最新415疟原虫血片制作染色

疟原虫血片的制作工需要材料1 .采血器材：75%酒精棉球、一次性采血针、玻片、推片、铅笔、干净的绸布或化纤布。

2 .染色材料：①姬氏原液②.蒸储水或纯净水：①稀释姬氏原液②染色时冲洗染液③固定剂：①用甲醇或无水乙醇（乙醇含量达99.9%）,固定薄血膜②用无水乙醇擦洗油镜头。

④脱油剂：无水乙醍或二甲苯：镜检后的血片脱镜油。

油镜头脱油可用无水乙醍：无水乙醇的7:3混合液擦拭。

⑤擦镜纸。

二、采血前准备：1.玻片准备⑴我们现在用的玻片都是除去油渍的脱脂玻片，使用前可用绸布擦去玻片上纤维和浮灰，即可使用。

⑵新的尚未脱油脂的玻片：用洗衣粉水洗净后，一一浸泡于95%的酒精中约一周时间，然后一一取由，用软而洁净并没有棉花纤维的细布擦干，擦亮，收藏好。

⑶已用过的旧玻片：先消毒后用洗涤剂清洗，去除污渍，再一一浸泡于95%的酒精中约一周时间，然后一一取由，用软而洁净并没有棉花纤维的细布擦干，擦亮，收藏好2.玻片编号：在玻片的磨砂端用铅笔进行编号。

玻片编号、检验报告单号和登记号应一致，并具有唯一性。

3.采血时间：⑴间日疟、三日疟原虫患者可在发作的任何时间进行采血，但由于患者刚发冷发热以后，大部分是在环状体期，故这一时期区别疟原虫种类是不容易的。

所以在发作后的6〜8小时内采血为最佳，这时环状体以滋养发育成晚期滋养体，较易识别。

⑵。

恶性疟原虫；从理论上讲，因为恶性疟原虫的裂体生殖是在内脏的毛细血管内进行的，所以在发作之前，患者的末梢血液中不易查到，但实际情况不尽如此，一般在受感染者的末梢血液中，随时能见到少量的恶性疟原虫的环状滋养体；虽然如此,较理想的采血时间，是在发作后的20小时左右，因为这个时候，环状体虽已发育至最高峰，但尚未回到内脏毛细血管中去进行裂体生殖。

环状体的数量和构造。

有助于疟原虫种类的鉴别，恶性疟原虫的配子体很容易识别，但在初发时，一般需要在发作7〜10日后才能在末梢血液在由现，应当注意。

4.采血的部位和方法；部位：以耳垂采血为主。

厚血膜的位置，位于玻片右1/3处。
厚血膜外观：圆形厚薄均匀，无划痕。过厚易于脱 落，过薄达不到检出率的要求。
4.推制薄血膜
用干棉球抹净玻片角上的血渍，然后将推片下缘 平抵载玻片的中线，当血液在载玻片与推片之间 向两侧扩展至约2cm宽时，使两玻片保持25~35° 角，从右向左迅速向前推成舌状薄血膜，厚度 应以红细胞之间互相接触而不相互重叠为佳。
吉姆萨（Giemsa）染液由天青、伊红组成。染料中天青是 碱性的,伊红是酸性的。染色的原理是基于在酸性染料中具 有染色作用的阴离子和细胞内的碱性物质相结合，而碱性染 料中的阳离子和细胞内的酸性物质相结合，所以酸性的细胞 成分被碱性染料所染色，而碱性的细胞组分则被酸性染料染 色。
嗜酸性颗粒为碱性蛋白质，与酸性染料伊红结合，染粉红色， 称为嗜酸性物质；细胞核蛋白和淋巴细胞 胞浆为酸性，与 碱性染料美蓝或天青结合，染紫蓝色，称为嗜碱性物质；中 性颗粒呈等电状态与伊红和天青均可结合，染淡紫色，称为 中性物质。
(2) 采血针：使用一次性釆血针。
(3) 玻片盒：
(4) 75％乙醇棉球：用于采血前后的消毒。
(5) 标签记号笔：用于玻片上书写号码。
2. 采血部位及取血方法 采血部位以耳垂较为 合适，也可在手指末端采血，婴儿可从拇趾或 足跟取血。先用75％乙醇棉球消毒取血部位后， 以一次性采血针迅速刺入取血部位1~2mm深， 然后用左手大拇指、食指和右手中指协同挤出 血滴。
2. 染色用水
常用的染液的稀释用水和染色的冲洗用水，是中 性的蒸馏水或经煮沸过滤的冷开水，也可用井水、 河水、泉水或雨水。为了使血膜着色较好，应用 pH7.0～7.2水效果最佳。
可配制缓冲液用于染液的稀释和染色后的冲洗。 配制pH6.6~7.4缓冲液时，先制备好两种贮备液。 贮备液Ⅰ为每1 000ml蒸馏水含9.5g 磷酸氢二钠， 贮备液Ⅱ为每1 000ml蒸馏水含9.07g 磷酸二氢钾。 配制pH6.6~7.4的缓冲液时，将两种贮备液按一定 比例混合后，用蒸馏水稀释成各种浓度的溶液。

疟原虫的镜检技术制片染色
主要内容
❖厚薄血膜的制作与染色。 ❖疟原虫计数方法。
❖用于检查疟原虫的血涂片有两种：
一种是将血液涂成薄膜状，称薄血膜；一种 是血液涂成圆盘状，称厚血膜。最好一张玻 片上同时制作厚、薄两种血膜。
❖涂制厚、薄血膜的位置
作为标本的血片每张玻片涂厚、薄血膜各1个。方 法是将载片分为6等分，第1、2格备贴标签及编号 用；厚血膜涂在第3格中央，薄血膜涂在第4格前缘 至第6格中部。
❖血膜应自然干燥 切忌在毒太阳下晒或火烤，加快其
干燥可采用手背上或衣服摩擦、风吹，干透后才能用甲 醇固定薄血膜。夏天标本尽可能24-48h内固定染色； 冬天也不能超过72h。放置时间越久，厚血膜越不易溶 血，染色效果也差。若不能及时染色，薄血膜宜先用甲 醇固定（1～3分钟）然后用过滤清水对厚血膜溶血，晾 干后装入盒内盖严，待以后染色。
位置，位于玻片右1/3处（中央偏右或6等份中的与贴 标签的1、2份相邻的第3份中部）。外观，圆形厚薄 均匀，边缘整齐。过厚易于脱落，过薄达不到检出率
的要求，以1个油镜视野5-10个白细胞为宜。
薄血膜的制作
用推片一端边缘的中点从取血部位①刮取约1～1.5 微升的血量（相当于1/4火柴头大小），使血滴与平 置的载玻片中线接触，并形成25～350夹角，待血液 向两侧扩展约② 2cm～2.5cm宽时，均匀而迅速地 从右向左推成舌状薄血膜（约2.5cm长）。注意：推 制时速度要均匀，血滴大小、推片与载玻片之间夹 角大小及展开血膜的速度快慢等常影响血膜的厚薄。 也可载玻片平置在桌面上操作。
制作血膜注意事项
❖清洗玻片，且勿碰撞、磨损 载玻片必须完全清洁
无油渍或污垢。制片时，手指勿接触玻片表面，以免油 污使薄血膜产生空白区以及厚血膜脱落。作为推片的玻 片边缘一定要平滑，才能使推出的血膜均匀一致。

二、血片制作
薄血膜血量
取洁净的载玻片 2张，1张 以左手拇指，食指夹持载
玻片两端，用另一张边缘
平滑的载玻片做推片，用 推片一端边缘的中点取血 约1~1.5ul的血量（小米粒 大小），使血滴与平置的 载玻片接触，并形成 25~30 度夹角，待血液向
两侧扩展宽约2cm时，均
匀而迅速地轻轻向左推出 （约2.5cm长）。
间越久，染色力越强。通常在染液配制1~2周后才使用，盛装染液的瓶子应加
塞盖密，以防吸潮而影响染液质量。 3.染液稀释后使用时间 吉氏染液的主要成份是美蓝、伊红和由美蓝氧化产生的天青，三者能在酒精溶 液中溶解，但在水溶液中伊红遇到美蓝和天青即产生沉淀。因此，必须在稀释 染液当时使用，一般在半小时内染色力最强。
900 ml
900 ml 900 ml
三、血片染色
单张血片染色
在量筒内加2ml缓冲液或 ph7.0~7.2净水， 滴加吉 氏原液4滴(每ml2滴）， 混匀，然后滴在已充分干
躁的厚薄血膜上，染色
30min。清水缓缓冲洗， 晾干（厚血膜朝下），等 待镜检。
三、血片染色
成批血片染色
根据血片多少来配应用液 选用ph7.0~7.2净水为好 吉氏原液的加量要根据厂 商提供的技术参数，最好 试染后再批量染。 可以用染色架
五、疟原虫镜检与其它鉴别
镜检结果登记
看完血片后，若为阳性应立即按血片编号登记原虫的
种、期、以防差错。为记录方便，对疟原虫的种、期
可使用英文字母缩写作为代号： 间日疟=P.v 三日疟=P.m 环状体=R 恶性疟=P.f 卵形疟=P.o 大滋养体=T
裂殖体=Ｓ
配子体=Ｇ
五、疟原虫镜检与其它鉴别
三、血片染色
缓冲液的配制