结核分枝杆菌复合群检测在AIDS合并结核病诊断中的应用

分子生物学技术在结核病诊断中的应用分析摘要：目的对分子生物学技术在结核病诊断中的应用实施分析。

方法本次研究中共计选择了2020年1月至2020年12月期间在我中心初诊为肺结核疑似病例或临床病例的371例患者为对象，371例患者均为痰涂片阴性病例，对其全部开展DNA实时荧光恒温扩增检测和交叉引物恒温扩增检测技术和改良罗氏培养进行诊断。

结果所有参与本次研究的371例初诊为肺结核疑似病例或临床病例，通过DNA实时荧光恒温扩增检测和交叉引物恒温扩增检测技术进行诊断之后，最终有63例患者确诊为分子生物学阳性病例、47例为培养阳性病例。

DNA实时荧光恒温扩增检测和交叉引物恒温扩增检测阳性率比涂片镜检和改良罗氏培养更高。

结论在对肺结核疑似病例或临床病例实施诊断期间，对患者采取实时DNA实时荧光恒温扩增检测和交叉引物恒温扩增检测具有比较高的诊断效果，值得推广。

关键词:分子生物学技术；结核病；诊断；价值结核病是由结核分枝杆菌感染引起的慢性传染病,是全球最具威胁的传染病之一。

据世界卫生组织统计,我国患结核病人数居世界第2位,是全世界22个结核病流行严重的国家之一[1]。

结核病实验室检查是结核病诊断、治疗方案制定和治疗效果评估的重要依据。

目前我国大多数实验室广泛采用细菌学检查方法,包括抗酸杆菌痰涂片镜检和分枝杆菌分离培养。

涂片检查简便、易行,但阳性检查率较低[2];分离培养法是目前结核病诊断的金标准,具有很高的灵敏度,但至少需要3~8周的时间,但耗时较长,不能满足结核病早期诊断的要求。

随着分子生物学的发展,近年来涌现出很多方法用于结核分枝杆菌的快速诊断及鉴定[3]。

本文正是基于此，选择了2020年1月至2020年12月期间在我中心初诊为肺结核疑似病例或临床病例的371例患者为对象，对分子生物学技术在结核病诊断中的应用进行分析，具体的研究情况报道如下。

1资料与方法1.1一般资料本次研究中共计选择了2020年1月至2020年12月期间在我中心初诊为肺结核疑似病例或临床病例的371例患者为对象，对所有患者共计742份痰标本进行诊断。

• 302 •中国防痨杂志2021 年 3 月第 43 卷第3 期Chin J Antituben^M arch 2021，V〇1. 43,No. 3•病例报告•L SW iO基因缺失结核分枝杆菌感染的肺结核一例谈小文王媛崔晓利党丽云雷静任斐赵国连分子生物学检测方法因其具有检测敏感度高、特异性强和时效性高等特点，成为结核病快速珍断的重要检测手段。

对于分子生物学检测，寻找检测效率高且存在特异性的靶基因尤为重要，分子检测靶基因的种属特异性和多拷贝序列是确保检测结果准确性和高效性的重要因素。

结核病分子生物学病原诊断常用的诊断靶标有rfiiV A jqB 和基因等，以上基因均属于管家基因。

其中IS6n〇为 多拷贝基因，其用于病原学诊断敏感度高于单拷贝基因，但是基因并非存在于所有结核分枝杆菌中，有的菌株/S6]〗0基因缺失，可能造成假阴性结果2。

本研究对西安市胸科医院收治的1例基因零拷贝菌株感染的结核病患者病原学诊断过程及分离株测序结果进行分析，旨在为临床诊断工作提供借鉴。

临床资料患者，男，50岁。

因间断咳嗽、咳痰、胸闷、气促10个月，伴发热1周，于2020年6月13日入住西安市胸科医院。

患者5年前无明显诱因出现咳嗽、咳白色黏痰，未行特殊处理。

2019年8月27日患者因胸闷、气促，就诊于当地医院，诊断为“尘肺”，给予对症治疗后症状稍有好转，但活动后仍感到气促，休息后可缓解，随着病程进展，气促症状逐渐加重。

患者于2020年6月5日出现发热，最高体温37.9。

，午后明显.无畏寒、寒颤，就诊于山阳县中医医院，行胸部CT 示双肺出现病灶并形成空洞，不排除肺结核可能，遂来我院做进一步诊断治疗。

患病期间，患者无咯血，无胸痛和心慌，无恶心和呕吐，体质量6个月减轻10 kg。

人院时体格检查:体温37 °C，脉搏92次/m in,呼吸频率开放科学（资源服务）标识码（OSID)的开放科学计划以二维码为入口，提供丰富的线上扩展功能，包括作者对论文背景的语音介绍、该研究的附加说明、与读者的交互问答、拓展学术圈等。

肺结核诊断标准(WＳ288－２008)1、范围本标准规定了肺结核诊断依据、诊断原则与鉴别诊断。

本标准适用于全国各级医疗卫生机构及其工作人员对肺结核得诊断、报告。

2、诊断依据２.1 流行病学结核患者发病时,大多不易查出其传染来源。

当易感者与具传染性得肺结核患者密切接触时被感染。

２。

２临床表现2、２、1 症状咳嗽、咳痰≥2周,或咯血为肺结核可疑症状。

多数起病缓慢,部分患者早期可无明显症状,随着病变进展,患者可表现咳嗽、咳痰、咳血痰或咯血,盗汗,疲乏,间断或持续午后低热,背部酸痛,食欲不振,体重减轻,女性患者可伴有月经失调或闭经,部分患者可有反复发作得上呼吸道症状,儿童还可表现发育迟缓等。

少数患者起病急剧,特别就是在急性血行播散性肺结核、干酪性肺炎以及结核性胸膜炎时,多伴有中、高度发热,胸痛与不同程度得呼吸困难等、当有支气管结核时,咳嗽较剧,持续时问较长;支气管淋巴瘘形成并破人支气管阻塞气道或支气管结核导致气管或支气管狭窄,可伴有气喘与呼吸困难。

当肺结核合并肺外结核时,还可表现肺外器官相应症状。

当肺结核合并其她病原菌感染时,多有中、高度发热,咳痰性状则会有相应变化,如咳黄、绿色痰等。

少数患者还可伴有结核变态反应引起得过敏表现,包括:结节性红斑、疱疹性结膜炎与结核风湿症等。

患者可以以一个或多个症状为主要表现,有少部分患者即使肺内已形成空洞也无自觉症状,仅靠胸部影像学检查时发现。

2.2、2 体征早期肺部体征不明显,当病变为大叶性干酪性肺炎时,局部叩诊呈浊音,听诊可闻及管状呼吸音,有空洞合并感染或合并支气管扩张时,可闻及干或湿性啰音。

少部分患者延误诊治时间较长或合并一侧肺不张时,可表现气管向患侧移位,患侧胸廓塌陷、肋间隙变窄、叩诊为浊音或实音、听诊呼吸音减弱或消失;健侧胸廓饱满、肋间隙增宽、叩诊为过清音等。

当病情严重时,患者除呼吸系统体征外,还可表现面色萎黄,结膜、甲床与皮肤苍白以及消瘦等相应部位体征。

当肺结核合并结核性胸膜炎时,早期于患侧可闻及胸膜摩擦音,随着胸腔积液得增加,患侧胸廓饱满,肋间隙增宽,气管向健侧移位,患侧叩诊呈浊音至实音,听诊呼吸音减弱至消失。

•240 •结核与肺部疾病杂志 2020 年12 月第1卷第3 期J Tuberc Lung Dis，December 2020, Vol. 1，No. 3•论著.三种检测技术鉴别结核分枝杆菌复合群与非结核分枝杆菌的效能评价易俊莉杨新宇张洁田丽丽丁北川武文清【摘要1目的评价对硝基苯甲酸/噻吩-2-竣酸肼（PNB/T C H)生长试验法、结核分枝杆菌抗原（MPB64)检 测法、PCR-荧光探针法在结核分枝杆菌复合群(MTBC)与非结核分枝杆菌(N TM)鉴别中的应用价值。

方法11株 标准菌株包括M T B标准株H37R v及10株N T M标准菌株均来源于国家结核病参比实验室。

238株临床分离株为北京结核病控制研究所2019年1一 12月门诊患者培养阳性冻存菌株，经涂片抗酸染色均为阳性。

应用 PNB/T C H生长试验法、MPB64检测法、PCR-荧光探针法及微阵列基因芯片法对11株标准菌株及238株临床分离 株进行鉴定;以微阵列基因芯片法菌种鉴定结果为参照，评价PNB/T C H生长试验法、MPB64检测法、PCR-荧光探 针法鉴别M T B C与N T M的效能。

结果以微阵列基因芯片法菌种鉴定结果为参照，PNB/T C H生长试验法、MPB64检测法、PGR-荧光探针法检测M T B C的敏感度分别为100_ 0%(206/206)、98. 5%(203/206)、100. 0% (206/206);特异度分别为 96. 9%(31/32)、100. 0%(32/32)、100. 0%(32/32);符合率分别为 99. 6%(237/238)、98. 7%(235/238)、100. 0%(238/238); K冲/« 值分别为 0• 98、0. 95、1.00。

PN B/TC H生长试验法、MPB64 检测法、PCR-荧光探针法检测周期分别为28 d、0. 5 h、0. 5 d，检测平均成本分别为20、40、60元。

关于开展“结核特异性细胞因子IFN-γ和IL-2联合检测”项目可行性报告××医院×年×月×日目录一、项目背景介绍 (3)（一）结核病的现状 (3)（二）我国结核病临床诊断的痛点、难点 (3)（三）现有结核病诊断技术的优缺点 (5)二、项目的国内外研究进展 (6)（一）细胞因子IFN-γ、IL-2可作为“结核病辅助诊断”标志物 (6)（二）IL-2的联合检测，有助于弥补IGRA技术的不足 (6)三、项目开展的临床价值 (8)四、双因子试剂盒简介 (11)五、同类产品比较分析 (13)六、项目开展的效益分析 (15)七、项目开展的实验室设备要求 (16)八、迪澳生物简介 (17)九、参考文献 (18)一、项目背景介绍（一）结核病的现状结核病是一种严重危害人类健康的慢性呼吸道传染病，其病原体是结核分枝杆菌，是人类所知的最古老的一种传染病。

当结核病患者将细菌排入空气时，结核分枝杆菌就会传播，例如通过咳嗽等。

该疾病通常累及肺部（肺结核），但也可累及其他部位（肺外结核病）。

近10年来，由于高感染人群和高危人群的流动、结核杆菌耐药菌株的出现、卡介苗免疫效果偏低以及人类免疫缺陷病毒（HIV）感染的蔓延等原因，结核病以极其迅猛的势头再次肆虐全球。

据世界卫生组织（WHO）《2020年全球结核病报告》显示，全球结核潜伏感染人群接近20亿。

2019年，全球新发结核病患者约996万，约有121万人死于结核病。

而我国结核病的流行形势亦非常严峻，我国是全球30个结核病高负担国家之一，位居全球第3位，每年新报告肺结核患者约83.3万例，位居甲乙类传染病第2位。

结核病的传染主要是发生在病人未被发现并进行治疗之前，1名结核病患者平均可传染15人，而目前全球普遍存在结核病诊断不足以及病例低报等现象。

为进一步遏制结核病流行，推进健康中国建设，2019年5月国家卫生健康委、国家发展改革委、教育部、科技部、民政部、财政部、国务院扶贫办和国家医保局联合制定了《遏制结核病行动计划（2019—2022 年）》，并指出：结核病的早期快速诊断是预防和控制结核病蔓延的关键。