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最新415疟原虫血片制作染色

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疟原虫的制片技术

疟原虫的制片技术

位 置： 玻片左半部分或第4格前缘到第6格中部。 外 观： 舌状，厚薄均匀，无划痕。在玻片上形成
平铺的红细胞，红细胞之间互相接触而不相互重叠。
注 意： 推制时速度要均匀。血滴大小、推片与载
玻片之间夹角大小及展开血膜的速度快慢等会影响血 膜的厚薄。
正确的推片姿势
标准的疟原虫血片
制片注意事项
疟大滋养体和裂殖体。
注 意：（1）用抗疟药之前取血（用药后镜检结果
往往是阴性）；（2）取血后应尽快制片（血细胞和 疟原虫的形态保存完好）。
血膜的种类
用于检查疟原虫的血膜用两种： 一种是将血液涂成薄膜状，称为薄血膜； 一种是将血液涂成圆盘状，称为厚血膜。
要求：一张玻片上同时制作厚、薄两种血膜！！
血膜的位置
管等
记号笔：写标签 水、纸巾：用于清洗、拭干推片
样本要求
末梢全血：指尖、耳垂末梢全血，婴幼儿可取拇趾
或足跟部全血。现场取血现场制片。
静脉全血：采用抗凝管采血。最好取血后立即制片，
如果血液放置时间过长会影响镜下形态。冷冻后的血 液不能用于制片。
骨 髓：临床上可用于确诊恶性疟感染，可查到恶性
影响染色效果的因素
血片染色好坏除与玻片清洁度、血片制作质量和染色 技术等有关外，还受到以下因素的影响： （1）染液稀释后使用）血片制作 （二）染 色
容
所需设备
载玻片：清洁无油污，以免血膜受污染或脱落 推 片：边缘光滑，用完后及时清洗，以免影响下次使
用
微量采血吸管：20ul，取血时可供参考 胶 头：与微量采血吸管配套，注意不要吸进血液 取血所用的设备：75%酒精棉球、一次性采血针、抗凝
注 意：（1）固定薄血膜时甲醇一定不要碰到

疟原虫血片制作及染色

疟原虫血片制作及染色

血膜制作（取血时间）
取血时机 现症病人一般可随时取血，疟疾普 查时可不考虑取血时机。但在诊断或需要某期 疟原虫作标本时，则应掌握适宜的取血时机。
血膜制作（取血时间）
间日疟
前驱期相当于肝内期疟原虫发育，因原虫密度太低， 镜检多为阴性。
发冷（寒战）期相当于红内期成熟裂殖体涨破 红细 胞期，镜检多为裂殖体和环状体。
血膜制作（涂片操作）
厚血膜 用推片的一角，从取血部位刮取约4-
5微升血量（相当于火柴头大小），使血滴与 平置的载玻片接触，再由里向外一个方向旋转 ，转2~4圈，再回到圆心收起，涂成直径 0.8~1cm大小圆形厚血膜。水平放置，务必使 血膜厚薄均匀，过厚易于脱落，过薄达不到检 出率的要求。
血膜制作（涂片操作）
标本片
疟疾调查时，每张玻片
可涂制2~3人血膜。
发热病人血片
厚、薄血膜的位置
每张载玻片上可做1个薄血膜和1个厚血膜，如图
2.5cm
各种不同的疟疾血片涂制法：
标准血片
门诊发热病人血片 居民普查血片
血膜制作（涂片操作）
血膜编号 血膜制成后，立即用特种蜡笔或 水笔于玻片面上写上受检者的号码，以防 差错，待薄血膜干后再用铅笔于薄血膜中 写上血片种类的代号和受检者的个人编号， 依次顺序插入标本盒内。
将推玻片向1的方向稍抽回，当血液充满推 玻片适当宽度（约2cm）后，以一定均匀的 速度向2的方向滑动（约2.5cm）。
血涂片质量评价：Βιβλιοθήκη 血膜均匀、厚薄度合适、无空泡、无划痕 薄血膜头体尾位置和形状好、无停顿起伏、
两侧留出空间
注意：血滴大，速度快、角度大 血膜厚
血滴小，速度慢、角度小 血膜薄
薄血膜
取洁净的载玻片2张，1张以左手拇指，食指夹持 载玻片两端（手指切勿接触玻片表面），用另1张 边缘平滑（最好为磨口边缘）的载玻片做推片， 用推片一端边缘的中点从取血部分取约1微升的血 量（相当于1/4火柴头大小），使血滴与平置的载 玻片接触，并形成25~30度夹角，待血液向两侧 扩展约2cm长度时，均匀而迅速地轻轻向左推出 （约2.5cm长）。

疟原虫的镜检技术-制片染色

疟原虫的镜检技术-制片染色

注意：蛋白质和氨基酸都是两性电解质，要求染 液的pH值7.0-7.2较好。 染液偏酸时，所带的正电荷增加，易于伊红结合， 使红细胞和疟原虫的核染成鲜红色，而淋巴细胞 和原虫的胞浆着色较差；反之，当染液偏碱时， 红细胞和嗜伊红白细胞的颗粒等被染成紫蓝色， 不易观察。
姬氏染液的染色方法
血片干燥后,先用甲醇或无水酒精固定薄血膜（瑞氏不需固定）, 再用清水对厚血膜溶脱血红蛋白(新制作的也可直接染色)，然后 再进行染色。 成批血片染色：将已用甲醇固定薄血膜的血片插入染色缸，倒入 3%姬氏染液稀释液（3毫升姬氏原液加缓冲液或蒸馏水97毫升， 混匀）浸没血片，同时对厚薄血膜染色30-40min（根据当地实际 情况，酌情增减染色时间），然后用清水轻轻将染液漂洗干净， 将血片标本（血膜面朝下）插于晾干板上晾干，包装，镜检。 单张血片染色：将处理好的血膜，加姬氏母液2-3滴，加缓冲液 或蒸馏水1ml，混合均匀，染色15-20分钟左右，然后用清水轻轻 将片上的染液冲洗干净，晾干镜检。（勿直接倾倒掉玻片上的染 液，防止渣滓附着在玻片上冲不掉影响镜检） 较理想的染色结果是红细胞为淡红或淡紫红色，疟原虫的胞质呈 蓝色，核为紫红色，疟色素为棕褐色。
染液的种类
疟原虫的染色，目前临床上应用最广泛的是瑞氏 （Wright stain）和姬氏染液（Giemsa stain）。 这些染液中的主要染剂都包含美蓝、伊红和由美 蓝氧化所成的天青，所以称多色性染剂。 我们主要用姬氏染液，它具有方便，染色效果稳 定，便于长期保存的优点。瑞氏染色，染色时间 短，但染色效果不如姬氏稳定，主要在门诊量大 的门诊实验室使用。
染液的染色原理
是染料与被染物的阴阳离子互相吸附而结合的一 种化学反应。 红、白细胞和疟原虫所含蛋白质的氨基酸电离出 的阴阳离子与酸碱染料伊红、美蓝有色集团所带 的阴阳离子相互结合便被染上不同的颜色。 疟原虫和白细胞的胞浆被染成蓝色，红细胞、疟 原虫和白细胞核被染成紫红色。

415疟原虫血片制作染色-32页精选文档

415疟原虫血片制作染色-32页精选文档

2020/4/27
10
制作血膜的注意事项
2. 刚涂制的血膜要平放在标本盒内或者 实验台面上。厚血膜未干前勿使标本片倾 斜，以免未干的血膜倾向一侧，造成血膜 厚薄不均，厚处不易溶血和着色而影响检 查结果；晾干血膜时应注意防尘、防止苍 蝇、蟑螂等昆虫吮吸血膜，干后应及时装 入标本盒内。新木制标本盒需敞开放置一 段时间，让木醇挥发后才能使用，以免厚 血膜血红蛋白被其固定，不能溶血或染色 效果不佳。
血片的染色 （一）染液的种类及染色原理
染色原理：伊红是酸性水溶性钠盐，美兰是碱性 水溶性盐酸盐，当它们各自溶化水中时，就离 解为带阳电和阴电的离子。伊红主要离解为酸 性的阳离子，在遇到碱性的蛋白质如血红蛋白、 嗜伊红白血球颗粒等即可结合成不易溶于水的 沉淀物染成红色。美兰主要离解为碱性的美兰 离子，美兰就与疟原虫、淋巴和大单核细胞的 胞浆、嗜碱性白细胞的颗粒等酸性蛋白质结合 染成兰色。
2020/4/27
12
血片的染色
（一）染液的种类及染色原理
染液种类：目前所用的血片染色液，虽然名称 很多，但都是从罗门诺夫斯基氏创造的染液 变化过来的。总的可分为水溶液和酒精溶液 两大类，前者包括罗氏、西氏（Simon)、 J.S.B氏染液等，后者包括利氏 (Leishman)、瑞氏和吉氏染液（被国家推 荐使用）等。这些染液中的主要染剂都包含 美兰、伊红和由美兰氧化所成的天青，所以 称为多色性染剂。
血片制作所需设备
载玻片 具有磨砂面，且规格是玻片宽度乘长度在 25.2*75.2mm，厚度1mm~1.2mm为好。
推玻片 有专用的。但现在一般选择边缘光滑整齐的载玻 片替代推玻片。
采血针 使用一次性的采血针。 玻片盒 木制/塑料均可以。 75%酒精棉球 用于采血部位的消毒。 记号笔/B2铅笔 用于载玻片上编写号码。

疟原虫血片制作

疟原虫血片制作

疟原虫血片的制作一、需要材料1.采血器材：75%酒精棉球、一次性采血针、玻片、推片、铅笔、干净的绸布或化纤布。

2.染色材料：①姬氏原液②.蒸馏水或纯净水:①稀释姬氏原液②染色时冲洗染液③固定剂：①用甲醇或无水乙醇（乙醇含量达99.9%），固定薄血膜②用无水乙醇擦洗油镜头。

④脱油剂：无水乙醚或二甲苯：镜检后的血片脱镜油。

油镜头脱油可用无水乙醚：无水乙醇的7:3混合液擦拭。

⑤擦镜纸。

二、采血前准备：1.玻片准备⑴我们现在用的玻片都是除去油渍的脱脂玻片，使用前可用绸布擦去玻片上纤维和浮灰，即可使用。

⑵新的尚未脱油脂的玻片：用洗衣粉水洗净后，一一浸泡于95%的酒精中约一周时间，然后一一取出，用软而洁净并没有棉花纤维的细布擦干，擦亮，收藏好。

⑶已用过的旧玻片：先消毒后用洗涤剂清洗，去除污渍，再一一浸泡于95%的酒精中约一周时间，然后一一取出，用软而洁净并没有棉花纤维的细布擦干，擦亮，收藏好。

2.玻片编号：在玻片的磨砂端用铅笔进行编号。

玻片编号、检验报告单号和登记号应一致，并具有唯一性。

3.采血时间：⑴间日疟、三日疟原虫患者可在发作的任何时间进行采血，但由于患者刚发冷发热以后，大部分是在环状体期，故这一时期区别疟原虫种类是不容易的。

所以在发作后的6～8小时内采血为最佳，这时环状体以滋养发育成晚期滋养体，较易识别。

⑵。

恶性疟原虫;从理论上讲，因为恶性疟原虫的裂体生殖是在内脏的毛细血管内进行的，所以在发作之前，患者的末梢血液中不易查到，但实际情况不尽如此，一般在受感染者的末梢血液中，随时能见到少量的恶性疟原虫的环状滋养体；虽然如此，较理想的采血时间，是在发作后的20小时左右，因为这个时候，环状体虽已发育至最高峰，但尚未回到内脏毛细血管中去进行裂体生殖。

环状体的数量和构造。

有助于疟原虫种类的鉴别，恶性疟原虫的配子体很容易识别，但在初发时，一般需要在发作7～10日后才能在末梢血液在出现，应当注意。

4.采血的部位和方法；部位：以耳垂采血为主。

疟疾血膜制作及染色技术

疟疾血膜制作及染色技术

疟疾血膜制作及染色技术一、血片的制作1.材料准备载玻片：新玻片浸入有液态洗涤剂的清水中10-20分钟，干净棉巾逐个擦拭，再用清水冲洗干净，晾干备用。

1. 2. 采血针：一次性 . 玻片盒：防止污染和昆虫吸食血膜 1. 4. 75%酒精棉球：采血前后消毒 . 记号笔：玻片上书写号码2.血片的制作（厚、薄血膜）用于检查疟原虫的血涂片有两种：一种是将血液涂成薄膜状，称薄血膜；一种是血液涂成圆盘状，称厚血膜。

最好一张玻片上同时制作厚、薄两种血膜。

薄血膜涂片薄血膜取洁净的载玻片1张，左手持载玻片平置,右手持推片，推片一端边缘的中点刮取血液~微升（相当于1/4火柴头大小），使血滴与平置的载玻片中线接触，待血液向两侧扩展约2cm宽时，以25°～35°夹角均匀而迅速地向左推成舌状薄血膜（约长）。

厚度以薄血膜上的红细胞之间互相接触而不相互重叠为佳。

厚血膜涂片用推片的一角刮取4~5微升血量（相当于火柴头大小），使血滴涂于载玻片的中央偏右处，由里向外一个方向旋转2圈，涂成直径~的圆形厚血膜，血膜厚薄均匀，过厚易于脱落，过薄达不到检出率的要求（厚度以1个油镜视野内可见5~10个白细胞为宜）。

血膜位置通常将厚、薄血膜涂在一张载玻片上。

方法是将载片分为6等分，第1、2格备贴标签及编用；厚血膜涂在第3格中央；薄血膜涂在第4格前缘至第6格中部。

血片的制作编号血膜制成后，立即在玻片面上写上受检者的号码（姓名）、单位(地址)、制片日期、以防差错；待血膜干后依次按顺序插入标本盒内。

血膜制作注意事项1. 清洗玻片，且勿碰撞、磨损2. 刚涂制的血膜要平放在标本盒内3. 血膜应自然干燥，要充分干燥。

二、血片染色：（吉氏染液的染色方法）1. 血膜染色前的处理固定薄血膜血片干燥后，用吸有甲醇的吸管在薄血膜表面轻轻涂抹，自然干燥。

注意固定时甲醇不要接触厚血膜，否则会影响厚血膜的溶血。

溶解厚血膜血片干燥后，用滴管滴水于厚血膜上，待血膜呈灰白色时，将水倒去，晾干。

疟原虫血片制作方法

疟原虫血片制作方法

第2页
血膜制作（取血操作）
取血方法 采血部位普通人为耳垂, 指头, 通常在耳垂取血（现场取血提议用大头针 采血, 一人一针, 防止血传疾病）。先用 75%酒精棉球消毒取血部位（冬季用手 捻动耳垂使其充血后再行消毒）, 待酒精 干后, 用左手拇指和食指紧捏耳垂上方, 右 手持消毒针快速刺入耳垂下端1~2毫米, 不宜过深或过浅。然后用右手中指轻轻向 挤压出血。
疟原虫血片制作方法
第23页
影响染色效果原因
（7）染色后不要直接将染液倒掉, 应沿玻 片或染色缸边缘加水使染液表面一层溢出, 并轻轻冲洗, 以免染液色素颗粒沾污血膜。
疟原虫血片制作方法
第24页
显微镜普通结构
1.镜座
9.粗调整器
2.镜柱
10.细调整器
3.镜臂
11.齿板
4.倾斜度关节 12.镜台
5.镜筒
疟原虫血片制作方法
第22页
影响染色效果原因
（6）染色用水 染液稀释用水和染色后冲洗用水 应选择Ph7.0~7.2清洁水, 通常使用新鲜蒸馏水 或过滤冷开水, 以及自来水、井水、河水、泉水和 雨水等。假如偏酸或偏碱, 可用缓冲蒸馏水调整。 染色后发觉血膜颜色偏蓝（偏碱）或偏红（偏酸） 时, 可用与之相反酸、碱度水冲洗血片给予纠正。
疟原虫血片制作方法
第11页
血片染色 （一）染液种类及染色原理
染色原理: 伊红是酸性水溶性钠盐，美兰是碱性 水溶性盐酸盐，当它们各自溶化水中时，就离 解为带阳电和阴电离子。伊红主要离解为酸性 阳离子，在碰到碱性蛋白质如血红蛋白、嗜伊 红白血球颗粒等即可结合成不易溶于水沈淀物 染成红色。美兰主要离解为碱性美兰离子，美 兰就与疟原虫、淋巴和大单核细胞胞浆、嗜碱 性白细胞颗粒等酸性蛋白质结合染成兰色。

疟原虫血片制作染色

疟原虫血片制作染色

1/21/2019
20
影响染色效果的因素
血片染色好坏除了与玻片是否清洁，血片 制作质量好坏等有关外，还受到以下几个 因素的影响： （1）染料溶剂的质量 染料、甲醇和甘油 如果不纯，常使配制的染液偏酸或偏碱而 影响染色效果。因此必须用分析纯的甲醇 和中性甘油，而且在配制时所用的器具必 须干净而无水份。
1/21/2019 19
血片的染色 （三）吉氏染液血片染色方法
单张血片染色：薄血膜经甲醇固定干燥后，用 2%吉氏染液稀释液1~2毫升，滴入血片标 本上染色30分钟左右，或用中性蒸馏水1~2 毫升，加吉氏母液1~2滴，混合均匀后滴入 血片标本上，染色20~30分钟，然后用清水 轻轻将片上的染液冲洗干净，晾干镜检。

1/21/2019 21
影响染色效果的因素

（2）染液的新旧 新配制的染液因色素尚 未充分溶解，染色力较弱且常呈现偏碱性。 染液存放时间越久，染色力越强。通常在 染液配制1~2周后才使用，盛装染液的瓶 子应加塞盖密。以防吸潮而影响染液质量。
1/21/2019
22
影响染色效果的因素

（3）染液稀释后使用时间 吉氏和瑞氏染 液的主要成份是美蓝、伊红和由美蓝氧化 产生的天青，三者能在酒精溶液中溶解， 但在水溶液中伊红遇到美蓝和天青即产生 沉淀。因此，必须在稀释染液当时使用， 一般在半小时内染色力最强。
血片制作和染色质量标准
项目 检查 内容
血量 位置
质量标准 好
4～ 5ц l 玻片右1/3 0.8～1.0cm
中
略多或略少 稍偏右 0.7～0.8 或1.0～ 1.2cm 圆形稍不均不整齐 略多或略少 稍偏右或偏左 稍大或稍小 舌状稍不均 厚血膜半脱落 过多或过少 偏右过多

检查疟原虫的血涂片制作与染色

检查疟原虫的血涂片制作与染色

检查疟原虫的血涂片制作与染色基本原理：疟原虫寄生在红细胞内，经染色后可对疟原虫形态做出鉴定。

材料准备：75%酒精、采血针、推片、载玻片、吉氏染液、甲醇、滴管、刻度管.(1)清洁载玻片的方法：将载玻片用清水清洗干净后晾干，再在稀释清洁液中浸泡1~2天，取出后用水冲洗干净，最后用蒸馏水冲洗，烘干，经95%酒精浸泡后，擦干。

清洗过的玻片用干净无油的纸包好备用。

(2)吉氏染液配制：○1原液配制，吉氏染剂粉1g，甲醇50ml，中性甘油50ml。

将吉氏染粉置乳钵中，加少量甘油充分研磨（30min以上），继续边加甘油边研磨，至加完为止。

然后转入烧瓶内，置55~60恒温水浴中，充分震摇使溶解（约2h）,冷却后加入甲醇，储于棕色瓶中，塞紧瓶塞，充分摇匀，1~3周后过滤，即为原液，配制时要研磨充分，不可混入水，配好后要密封，放置越久染色性能越好；○2工作液临时配制：将吉氏原液用pH 6.8~7.2的PBS作1:15~1:20稀释混匀即可。

操作方法：采用疟原虫感染小鼠做血涂片并染色.(但以下采血以人为例)（1）采血:1时间据各种疟原虫在人外周血中出现的规律，间日虐和三日疟患者可在发作后任何时间取血，但以发作后10h 以内最佳，恶性疟原应在发作开始后不久做血检，患者刚开始发作时原虫密度较低可能检测不到，所以应在第二次发作时再做一次以免漏诊：2部位成人可在耳垂或指尖，婴儿宜在脚跟或者大拇指：3方法先用75%酒精给皮肤消毒，右手持一次性无菌采血针迅速刺入皮肤2mm，轻轻挤压周围皮肤，弃去第一滴血，再取1滴作薄血膜，2滴作厚血膜。

薄血膜取血量少，涂面大，原虫分散，但形态清晰，易作虫种鉴别：厚血膜血量多，RBC集中，在原虫数量较少时便于发现，但因制作时细胞相互挤压堆积，原虫形态难认。

（2）涂片：1薄血膜制作取1滴置于洁净载玻片上，用1张磨口边缘作推片。

推片时用力要均匀，一次推成，保证血膜应呈舌形，RBC分布均匀。

2厚血膜制作用推片一角取血2滴，治愈薄血膜片右方用推片角由里向外顺一个方向旋转，使血滴形成直径约1cm的圆形血膜。

疟原虫血片制作及染色

疟原虫血片制作及染色

血膜染色 （二）染色的原理
染色化学反应反应的示意图：
疟原虫细胞浆的阴离子（COO—）＋ 美蓝阳离子—→呈蓝色
┏天青（染媒作用） 疟原虫核的阳离子（NH3+）＋┫
┗伊红阴离子
－→ 呈紫红色
血膜染色 （二）染色的原理
蛋白质本身是阴阳电荷是相等，带有两基性的。所 以其所带阴阳电荷的数量可受周围液体的酸碱度（ PH）而改变，在偏酸的溶液中阳离子增加，易于伊 红结合，着色偏红。在偏碱的溶液中阴离子增加， 易于美蓝结合，着色偏蓝。这就说明了为何配制染 液的酸碱度直接影响了血片染色的质量，偏酸着色 过红，偏碱着色过蓝。所以在染血片时稀释液要控 制在PH7.2，最为适宜，疟原虫的结构才能清晰可见 。
血膜制作（工具准备）
一次性采血针、75%酒精、棉棒（球）,载玻片， 推片，记号笔或铅笔。
血膜制作（取血操作）
取血方法 采血部位一般人为耳垂，指头， 通常在耳垂取血。先用75%酒精棉球消毒 取血部位（冬季用手捻动耳垂使其充血后 再行消毒），待酒精干后，用左手拇指和 食指紧捏耳垂上方，右手持消毒采血针（ 一人一针，避免血传疾病）迅速刺入耳垂 下端1~2毫米，不宜过深或过浅。然后用 右手中指轻轻向上挤压出血。
成批血片染色：将已固定薄血膜的血片插入染色缸， 倒入2%吉氏染液稀释液（2毫升原液加中性蒸馏水 98毫升稀释均匀即成），同时对厚薄血膜染色30分 钟，然后用清水注入染缸将染液通过溢出方式洗去， 再用清水浸洗1-2次，干净后将血片标本（血膜面朝 下）插于晾干板上，待干后镜检。
单张血片染色：薄血膜经固定干燥后，用中 性蒸馏水（或娃哈哈矿泉水）1ml，加吉氏 母液1~2滴，混合均匀后滴入血片标本上， 染色10~20分钟，然后用清水轻轻将片上的 染液冲洗干净，晾干镜检。

血片制作染色和血检质量控制3

血片制作染色和血检质量控制3

血片的染色 （三）吉氏染液血片染色方法
先用甲醇或无水酒精固定薄血膜，待干 后进行染色。亦可在固定薄血膜后用清水对厚 血膜溶脱血红蛋白，然后才进行染色。
单张血片染色：薄血膜经固定干燥后， 用2%吉氏染液稀释液1~2毫升，滴入血片 标本上染色30分钟左右，或用中性蒸馏水1毫 升，加吉氏母液1~2滴，混合均匀后滴入血 片标本上，染色10~20分钟，然后用清水轻 轻将片上的染液冲洗干净，晾干镜检。
22
影响染色效果的因素
（6）染色用水 染液的稀释用水和染色后冲洗用 水应选择Ph7.0~7.2清洁水，通常使用的新鲜 的蒸馏水或过滤的冷开水，以及自来水、井水、 河水、泉水和雨水等。如果偏酸或偏碱，可用缓 冲蒸馏水调整。染色后发现血膜颜色偏蓝（偏碱） 或偏红（偏酸）时，可用与之相反的酸、碱度水 冲洗血片予以纠正。
13
血片的染色 （一）染液的种类及染色原理
注意：蛋白质是二性电解质，当其处于较等电点为酸的溶液中时， 便呈硷的作用，即与酸结合* ，这就说明为何在染液偏酸时， 伊红的着色力强，使红细胞着色鲜艳而淋巴细胞和原虫的胞浆 着色不著；反之，蛋白质在偏硷的溶液中呈酸的作用而中和硷 基，也就说明为何染液偏硷时，红细胞和嗜伊红白细胞的颗粒 等被染成紫兰色。
33
三、发热病人血检的质量控制
2 、血检对象
表中显示，在诊断为发热原
因不明的病人中，原虫阳性率仅为
0.02%，也就是说检出1例病人
成批血片染色：将已固定薄血膜的血片插入染 色缸，倒入2%吉氏染液稀释液（2毫升原液加中性 蒸馏水98毫升稀释均匀即成），同时对厚薄血膜染 色30分钟（如染液不合标准时，得酌情增减染色时 间），然后用清水轻轻将染液冲去，再用清水轻轻冲 洗一次，干净后将血片标本（血膜面朝下）插于晾干 板上，待干镜检。
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2020/10/8
11
制作血膜的注意事项
3. 血膜让其自然干燥，切忌用太阳晒或火烤， 干透后才能用甲醇固定薄血膜。夏天标本尽可 能24~48小时内固定染色；冬天也不能超过 72小时。放置时间越久，厚血膜越不易溶血， 染色效果也差。若不能及时染色，薄血膜宜先 用甲醇固定（1~3分钟）然后用过滤清水或自 来水对厚血膜溶血，晾干后包好置干燥器于冰 箱内保存，用时将干燥器置室温中1~2小时后 取出染色。
恶性疟较理想的取血时间是在发作后至20小 时内取血，初发患者退热后常查不到疟原虫。
2020/10/8
4
涂制血膜规则
用于检查疟原虫的血涂片有两种：一种是将血液涂呈 薄膜状，称薄血膜；一种是血液涂成圆盘状，称厚血膜。
薄血膜上的血细胞要求平辅在玻片上面。 涂片顺序，先厚后薄；位置分配，血片自左向右：薄厚-标签；推薄片用玻片短边。
2020/10/8
10
制作血膜的注意事项
2. 刚涂制的血膜要平放在标本盒内或者 实验台面上。厚血膜未干前勿使标本片倾 斜，以免未干的血膜倾向一侧，造成血膜 厚薄不均，厚处不易溶血和着色而影响检 查结果；晾干血膜时应注意防尘、防止苍 蝇、蟑螂等昆虫吮吸血膜，干后应及时装 入标本盒内。新木制标本盒需敞开放置一 段时间，让木醇挥发后才能使用，以免厚 血膜血红蛋白被其固定，不能溶血或染色 效果不佳。
薄血膜 取洁净的载玻片2张， 1张平置在桌上，以左手拇 指，食指夹持载玻片两端 （手指切勿接触玻片表面）， 用另一张边缘平滑（最好为 磨口边缘）的载玻片做推片， 用推片一端边缘的中点从取 血部分刮取约1~1.5微升的 血量（相当于1/4火柴头大 小），使血滴与平置的载玻 片接触，并形成25~35度 夹角，待血液向两侧扩展约 2厘米宽度时，均匀而迅速 地轻轻向左推出（约2.5厘 米长）且边缘带有“舌状” 的薄血膜。
旧玻片处理 用过的玻片浸泡洗涤剂溶液中1~2天 或者浸泡于煮沸好的5%肥皂水中1~2小时，逐个 擦去玻片上的旧血膜痕迹，用清水漂洗干净擦干擦 亮。
洗净载玻片处理 每10~20张用白纸包好或者装原
玻片盒里再放入塑料袋内，保存于干燥环境中备用。
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取血部位及方法
取血部位及方法 取血部位以耳垂较为合 适，也可在手指末端采血，婴儿可从拇趾 或足跟取血。先用75%酒精棉球消毒取 血部位后，以一次性采血针迅速刺入取血 部位1~2毫米深，然后用左手大拇指、食 指和右手中指协同挤出血滴。
2013415疟原虫血片制作染色
载玻片的清洗
载玻片 用以涂制血膜的载玻片，必须清洁无油迹。 有油迹的载玻片涂制的厚血膜容易脱落，薄血膜涂 不均匀。
新玻片处理 应浸于有液态洗涤剂清水中10~20分 钟，然后用干净棉巾逐个擦拭，再用清水冲洗干净， 晾干后用干净柔软的棉巾擦亮备用。也可以95%的 乙醇浸泡5~10分钟，再用纱布擦干擦亮备用。
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血片的染色 （一）染液的种类及染色原理
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血片的染色
（一）染液的种类及染色原理
染液种类：目前所用的血片染色液，虽然名称 很多，但都是从罗门诺夫斯基氏创造的染液 变化过来的。总的可分为水溶液和酒精溶液 两大类，前者包括罗氏、西氏（Simon)、 J.S.B氏染液等，后者包括利氏 (Leishman)、瑞氏和吉氏染液（被国家推 荐使用）等。这些染液中的主要染剂都包含 美兰、伊红和由美兰氧化所成的天青，所以 称为多色性染剂。
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血片的染色 （一）染液的种类及染色原理
染色原理：美兰与伊红都不能使原虫和白细胞 的核着色，必须由天青作为媒介（染媒）才 能使其着色。天青虽然也是碱性染剂，但又 具有染媒作用，使原虫核和白细胞核等原来 只能染上极淡兰色的结构染上显著的酸性染 剂伊红，这样，就使白细胞粗大的核染成显 著的既兰又红的紫兰色，而较小或菲薄的原 虫核和淋巴细胞原浆中的颗粒染成紫红色。
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血片编号
血膜制成后，立即将受检者的个人编 号写在玻片磨砂面上（血片的编号要 与血检登记本上编号一致）以防差错。
玻片清洗时，避免玻片碰撞、 磨损。制作血膜的载玻片必须完 全清洁而毫无油渍或污垢。制片 时，手指只能持载片的边缘，不 能接触玻片表面，以免油污使薄 血膜产生空白区以及厚血膜脱落。 作为推片的玻片边缘一定要平滑， 才能使推出的血膜均匀一致。
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采血时间
取血时机 现症病人一般可随时取血，疟疾普 查时可不考虑取血时机。但在诊断或需要某期 疟原虫作标本时，则应掌握适宜的取血时机。
间日疟在寒热发作时，外周血液中主要可见环 状体期；发作后数小时，环状体发育到滋养体 期，疟色素形成，形态较易辩认，为诊断疟疾 的有利时机；36~48小时，可检出裂殖体； 发作一、二次后，配子体出现较多。
血片的染色 （一）染液的种类及染色原理
染色原理：伊红是酸性水溶性钠盐，美兰是碱性 水溶性盐酸盐，当它们各自溶化水中时，就离 解为带阳电和阴电的离子。伊红主要离解为酸 性的阳离子，在遇到碱性的蛋白质如血红蛋白、 嗜伊红白血球颗粒等即可结合成不易溶于水的 沉淀物染成红色。美兰主要离解为碱性的美兰 离子，美兰就与疟原虫、淋巴和大单核细胞的 胞浆、嗜碱性白细胞的颗粒等酸性蛋白质结合 染成兰色。
制作厚血膜
制作薄血膜
厚血膜血量及涂片法
厚血膜 用推片的一角，从取血部位刮取约4~5微升血 量（相当于火柴头大小），使血滴与平置的载玻片接触， 再由里向外一个方向旋转，转2~4圈，涂成直径 0.8~1厘米大小圆形厚血膜，血膜厚薄均匀，过厚易 于脱落，过薄达不到检出率的要求。
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薄血膜血量及涂片法
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涂制厚、薄血膜的位置
通常是将厚、薄血膜涂在一张载玻片上。方法 是将载玻片分为3等分（留出标签或磨砂面位 置后的3等分）。厚血膜涂在载玻片靠近标签 或磨砂面方向的右1/3中央处，圆形、厚薄均 匀 、 边 缘 整 齐 。 薄 血 膜 涂 在 载 玻 片 1/2 至 左 1/3的中部位置，舌状、厚薄均匀。