鲎试剂

鲎试剂凝胶的原理-概述说明以及解释1.引言1.1 概述鲎试剂凝胶是一种常用的实验工具，用于生物学和生物化学领域的分离和分析。

它具有很高的分辨率和灵敏度，被广泛应用于DNA、RNA和蛋白质的电泳分离。

鲎试剂凝胶的原理是基于电泳的原理。

电泳是利用电场使带电粒子在溶液中移动的现象。

在鲎试剂凝胶中，电泳的基本原理是将分子沿着凝胶基质中的通道移动，根据分子的大小和电荷差异进行分离。

鲎试剂凝胶通常使用琼脂糖或聚丙烯酰胺等材料制备而成。

这些材料可以形成细小的孔隙结构，使得分子可以在凝胶中移动。

通过改变凝胶的浓度和孔隙大小，可以调节分子在凝胶中的运动速度和分离效果。

鲎试剂凝胶的制备方法有多种，常见的包括连续电泳法、间断电泳法和双向电泳法等。

其中，连续电泳法是最常用的方法，通过将凝胶浸泡在缓冲液中，使其与电源相连，利用电场将分子分离出来。

鲎试剂凝胶在实验中有许多优势，例如分离效果好、操作简单、成本低廉等。

然而，也存在一些局限性，比如分离速度较慢、无法分离高分子量的分子等。

总之，鲎试剂凝胶作为一种常用的实验工具，在生物科学研究中起着重要的作用。

它的原理简单明了，制备方法多样，可以满足不同实验需求。

未来，随着科学技术的不断发展，鲎试剂凝胶的分离效果和操作方便性可能会得到进一步改善，为生物学和生物化学领域的研究提供更加有效的工具。

1.2文章结构1.2 文章结构本文将分为三个主要部分进行讨论。

第一部分是引言，将概述鲎试剂凝胶的原理以及本文的目的。

在概述部分，将介绍鲎试剂凝胶的基本概念和应用范围，以便读者对其有一个初步的了解。

在文章目标部分，将明确本文的目的是解析鲎试剂凝胶的原理，以便读者能够更深入地理解该技术的工作原理和作用机制。

第二部分是正文，将重点探讨鲎试剂凝胶的制备方法和原理解析。

在鲎试剂的定义和应用范围部分，将详细介绍鲎试剂的定义、特点和广泛应用的领域，以展示其重要性和广泛性。

在鲎试剂凝胶的制备方法部分，将介绍不同的制备方法，包括材料选择、混合比例、反应条件等，以帮助读者了解制备过程。

鲎试剂灵敏度复核试验
一.试验目的
当使用新批号的鲎试剂或试验条件发生了任何可能影响检验结果的改变时，应进行鲎试剂灵敏度复核试验。

二.试验步骤
1.根据鲎试剂灵敏度的标示值（λ）,将细菌内毒素工作标准品用细菌内毒素检查用水溶解，在旋涡混合器上混匀15分钟, 然后制成2λ、1λ、0.5λ和0.25λ四个浓度的内毒素标准溶液，每稀释一步均应在旋涡混合器上混匀30秒钟。

2.取复溶后的0.1ml/支规格的鲎试剂原安瓿18支，其中16管分别加入0.1ml不同浓度的内毒素标准溶液，每一个内毒素浓度平行做4管；另外2管各加入0.1ml细菌内毒素检查用水作为阴性对照。

3.将试管中溶液轻轻混匀后，封闭管口，垂直放入37℃±1℃的适宜恒温器中，保温60分钟±2分钟。

三.结果分析
1.将试管从恒温器中轻轻取出，缓缓倒转180°时，若管内形成凝胶，且不从管壁滑脱者为阳性；若不形成凝胶，或形成凝胶但倒转180°后从管壁滑脱者为阴性。

2.若最大浓度2.0λ管均为阳性，最低浓度0.25λ管均为阴性，阴性对照管为阴性，试验方为有效。

计算反应终点浓度的几何平均值，即为鲎试剂灵敏度的测定值（λc），计算方法见中国药典。

3.反应终点浓度是指系列递减的内毒素浓度中最后一个呈阳性
结果的浓度。

4.当λc在0.5λ～2.0λ（包括0.5λ和2.0λ）时，方可用于细菌内毒素检查，并以标示灵敏度λ为该批鲎试剂的灵敏度。

四.注意事项
1.保温和拿取试管过程应避免受到振动造成假阴性结果。

2.安瓿开启前应先用砂石划痕(不管是色点或包环易折安瓿)，用手半拉半掰将颈部折断，千万不能用镊子敲击，防止碎玻屑掉入安瓿。

[精华]鲎试剂试验方法鲎试剂实验方法鲎试剂按实验方法可分为:凝胶法、动态浊度法鲎试剂、终点浊度法鲎试剂、动态显色法鲎试剂、终点显色法鲎试剂。

凝胶法系通过鲎试剂与内毒素产生凝集反应的原理来定性检测或半定量内毒素的方法。

凝胶法是通过观察有无凝胶形成作为反应的终点。

此法操作比较简单，经济，不需要专用测定设备，可以进行定性或半定量测定。

凝胶法鲎试剂常见规格为0.1ml/支或0.2ml/支的单个测试或0.5ml/支至5.2ml/瓶的真空封口西林瓶装的多个测试。

使用时一般应加细菌内毒素检查用水复溶后使用。

厦门市鲎试剂实验厂有限公司的真空封口试管凝胶法鲎试剂是把鲎试剂直接灌装在试管中，在真空中压盖封口的新产品。

使用时直接用样品溶解鲎试剂，不会割伤手，更加简单方便安全。

特异性鲎试剂，即弃G因子鲎试剂，是厦门市鲎试剂实验厂有限公司国内首创的产品，它专一对内毒素起反应，避免了G因子旁路的干扰，使检测结果更加可靠，在药检和临床检验方面是不可或缺的理想检测试剂。

目前厦门市鲎试剂实验厂有限公司提供的各种内毒素检测鲎试剂均为特异性鲎试剂，都能对抗葡聚糖的干扰，只对内毒素起反应。

因此不列为独立品种。

动态浊度法鲎试剂、终点浊度法鲎试剂、动态显色法鲎试剂、终点显色法鲎试剂，这四种方法都是定量检测内毒素的。

这几种定量法鲎试剂统称光度法鲎试剂。

根据检测原理，终点浊度法和动态浊度法都属于浊度法。

浊度法系利用检测鲎试剂与内毒素反应过程中的浊度变化而测定内毒素含量的方法。

终点浊度法未见商品化产品。

动态浊度法(又称动态比浊法)是检测反应混合物的浊度上升某一预先设定的吸光度所需要的反应时间，或是检测浊度增加速度的方法。

动态浊度法的特点为:1. 能准确定量。

2.检测范围宽，可达4个数量级。

3.灵敏度高达0.005EU/ml。

4. 操作简便，系统自动检测分析，一步即成。

5. 经济实用，试剂样品需要量少，可降至50μL。

6. 和微生物检测系统Elx808(配套IU)及专用软件TALgent使用，一次可同时检测多达96个样品。

鲎试剂摘要：本文档介绍了鲎试剂的基本概念、用途、制备方法、相关研究进展及其在生物医学领域的应用。

鲎试剂是一种重要的化学试剂，因其在生物医学研究中的广泛应用而备受关注。

在本文中，我们将详细探讨鲎试剂的制备方法和相关合成技术，并介绍其在生物医学研究中的应用前景。

1. 引言鲎试剂是一类重要的化学试剂，广泛应用于生物医学研究领域。

鲎是一种海洋生物，其体内含有丰富的活性物质，具有抗肿瘤、抗炎、抗菌等多种生物活性，因此被广泛应用于药物研发和生物医学研究中。

2. 鲎试剂的制备方法2.1. 鲎采集与提取鲎是一种海洋底栖无脊椎动物，生长在海洋深处，常见于大洋的中、深层海域。

采集鲎主要有两种方法，一种是利用潜水艇、潜水器等工具直接采集；另一种是利用钓网、拖网等渔具进行捕捞。

采集到的鲎需要迅速进行冷冻保存，以保持其生物活性。

提取鲎试剂主要有两种方法，一种是通过高温高压提取，将鲎样品加入适量的溶剂中，在高温高压的条件下进行提取。

另一种是通过酸碱提取，将鲎样品进行酸碱处理，使其中的目标物质转化为带电离子，再通过溶剂分离。

2.2. 鲎试剂的纯化与分离提取得到的鲎试剂需要进行纯化和分离，以获得纯度较高的鲎试剂。

常用的纯化和分离方法包括反渗透、离心分离、柱层析等。

这些方法可以有效地去除杂质，提高鲎试剂的纯度。

2.3. 鲎试剂的结构鉴定经过纯化和分离后的鲎试剂需要进行结构鉴定，以确定其化学成分和结构。

常用的结构鉴定方法包括质谱分析、核磁共振等。

这些方法可以帮助研究者了解鲎试剂的化学性质，并为进一步研究和应用提供依据。

3. 鲎试剂的应用前景3.1. 鲎试剂在药物研发中的应用由于鲎试剂具有多种生物活性，因此被广泛用于药物研发领域。

鲎试剂可以作为药物候选物，通过对其进行结构优化和改造，开发出具有较高药效的新药。

同时，鲎试剂也可以作为药物控释系统的载体，实现药物的控制释放。

3.2. 鲎试剂在生物医学研究中的应用鲎试剂在生物医学研究中有着广泛的应用。

动态显色法内毒素检测鲎试剂盒使用说明书：T7570：48T/盒1.7ml：阴凉处，最佳2-8ºC ，避光保存。

鲎试剂为鲎科动物东方鲎的血液变形细胞溶解物的冷冻干燥品, 鲎试剂中含有Ｃ因子、Ｂ因子、凝固酶原、凝固蛋白原等。

在适宜的条件下(温度，pH 值及无干扰物质），细菌内毒素激活C 因子，引起一系列酶促反应，激活凝固酶原形成凝固酶，凝固酶分解人工合成的显色基质，使其分解为多肽和黄色的对硝基苯胺（pNA ，λmax=405）。

反应液的吸光度(OD 值)增加, OD 值增加的速度与内毒素浓度成正相关。

换言之，OD 值上升某一预设限值(启动OD)所需要的时间(定义为启动时间)与内毒素浓度成负相关，启动时间的对数与内毒素浓度的对数成线性关系，据此，可以定量供试品的内毒素浓度。

内毒素工作标准品、鲎试剂、显色基质、细菌内毒素检查用水、除热原试管、除热原吸头、除热原96孔微板（或可拆式板条）、旋涡混合器、移液器、试管架、带温育系统的动态光度测定仪器及配套软件，例如，微板鲎试仪ELx808及软件TALgent 或Gen5。

① 该试剂盒用于体外细菌内毒素的定量检测，严禁试剂以任何途径进入机体。

② 接触试剂及供试品的所有器皿必须是除热原的。

试验过程应防止微生物的污染。

该说明书中的除热原指内毒素浓度小于0.005 EU/ml 。

③ 供试品的pH 值应在6.0 – 8.0之间，若超出此范围，需用除热原的缓冲液、0.1M 氢氧化钠或0.1M 盐酸调节。

④ 当供试品中可能存在鲎试验的干扰物质时，须进行干扰试验，参见【供试品的干扰试验】。

1、动态光度测定仪器的设定，以鲎试验微生物快速检测系统ELx808IU 为例：预热仪器，设置温育温度为37ºC 。

设置模板及程序。

设定读板波长为405nm ，设定动力学参数：读板120分钟， 每30秒读一次。

2、内毒素标准溶液配制（浓度10，1，0.1，0.01EU/ml ）2.1、取内毒素工作标准品1支，用砂轮沿安瓿颈部划痕，开启，加入适量（建议在0.5 ml - 1.2ml 之间）细菌内毒素检查用水，置旋涡混合器上剧烈振摇5分钟。

1目的建立细菌内毒素预试验操作规程，以指导检验人员的正确规范操作，为保证细菌内毒素检查凝胶法的准确性提供依据。

2适用范围适用于细菌内毒素检查法的“鲎试剂灵敏度复核试验”和“干扰试验”。

本规程参照《中国药典》2020年版四部-1143细菌内毒素检查法制定。

3职责进行细菌内毒素检查的操作人员严格按本规程进行操作。

4内容4.1基本原理4.1.1本法采用凝胶法，系通过鲎试剂与内毒素产生凝集反应的原理进行限度检测或半定量检测内毒素的方法。

4.1.2鲎试剂灵敏度复核试验：当使用新批号的鲎试剂或试验条件发生了任何可能影响检验结果的改变时，应进行鲎试剂灵敏度复核试验。

4.1.3干扰试验：当进行新药的内毒素检查试验前，或无内毒素检查项目的品种建立内毒素检查法时，须进行干扰试验；当鲎试剂、供试品的处方、生产工艺改变或试验环境中发生了任何有可能影响试验结果的变化时，须重新进行干扰试验。

4.1.4本试验操作过程应防止内毒素的污染。

4.1.5EU：内毒素单位，1EU与1个内毒素国际单位（IU）相当。

4.1.6λ：鲎试剂的标示灵敏度，单位：EU/ml。

4.1.7MVD：最大有效稀释倍数，指在试验中供试品溶液被允许达到稀释的最大倍数。

4.2材料准备4.2.1细菌内毒素工作标准品：应经细菌内毒素国家标准品为基准标定效价；4.2.2鲎试剂：当使用新批号前，按《细菌内毒素预试验SOP》进行灵敏度检查；4.2.3细菌内毒素检查用水（BET水）：内毒素含量应＜0.015EU/ml，且对内毒素试验无干扰作用；4.2.4供试品溶液：pH宜在6.0~8.0范围内，否则用已去除内毒素和干扰因子的酸、碱溶液或缓冲液调节。

4.3器具准备4.3.1移液枪、一次性除热源枪头（1000μL、200μL）；4.3.2剪刀、砂轮片、试管架、除热源试管、医用胶布；4.3.3恒温培养箱（37℃±1℃）、旋涡混合器、洁净工作台。

4.4鲎试剂灵敏度复核试验4.4.1试验过程：4.4.1.1根据当批鲎试剂的标示灵敏度（λ），把细菌内毒素工作标准品用适量BET水充分溶解，避免产生气泡，在旋涡混合器上混匀15分钟。

鲎试剂百科名片鲎试剂鲎试剂是由海洋生物鲎的血液变形细胞溶解物制成的无菌冷冻干燥品，含有能被微量细菌内毒素和真菌葡聚糖激活的凝固酶原，凝固蛋白原，能够准确、快速地定性或定量检测样品中是否含有细菌内毒素和（1,3）-β-葡聚糖激。

目前，鲎试剂广泛用于制药、临床以及科研等领域，用于细菌内毒素和真菌葡聚糖检测。

目前使用的鲎试剂分为美洲鲎试剂和东方鲎鲎试剂两大类。

目录简介试剂分类实验方法正确使用编辑本段简介鲎的血液中含有铜离子，它的血液是蓝色的。

这种蓝色血液的提取物——“鲎试剂”，可以准确、快速地检测人体内部组织是否因细菌感染而致病；在制药和食品工业中，可用它对毒素污染进行监测。

此外，鲎的肉、卵均可食用。

鲎试剂是从栖生于海洋的节肢动物“鲎”的蓝色血液中提取变形细胞溶解物，经低温冷冻干燥而成的生物试剂，专用于细菌内毒素检测和真菌（1,3)-β-D-葡聚糖检测。

鲎试验法是国际上至今为止检测内毒素最好的方法，它简单﹑快速﹑灵敏﹑准确，因而被欧美药典及我国药典定为法定内毒素检查法，并已被世界各国所采用。

目前能生产鲎试剂的主要有美国、日本、中国等国家。

中国国内现在生产鲎试剂的厂家有福州新北生化工业有限公司，厦门市鲎试剂实验厂有限公司,湛江安度斯生物有限公司及湛江博康海洋生物公司等。

编辑本段试剂分类按原料来源分一种是由美洲鲎血液提取的称美洲鲎试剂(Limulus Amebocyte Lysate)，缩写为LAL，由美国生产;另一种是由东方鲎血液中提取的称东方鲎鲎试剂(Tachypleus Amebocyte Lysate)，缩写为TAL。

TAL 与LAL有相同的功效。

按实验方法分细菌内毒素检查法包括两种方法，即凝胶法和光度测定法，后者又包括浊度法和显色基质法。

则鲎试剂可分为：凝胶法鲎试剂、动态浊度法鲎试剂、终点浊度法鲎试剂、动态显色法鲎试剂和终点显色法鲎试剂。

凝胶法鲎试剂通过与内毒素产生凝集反应的原理来定性检测或半定量内毒素的方法。

USP这一章节的部分内容已与欧洲药典和日本药典协调一致，不一致的部分以符号*标出。

本章阐述了关于检查和定量供试品内毒素的方法。

本法利用鲎（Limuluspolyhemus或 Tachypleus tridentatus）血细胞提取物制备的用于内毒素检测的鲎试剂（LAL）检定内毒素。

*1该检查包括两种方法：一为凝胶法，系利用鲎试剂与内毒素产生凝集反应的原理；另一种为光度测定法，该法利用鲎试剂与内毒素反应过程中的光学变化来实现内毒素的测定，这种方法又可分为浊度法（基于形成凝胶的过程中，溶菌液的浊度变化）和显色法（得到的肽－呈色基团复合物断裂后，检测反应混合物的色度）。

检测时，可用其中任一种方法进行试验。

当测定结果可疑或有争议时，除非各论中另有规定，以凝胶法测定结果为准。

直接比较供试品溶液与标准内毒素溶液，判断凝胶法的反应终点。

内毒素含量以USP内毒素单位（USP-EU）表示。

[注-1USP EU相当于1个内毒素单位。

]LAL试剂专用于浊度检查法或显色法，因此，使用这两种方法进行检定时，必须符合它们各自的要求。

两种检查法都要求建立标准曲线，以检定供试品的内毒素含量。

主要的实验步骤有：在预定的时间内将内毒素和对照品分别与LAL试剂保温培养；读取相应波长处的吸光度等。

使用终点浊度法时，应在孵育时间结束时马上读数；对终点显色法，则要在孵育终止时添加酶反应-终止制剂，反应停止后，方可读数。

动态浊度法和动态显色法分析整个反应时间内吸光度的变化，并通过这些读数计算比值。

仪器所有玻璃器皿及由其他耐热材料制成的器皿需用已验证的工艺在热烘箱内进行去热原处理。

*2去热原时，常用的最小时间和温度设置分别为30分钟和250℃。

若使用塑料器械，如微孔板和微量进样器配套的吸头等，它们必须标明无内毒素并确对试验无干扰。

[注-本章内，“管”也包括任何其他反应容器，如微孔板的孔等。

]内毒素储备标准溶液和内毒素标准溶液的制备USP内毒素RS的效价规定为10000 USP内毒素单位（EU）/西林瓶。