缺铁贫血动物模型建立方法和研究进展

脑缺血动物模型构建的研究现状与展望缺血性脑血管病（ICVD）是指局部脑组织包括神经细胞、胶质细胞及联系纤维由于供血障碍发生的病变、坏死或一过性的功能丧失。

为了系统地研究缺血性脑血管病，建立一个接近临床的，重现性好，可控的脑缺血模型是有必要的。

笔者对大鼠脑缺血模型及体外模型的复制方法、模型特点及影响关系等方面进行概述，发现存在两大问题：一是目前大多数模型构造以青年大鼠为研究对象，但缺血性脑血管病多发于老年人，青年大鼠的生理学和病理学与临床脑血管病存在差异，存在青年大鼠模型的假阳性结果；二是临床上缺血性脑血管病的发病机制复杂，常伴有动脉粥样硬化、高血压、糖尿病等疾病，但目前模型的复制往往采用单一因素导致脑缺血，与临床实际存在差距。

因此，现阶段对于老年脑缺血模型的制备方法还很缺乏，建立一个符合临床发病特点，操作简便稳定、重复性好的脑缺血动物模型刻不容缓。

标签：缺血性脑血管病；老年大鼠；动物模型；体外模型缺血性脑血管病（Ischemic Cerebrovascular Disease，ICVD）是指局部脑组织包括神经细胞和胶质细胞及联系纤维由于供血障碍发生的病变、坏死或功能瞬态损耗。

目前，缺血性脑血管疾病在全部脑血管病中约占80%，并且脑缺血疾病有着发病率高，死亡率高，复发率高，致残率高等特点。

调查发现，许多因素与此疾病的发生有着密切的关系。

其中，可干预性因素有高血压、心血管疾病、糖尿病、高血脂症等；不可干预性因素有年龄、性别、种族和卒中家族史等。

为了更加系统地研究缺血性脑血管病的发病機制、病理过程、诊断及观察药物的治疗作用，建立一个接近临床、重现性好且可控的脑缺血模型是很有必要的。

近5年的文献研究表明，脑缺血模型的制备主要包括脑缺血动物模型和体外模型两种类型，均以大鼠作为实验动物。

本文将近5年的文献进行整理，对老年大鼠脑缺血模型及体外模型的复制方法、模型特点以及影响关系等进行综述。

1.老年大鼠脑缺血动物模型的制备由于在临床上，脑血管意外多发于老年人，因此本文重点关注老年大鼠脑缺血动物模型的制备。

缺铁性贫血及其治疗的研究进展缺铁性贫血（iron-deficiency anemia，IDA）是由各种原因导致机体铁摄入不足、吸收障碍或消耗过多引起红细胞生成不足而导致的贫血。

IDA在全世界普遍存在，是最为常见的贫血，孕妇和儿童是主要发病人群。

目前临床上主要采取口服铁剂、静脉注射铁剂及联合营养干预等手段治疗，本文主要比较这些方法从治疗效果，不良反应上的不同及其各自的优缺点。

[Abstract] Iron-deficiency anemia is caused by a variety of reasons iron deficiency in the body，malabsorption or excessive consumption，resulting in anemia caused by inadequate production of red blood cells.IDA is prevalent around the world and is the most common form of anemia. The main population of iron deficiency anemia is pregnant women and children. At present，the treatment of iron deficiency anemia in clinic is oral iron，intravenous iron and combined nutrition intervention. The advantages and disadvantages of these methods were compared in terms of efficacy and adverse effects.[Key words] Iron-deficiency anemia；Oral iron；Intravenous iron；Nutrition intervention缺铁性贫血（iron-deficiency anemia，IDA）是由于体内缺少铁而影响血红蛋白合成，而引起的一种贫血。

小鼠肝缺血
摘要：
一、小鼠肝缺血的定义及意义
二、小鼠肝缺血的实验方法
三、小鼠肝缺血模型的应用领域
四、小鼠肝缺血的研究进展
五、未来研究方向和挑战
正文：
一、小鼠肝缺血的定义及意义
小鼠肝缺血是指在实验过程中，通过手术或其他方法暂时切断小鼠肝脏的血流供应，从而导致肝脏组织缺氧和代谢紊乱。

这一模型在研究肝脏生理、病理生理以及药物筛选等方面具有重要意义。

二、小鼠肝缺血的实验方法
1.手术法：将小鼠麻醉后，暴露肝脏，采用无损伤血管夹或缝合线暂时阻塞肝动脉和门静脉，从而实现肝缺血。

2.非手术法：通过导管技术或血管夹闭技术，在无需开腹手术的情况下实现肝缺血。

三、小鼠肝缺血模型的应用领域
1.肝脏缺血再灌注损伤研究
2.肝脏疾病药物筛选和评价
3.肝脏移植研究
4.肝脏生理学研究
四、小鼠肝缺血的研究进展
1.发现了一系列保护肝脏的治疗策略，如药物、基因治疗等。

2.深入探讨了肝缺血再灌注损伤的分子机制。

3.建立了多种小鼠肝缺血模型，提高了实验的可重复性和可靠性。

五、未来研究方向和挑战
1.进一步揭示肝缺血再灌注损伤的病理生理机制。

2.开发更有效的治疗策略，以减轻肝缺血导致的损伤。

3.优化实验模型，提高实验效率和准确性。

4.探讨肝缺血在不同疾病背景下的作用及治疗策略。

综上所述，小鼠肝缺血模型在科学研究中具有重要地位，有望为肝脏疾病的治疗提供新思路。

小鼠失血性贫血模型造模方法
常用的小鼠造模法主要有眼眶后静脉丛放血法和剪尾尖或切开尾动脉法。

①眼眶后静脉丛放血法：用左手固定小鼠并轻轻对颈部施加压力，使头部静脉淤血，在突出的眼球旁分辨出后眼眶静脉，然后用少量10％可卡因滴入动物眼内，使眼部局部麻醉；右手持消毒过的毛细吸管从内侧眼角由鼻侧眼眶平行地向喉头方向轻压至后眼眶静脉丛，血液自然吸入管内，放血6～8滴(约0.5ml)。

毛细吸管内径0.5～1.0mm，可用聚氯乙烯管或玻璃毛细管制成，采血时毛细管与鼠面成45°角，在泪腺区域内，由眼内角在眼睑和眼球之间向喉头方向刺入。

若为针头，其斜面先向眼球，刺入后再转l80°角使斜面对着眼眶后界刺入深度为2～3mm，当达到蝶骨感到有阻力时，再稍后退0.1～0.5mm，边退边抽。

把取血管保持水平位，稍加旋转并后退吸引。

由于血压关系，血液即自动流入吸血管中，得到所需血管后，即除去加于颈部的压力，同时拔出采血管，以防止术后穿刺孔出血.并用消毒纱布或棉球压迫眼球止血30s。

一般20g左右体重小鼠每鼠从眼眶静脉丛抽血0.5ml。

如隔日放血1次，连续5次可形成慢性失血性贫血模型。

失血后24h 形成急性失血性贫血模型。

②剪尾尖或切开尾动脉法：小鼠剪尾放血：用手揉擦或用温水(45～50℃)加温鼠尾，使之充分充血后，用剪刀剪去尾尖约2mm，用手轻轻从尾根部向尾尖部挤压，使失血量达0.5ml左右。

溶血性贫血动物模型制作步骤及方法溶血性贫血是由于红细胞破坏增多、增速，超过造血代偿能力时所发生的一组贫血。

红细胞的平均寿命为15～20d，红细胞破坏速度远远超过骨髓的代偿潜力时，则出现贫血。

溶血性贫血发病的基本问题是红细胞寿命缩短，易于破坏。

主要通过以下三方面的机制：红细胞膜的异常变化；血红蛋白的异常；机械性因素。

1乙酰苯肼诱发的溶血性贫血大鼠模型(1)复制方法体重为180～250g的雄性大鼠，大鼠常规饲养，自由饮水和进食。

分别于造模的1, 4, 7日经腹腔注射2％乙酰苯肼(Acetylphenylhydrazine, APH)生理盐水溶液，初次注射剂量为1ml/100g体重，第2、3次剂量减半为0.5ml/100g体重。

注射乙酰苯肼后，每天上午经大鼠尾静脉取血作血红蛋白测定，并进行血红细胞计数和白细胞计数。

通过不同方法分别作网织红细胞、海氏小体(Heina body)、中性粒细胞、碱性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)、ATP 酶、琥珀酸脱氢酶(SKH)及葡萄糖-6-磷酸酶(G-6- P)染色。

(2)模型特点注射APH后第3日，模型大鼠开始出现疲乏无力，行动迟缓，嗜睡、喘息；面、眼、耳、尾苍白，体温偏低等临床表现。

肉眼观察可见肝、脾均肿大，脾肿大尤为明显，呈暗红色。

血液学观察指标：血红蛋白和红细胞呈进行性下降，网织红细胞、海氏小体和白细胞总数显著增多(显示出贫血性血象)。

注射APH 1周后，模型动物血红蛋白可下降为40～70g/L；红细胞降为(200～400)×1000000000/L；白细胞降为(30～39)×1000000000/L；网织红细胞则升为85％～95％，海氏小体升至30％～38％(正常为0)。

血细胞组织化学染色观察显示中性粒细胞AKP、ACP、ATP酶、SDH和G-6-P酶均出现不同程度异常。

(3)比较医学乙酰苯肼可引起骨髓造血干细胞生长发生变化，促使其从骨髓向脾脏转移，而在代偿期出现骨髓血细胞增多。

改善营养性贫血功能评价方法（征求意见稿）保健食品评价试验项目、试验原则及结果判定Items, Principles and Result Assessment改善营养性贫血功能1 试验项目动物实验1.1.1 体重1.1.2 血红蛋白#1.1.3红细胞比积/红细胞游离原卟啉人体试食试验1.2.1 血红蛋白1.2.2 血清铁蛋白1.2.3 红细胞游离原卟啉/红细胞运铁蛋白饱和度2 试验原则动物实验和人体试食试验所列指标均为必做项目。

针对儿童的人体试食试验，只测血红蛋白和红细胞内游离原卟啉。

在进行人体试食试验时，应对受试样品的食用安全性作进一步的观察。

3 结果判定动物实验：血红蛋白指标阳性，红细胞游离原卟啉/红细胞压积二项指标一项指标阳性，可判定该受试样品改善营养性贫血功能动物实验结果为阳性。

…人体试食试验3.2.1针对改善儿童营养性贫血功能的，血红蛋白和红细胞内游离原卟啉二项指标阳性，可判定该受试样品具有改善营养性贫血功能作用。

3.2.2针对改善成人营养性贫血功能的，血红蛋白指标阳性，血清铁蛋白、红细胞内游离原卟啉/血清运铁蛋白饱和度二项指标一项指标阳性，可判定该受试样品具有改善营养性贫血功能作用。

改善营养性贫血功能检验方法Method for the Assessment of ImprovingNutritional Anaemia Function1.动物实验原理用低铁饲料喂饲动物可形成实验性缺铁性贫血模型，再给予受试样品，观察其对血液细胞学、血液生化学等指标的影响，可判定该受试样品对改善动物营养性贫血的作用。

实验动物【健康初断乳大鼠，单一性别，每组大鼠8-12只。

低铁饲料配方：成分添加量g/kg玉米淀粉蛋清蛋白*蔗糖,玉米油（无添加剂）纤维素混合矿物盐(AIN-93G-MX)混合维生素(AIN-93G-VX)L-胱氨酸；氯化胆碱* 亦可使用EDTA处理的酪蛋白AIN-93G混合矿物盐配方矿物质添加量g or mg/kg mixCalcium carbonate anhydrousPotassium phosphate monobasic&Potassium citrate, tripotassium monohydrateSodium chloridePotassium sulfateMagnesium oxideZinc carbonate》Sodium meta-silicater9H2OManganous carbonateCupric carbonateChromium potassium sulfater12H2OBoric acid % B), mgSodium fluoride % F), mg》Nickel carbonate (45% Ni), mgLithium chloride % Li), mgSodium selenate anhydrous% Se), mg表3 AIN-93G混合维生素配方维生素添加量·g/kg mixNicotinic acidCa pantothenatePyridoxine-HClThiamin-HClRiboflavin…Folic acidBiotinVitamin B-12 (cyanocobalamin) % in mannitol)Vitamin E (all-rac-a-tocopheryl acetate)2 (500 IU/g)Vitamin A (all-trans-retinyl palmitate)2 (500,000 IU/g)Vitamin D-3 (cholecalciferol) (400,000 IU/g)【Vitamin K-1 (phylloquinone)Powdered sucrose剂量分组及受试样品给予时间实验设三个剂量组和一个低铁对照组，以人体推荐量的5倍为其中的一个剂量组，另设二个剂量组，必要时设阳性对照组（硫酸亚铁或乳酸亚铁，剂量为2ppm或2mg/(kgbw)，以Fe 元素计）。

自身免疫性溶血性贫血（NZB小鼠）动物模型自身免疫性疾病是机体对自身细胞和组织成分发生免疫反应的疾病。

最为典型的有自身免疫性溶血性贫血（autoimmune hemolytic anemia，AIHA）和全身性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus，SLE）。

自身免疫性溶血性贫血系免疫功能调节紊乱，产生自身抗体（简称AIHA补体）并吸附在红细胞表面，细胞破坏增速而引起的一种溶血性贫血。

根据抗体作用于红细胞时所需温度的不同可分为温抗体型和冷抗体型两种，前者在37℃时最为活跃，主要是IgG，少数是IgM，为不完全抗体；后者在20℃时最活跃，主要是IgM，凝集素性IgM 较多见于冷凝集素综合征，可直接在血循环中发生红细胞凝集反应，所以是完全抗体。

自身免疫性疾病的病因尚不十分清楚，因此用普通动物制作自身免疫性疾病模型来用于研究是很困难的。

NZB小鼠的AIHA是自发性的。

NZB小鼠和NZW的杂交一代（NZB×NZWF1）小鼠也可自然发生AIHA。

所以此类小鼠是研究自身免疫性疾病发生机制的最为珍贵的模型动物。

在自身免疫性疾病中，有一些免疫现象被怀疑与相应的疾病相关。

在AIHA中存在着自身红细胞抗体，这种免疫球蛋白能与红细胞结合，所以可以用抗红细胞免疫球蛋白试验（Coomb’s试验）来证实这一点。

同时让这种抗体从红细胞中溶出还能够检出它的性状。

在SLE中发现有很多的自身抗体，但最重要的是抗DNA抗体，它和自身的DNA结合产生免疫复合体（immune complex），在肾脏和血管沉着，随之又与补体结合形成复合体从而引起伤害。

这两种疾病既可以在一个人身上同时出现，也可能前后相继出现。

在NZB小鼠身上这两种疾病也是具有相关性的。

一、发现经过NZB小鼠是1948年新西兰Otago大学Bielschowskt女士培育出来的一种黑色小鼠，她将其b系和a系进行杂交，再通过近亲交配培育成NZB小鼠。

一、概述：（一）定义：由于体内贮存铁消耗怠尽，不能满足正常红细胞生成的需要时发生的贫血。

（二）流行病学：世界贫血之最WHO1985年报告，全球30%患贫血，其中50%为缺铁。

发展中国家：70%儿童、育龄妇女患贫血，其中30%有缺铁。

发达国家：30%青少年、妇女，60%孕妇患贫血，其中14%的妇女和30%青年有缺铁。

二、铁的代谢：（一）铁的分布：铁的分布图成年男性成年女性体内铁总量 50~55mg/kg 35~40mg/kg 分布：血红蛋白 66~70% 66~70%肌红蛋白 15% 15%细胞酶类 1% 1%贮存铁（以铁蛋白形式） 700~1000mg 200~400mg （二）铁的来源和吸收：1．铁的来源：1）外源性铁：从食物中摄取，1.0~1.5mg/日。

海带、木耳、香菇、肝、肉类、豆类等。

动物铁可吸收率为20%。

植物铁可吸收率为1~7%。

2）内源性铁：衰老或被破坏的红细胞，可吸收率为100%。

3）病态情况下口服铁剂、肌注铁剂、静脉输血等。

2．铁的吸收吸收部位：十二指肠及空肠上部借助：维生素C作为氧化剂，使Fe++ + →Fe++便于吸收（三）铁的运转：（四）铁的贮存：合成红细胞后多余的铁：以铁蛋白、含铁血黄素形式贮存于单核一巨噬细胞系统内。

（五）铁的排泄：正常情况下粪便<1mg/日乳汁中1mg/日汗液、尿中少量三、病因学：正常情况：铁排泄与铁吸收保持动态平衡。

四、发病机理：铁是人体必需的微量原素，存在于机体所有生存的细胞内。

参与：Hb 合成、线粒体电子传递、DNA合成、机体内各种生物效应酶的功能等。

缺铁时：1. 骨骼肌运动后乳酸易堆积，肌力下降；2. 单胺氧化酶活力下降：神经及智力发育欠佳。

3. 含铁酶活性下降：上皮细胞角化加快，粘膜萎缩，造成皮肤干燥、胃酸分必下降等。

4. 过氧化氢酶活力下降：红细胞变型性差，寿命缩短5. 可使血小板粘附功能降低，出血加重。

6. 巨噬细胞功能及脾自然杀伤细胞功能下降，机体易感染。