鲎试剂凝胶法

透析透析专用专用专用细菌内细菌内细菌内毒毒素检测鲎试剂盒使用说明书(凝胶法)【品名品名】】透析用水及透析液细菌内毒素检测鲎试剂盒【规格规格】】1样份/盒【用途用途】】用于透析用水或透析液细菌内毒素检测。

【原理原理】】该鲎试剂为鲎科动物东方鲎的血液变形细胞溶解物的冷冻干燥品, 鲎试剂中含有C因子、B 因子、凝固酶原、凝固蛋白原等。

在适宜的条件下，细菌内毒素激活C 因子，引起一系列酶促反应，使鲎试剂产生凝集反应形成凝胶。

【试剂盒组成试剂盒组成】】名称 规格/数量 用途 1 鲎试剂（TAL ） 0.5EU/ml ×8支 反应主剂 2 内毒素工作标准品（CSE ） 1EU/支×2支 阳性对照和供试品阳性对照 3 细菌内毒素检查用水（TRW ） 2ml ×3支 鲎试剂与内毒素溶解 4 辅液Ⅰ 0.7ml ×1支 样本稀释 5 采样瓶 10ml ×1支 透析用水或透析液采集 6 空安瓿 2ml ×1支 样本稀释 7 除热原吸头 200µl ×2包，1ml ×1包 移取样本及内毒素溶液 8 使用说明书 1份 操作说明 9 质检报告 1份 质检报告【需准备的材料和设备需准备的材料和设备】】除本试剂盒外需准备旋涡混合器、移液器、试管架、恒温水浴箱或恒温器（37±1℃）。

【用法用法】】1. 供试品溶液及对照制备1.1阴性对照溶液的制备即细菌内毒素检查用水（TRW ）。

1.2阳性对照溶液的制备一般为浓度为2λ的内毒素溶液（λ为鲎试剂的的标示灵敏度）。

例如：取效价为1EU/支的内毒素工作品（CSE ）１支，加入1.0ml 细菌内毒素检查用水（TRW ），在旋涡混合器震摇2-3min 得1.0EU/ml 内毒素阳性对照溶液。

1.3供试品溶液的制备用无热原采样瓶采集适量透析用水或透析液。

若样本的内毒素限值(L )为1.0EU/ml ，按鲎试剂的灵敏度λ及样本的内毒素限值L 计算供试品德最大有效稀释倍数(MVD )，M V D = L /λ当λ= 0.5 EU/ml ，L= 1.0EU/ml 时，M V D =2(倍),取样本0.7ml 于试剂盒配套辅液Ⅰ中，用旋涡混合器混匀1min 后，即为待测供试品溶液。

产品描述：凝胶法鲎试剂内毒素检测试剂Gel Clot LAL Assays产品介绍：内毒素检测Endotoxin Detection提供内毒素检测LAL(Limulusamebocytelysate)试剂及各种仪器，此类产品广泛用于工业药品制造厂家。

可检测各种规格的内毒素含量。

Lonza公司可提供各种单独或组合装的试剂检测盒,以及内毒素标准品、检测用水、检测仪器。

为适应市场的需要Cambrex公司还不断推出各种新的检测方法及试剂。

：1)凝胶法：定性、半定量、更高的灵敏度。

2) 荧光法：快速、高灵敏度、简单、较大范围内定量3) 端点显色法：快速、简便、小范围内定量。

4) 内毒素检测精密移液器、试管架、无热源吸头、无热源试管、无热源微板、动态检测仪器。

其中重组因子C ----内毒素激活的胶凝级联反应中最重要的成分。

PyroGene™重组因子C 的内毒素侦测有较佳的状态, 不会检测到β(1,3)-聚葡萄醣体的活动，不受季节、环境、动物血、不同批次差异性的影响。

使用PyroGene™无需使用G因子阻滞缓冲液，节约您的时间跟经费。

PyroGene™的订购号码: 50-658U, 每组192支。

需要进一步的产品信息, 请与我们联系。

订货信息货号描述灵敏度EU/ml规格PYROGENT® Gel Clot LAL Assay80 tests = 5×16 tests/vial of lysate250 tests = 5×50 tests/vial of lysateN104 0.03 250 testsN183-06 0.06 80 testsN194-06 0.06 250 testsN183-125 0.125 80 testsN184-125 0.125 250 testsN184-25 0.25 250 testsPYROGENT® Gel Clot LAL Single Test Vials25 single test vials of lysateN189-06 0.06 25 testsN189-125 0.125 25 testsN189-25 0.25 25 testsPYROGENT® Plus Gel Clot LAL Assay（含对照）1×10 ng/vial endotoxin64 Tests = 4×16 tests/vial of lysate200Tests = 4×50 tests/vial of lysateN294-03 0.03 200 testsN283-06 0.06 64 testsN294-06 0.06 200 testsN283-125 0.125 64 testsN294-125 0.125 200 testsN284-25 0.25 200 testsPYROGENT® Plus Gel Clot LAL Single Test Vials1×1 ml vial endotoxin24 single test vials of lysateN289-06 0.06 24 testsN289-125 0.125 24 testsN289-25 0.25 24 testsPYROGENT® Ultra Gel Clot LAL Assay200Tests = 4×50 tests/vial of lysate5×5 ml liquid endotoxin standardsN594-03 0.03 200 testsN594-06 0.06 200 testsN594-125 0.125 200 testsControl Standard Endotoxin for Gel Clot LALEndotoxin(E. coli) for Gel Clot AssaysStrain O55:B5N185 5 vials×2.5 mg/vial*N186 5 vials×10 ng/vial* high potency for depyrogenation studies。

鲎试剂实验方法鲎试剂按实验方法可分为：凝胶法、动态浊度法鲎试剂、终点浊度法鲎试剂、动态显色法鲎试剂、终点显色法鲎试剂。

凝胶法系通过鲎试剂与内毒素产生凝集反应的原理来定性检测或半定量内毒素的方法。

凝胶法是通过观察有无凝胶形成作为反应的终点。

此法操作比较简单，经济，不需要专用测定设备，可以进行定性或半定量测定。

凝胶法鲎试剂常见规格为0.1ml/支或0.2ml/支的单个测试或0.5ml/支至5.2ml/瓶的真空封口西林瓶装的多个测试。

使用时一般应加细菌内毒素检查用水复溶后使用。

厦门市鲎试剂实验厂有限公司的真空封口试管凝胶法鲎试剂是把鲎试剂直接灌装在试管中，在真空中压盖封口的新产品。

使用时直接用样品溶解鲎试剂，不会割伤手，更加简单方便安全。

特异性鲎试剂，即弃G因子鲎试剂，是厦门市鲎试剂实验厂有限公司国内首创的产品，它专一对内毒素起反应，避免了G因子旁路的干扰，使检测结果更加可靠，在药检和临床检验方面是不可或缺的理想检测试剂。

目前厦门市鲎试剂实验厂有限公司提供的各种内毒素检测鲎试剂均为特异性鲎试剂，都能对抗葡聚糖的干扰，只对内毒素起反应。

因此不列为独立品种。

动态浊度法鲎试剂、终点浊度法鲎试剂、动态显色法鲎试剂、终点显色法鲎试剂，这四种方法都是定量检测内毒素的。

这几种定量法鲎试剂统称光度法鲎试剂。

根据检测原理，终点浊度法和动态浊度法都属于浊度法。

浊度法系利用检测鲎试剂与内毒素反应过程中的浊度变化而测定内毒素含量的方法。

终点浊度法未见商品化产品。

动态浊度法（又称动态比浊法）是检测反应混合物的浊度上升某一预先设定的吸光度所需要的反应时间，或是检测浊度增加速度的方法。

动态浊度法的特点为：1. 能准确定量。

2.检测范围宽，可达4个数量级。

3.灵敏度高达0.005EU/ml。

4. 操作简便，系统自动检测分析，一步即成。

5. 经济实用，试剂样品需要量少，可降至50μL。

6. 和微生物检测系统Elx808（配套IU）及专用软件TALgent使用，一次可同时检测多达96个样品。

鲎试剂凝胶的原理-概述说明以及解释1.引言1.1 概述鲎试剂凝胶是一种常用的实验工具，用于生物学和生物化学领域的分离和分析。

它具有很高的分辨率和灵敏度，被广泛应用于DNA、RNA和蛋白质的电泳分离。

鲎试剂凝胶的原理是基于电泳的原理。

电泳是利用电场使带电粒子在溶液中移动的现象。

在鲎试剂凝胶中，电泳的基本原理是将分子沿着凝胶基质中的通道移动，根据分子的大小和电荷差异进行分离。

鲎试剂凝胶通常使用琼脂糖或聚丙烯酰胺等材料制备而成。

这些材料可以形成细小的孔隙结构，使得分子可以在凝胶中移动。

通过改变凝胶的浓度和孔隙大小，可以调节分子在凝胶中的运动速度和分离效果。

鲎试剂凝胶的制备方法有多种，常见的包括连续电泳法、间断电泳法和双向电泳法等。

其中，连续电泳法是最常用的方法，通过将凝胶浸泡在缓冲液中，使其与电源相连，利用电场将分子分离出来。

鲎试剂凝胶在实验中有许多优势，例如分离效果好、操作简单、成本低廉等。

然而，也存在一些局限性，比如分离速度较慢、无法分离高分子量的分子等。

总之，鲎试剂凝胶作为一种常用的实验工具，在生物科学研究中起着重要的作用。

它的原理简单明了，制备方法多样，可以满足不同实验需求。

未来，随着科学技术的不断发展，鲎试剂凝胶的分离效果和操作方便性可能会得到进一步改善，为生物学和生物化学领域的研究提供更加有效的工具。

1.2文章结构1.2 文章结构本文将分为三个主要部分进行讨论。

第一部分是引言，将概述鲎试剂凝胶的原理以及本文的目的。

在概述部分，将介绍鲎试剂凝胶的基本概念和应用范围，以便读者对其有一个初步的了解。

在文章目标部分，将明确本文的目的是解析鲎试剂凝胶的原理，以便读者能够更深入地理解该技术的工作原理和作用机制。

第二部分是正文，将重点探讨鲎试剂凝胶的制备方法和原理解析。

在鲎试剂的定义和应用范围部分，将详细介绍鲎试剂的定义、特点和广泛应用的领域，以展示其重要性和广泛性。

在鲎试剂凝胶的制备方法部分，将介绍不同的制备方法，包括材料选择、混合比例、反应条件等，以帮助读者了解制备过程。

USP这一章节的部分内容已与欧洲药典和日本药典协调一致，不一致的部分以符号*标出。

本章阐述了关于检查和定量供试品内毒素的方法。

本法利用鲎（Limuluspolyhemus或 Tachypleus tridentatus）血细胞提取物制备的用于内毒素检测的鲎试剂（LAL）检定内毒素。

*1该检查包括两种方法：一为凝胶法，系利用鲎试剂与内毒素产生凝集反应的原理；另一种为光度测定法，该法利用鲎试剂与内毒素反应过程中的光学变化来实现内毒素的测定，这种方法又可分为浊度法（基于形成凝胶的过程中，溶菌液的浊度变化）和显色法（得到的肽－呈色基团复合物断裂后，检测反应混合物的色度）。

检测时，可用其中任一种方法进行试验。

当测定结果可疑或有争议时，除非各论中另有规定，以凝胶法测定结果为准。

直接比较供试品溶液与标准内毒素溶液，判断凝胶法的反应终点。

内毒素含量以USP内毒素单位（USP-EU）表示。

[注-1USP EU相当于1个内毒素单位。

]LAL试剂专用于浊度检查法或显色法，因此，使用这两种方法进行检定时，必须符合它们各自的要求。

两种检查法都要求建立标准曲线，以检定供试品的内毒素含量。

主要的实验步骤有：在预定的时间内将内毒素和对照品分别与LAL试剂保温培养；读取相应波长处的吸光度等。

使用终点浊度法时，应在孵育时间结束时马上读数；对终点显色法，则要在孵育终止时添加酶反应-终止制剂，反应停止后，方可读数。

动态浊度法和动态显色法分析整个反应时间内吸光度的变化，并通过这些读数计算比值。

仪器所有玻璃器皿及由其他耐热材料制成的器皿需用已验证的工艺在热烘箱内进行去热原处理。

*2去热原时，常用的最小时间和温度设置分别为30分钟和250℃。

若使用塑料器械，如微孔板和微量进样器配套的吸头等，它们必须标明无内毒素并确对试验无干扰。

[注-本章内，“管”也包括任何其他反应容器，如微孔板的孔等。

]内毒素储备标准溶液和内毒素标准溶液的制备USP内毒素RS的效价规定为10000 USP内毒素单位（EU）/西林瓶。

凝胶法内毒素快速检测试剂盒 Pyrosate 操作流程
（仅供参考，使用时请参照试剂配套的使用说明）
试剂盒简介：
1974年成立的美国ACC 公司（Associates of Cape Cod, lnc.），是全球首家成立并通过FDA 关于内毒素检测LAL ————鲎试剂生产认证的企业，专业生产内毒素和β-葡聚糖检测产品。

现在ACC 已经成为拥有全球机构和经销网络的世界级组织。

领跑全球呢毒素检测领域。

Pyrosate Kit 作为目前世界上唯一的凝胶法内毒素快速检测试剂盒，是当今最先进最快速的凝胶法鲎试剂，在LAL 凝胶法检测中具有着其他方法无可替代的优点，它不需要专业培训或额外的实验仪器，只需按照说明书中的步骤操作，即可在短时间内（30）分钟得到准确结果，尤其适用于对水和无稀释渗透液的检测。

优势：
无需冷藏 无需稀释 有两个可用灵敏度。

（1.0EU/mL 和0.25EU/mL ） 符合阳性产物控制 检测时间短 对内毒素特异
Factor B Factor G
Clotting Enzyme
Factor C
Turbidimetric。

鲎试剂凝胶法流程及其步骤详细介绍，实验操作指南The agarose gel electrophoresis method is commonly used for the separation and analysis of DNA fragments. Here is a step-by-step procedure for the agarose gel electrophoresis using a Haematoxylin reagent:1. Prepare the gel: Mix agarose powder with a buffer solution, such as TAE or TBE, and heat it until the agarose is completely dissolved. Pour the mixture into a gel tray and insert a comb to create wells for sample loading. Allow the gel to solidify.2. Prepare the samples: Mix the DNA samples with a loading dye, which helps in visualization and tracking during electrophoresis. Heat the samples briefly to denature the DNA strands.3. Load the samples: Carefully load the DNA samples into the wells of the gel using a micropipette, taking care not to introduce air bubbles.4. Run the gel: Place the gel tray into an electrophoresis chamber filled with buffer solution. Connect the electrodes to the power supply and run the gel at a constant voltage. The DNA fragmentswill migrate through the gel matrix based on their size, with smaller fragments moving faster.5. Stain the gel: After electrophoresis, remove the gel from the tray and immerse it in a Haematoxylin reagent solution. Gently agitate the gel for staining and allow it to sit for a few minutes.6. Destain the gel: Transfer the stained gel to a destaining solution, such as distilled water or a destaining buffer, and gently agitate it to remove excess stain. This step helps in visualizing the DNA bands.7. Visualization: Place the gel on a UV transilluminator and observe the DNA bands under UV light. Photograph or document the gel for further analysis and interpretation.中文回答：琼脂糖凝胶电泳方法是常用于DNA片段的分离和分析的技术。

细菌内毒素试验（鲎试验）要点及控制方法一般细菌毒素可分为两类，一类为外毒素(Exotoxin)；它是一种毒性蛋白质，是细菌在生长过程中分泌到菌体外的毒性物质。

产生外毒素的细菌主要是革兰氏阳性菌。

如白喉杆菌、破伤风杆菌、肉毒杆菌、金黄色葡萄球菌以及少数革兰氏阴性菌。

另一类为内毒素(Endotoxin)，是革兰氏阴性菌的细胞壁的产物。

细菌在生活状态时不释放出来，只有当细菌死亡自溶或粘附在其它细胞时，才表现其毒性，内毒素的主要化学成分是脂多糖中的类脂A 成分。

和热原的关系热原(pyrogen)系指能引起恒温动物体温异常升高的致热物质。

它包括细菌性热原、内源性高分子热原、内源性低分子热原及化学热原等。

热原是否就是内毒素？细菌内毒素是热原的一种，即细菌性热原。

细菌内毒素被认为是热原的本质，此事在学术上仍有争议，热原不仅是细菌内毒素。

但在药检的范畴，细菌内毒素是主要的热原物质，可以说无内毒素就无热原，控制内毒素就是控制热原。

热原反应：含有热原的注射剂注入人体可引起发热反应，使人体产生发冷、寒战、体温升高、出汗、恶心、呕吐等症状，有时体温可升至40℃，严重者甚至昏迷、虚脱，如不及时抢救，可危及生命。

来源和控制方法1、细菌内毒素的特性2、去除细菌内毒素的方法(1)吸附法此法是利用活性炭对热原的吸附作用达到去除作用的方法。

常用的吸附剂中，活性炭对热原的吸附作用最强，一般用量为总容量的0.1%-0.5% ，将溶液加热到70℃左右保温一定时间效果更好。

使用的活性炭应符合药典规定要求。

(2)蒸馏法此法是利用热原具有不挥发性而达到去除目的。

因此，凡适于蒸馏的药品均可用蒸馏法除去热原。

(3)热破坏法此法是利用热高温能破坏热原质达到去除目的。

因此，凡适用于高温处理的如热原检查试验中接触药液的容器，可用180℃干烤3小时，或250℃干烤30min以上。

(4)强酸强碱处理法此法利用强酸强碱能破坏热原而达到去除的目的。

(5)其他，也可以采用过滤等方法去除热原。