血管内皮细胞培养

杰特细胞培养标准
杰特细胞是一种血管内皮细胞，主要用于研究血管生成和血管疾病的发生机理。

以下是杰特细胞培养的标准：
1. 培养基选择：常用杰特细胞培养基为DMEM/F12，其中含10%胎牛血清、1% L-谷氨酸、10 ng/mL VEGF、50 U/mL 青霉素和50 μg/mL链霉素。

2.杰特细胞分离：杰特细胞来源于人类肾小管上皮细胞系，通常用酶法、细胞贴壁法或洗涤法等方法将细胞从组织中分离。

3.细胞培养条件：细胞在37℃、5%CO2的恒温培养箱中培养。

根据杰特细胞的特性，在细胞达到60%～80%的密度时，应及时处理。

4.细胞传代：当细胞密度到达85%～90%时，需要进行细胞传代，通常采用胰酶或三胺基乙烷酸法进行分离，每次分离后对细胞株进行鉴定。

5.细胞检测：杰特细胞常用的检测方法有细胞形态观察、免疫荧光染色、流式细胞术等，以确保细胞的鉴定和纯化。

6.冻存条件：培养的细胞必须进行冻存备份，通常使用10%DMSO作为冷冻液，保存在液氮中。

7.细胞应用：杰特细胞可以应用于各种相关研究和实验中，如血管生成、心血管疾病等。

血管内皮细胞—平滑肌细胞共培养体系研究进展血管内皮细胞（endothelial cells，EC）和血管平滑肌细胞（smooth musclecells，VSMC）的相互作用、相互影响维持血管生理功能和多种疾病的发生发展，EC-SMC联合培养模型是目前研究这2种细胞间相互影响的最佳方式。

作者对现有的EC-SMC共培养模型及共培养对这2种细胞结构和功能的影响进行综述，为在微观上深入研究二者的相互关系提供依据，也为建立更接近机体生理/病理状态的EC-SMC体外共培养体系提供参考。

标签：内皮细胞；平滑肌细胞；共培养；相互作用血管内皮细胞（endothelial cells，EC）和血管平滑肌细胞（smooth muscle cells，VSMC）是构成血管壁的主要细胞成分，2种细胞间的相互作用、相互影响是维持血管生理功能和血管壁自身结构稳定的关键，在病理条件下EC和SMC的相互作用同样可影响多种疾病的发生发展。

EC-SMC联合培养模型是目前研究这2种细胞间相互影响的最佳方式，对研究动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）发病机制、血管壁生理及炎症反应等有重要意义。

本文就目前EC-SMC共培养模型和共培养模式下2种细胞的互相影响做一综述，为在微观上深入研究二者的相互关系提供依据。

1 EC-SMC共培养模型1.1 直接接触的共培养模式早在20世纪80年代，国外学者就开始尝试建立EC-SMC共培养的方法。

早期研究简单地将EC和SMC按一定的比例混合，种植在同一体系中，2种细胞能够混合生长，且相邻的EC和SMC之间形成连接[1]。

此模型较为原始，细胞混杂，EC和SMC没有形成生理状态下的结构层次，且2种细胞之间干扰较大。

在此基础之上，Davies等[2]引进了微载体技术，即将2种细胞分别种植于微载体上，然后将微载体混合于同一体系，实验中相邻的微载体上同型或异型细胞间都形成接触连接。

这种方法很好地将2种细胞分离培养，使其能独立存在，从而为单独研究联合培养体系中某一种细胞提供了方便，但仍然不能反映生理状态下细胞的生长结构层次关系。

人脐静脉血管内皮细胞的高效分离与培养张臣;李彤;侯跃龙;严晓晔;高英堂【摘要】目的:建立人脐静脉内皮细胞(HUVEC)体外分离、培养、鉴定的高效方法.方法:胰酶消化法从脐静脉获得HUVEC,观察其形态并传代培养,检测其摄取Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白(Dil-AcLDL)的情况,传3代流式榆测内皮细胞特异性表达.结果:消化分离的细胞呈小圆形且聚集成团;2h细胞开始贴壁,呈条索状;7d细胞增多呈漩涡样生长;此后细胞继续增多接近融合,呈铺路石样改变.流式检测细胞高表达血管内皮细胞特异性标志CD144、vWF、CD31,部分表达CD34,而白细胞共同抗原CD45为阴性表达.镜下发现贴壁细胞原代、第5代摄取Dil-AcLDL,胞浆呈现红色荧光,提示为有活性的内皮细胞.结论:利用胰酶消化法能从人脐静脉获得大量内皮细胞,体外培养后能成功增殖传代.【期刊名称】《天津医药》【年(卷),期】2010(038)007【总页数】3页(P605-607)【关键词】内皮细胞;脐静脉;细胞培养技术;细胞分离;连续传代【作者】张臣;李彤;侯跃龙;严晓晔;高英堂【作者单位】300170,天津市第三中心医院,天津市人工细胞重点实验室;300170,天津市第三中心医院,天津市人工细胞重点实验室;300170,天津市第三中心医院,天津市人工细胞重点实验室;300170,天津市第三中心医院,天津市人工细胞重点实验室;300170,天津市第三中心医院,天津市人工细胞重点实验室【正文语种】中文人的内皮细胞是血管壁的主要组成部分，在维持组织稳态、纤溶与凝血、血液组织交换、血管舒缩调节、血管新生、血细胞激活和迁移等生理和病理过程中发挥着重要作用，另外在免疫反应起始过程中也起着决定性的作用[1]。

因此体外获得血管内皮细胞可为阐明许多疾病血管并发症的病理过程提供重要研究模型[2]。

新生儿脐带由于取材经济、来源充足,而成为血管内皮细胞体外获得的主要材料。

肿瘤原代血管内皮细胞提取
肿瘤原代血管内皮细胞提取是指从肿瘤组织中分离和培养原代血管内皮细胞。

下面是一种常见的方法：
1. 收集肿瘤组织样本：从患者手术切除的肿瘤组织或者小鼠移植的肿瘤样本中切取一小块组织。

2. 组织消化：将切取的肿瘤组织块放入含有酶消化液（如胰酶、胶原酶等）的培养皿中，静置一段时间（通常为30分钟至1
小时），使组织细胞分解。

3. 细胞收集：将消化后的组织液过筛或通过离心的方法分离细胞。

离心后，上清液中包含了原代血管内皮细胞。

4. 细胞培养：将分离得到的原代血管内皮细胞接种于预先涂覆了基质的培养皿中。

培养基可以选择适合血管内皮细胞生长的培养基，如内皮细胞培养基。

5. 细胞培养与扩增：将培养皿置于恒温培养箱中，提供适当的培养条件（如37℃恒温、5% CO2、高湿度等），定期更换培
养基，并观察细胞生长情况。

原代内皮细胞通常需要经过数代扩增，以获得足够量的细胞。

以上是一种常见的肿瘤原代血管内皮细胞提取方法，具体操作细节可能根据实验目的和实验室条件的不同而有所调整。

内皮细胞的培养内皮细胞，用高倍镜观察肠系膜上的毛细血管，可见到内皮细胞，内皮细胞较间皮细胞小，排列紧密。

内皮细胞或血管内皮是一薄层的专门上皮细胞，由一层扁平细胞所组成，呈多边形，细胞的边缘呈锯齿状，相互嵌合。

血管内皮细胞（EC）位于血液与血管组织之间，它不仅能完成血液和组织液的代谢交换，并且能合成和分泌多种生物活性物质，以保证血管正常的收缩和舒张，起到维持血管张力，调节血压以及凝血与抗凝平衡等特殊功能，进而保持血液的正常流动和血管的长期通畅。

抗凝血材料表面内皮细胞化，可以减少血栓的形成和血小板激活。

下面以脐带静脉为例介绍内皮细胞的培养：一、试剂准备：（1）脐带保存液：生理盐水、葡萄糖100 mmoL/L、100 U/ml青霉素一100 U/m1链霉素。

（2）组织消化液：0．1％I型胶原酶和0．05％胰酶-0．02％乙二胺四乙酸二钠盐(EDTA)溶液。

（3）内皮细胞培养液：含20％胎牛血清、ECGS、肝素，100 U／m1青霉素-100 U／m1链霉素的M199培养基。

（4）器皿：0．2％明胶包被：用PBS配制。

二、原代提取（1）脐带处理：在无菌条件下取新生胎儿脐带，长度>20 cm。

剪去脐带两端和脐带上有夹痕及血肿部分，尽量挤干净脐带内血液。

用生理盐水冲洗脐带表面至无血色。

（2）脐静脉处理：用输血器内接有穿刺器的软管，找到脐静脉，将软管针头一端插入脐静脉，用止水夹固定，另一端接20 m1注射器，吸取PBS反复冲洗脐静脉直至无血色液体流出为止。

（3）组织消化：将脐带另一端用止血钳夹闭，向脐静脉中灌入0．1％I型胶原酶溶液，使之充盈，夹闭软管，37℃水浴中孵育20 min，其间轻轻挤压并旋转脐带，以使酶溶液充分接触血管内壁，然后将细胞一酶溶液收集于预先装有温培养液小三角瓶中。

（4）收集细胞：用2倍于消化液的温PBS冲洗脐静脉，一并收集于小三角瓶中，将细胞悬液装入10 ml离心管，（5）离心培养：1 000 r／min离心10 min，弃上清，吹打悬浮，再次离心10 min，重悬细胞并接种于铺有明胶的25 cm2培养瓶中，置于37℃5％C02饱和湿度培养箱中培养，24 h 后更换培养液，以后每隔2 d换液1次。

血管内皮细胞培养方法全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：血管内皮细胞（vascular endothelial cell，VEC）是血管内膜上的一种细胞，它们起着维持血管结构和功能的重要作用。

近年来，血管内皮细胞的培养方法逐渐成为生物医学领域的研究热点之一。

良好的血管内皮细胞培养方法不仅有助于研究心血管疾病的发生机制，还可以为新药的研发提供重要参考依据。

本文将详细介绍血管内皮细胞培养的方法和技巧，希望对相关研究人员和医学工作者有所帮助。

一、血管内皮细胞来源血管内皮细胞可以从多种来源获得，包括人类或动物的血管组织。

通常情况下，从人体的脐带血、外周血或组织中分离得到的血管内皮细胞具有较高的纯度和活性，适合于体外培养。

一些商业生物技术公司也提供血管内皮细胞的原代细胞培养服务，可以方便地购买到高质量的细胞用于研究。

二、血管内皮细胞培养基的选择血管内皮细胞培养基是培养血管内皮细胞的基本营养液，不同类型的细胞需要不同种类的培养基。

一般来说，常用的血管内皮细胞培养基包括Eagle's minimum essential medium（EMEM）、Dulbecco's modified Eagle's medium（DMEM）和Medium 199等。

这些培养基通常含有必需氨基酸、维生素、矿物质、生长因子、胎牛血清等营养成分，可以提供适宜的环境促进细胞生长。

1、原代细胞的分离和培养将采集到的组织样本进行酶消化处理，分离出血管内皮细胞，并通过贴壁法或悬浮培养法将其传代培养。

在传代培养的过程中，需要定期更换培养基、观察细胞的形态和数量变化，以确保细胞的健康生长。

2、细胞的传代和冻存随着细胞的传代次数增加，细胞的增殖能力和活性逐渐下降，需要进行细胞的传代和冻存。

传代前需要对细胞进行细胞数计数和活力检测，传代后要及时观察细胞的形态和生长情况，确保细胞的健康状态。

3、细胞的实验处理在进行实验前，需要对培养的细胞进行处理，如细胞分裂抑制（如丙酮酸、羟基脲等）、细胞增殖刺激（如VEGF、EGF等）等。

改良的心肌微血管内皮细胞分离培养方法我折腾了好久这个改良的心肌微血管内皮细胞分离培养方法，总算有点门道。

一开始我真的是瞎摸索，各种状况频出。

我先讲讲最开始那些失败的尝试吧。

最初我就按照一些基础的细胞分离培养方法来搞。

我想从心肌组织里获取微血管内皮细胞，就简单地用酶去消化，感觉好像很容易似的。

但是呢，得到的细胞数量少得可怜，而且纯度也低，根本没法做后续实验。

那时候我就知道，这肯定不是那么简单的事儿。

后来我又尝试增加酶的浓度。

我想着这就像是在开锁，原来那个浓度的钥匙打不开锁，说不定提高点浓度就能行了呢。

结果可倒好，浓度高了之后，细胞损伤特别大。

这就像是你用蛮力去拽开一扇门，门是开了，但是里面的东西也被破坏得乱七八糟的。

然后我也试过延长消化的时间，就觉得也许给它多一点时间，就能更彻底地分离细胞。

可是这就像炖肉一样，你炖得太久就烂糊了，细胞也是，都失去活性了。

那现在这个改良的方法里，有几个地方特别关键。

比如说消化这步，不是随便选个酶就行的。

我仔细研究了好多种酶的组合，就像你搭配不同的调料来做菜一样。

发现多种酶按一定比例混合，才能既有效地把细胞从组织里分离开，又不伤害细胞。

另外，离心的速度和时间也是很有讲究的。

我试了好多不同的数值，最后发现一个比较合适的范围，这样就能把杂质去掉，得到纯度高一些的细胞了。

还有清洗这步，之前我都是很随意地清洗，感觉把里面的消化酶啥的冲掉就得了。

但是后来才知道，清洗的缓冲液的成分和数量也很重要。

就好比你洗衣服，不是用清水随便泡泡就行的，你得用药水而且量还得合适才能把脏东西彻底弄掉，又不会对衣服本身有伤害。

我现在觉得啊，在做这个心肌微血管内皮细胞分离培养的时候，每一个小步骤都可能是成败的关键。

而且你得非常有耐心，不断尝试，每个因素都调整一下试试，说不定就突然找到最佳的方案了。

我也不敢说我这个方法就完美了，就是把我目前摸索出来的这些经验跟你们分享下。

希望要是有人也做这个实验的话，能少走些弯路。

大鼠血管内皮细胞培养研究血管内皮细胞是血管中重要的细胞类型，其在维护血管生理特性以及参与血管病理反应中都具有重要的作用。

大鼠作为实验动物，其血管内皮细胞的研究也是非常重要的。

在这篇文章中，我们将重点介绍大鼠血管内皮细胞的培养技术及其在血管生物学研究中的应用。

一、大鼠血管内皮细胞培养技术1.1 资源准备大鼠动脉、静脉组织、FBS、DMEM/F12、胰酶、胰酶抗性味粉、细胞凝集素、槲皮素、PBS、二氧化碳培养箱、显微镜、离心机、相位对比显微镜、细胞均质器等。

1.2 组织消化将新鲜的大鼠动脉或静脉取出，去除外膜及脂肪组织，用PBS缓冲液清洗数次。

接着，用胰酶液消化组织，割碎后转移到消化液中，37℃孵育1-2小时，直到组织消化完全。

1.3 筛选基质消化完全的组织过筛，筛子孔径为80目。

去掉筛子上的淋渣后，产出的细胞可以用显微镜观察并鉴定是否为血管内皮细胞。

1.4 细胞培养将产出细胞悬浮在完全培养基（DMEM/F12，10% FBS，100ug/mL嘌呤鸟嘌呤，100ug/mL青霉素和50ug/mL链霉素）中，在培养室内孵育。

按细胞密度不同，可选用不同的培养方法，比如单细胞悬浮培养、半贴壁培养和全贴壁培养等。

1.5 纯化细胞如果需要纯化大鼠血管内皮细胞，还需要使用血管壁内形成的凝集素贴壁分离技术，配合药物槲皮素进行消除非内皮细胞。

二、大鼠血管内皮细胞在血管生物学研究中的应用2.1 血管内皮损伤与修复在血管损伤修复研究中，常常会使用拉环法、加热法、切割法、放置血栓等手段产生不同程度的血管内皮损伤模型，进而观察、探究血管内皮细胞的响应和修复机制。

例如研究大鼠颈动脉内皮细胞在内膜损伤后的DNA修复机制是一个非常热门的研究课题。

2.2 血管疾病如高血压、动脉硬化、心血管疾病等，都与血管内皮细胞的损伤和功能异常有关。

通过培养大鼠血管内皮细胞，可以模拟这些血管疾病模型，如在培养基中将NO剂加入，从而模拟高血压或将脂质压入细胞内，模拟动脉硬化等，可以帮助我们更好的探究血管疾病的病理生理机制。