疟原虫镜检血片制作与染色操作流程
1．填写登记表 在“疟疾发热病人血检登记本”上为患者编号并登记其相关信息。
2．清洁玻片
3．玻片编号 用目测法将玻片分成六等分，左侧第一和等二等份用于编号。同一患者玻片上号码应与登记本上一致。
4．采血
5．涂制厚厚片
（1） 血量: 4～5微升
（2） 位置：玻片第三等份中央的位置
（3） 血膜大小：0.8～1.0厘米
6．涂制薄血膜
（1） 血量: 1～1.5微升
（2） 位置：玻片第四至第六等份的位置。涂制薄血膜的血应滴在玻片中央稍偏右的位置
（3） 血膜大小：2.0厘米(宽)×2.5厘米(长)
7．吉氏染色液配制
（1）2%的吉氏染色液配制方法 98毫升蒸馏水加入2毫升吉氏原液，混匀后即为2%的吉氏染色液。也可用1支试管，按1毫升蒸馏水加入1滴吉氏原液的比例稀释染液，混匀后用于染色。
（2） 注意事项 2%的吉氏染色液必须现配现用。
8．吉氏染色方法
（1） 待厚血膜干燥
（2） 甲醇固定薄血膜
（3） 待甲醇挥发干净
（4） 滴2%的吉氏染液覆盖厚薄血膜，染色30分钟。
（5） 取出染好的血片，连同染液在清水中轻轻漂洗一遍，洗去表面吸附的杂质。
（6）放置干燥处晾干。血膜面朝上，注意不要放反了。
附表6
疟原虫血片制作、染色和清洁度评分标准细则表
项目 检查内容 质量标准
好 分值 中 分值 差 分值
血片制作 厚血膜（40分） 血量（10分） 4～5цl 10 略多或略少 7 过多或过少 5
位置（10分） 玻片右1/3 10 稍偏右 7 偏右过多 5
直径（10分） 0.8～1.0cm 10 0.7～0.8 或1.0～1.2cm 8 <0.7或>1.2cm 5
外观（10分） 圆形均匀，边缘整齐 10 圆形稍不均不整齐 8 厚薄不匀影响着色 5
薄血膜（40分） 血量（10分） 1～1.5цl 10 略多或略少 7 过多或过少 5
位置（10分） 玻片1/2～1/3处 10 稍偏右或偏左 7 偏右或偏左过多 5
直径（10分） 2.5～2.0cm 10 稍大或稍小 8 过多或过少 5
外观（10分） 舌状厚薄均匀 10 舌状稍不均 8 厚薄不匀呈波浪型 5
血片染色质量
（10分） 外观（10分） 蓝紫色 10 厚血膜半脱落 5 厚血膜全脱落 2
血片清洁度
（10分） 外观（10分） 光洁无油灰 10 稍有油污 5 油灰粘连 2
合计 100分
一、实验目的
1. 掌握疟原虫涂片制作的方法。
2. 熟悉疟原虫形态学特征，学会识别疟原虫种类。
3. 了解疟疾的实验室诊断方法。
二、实验原理
疟疾是由疟原虫引起的一种严重传染病，主要通过按蚊叮咬传播。疟原虫在人体内寄生，经过多个发育阶段，最终在红细胞内繁殖。血涂片检查是诊断疟疾的重要方法之一，通过显微镜观察血涂片中的疟原虫形态，可以确定疟原虫的种类，为临床诊断和治疗提供依据。
三、实验材料
1. 试剂：抗凝剂EDTA-Na2/K2、吉姆萨染液、蒸馏水。
2. 仪器：显微镜、载玻片、盖玻片、移液器、酒精灯、吸管等。
3. 样本：疑似疟疾患者的血液样本。
四、实验步骤
1. 采集血液样本：使用EDTA-Na2/K2抗凝管采集患者外周静脉血2-5mL。
2. 制作血涂片：
a. 将血液样本滴在载玻片中央，形成直径约1cm的圆形。
b. 用另一张载玻片边缘轻刮血液，制成薄而均匀的血膜。
c. 待血膜干燥后，用盖玻片覆盖。
3. 染色：
a. 将载玻片放入吉姆萨染液中，浸泡5-10分钟。
b. 用蒸馏水冲洗载玻片，去除多余染液。
c. 待载玻片干燥后，用显微镜观察。
4. 观察与鉴定： a. 使用低倍镜观察血涂片，寻找疟原虫。
b. 使用高倍镜观察疟原虫的形态学特征，如细胞核、滋养体、裂殖体等。
c. 根据疟原虫的形态学特征，确定疟原虫的种类。
五、实验结果
1. 在血涂片中观察到疟原虫，经鉴定为恶性疟原虫。
2. 疟原虫的形态学特征如下：
a. 细胞核呈红色，圆形或椭圆形。
b. 滋养体呈圆形或椭圆形，大小约为10-15μm。
c. 裂殖体呈椭圆形，大小约为20-30μm。
六、实验讨论
1. 本实验成功制作了疟原虫血涂片，并成功鉴定出恶性疟原虫，验证了实验原理和步骤的正确性。
2. 在实验过程中，需要注意以下几点：
血疟原虫检查标准操作程序
1 检验目的
应用瑞氏-吉姆萨染色法对制备好的血片进行染色后在显微镜下观察，判断是否感染疟原虫。
2 检测原理
瑞氏染料由酸性染料伊红和碱性染料亚甲蓝组成。将适量伊红、美蓝溶解在甲醇中，即为瑞氏染料。瑞氏染色既有物理的吸附作用，又有化学的亲和作用。各种细胞成分化学性质不同，对各种染料的亲和力也不一样。核与酸性染料伊红结合,染成粉红色；胞质与碱性染料美蓝或天青结合，染蓝色;胞质中含有血红蛋日白消化分解后的产物-疟色素,疟色素不着色，为棕黄色或棕褐色。
3 性能特征
无
4 标本要求（包括病人准备、容器、样本类型等)
4.1 病人准备:间日疟及三日患者应在发作后数小时至10余小时采血，此时，早期滋养体已发育成易于鉴别形态的晚期滋养体；恶性疟患者，应在发作后20小时左右采血。
4.2 标本类型:静脉全血
4.3 标本容器: EDTA-K2抗凝管
4.4 标本存放:
4.4.1未检测标本的存放:放在工作台标本架。
4.4.2已拉测标本的存放:检毕标本排列于样本架,置检毕标本台，由卫生员统一转入2-8℃标本冷藏库保存7天，血片用乙酸乙酯脱油保存于存片盒。
4.5 标本运输:室温条件下运输。
4.6 标本拒收标准:参照《用户手册》
4.7 检测时限: 1小时。
5 仪器和试剂
5.1 试剂名称:瑞姬氏染色液
5.1.1瑞姬氏染色液:瑞氏染料0.5g、姬氏染料0.5g，加入500ml甲醇中，混匀溶解后备用。 5.1.2pH6.5磷酸盐缓沖液:磷酸二氢钾0.3g、 磷酸氢二钠0.2g,加入100ml蒸馏水中溶解。
5.2 试剂来源:珠海贝索。
5.3 仪器:普通光学显微镜。
6 环境和安全:
6.1 检测环境:应符合《显微镜标准操作程序》相关要求。
6.2 设备的安全操作:详见《显微镜标准操作程序》。
6.3 生物安全:
6.3.1血液标本的运送必须保证运送过程中的生物安全，防止溢出。血液标本溢出后，应该立即对污染的环境和设备进行消毒处理。
