加入适量的培养基，并将培养皿放回恒温培养箱中进行培养。

培养基的选择和配方可以根据实验需要进行调整。

8. 细胞鉴定：通过免疫荧光染色或免疫组化方法，使用窦状内皮细胞特异性标记物（如CD31、VE-Cadherin等）对分离的细胞进行鉴定，确认其为窦状内皮细胞。

通过这种新的小鼠肝脏窦状内皮细胞分离及培养方法，可以获得纯度较高的窦状内皮细胞，为后续研究窦状内皮细胞的生理功能和相关疾病的发生发展机制提供了可靠的实验材料。

内皮细胞和平滑肌细胞共培养
内皮细胞和平滑肌细胞是人体内两种重要的细胞类型，它们在血管壁和其他组织中发挥着重要的生理功能。

内皮细胞位于血管内膜表面，起着调节血管张力、维持血管通透性和抗凝等重要作用。

而平滑肌细胞则主要负责调节血管的收缩和舒张，控制血管内的血液流动。

近年来，科学家们开始关注内皮细胞和平滑肌细胞共培养的研究。

这种研究有望为心血管疾病和其他疾病的治疗提供新的思路和方法。

内皮细胞和平滑肌细胞共培养可以模拟体内血管内环境，有助于研究血管内的生理和病理过程。

通过共培养，科学家们可以更好地了解内皮细胞和平滑肌细胞之间的相互作用，以及它们在血管功能调节中的协同作用。

此外，内皮细胞和平滑肌细胞共培养还可以为药物筛选和新药研发提供平台。

许多心血管疾病的治疗药物都是通过作用于血管内皮细胞和平滑肌细胞来发挥作用的，因此，共培养的模型可以更准确地评估药物的疗效和安全性。

总的来说，内皮细胞和平滑肌细胞共培养的研究具有重要的科
学意义和临床应用前景。

通过深入研究这一领域，我们有望更好地理解血管疾病的发病机制，为相关疾病的治疗和预防提供新的思路和方法。

sciencell内皮细胞培养基说明书Sciencell内皮细胞培养基是一种特异性和高效性培养内皮细胞的基质，能够有效地维持和生长内皮细胞，并促进它们的分化和功能发挥。

以下是Sciencell内皮细胞培养基的详细说明：一、培养基配方Sciencell内皮细胞培养基主要包含以下成分：1. DMEM/F12培养基2. 10% FBS3. 内皮细胞生长因子（EGF、VEGF、FGF、呋喃丙酸等）4. 抗生素/抗菌素（penicillin和streptomycin）5. L-酪氨酸、谷氨酰胺和葡萄糖等。

二、适用范围Sciencell内皮细胞培养基适用于以下内皮细胞的培养：1. 人类内皮细胞（HEC、HUAEC、HPMEC等）2. 小鼠内皮细胞（MEC、MAEC等）3. 大鼠内皮细胞（REPEC、RAEC等）4. 其他动物内皮细胞。

三、培养条件1. 培养温度：37℃2. CO2浓度：5%3. 外源性添加物：Sciencell内皮细胞培养基中已经包含了必要的营养因子、生长因子和抗生素/抗菌素，不需要额外添加外源性添加物。

4. 培养密度：内皮细胞的培养密度应当根据不同细胞类型和研究需要适当调整，一般为1-3x10^4 cells/cm2。

5. 培养时间：培养时间应当根据不同细胞类型和实验需要适当调整，一般为4-7天。

四、保存条件Sciencell内皮细胞培养基应当在4℃低温保存，避免阳光直射和冻结。

保存期长达6个月，但是在保质期内使用会更好。

打开后，建议在一个月内使用完毕。

五、使用说明1. 移液操作：使用Sciencell内皮细胞培养基时应当采用无菌条件下的移液操作，并避免出现气泡和异物。

2. 细胞接种：将内皮细胞接种到预先涂覆的细胞培养底物上，并根据需要进行细胞划分和培养状态监测。

3. 细胞增殖：使用Sciencell内皮细胞培养基可促进内皮细胞的增殖和生长，建议每3-4天更换新的培养基。

4. 细胞检测：在细胞培养期间需监测细胞的培养状态、生长状态和增殖情况。

血管内皮细胞培养方法全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：血管内皮细胞（vascular endothelial cell，VEC）是血管内膜上的一种细胞，它们起着维持血管结构和功能的重要作用。

近年来，血管内皮细胞的培养方法逐渐成为生物医学领域的研究热点之一。

良好的血管内皮细胞培养方法不仅有助于研究心血管疾病的发生机制，还可以为新药的研发提供重要参考依据。

本文将详细介绍血管内皮细胞培养的方法和技巧，希望对相关研究人员和医学工作者有所帮助。

一、血管内皮细胞来源血管内皮细胞可以从多种来源获得，包括人类或动物的血管组织。

通常情况下，从人体的脐带血、外周血或组织中分离得到的血管内皮细胞具有较高的纯度和活性，适合于体外培养。

一些商业生物技术公司也提供血管内皮细胞的原代细胞培养服务，可以方便地购买到高质量的细胞用于研究。

二、血管内皮细胞培养基的选择血管内皮细胞培养基是培养血管内皮细胞的基本营养液，不同类型的细胞需要不同种类的培养基。

一般来说，常用的血管内皮细胞培养基包括Eagle's minimum essential medium（EMEM）、Dulbecco's modified Eagle's medium（DMEM）和Medium 199等。

这些培养基通常含有必需氨基酸、维生素、矿物质、生长因子、胎牛血清等营养成分，可以提供适宜的环境促进细胞生长。

1、原代细胞的分离和培养将采集到的组织样本进行酶消化处理，分离出血管内皮细胞，并通过贴壁法或悬浮培养法将其传代培养。

在传代培养的过程中，需要定期更换培养基、观察细胞的形态和数量变化，以确保细胞的健康生长。

2、细胞的传代和冻存随着细胞的传代次数增加，细胞的增殖能力和活性逐渐下降，需要进行细胞的传代和冻存。

传代前需要对细胞进行细胞数计数和活力检测，传代后要及时观察细胞的形态和生长情况，确保细胞的健康状态。

3、细胞的实验处理在进行实验前，需要对培养的细胞进行处理，如细胞分裂抑制（如丙酮酸、羟基脲等）、细胞增殖刺激（如VEGF、EGF等）等。

一、脐带内皮细胞的分离1. 脐带收集用无菌止血钳夹闭脐带两端，在止血钳外侧剪断脐带，放入盛有4 ℃Cord Buffer 的饭盒内。

脐带在4 ℃放置不应超过24 小时。

2. 脐带内皮细胞分离（1）带无菌手套，取出脐带，在止血钳内侧用碘酒和酒精棉球消毒后，用无菌剪刀将两端脐带剪除。

（2）在脐带一端找到静脉，插入脐带静脉插管，用2 根粗丝线扎牢，用Cord Buffer 抽吸有的30 ml注射器冲洗静脉腔，至将脐血洗净。

（3）赶出静脉腔内残余液体，将脐带另一端用止血钳夹闭，用10 ml注射器连接针头，注入37 ℃预热的0.1 ％胶原酶约6-8 ml，放入37 ℃Cord Buffer中保温6-10 min。

（4）吸出静脉腔内胶原酶所消化的细胞悬液，加入预加有20 ml Cord Buffer的离心管中，冲洗静脉腔，一并加入离心管中。

（5）离心，1500 rpm，10 min弃上清，用5～7 ml 20 ％FCS，RPMT 1640重悬细胞，转入培养瓶，放5 ％CO孵箱。

二、牛下丘脑内皮细胞生长因子粗提物的制备1. 取新鲜牛下丘脑，加1.5倍体积的冰生理盐水用组织匀浆机匀浆，每次0.5 min，共6次。

2. 在4 ℃条件下用震荡器机械震荡约1.5 h。

3. 离心，10000 g，40 min，收取上清液。

4. 按0.5 ％加硫酸链霉素，4 ℃过夜。

5. 离心，20000 g，40 min，收取上清液。

6. 用紫外分光光度测280 nm，260 nm OD值按公式计算蛋白含量。

7. 过滤，分装，-20 ℃保存备用。

三、内皮细胞的培养与鉴定1. 培养瓶包被明胶培养瓶（25 cm）中加入0.2 ％明胶3 ml，使其铺满瓶底，放4 ℃备用。

用前弃去明胶溶液。

2. 原代培养将从脐带静脉中收集到的内皮细胞移入包被明胶的培养瓶（25 cm），加5～7 ml 20 ％小牛血清199培养基，按终浓度分别为20 μg/ml和100 μg/ml加入内皮细胞生长因子粗提物和肝素。

实验目的：本研究旨在通过体外实验，探讨内皮细胞在不同条件下的生物学特性，包括细胞增殖、凋亡、迁移和血管生成能力，以期为内皮细胞在疾病发生发展中的作用提供实验依据。

实验材料：1. 人脐静脉内皮细胞（HUVECs）2. DMEM培养基（高糖）3. 胎牛血清（FBS）4. 0.25%胰蛋白酶5. 细胞培养箱6. 倒置显微镜7. 流式细胞仪8. 实验试剂（如Annexin V-FITC/PI双染试剂盒、血管内皮生长因子（VEGF）检测试剂盒等）实验方法：一、细胞培养与鉴定1. 将HUVECs接种于培养皿中，置于37℃、5%CO2的培养箱中培养。

2. 每2-3天更换一次培养基。

3. 利用免疫荧光染色法鉴定内皮细胞，观察细胞形态和内皮细胞标记物（如VE-cadherin）的表达。

二、细胞增殖实验1. 将细胞分为实验组和对照组。

2. 实验组给予不同浓度的VEGF处理，对照组给予等量DMEM培养基。

3. 在不同时间点收集细胞，利用CCK-8法检测细胞增殖情况。

三、细胞凋亡实验1. 将细胞分为实验组和对照组。

2. 实验组给予不同浓度的肿瘤坏死因子α（TNF-α）处理，对照组给予等量DMEM 培养基。

3. 利用Annexin V-FITC/PI双染试剂盒检测细胞凋亡情况。

四、细胞迁移实验1. 将细胞分为实验组和对照组。

2. 实验组给予不同浓度的细胞外基质（ECM）蛋白处理，对照组给予等量DMEM培养基。

3. 利用Transwell小室检测细胞迁移能力。

五、血管生成实验1. 将细胞分为实验组和对照组。

2. 实验组给予不同浓度的VEGF处理，对照组给予等量DMEM培养基。

3. 利用血管生成实验试剂盒检测细胞血管生成能力。

实验结果：一、细胞培养与鉴定成功培养出HUVECs，细胞形态为长梭形，细胞表面表达VE-cadherin。

二、细胞增殖实验VEGF处理组细胞增殖能力明显增强，与对照组相比，增殖率显著提高。

三、细胞凋亡实验TNF-α处理组细胞凋亡率显著升高，与对照组相比，凋亡率显著增加。

大鼠血管内皮细胞培养研究血管内皮细胞是血管中重要的细胞类型，其在维护血管生理特性以及参与血管病理反应中都具有重要的作用。

大鼠作为实验动物，其血管内皮细胞的研究也是非常重要的。

在这篇文章中，我们将重点介绍大鼠血管内皮细胞的培养技术及其在血管生物学研究中的应用。

一、大鼠血管内皮细胞培养技术1.1 资源准备大鼠动脉、静脉组织、FBS、DMEM/F12、胰酶、胰酶抗性味粉、细胞凝集素、槲皮素、PBS、二氧化碳培养箱、显微镜、离心机、相位对比显微镜、细胞均质器等。

1.2 组织消化将新鲜的大鼠动脉或静脉取出，去除外膜及脂肪组织，用PBS缓冲液清洗数次。

接着，用胰酶液消化组织，割碎后转移到消化液中，37℃孵育1-2小时，直到组织消化完全。

1.3 筛选基质消化完全的组织过筛，筛子孔径为80目。

去掉筛子上的淋渣后，产出的细胞可以用显微镜观察并鉴定是否为血管内皮细胞。

1.4 细胞培养将产出细胞悬浮在完全培养基（DMEM/F12，10% FBS，100ug/mL嘌呤鸟嘌呤，100ug/mL青霉素和50ug/mL链霉素）中，在培养室内孵育。

按细胞密度不同，可选用不同的培养方法，比如单细胞悬浮培养、半贴壁培养和全贴壁培养等。

1.5 纯化细胞如果需要纯化大鼠血管内皮细胞，还需要使用血管壁内形成的凝集素贴壁分离技术，配合药物槲皮素进行消除非内皮细胞。

二、大鼠血管内皮细胞在血管生物学研究中的应用2.1 血管内皮损伤与修复在血管损伤修复研究中，常常会使用拉环法、加热法、切割法、放置血栓等手段产生不同程度的血管内皮损伤模型，进而观察、探究血管内皮细胞的响应和修复机制。

例如研究大鼠颈动脉内皮细胞在内膜损伤后的DNA修复机制是一个非常热门的研究课题。

2.2 血管疾病如高血压、动脉硬化、心血管疾病等，都与血管内皮细胞的损伤和功能异常有关。

通过培养大鼠血管内皮细胞，可以模拟这些血管疾病模型，如在培养基中将NO剂加入，从而模拟高血压或将脂质压入细胞内，模拟动脉硬化等，可以帮助我们更好的探究血管疾病的病理生理机制。

内皮祖细胞的分离和培养实验原理内皮祖细胞(endo thelial prog enitor cells, EPCs)存在于骨髓、脐血和外周血，是血管内皮的前体细胞，参与胚胎时期的血管发生和出生后的血管新生，有促进组织器官, 尤其是缺血组织器官内皮细胞(endothiel cell, EC)修复、建立侧支循环和恢复血供的作用。

EPCs对培养体系要求很高，必须要有特异性生长因子血管内皮生长因子诱导和纤连蛋白辅助贴壁下才能够保持良好的生长状态和增殖活性。

外周血中所含内皮祖细胞极低，本次试验选用骨髓来分离内皮祖细胞。

实验材料1.材料来源:SD小鼠，4周龄，雄性，体重80g2.手术器械:解剖剪、解剖镊和止血钳3.清洗液:PBS和不含Ca2＋、Mg2＋的HBSS4.培养液:DMEM添加10％FBS、10万IU/L青霉素和100mg/L链霉素；含有8％肝素纳（500IU/ml）的PBS操作步骤1.取材:2～3w大鼠，脱颈，取股骨和胫骨。

2.冲骨:D-PBS冲洗骨髓，收集骨髓冲洗液，离心（100rpm，10min），弃上清，加DMEM混悬。

3.配细胞分离液:Percoll。

4.A液: Percoll原液和1. 5 mol NaCl（9:1），比重为1.124。

5.B液:A液和0.9% NaCl（6:4），比重为1.076。

6.梯度离心:缓慢将细胞混悬液1：1加于Percoll液上面，离心（2000rpm，20min），观察细胞分层。

7.单形核细胞培养:吸出含有单形核细胞的液层，用0.9% NaCl混悬，离心（100rpm，10min），弃上清，加适量培养液，接种于培养皿，37℃、0.5%CO2条件下培养24h。

8.吸取上层未贴壁单形核细胞，离心（1000rpm，10min），弃上清，加适量培养液，接种于培养皿，37℃、0.5%CO2条件下培养，3～5d传代。

注意事项1.取材前现配Percoll 液，4℃放置备用。

内皮细胞成管实验步骤内皮细胞是一种具有重要生物学功能的细胞类型，其在血管形成和维持血管功能方面起着关键作用。

内皮细胞成管实验是一种常用的实验方法，用于研究内皮细胞的管腔形成能力和血管生成的机制。

下面将介绍内皮细胞成管实验的详细步骤。

步骤一：细胞培养和准备1.1 培养内皮细胞：从小鼠或人的血管组织中分离内皮细胞，并将其培养在含有内皮细胞培养基的培养皿中，细胞密度一般为1×10^4 - 1×10^5个细胞/ml。

1.2 细胞的准备：用内皮细胞培养基洗涤细胞，将细胞悬浮于含有血清的培养基中。

步骤二：细胞的涂层和培养2.1 准备基质涂层：在培养皿中加入适量的基质涂层溶液（如胶原、玻璃纤维基质等），在室温下静置1小时或在4°C下静置过夜。

2.2 细胞的涂层：将细胞悬液加入基质涂层的培养皿中，使细胞均匀分布在涂层表面。

2.3 培养细胞：将培养皿放入细胞培养箱中，以37°C、5% CO2的条件下培养。

步骤三：细胞的处理和观察3.1 添加适当的刺激物：在培养基中加入适当的刺激物（如VEGF、FGF等），以促进内皮细胞的管腔形成。

3.2 处理时间的控制：根据实验的需要，控制细胞处理的时间，通常为24-72小时。

3.3 细胞的观察：使用光学显微镜观察培养皿中的细胞形态变化，特别注意细胞的管腔形成情况。

步骤四：结果分析和图像获取4.1 细胞成管评价：根据观察到的管腔形成情况，使用成管指数等评价指标对细胞成管能力进行定量分析。

4.2 图像获取：使用显微镜和成像设备获取细胞成管的图像，用于结果展示和进一步分析。

步骤五：数据分析和结果呈现5.1 数据的统计分析：使用合适的统计学方法对实验结果进行分析，比较不同处理组之间的差异。

5.2 结果的呈现：将实验结果以表格、图表或图片的形式进行呈现，准确描述实验结果和得出的结论。

内皮细胞成管实验是研究内皮细胞生物学功能的重要方法之一。

通过对内皮细胞的培养、处理和观察，可以深入了解内皮细胞的管腔形成过程和相关的信号通路。

内皮细胞和间质细胞共培养
内皮和间质细胞是构成血管壁的两种主要细胞类型。

在体外培养中，这两种细胞可以共同生长，并形成一个类似于血管壁的结构。

这种共培养系统可以用于研究血管发育、血管疾病以及药物筛选等方面。

内皮细胞和间质细胞之间的相互作用是血管发育和维持血管结
构的关键。

内皮细胞负责形成血管内皮层，参与调节血管通透性和血管张力；间质细胞则位于血管外膜，提供结构支持和保持血管稳定性。

在共培养系统中，内皮细胞和间质细胞可以相互刺激和影响，从而促进血管壁的形成和维护。

共培养系统的建立需要注意细胞来源、培养条件和细胞密度等因素。

内皮细胞可以来源于人体各种组织，如肺、脐带、肾等；间质细胞则主要来自于成人或胎儿的皮肤、骨髓等。

培养条件应包括适宜的培养基、生长因子和细胞密度等参数，以保证细胞正常生长和发育。

共培养系统的应用广泛，可以用于研究血管生成、血管损伤修复、肿瘤血管生成以及血管疾病等方面。

同时，该系统也可以作为药物筛选和评估的模型，用于测试药物对血管壁的影响和作用机制等。

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人脐带静脉内皮细胞的分离与培养试剂：血清、胰蛋白酶/胶原酶、PRMI培养粉、青、链霉素三蒸水、EDTA(乙二胺四乙酸二钠)、HCL、NaOH、NaCL、KCL、Na2HPO4.H2O、NaHCO3、台盼蓝器材：超净工作台、压力蒸汽消毒器、电热干燥箱、滤器、CO2培养箱、倒置显微镜、手术器械、水浴锅、温度计、磁性搅拌器、离心机、电子天平、血细胞计数板耗材：储存瓶、培养瓶，吸管、滴管，烧杯、量筒、粗细线、牛皮纸、饭盒、静脉插管、胶塞、离心管溶液配制1．水：新鲜配置的三蒸水2．PBS平衡盐溶液（工作液液）NaCL 80.0gKCL 4.0gNa2HPO4.H2O 0.6gKH2PO4 0.6g以上药品溶于1000ml三蒸水。

NaHCO3调PH到7.2，工作台内过滤后分装，－20℃冻存。

4℃解冻备用。

3．0．25%胰蛋白酶称取酶粉0.25g，加入100ml PBS工作液（注：不能用蒸馏水），磁力搅拌完全溶解，过夜，工作台滤过除菌，分装，－20℃冻存。

4．胎牛血清灭活（消除补体活性）：56℃，30 分钟摇匀后直接分装。

5．青霉素、链霉素一般市售的青霉素为80万单位/瓶，将其溶解在4ml三蒸水，每1000ml培养液中加0.5ml，最终使用浓度为每毫升100单位。

一般市售的链霉素为100万单位/瓶，将其溶解在5ml三蒸水，每1000ml培养液中加0.5ml，最终使用浓度为每毫升100单位。

6．10％血清RPMI-1640培养液RPMI-1640培养粉1袋(10.4g)碳酸氢钠 2.0 g青、链霉素各100单位／毫升加三蒸水至1000ml, 过滤除菌。

调节pH值至7.2加血清（终浓度10％）实验步骤：1.取产后健康新生儿脐带（4D-Hanks保存），6小时内操作；2.超净工作台上无菌操作：操作端插上无菌静脉插管，细线固定，用注射器将D-Hanks冲洗脐静脉到无血液为止；夹闭另一端，工作端注入37℃预热的胰蛋白酶10ml（37℃水浴锅消化10’）；消化液收入到加有血清培养液的离心管，3．1000rpm离心10’；弃上清，加入含10%血清培养液适量，吸管轻轻吹打，制成细胞悬液；4．种入培养瓶中，在培养箱中培养观察。

血管内皮细胞培养方法全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：血管内皮细胞是一种位于血管内壁的重要细胞，它们在维持血管结构稳定、调控血管张力和血液循环等方面发挥着重要作用。

对血管内皮细胞进行培养研究具有重要的生物学意义和临床应用前景。

下文将介绍一种常见的血管内皮细胞培养方法，希望能为相关研究工作提供一些帮助。

一、血管内皮细胞的来源：血管内皮细胞主要来源于人体的血管组织，通过合适的方法可以从血管中分离和提取。

通常来说，可以选择人体动脉、静脉等血管组织作为细胞来源，从中分离得到血管内皮细胞进行培养。

在实验动物中，也可以选择小鼠、大鼠等动物的血管组织来获取血管内皮细胞。

1. 血管组织的分离和处理：需要将血管组织从人体或动物中取出，并去除周围的结缔组织和肌肉组织。

然后，将血管组织切成小段，并用适当的消化酶进行消化处理，使内皮细胞从血管组织中释放出来。

2. 血管内皮细胞的分离和纯化：经过消化处理后，将获得的细胞悬液进行离心分层，采集含有内皮细胞的上清液。

然后，可以通过负性筛选或CD31抗体磁珠等方法将内皮细胞进行进一步的分离和纯化。

3. 血管内皮细胞的培养和传代：将得到的血管内皮细胞接种到预先涂有明胶或基底膜的培养皿中，加入适当的培养基和生长因子，将细胞放入细胞培养箱中进行培养。

随着细胞的增殖和扩张，可以进行细胞的传代，维持内皮细胞培养的稳定性。

4. 血管内皮细胞的鉴定与应用：在进行内皮细胞培养的过程中，需要对细胞进行鉴定，确认其具有内皮细胞的特征和功能。

通过免疫组化染色、PCR检测等方法，可以检测内皮细胞表面标记物和相关基因的表达情况。

血管内皮细胞在动脉粥样硬化、血管疾病等方面的研究应用也具有广泛的前景。

1. 培养环境的控制：血管内皮细胞对培养环境的要求比较严格，需要在无菌条件下进行培养，并保持适当的温度、湿度和CO2浓度等参数。

2. 培养基的选择：选择适合血管内皮细胞生长和扩张的培养基是培养过程中的关键。

淋巴细胞和内皮细胞共培养
淋巴细胞和内皮细胞的共培养是一种常见的实验技术，它可以
用于研究免疫反应、细胞间相互作用以及疾病发生机制等方面。

在
共培养过程中，淋巴细胞和内皮细胞相互作用，可以模拟体内细胞
间的相互作用，有助于研究它们在炎症、免疫应答、血管生成等生
理和病理过程中的作用。

首先，淋巴细胞和内皮细胞的共培养可以用于研究免疫细胞在
血管内皮中的迁移和粘附。

内皮细胞作为血管内壁的主要构成细胞，与循环中的免疫细胞（如淋巴细胞）之间的相互作用对于炎症反应
和免疫应答至关重要。

通过共培养实验，可以模拟这种相互作用，
进而研究免疫细胞在炎症过程中的粘附、迁移和活化等过程。

其次，共培养也可以用于研究内皮细胞对淋巴细胞的免疫调节
作用。

内皮细胞作为免疫调节的重要细胞，可以通过分泌细胞因子、表达黏附分子等途径调节淋巴细胞的活化、增殖和分化。

通过共培
养实验，可以探究内皮细胞在免疫应答中的调节机制，从而深入了
解免疫细胞与内皮细胞之间的相互作用。

此外，共培养还可以用于研究血管生成过程中淋巴细胞和内皮
细胞的相互影响。

内皮细胞在血管生成中起着重要作用，而最近的
研究表明，淋巴细胞也参与了血管生成过程。

通过共培养实验，可
以探究淋巴细胞和内皮细胞在血管生成中的相互作用机制，有助于
揭示血管生成过程中的免疫调节网络。

总的来说，淋巴细胞和内皮细胞的共培养是一个重要的实验模型，可以从多个角度深入研究免疫细胞与内皮细胞之间的相互作用，对于揭示炎症、免疫调节、血管生成等生理和病理过程具有重要意义。

前言血管重建在血管外科中占有重要地位，手术所需血管替代物可分三大类：第一类是自体血管，以大隐静脉为首选，但由于管径小，有时静脉质量差（如大隐静脉曲张、浅静脉炎），或已作过大隐静脉剥离术，利用率不到５０％；第二类是同种异体血管，其优点是组织结构和功能符合生理需要，但存在异体组织免疫排斥反应，尽管有很多方法如低温冷冻、免疫抑制剂等预处理，移植后的远期通畅率较低；第三类是人工血管，包括涤纶、真丝、聚四氟乙烯（ｐ０１），ｔｅｔｒａｎｕｏｒｏｅｔｈｙＩｅｎｅ，ＰＴＦＥ）、膨体聚四氟乙烯（ｅｘｐａｎｄｅｄｐ０１）’ｔｅｔｒａｆｌｕｏｔ’ｏｅｔｈ）’ｌｅｎｅ，ｅＰＴＦＥ），各类组织工程血管等。

上述人工血管已被部分应用于临床，但普遍存在组织相容性差，术后移植物血栓发生率较高，影响远期通畅率。

１９７０年，Ｍａｎｓｆｉｅｌｄ首次提出“人工血管内皮化”（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｉｚａｔｉｏｎ）概念，即内皮细胞种植人工血管，以提高人工血管腔面生物活性和功能。

经过３０多年的发展，人工血管内皮化相关技术包括内皮细胞的分离、种植和人工血管材料技术等方面已取得较大进展，动物实验和部分临床应用的效果证实经内皮化的人工血管可提高移植物术后通畅率，特别在小口径血管和静脉移植物尤其明显。

目前，用于人工血管内皮化的内皮细胞主要取材于自体血管如大隐静脉或富有微血管的组织如大网膜，这种通过外科手段获取内皮细胞的方法给人工血管内皮化的临床应用带来不便，且自体成熟内皮细胞在体外培养过程中，易发生细胞生物学特性改变。

近年来，随着对胚胎造血干细胞的研究利用，人们发现，在胚胎发育早期，血管内皮细胞和造血干细胞（ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｓ，ＨＳＣｓ）由共同的祖细胞分化而来，这种内皮祖细胞（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｃｅｉｌｓ，ＥＰＣｓ）表达ＣＤ３４抗原，１９９７年，Ａｓａｈａｒａ首次发现在成人外周血存在这种细胞，以后，相继在人胎儿脐血（Ｎｉｅｄａｅｔａ１．１９９７）和骨髓ｆＡｓａｈａｒａｅｔａ１．１９９９）中发现，有人把这种细胞统称为循环内皮细胞（ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｉｌｓ）。

一种小鼠主动脉内皮细胞的分离及培养方法说实话小鼠主动脉内皮细胞的分离及培养方法这事，我一开始也是瞎摸索。

我试过好几种方法，有一回，我按照一个看起来很靠谱的文献里说的做。

首先就是处死小鼠这一步，听起来简单，其实要很小心。

就好比你要拆除一个特别精密的小零件一样，手要稳准狠。

我刚开始的时候手有点抖，导致取主动脉的时候就不是很顺利。

这中间有个小窍门就是一定要让小鼠处于合适的麻醉或者处死状态，要是它突然动一下，那就全乱套了。

取主动脉的时候呢，因为主动脉很细小，就像在一堆细细的面条里面找到一根特定的面条那样难。

我曾经就因为镊子用得不顺手，把主动脉弄破了，这一破，基本上前面的工作就白费了。

所以，工欲善其事必先利其器，镊子剪刀这些小工具，一定要选那种尖细又合手的。

取出来主动脉之后，就要开始处理细胞分离了。

我试过用酶来消化，但是这个酶的浓度啊，我当时就把握不好。

浓度太高吧，会把细胞都给毒死了似的，浓度低呢，又分不出来多少细胞。

就像你做饭放盐，多了就咸得没法吃，少了又没味道。

在无数次尝试之后，我感觉大概这个酶的浓度到多少多少是比较合适的，当然这个数值可能不是完全精准，但是能做出效果。

再就是培养了，培养的时候那个细胞生长的环境很重要。

比如说培养皿就像房子，得先把房子打扫干净，也就是把培养皿进行非常严格的消毒处理。

那培养基就像是食物，得选对适合主动脉内皮细胞生长的培养基。

我在这方面也走了不少弯路，刚开始随便选了一种培养基，结果细胞根本就不怎么长，就像把树栽在沙漠里肯定不行啊。

后来换了适合的培养基，还有就是温度、湿度这些环境一定要控制好，就好比人类不能在高温火山或者冰冷极地好好生活一样，细胞也需要合适的温湿度。

还有就是观察细胞的时候，千万不能偷懒。

我有时候忘记及时观察细胞状态，结果细胞就被污染了，那些污染就像侵略者一样，一进来就把细胞都破坏掉了。

所以要时不时地看看细胞有没有变化。

虽然这个过程很折腾，但只要耐心地不断尝试，总能找到适合自己的方法的。

内皮细胞原代培养
[材料]新生牛主动脉，大鼠主动脉
[仪器及设备]超净工作台
培养箱（37︒C，5%CO2）
倒置显微镜
离心机
[常用试剂]培养液：1640+10%小牛血清
平衡盐溶液：Hank's液及D-Hank's液
消化液：胶原酶（或胰蛋白酶）
[操作方法]
酶消化法将牛胸主动脉取出（至少5cm）,放入含双抗的Hank's液瓶内带回。

于超净台内充分剥离血管外面的脂肪与结缔组织，并反复用Hank's
液冲洗动脉腔至无血液凝块为止。

用剪刀将血管剪开，使内皮贴在
倒有0.1%胶原酶（或0.25%胰酶）的平皿中，置培养箱中消化8~10
分钟。

收集消化液于无菌离心管中，再用培养液冲洗血管内壁，一
并收集入离心管，1000rpm离心8分钟。

可再洗1~2次。

沉淀细胞
用培养液制成细胞悬液。

计数，接种密度2~3⨯105cells/cm2。

置培
养箱内培养，2~3天换液一次。

贴块法无菌操作取出大鼠主动脉，去脂肪与结缔组织，冲洗干净。

沿动脉一长轴剪开主动脉，切成2mm2动脉小块，将动脉片10~20块（内
膜向下，色偏黄），贴在预先涂过明胶的培养瓶上，放入37︒C温
箱中贴固0.5~1h，再加培养液，2天后换液一次，5天左右取出动
脉片，8~9天基本汇成单层细胞。