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两种木薯乙醇发酵废醪渣产沼气试验分析木薯是一种重要的粮食作物，在中国、亚洲及其他部分地区被广泛种植。
它的甜味在许多菜肴中使用，它被用来制作面粉、淀粉、酒精和粘合剂等产品。
随着人们对木薯的需求增加，木薯加工厂的数量也在增加，这产生了大量的木薯渣。
研究发现，木薯渣可以被用作能源资源。
本试验研究了两种木薯乙醇发酵废醪渣（简称废醪渣）的沼气产量和发酵特性。
实验使用了两种不同种类的废醪渣，分别为1号和2号。
在不同温度和不同处理方法下，测量了不同时间段的沼气产量和化学参数，以评估醪渣的沼气产生潜力。
实验结果将有助于开发木薯渣作为能源资源的潜力。
实验过程：实验分为两个部分：废醪渣1号和废醪渣2号。
它们分别被分为两个组，分别称为组A 和组B。
每个组包含了三个处理方法，包括开放式厌氧消化、密闭式厌氧消化和掺混式消化。
每个组使用的废醪渣总量为5公斤，并置于普通塑料桶中进行注射，预处理72小时。
期间按照一定的计划换液。
沼气产量有机化学参数和消化仍留在不同时间段被测量。
实验温度保持在30℃左右。
结果分析：废醪渣1号的实验结果表明，在所有处理方法中，组B的沼气产量最高，达到9760毫升，并且呈指数递增趋势，说明在一定程度上掺混处理可以促进沼气产生。
相比之下，组A的沼气产量最低，不到1000毫升。
废醪渣2号的实验结果表明，在所有处理方法中，掺混处理的沼气产量最高，达到10320毫升，开放处理沼气产量与组B差不多，密闭处理沼气产量最低。
废醪渣2号的化学参数更为稳定，现在难以做出进一步的分析。
综合分析：实验结果表明，木薯废醪渣作为沼气的原料具有很大的潜力。
其产生沼气的能力与处理方法、醪渣料源和处理温度等因素有关。
掺混式消化可以明显提高废醪渣的沼气产量。
然而，开放式消化与密闭式消化的差异并不大，因此可以根据实际情况和经济成本选择不同的处理方法去利用这种能源。
结论：本试验测试了两种不同种类的木薯乙醇发酵废醪渣的沼气产量和发酵特性。
实验室木薯酒精发酵中的菌种筛选
丁丽;朱德明;匡钰;韩志萍
【期刊名称】《安徽农学通报》
【年(卷),期】2007(014)016
【摘要】本试验利用低温双酶法糖化发酵带皮木薯淀粉来生产燃料酒精,分别比较了As2.399、As2.109、 R12 、高酒酵母以及安琪酿酒高活性干酵母5种酵母的产酒能力,得出较优菌种为高活性干酵母,并对该菌进行了利用木薯淀粉生产酒精的实验室发酵条件研究,初步得出较优条件为接种量0.5‰,培养温度为34℃,培养时间为96h.
【总页数】2页(P45-46)
【作者】丁丽;朱德明;匡钰;韩志萍
【作者单位】中国热带农业科学院农产品加工研究所,广东湛江,524001;中国热带农业科学院农产品加工研究所,广东湛江,524001;中国热带农业科学院农产品加工研究所,广东湛江,524001;中国热带农业科学院农产品加工研究所,广东湛
江,524001
【正文语种】中文
【中图分类】S632
【相关文献】
1.木薯干中铅砷汞金属离子在发酵酒精生产过程中的迁移规律研究 [J], 曹喜焕;茅伟刚;陈霞;叶忠伟;张永夏
2.海藻酸锰固定化酵母在木薯淀粉酒精发酵工艺中的应用研究 [J], 阎欲晓;粟桂娇;蒋青青
3.氢化物发生-原子荧光光谱法测定木薯干及其发酵产物酒精中铅量 [J], 侯晋;倪鹏;梅少博;张文国
4.气相色谱法和蒸馏-酒精计法测定木薯发酵液中酒精含量的比较 [J], 孙海彦;刘恩世;赵平娟;黎娟华;卢诚;王文泉;彭明
5.酶制剂在玉米木薯混合原料酒精发酵中的应用研究 [J], 郑彬;刘燕;张彩莹;史利娟;刘钺;李勇
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两种木薯乙醇发酵废醪渣产沼气试验分析木薯，又称为南芋、山芋等，是一种常见的淀粉作物。
木薯在生物质能源领域具有巨大的潜力，可以通过发酵制取乙醇和产沼气。
本试验旨在分析两种不同种类的木薯乙醇发酵废醪渣产沼气的特性和产量。
试验中使用的两种木薯废醪渣分别是粉质废醪渣和颗粒状废醪渣。
将粉质废醪渣和颗粒状废醪渣分别进行傅里叶红外光谱分析。
结果显示，两种废醪渣中都存在红外吸收峰，表明两种废醪渣均含有脂肪酸、多糖、蛋白质等。
两种废醪渣中还发现了特征性的吸收峰，表明两种废醪渣中存在的化学成分有所差异。
接下来，将两种废醪渣进行发酵处理，以制取乙醇和产沼气。
首先将废醪渣与水混合后加入酵母发酵剂，调节pH值并进行发酵。
发酵过程中，监测发酵物温度、pH值和乙醇产量变化。
发酵过程中发现，粉质废醪渣和颗粒状废醪渣均能有效地发酵产生乙醇和产沼气。
发酵物温度在一定范围内保持稳定，pH值的变化在可控范围内。
乙醇产量的变化显示，粉质废醪渣的乙醇产量略高于颗粒状废醪渣。
分析产沼气的气体成分。
气体成分分析结果显示，两种废醪渣产沼气的气体成分主要为甲烷、二氧化碳和少量的氢气和氧气。
甲烷是主要的能源组分，可以应用于能源供应领域。
综合分析试验结果得出结论，粉质废醪渣和颗粒状废醪渣均可有效发酵产沼气和乙醇。
虽然两种废醪渣的化学成分有所差异，但对乙醇和产沼气的产量影响不大。
由于木薯是一种常见的淀粉作物，利用木薯废醪渣发酵生产乙醇和产沼气可以有效利用农业废弃物并使其成为可再生能源。
这对于推动可持续发展和解决能源问题具有重要意义。
木薯酒精可行性研究报告1. 引言酒精是一种被广泛应用于工业和日常生活中的重要化学品。
然而，酒精的生产通常依赖于玉米、小麦等粮食作物。
随着人口增长和粮食需求的增加，这种生产方式面临着诸多挑战。
为了寻找一种更可持续的酒精生产方式，本研究探索了使用木薯作为原料生产酒精的可行性。
2. 木薯的特点和现状2.1 木薯的特点木薯是热带和亚热带地区常见的一种根茎类作物，具有以下特点：•木薯具有高度适应性，适合在各种土壤和气候条件下生长。
•木薯生长周期短，一般在6-12个月内就可以收获。
•木薯可以生产大量的淀粉，其淀粉含量可高达70%以上。
2.2 木薯的现状目前，木薯主要被用作食品原料，如烹饪和制作淀粉。
然而，由于木薯的淀粉含量较高，利用木薯生产酒精是一种有潜力的利用方式。
3. 木薯酒精生产工艺3.1 酒精发酵过程木薯酒精的生产过程主要包括以下几个步骤：1.原料准备：将木薯洗净、切碎，并进行蒸煮以去除有害物质。
2.糖化：将蒸煮后的木薯加入糖化酶，将淀粉转化为可发酵的糖类。
3.发酵：将糖化后的液体加入酵母等微生物，进行发酵过程，将糖类转化为酒精。
4.蒸馏：将发酵液进行蒸馏，获取高纯度的酒精。
3.2 工艺优化和问题解决木薯酒精的生产过程中存在一些工艺优化和问题需要解决：•酒精产量和纯度：通过优化糖化和发酵过程，可以提高酒精的产量和纯度。
•有害物质去除：木薯中可能含有一些有害物质，如氢氰酸。
需要采取适当的蒸煮和处理措施来去除这些物质，确保酒精的质量和安全性。
4. 可行性评估4.1 经济可行性木薯作为一种广泛种植的作物，在许多地区具有较低的种植成本。
同时，木薯酒精的市场需求也较大。
因此，在经济上，木薯酒精生产具有一定的可行性。
4.2 环境可行性相对于使用粮食作物生产酒精，使用木薯作为原料具有更好的环境可行性。
木薯的种植不仅对土壤要求较低，还能够提供更好的土壤保护和生态系统保持。
4.3 可持续性评估木薯的种植和酒精生产过程中能够产生大量的副产物，如木薯渣、木薯皮等。
实验报告一、实验目的掌握木薯分酒精发酵的基本过程与主要参数的测定方法。
熟悉基本仪器的工作原理和使用方法二、实验原理酒精发酵是在厌氧条件下，己糖分解为乙醇并释放出二氧化碳。
酒精发酵的类型有3种：即通过EMP途径的酵母菌酒精发酵、通过HMP途径的细菌酒精发酵和通过ED途径的细菌酒精发酵酵母菌通过EMP途径分解己糖生成丙酮酸，在厌氧条件和微酸性下，丙酮酸则继续分解为乙醇。
淀粉类原料的酒精发酵主要有先糖化后发酵工艺和边糖化变发酵工艺（即同步糖化发酵工艺）2种，前者发酵时间长、酒精浓度低；后者发酵时间短，酒精浓度高，而且由于没有终产物抑制，糖化酶用量也较少，因此该工艺是酒精发酵研究的重要方向之一。
本实验即采用的是同步糖化发酵工艺。
液化酶即ɑ-淀粉酶，可将淀粉液化成糊精及少量麦芽糖和葡萄糖。
糖化酶是一种淀粉外切酶，能把淀粉从非还原性未端水解a-1.4葡萄糖苷键产生葡萄糖，也能缓慢水解a-1.6葡萄糖苷键，转化为葡萄糖。
同时也能水解糊精，糖原的非还原末端释放β-D-葡萄糖。
三、实验材料1、菌种酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）GGSF162、培养基斜面菌种保藏培养基：葡萄糖20g/L,酵母浸膏10g/L，蛋白胨20g/L，琼脂20g/L，加水溶解，自然pH，于121℃下蒸汽灭菌30min。
一级种子培养基：葡萄糖20g/L,酵母浸膏10g/L，蛋白胨20g/L，自然pH，于121℃下蒸汽灭菌30min。
二级种子培养基：葡萄糖20g/L,酵母浸膏10g/L，蛋白胨20g/L，pH值自然，于121℃下蒸汽灭菌30min。
发酵培养基：量取初始全渣总糖浓度291.48g/L和滤液总糖浓度295.57g/L 的木薯粉浆液ml，接种前加入用过滤膜过滤的尿素溶液，添加量为3.0g/L。
3、主要仪器标准筛40目、立式压力蒸汽灭菌器、低速台式大容量离心机、全温度恒温调速摇瓶柜、台式冷冻离心机、生物传感分析仪SBA-40C、分光光度计、酸度计、漩涡混合器、Motic数码生物镜、灭菌锅、3000ml三角瓶2个、500ml三角瓶11个、万用电炉、0.5-10ul移液枪、100-1000ul移液枪、1000-5000ul移液枪、酸式滴定管25ml。
木薯酒精发酵实验姓名：班级：生 E-mail：8@一、实验目的掌握酒精发酵的基本原理。
二、实验原理酒精发酵是在厌氧条件下，己糖分解为乙醇并释放出二氧化碳。
酒精发酵的类型有3种：即通过EMP途径的酵母菌酒精发酵、通过HMP途径的细菌酒精发酵和通过ED途径的细菌酒精发酵酵母菌通过EMP途径分解己糖生成丙酮酸，在厌氧条件和微酸性条件下，丙酮酸则继续分解为乙醇。
而如果在碱性条件或者培养基中加有亚硫酸盐时，则发酵的主要产物是甘油，这也是工业的甘油发酵。
因此，如果要用酵母进行酒精发酵，就必须控制发酵液的微酸性条件。
三、实验材料1. 菌种酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）GGSF162. 培养基YPD（Yeast extract Peptone Dextrose，酵母浸出物）斜面培养基：葡萄糖20 g/L，酵母膏10 g/L，蛋白胨10 g/L，自然pH，115℃灭菌20min。
木薯粉发酵培养基：料水比1：2.3的木薯粉，经液化糖化，调节pH至4.5，添加相应营养盐至终浓度为MgSO4·7H2O 0.45g/L，KH2PO4 1.5g/L，CaCl2 0.2g/L，115℃灭菌20min，冷却，添加NH4Cl 0.6g/L至灭菌醪液中。
3. 溶液及试剂*2.5g/L的标准葡萄糖溶液：称取105℃左右烘干至恒重的葡萄糖2.5g，加水溶解，加浓盐酸5mL，蒸馏水定容至1000mL容量瓶。
3mol/L尿素母液：尿素18.02g定容至100mL，以微孔滤膜过滤备用。
使用时按每100g木薯粉0.25g尿素量添加。
*用NH4Cl代替尿素，使用时终浓度为0.6g/L。
*菲林甲液：34.65g硫酸铜加蒸馏水定容至500mL。
*菲林乙液：173g酒石酸钾钠加50g氢氧化钠，加蒸馏水定容至500mL。
2mol/L HCl溶液：浓盐酸5.6mL，定容至100mL容量瓶中。
质量分数为20%的HCl溶液：浓盐酸257mL，定容至500mL容量瓶中。
木薯酒精发酵工艺的研究嘿，朋友们！今天咱们来聊聊木薯酒精发酵工艺，这就像是一场微生物的超级派对。
首先呢，木薯就像是一个装满宝藏的小仓库。
它里面的淀粉啊，那可是微生物们垂涎欲滴的美食。
我们把木薯弄成浆糊一样的东西，就像是把仓库里的宝藏一股脑儿倒出来，准备分给微生物小伙伴们。
然后呢，要加入淀粉酶这个神奇的小助手。
淀粉酶就像是一把超级小剪刀，“咔嚓咔嚓”地把木薯里长长的淀粉链剪成一段一段的小碎片。
这时候的木薯浆就像是被剪成小段的彩色绳子，变得更适合微生物们享用啦。
接下来，要把环境调节得舒舒服服的，就像给微生物们准备一个超级豪华的度假酒店。
合适的温度、pH值，这就好比酒店里合适的温度和舒服的床铺一样。
要是温度不合适啊，就像让微生物们住在冰窖或者火炉里，那它们可就不乐意干活啦。
然后就轮到酵母君登场啦！酵母君就像是一群勤劳的小蜜蜂，一头扎进那些被淀粉酶处理过的木薯浆里。
它们开始大口大口地吃着那些小淀粉碎片，然后“噗噗噗”地放出二氧化碳，就像在开一场盛大的碳酸饮料派对。
在发酵的过程中，整个容器就像是一个热闹的小宇宙。
酵母君们忙得热火朝天，不断地把淀粉转化成酒精。
这个时候的木薯浆，就像是一个正在慢慢变成魔法药水的神奇液体，酒精含量一点点地增加，就像小魔法师在不断地往药水里添加魔力一样。
随着时间的推移，发酵就像一场马拉松比赛。
酵母君们可不能中途偷懒，得一直努力地工作。
要是有其他杂菌跑进来捣乱，那就像是比赛的时候突然冒出来几个捣蛋鬼，会把整个发酵过程搞得一团糟，所以要小心地防范这些“坏家伙”。
等到发酵到一定程度，就像是到了魔法药水大功告成的时候。
这时候的液体里已经有了不少酒精，就像宝藏已经被微生物们成功挖掘出来一样。
然后呢，我们要把这些发酵好的液体进行分离。
这就像是从一堆宝贝里把真正的珍珠挑出来一样，把酒精从其他的杂质中分离出来。
最后，经过一系列的处理，纯净的木薯酒精就诞生啦。
这就像是从一个奇妙的魔法世界里得到了一瓶珍贵的魔法药剂，可以用在好多好多地方呢。
实验名称木薯酒精发酵院系生物与化学工程学院专业生物工程班级生物121学号201200606029姓名翁振耀指导老师赵东玲二〇一五年七月十二日目录1 绪论 (1)1.1 实验目的 (1)1.2 实验原理 (1)2 材料与方法 (2)2.1 实验材料 (2)2.1.1菌种 (2)2.1.2 培养基 (2)2.1.3 主要药品与试剂 (2)2.1.4主要仪器设备 (3)2.1.5其他辅助仪器 (3)2.2 方法与步骤 (4)2.2.1试剂配制 (4)2.2.2培养基配制 (4)2.2.3酿酒酵母GGSF16培养 (5)2.2.4分析方法 (5)3 实验记录与计算 (7)3.1 记录发酵时间流程 (7)3.2 称重数据 (7)3.3 计算方法 (9)3.3.1还原糖的计算 (9)3.3.2 总糖的计算 (10)3.3.3测酒精度 (11)3.3.4发酵效果的判定指标 (11)4 结果与讨论 (11)4.1 结果 (11)4.1.1计算结果 (11)4.1.2发酵效果指标 (12)4.1.3 CO2失重作图 (12)4.2讨论 (12)4.2.1 结果讨论 (12)4.2.2 误差分析 (12)4.2.3 实验收获 (13)致谢 (13)参考文献 (14)附录 (14)1 绪论1.1 实验目的1. 掌握木薯淀粉液化、糖化原理。
2. 掌握酒精发酵的基本原理。
3. 掌握总糖、还原糖及酒度的测定原理和方法。
1.2 实验原理酒精发酵是在厌氧条件下，己糖分解为乙醇并释放出二氧化碳。
酒精发酵的类型有3种：即通过EMP途径的酵母菌酒精发酵、通过HMP途径的细菌酒精发酵和通过ED途径的细菌酒精发酵[4]。
酵母菌通过EMP途径分解己糖生成丙酮酸，在厌氧条件和微酸性条件下，丙酮酸则继续分解为乙醇。
如果在碱性条件或者培养基中加有亚硫酸盐时，则发酵的主要产物是甘油，这也是工业的甘油发酵。
因此，如果要用酵母进行酒精发酵，就必须控制发酵液的微酸性条件。
2 材料与方法2.1 实验材料2.1.1菌种酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）GGSF162.1.2 培养基（1）YPD液体培养基：用于种子培养。
（2）木薯粉发酵培养基：用于酵母发酵。
2.1.3 主要药品与试剂表2-1 主要药品与试剂Table 2-1 Main chemicals and reagents产品名称规格产地/厂家葡萄糖AR 天津市科密欧化学试剂有限公司酵母浸膏BR 广东环凯微生物科技有限公司细菌学蛋白胨BR 广东环凯微生物科技有限公司磷酸二氢钾AR 广东光华化工厂有限公司无水氯化钙AR 广东汕头市西陇化工厂氯化铵AR 广东光华化学厂有限公司七水硫酸镁AR 广东台山粤侨试剂塑料有限公司氢氧化钠AR 广州化学药剂厂盐酸AR 广东汕头市西陇化工股份有限公司硫酸AR 广东汕头市西陇化工股份有限公司酒石酸钾（C4H4O6KNa·4H2O）AR 天津市大茂化学试剂厂硫酸铜(CuSO4·5H2O) AR 天津市大茂化学试剂厂亚甲基（C16H18ClN3S·3H2O）AR 天津市科密欧化学试剂有限公司表2-2 酶制剂Table 2-2 Enzyme preparation酶制剂规格液化酶40000 U/mL糖化酶100000 U/mL2.1.4主要仪器设备表2-3 主要仪器设备Table2- 3 Main instruments and equipments仪器名称规格产地/厂家恒温培养振荡器ZHWY-2112C 上海智城分析仪器制造有限公司电子天平T－500 美国双杰兄弟（集团）有限公司全温度恒温调速摇床柜HWY-2112 上海智城分析仪器制造有限公司电子天平JJ200 常熟市双杰测试仪器厂电子分析天平AB104－N 梅特勒－托利多仪器（上海）有限公司酒精浓度计MC 冀州市耀华器械仪表厂全自动新型鼓风干燥箱ZFD－5230 上海智城分析仪器制造有限公司立式压力蒸汽灭菌器LS-B35L-I 江阴滨江医疗设备有限公司立式压力蒸汽消毒器628B-2 铁岭市医疗器械总厂不锈钢电热蒸馏水器15KW－20L 上海博讯实业有限公司医疗设备厂光波炉YS－A007B 广东省茂名市亚洲电器有限公司垂直流超净工作台2HJH-1112C 上海智城分析仪器制造有限公司2.1.5其他辅助仪器（1）40目筛：筛木薯粉（2）纱布及脱脂棉：总糖测定发酵液预处理过滤用及还原糖测定过滤（3）500mL三角瓶：20个（包扎灭菌），用于发酵（4）纱布及牛皮纸、保鲜膜：用于三角瓶包扎（5）200mL量筒：2个，要包好灭菌，用于分装发酵培养基（一用一备）（6）玻璃棒：2根，包好灭菌，用于调发酵液pH值（一用一备）（7）200mL烧杯：2个，包好灭菌，用于分装发酵培养基（一用一备）（8）100mL量筒：2个，用于量取发酵液，收集酒精（9）酒精计：一个，规格0-10%，用完要用水洗好，擦干（10）水银温度计：测酒精时量温度，用完要用水洗好（11）250mL三角瓶：4个，用于总糖消化和测还原糖（12）105cm回流管：带塞（13）电炉：用于滴糖加热（14）pH试纸：用于测发酵培养基pH(4.5)值，测总糖调pH(微酸性)（15）电子天平：规格0-500克，用于测摇瓶总重（二氧化碳失重）（16）精馏装置：包括500mL精馏瓶，用于酒精测定（17）250mL容量瓶：用于总糖及还原糖测定的试样制备（18）5L 三角瓶:一个，木薯粉液化和糖化（19）注射器及过滤除菌膜（20）25mL滴定管2.2 方法与步骤2.2.1试剂配制（1）2.5g/L的标准葡萄糖溶液：配取3L，分三次配，每次配1L。
先称取20.0g瓶装葡萄糖放入称量瓶内于105℃烘4h后，置于干燥器中冷却，再分三次称量，每次准确称取烘干样品2.5000g于小烧杯中，加适量水溶解，再加5mL浓盐酸，搅拌混匀后引流，加水定容至1000mL。
再重复配两次。
（提前2-3天配好备用。
）（2）NH4Cl：使用时终浓度为0.6g/L。
称取1.8g NH4Cl固体，用适量无菌水溶解后，在超净台中用注射器和过滤膜操作，将溶解液过滤除菌待用。
（3）菲林甲液：配3L，分三次配制，每次配1L。
每次称取69.3g硫酸铜（含5个结晶水）加蒸馏水定容至1000mL。
再重复配两次。
（4）菲林乙液：配3L，分三次配制，每次配1L。
每次称346.0g酒石酸钾钠加100.0g 氢氧化钠，混溶于适量蒸馏水后，加蒸馏水定容至1000mL。
再重复配两次。
（5）质量分数为20%的HCl溶液(总糖的测定-消化)：量取36%-38%浓盐酸556.0mL于1L 容量瓶，加蒸馏水定容至1000mL。
（6）2mol/L H2SO4溶液(调发酵液pH)：吸取浓硫酸（18M）11.1mL缓慢加入装有适量水的小烧杯中，冷却后引流到100mL容量瓶，加蒸馏水定容至100mL。
（7）200g/L NaOH溶液(总糖的测定-消化)：称取100.0g氢氧化钠于小烧杯中溶解，引流到500mL容量瓶，加蒸馏水定容到500mL。
（8）2mol/L NaOH溶液(酒精度测定)：称取8.0g氢氧化钠于小烧杯中溶解，引流到100mL 容量瓶，加蒸馏水定容到100mL。
（9）亚甲基兰溶液（1%，w/v）: 称取 1.0g亚甲基蓝，在小烧杯中加水溶解，引流到100mL容量瓶并定容至100mL。
2.2.2培养基配制（1）YPD液体培养基：配制500mL。
称取：葡萄糖10g，酵母膏5g，蛋白胨5g，三者混合煮溶解后定容到500mL。
自然pH，分装到三个250mL三角瓶（每瓶150mL）和4支试管（每支5mL）。
115℃灭菌20min。
（2）YPD Agar:量取50mL液体YPD，加入1g琼脂，混合后装入100mL三角瓶，115℃灭菌20min。
冷却到适合温度后趁热倒试管斜面。
（3）木薯粉发酵培养基：称取过40目筛的木薯粉429.6g加入5L三角瓶，以料水比1：3的比例混合于60℃的自来水中，添加相应营养盐为MgSO4·7H2O 1.35g，KH2PO4 4.5g，CaCl20.6g，调浆定容到3L, 按10U/g木薯粉的量加入液化酶，搅拌混匀后60℃下保温30min糊化，然后迅速升温到97℃，保温液化1.5h后，115℃灭菌30min.冷却到室温（30℃左右），添加过滤除菌的NH4Cl全部溶液（用1.8g固体NH4Cl配成），摇匀，滴加2mol/L H2SO4调pH至4.5，按150U/g木薯粉加入糖化酶。
搅拌均匀后，取发酵液60mL置于三角瓶中分别取样测定初总糖和初还原糖。
2.2.3酿酒酵母GGSF16培养酵母菌种培养流程：实验室保藏菌种→斜面活化→一级种子培养→二级种子培养→接种发酵（1）斜面活化：无菌操作将实验室保存的酵母GGSF16接种到斜面培养基上，32℃培养1d-2d。
（2）一级种子培养：挑取活化后健壮的菌种取一环，接种（二级种子接种前8-10小时接）到液体试管培养基中，32℃培养。
（3）二级种子培养：（接种发酵液前8小时）将一级种子按体积比1%接种到三角瓶中。
（4）接种发酵：按接种量为10％，接种酿酒酵母GGSF16至液化糖化后的木薯培养基中。
搅拌混匀后分装到19个500mL三角瓶。
每瓶加150mL，用透气膜、保鲜膜封口，第一次称重，于33℃，转速为120r/min，摇床培养24h，培养期间定时间隔称重。
发酵结束后，测定酒精度，残总糖和残还原糖。
2.2.4分析方法（1）还原糖的测定[3]①试样的制备：称取木薯发酵液试样10mL于250mL容量瓶定容至250mL，用纱布夹脱脂棉过滤，滤液摇匀备用。
②斐林试剂所消耗葡萄糖标准溶液的体积标定A.预备试验：分别吸取费林甲液、乙液及标准葡萄糖液各5mL于250mL三角瓶内，加20mL蒸馏水，摇匀，加入数颗玻璃珠，在电炉上加热沸腾，加入亚甲基兰溶液（1%，w/v）2滴，盖住表面皿，保持沸腾以避免空气中氧气的干扰，在沸腾状态下用标准葡萄糖液滴定至蓝色消失为止。
记录标准葡萄糖液消耗的总体积。
B.正式试验：吸取费林甲液、乙液及标准葡萄糖液各5mL于250mL三角瓶内，加水20mL，加入少于预备试验1毫升的2.5g/L标准葡萄糖溶液，加入玻璃珠数颗，置电炉上沸腾2min，滴入亚甲基兰2滴，沸腾状态下1min内以标准葡萄糖溶液滴定，至溶液蓝色刚好消失。
记录标准葡萄糖液消耗的总体积，并做平行试验，使两次滴定结果之差在0.1mL 之内。
③试样还原糖的测定A.预备试验：吸取费林甲液、乙液及待测液各5mL于250mL三角瓶内，加20mL水，摇匀，加入数颗玻璃珠，在电炉上加热沸腾，加入亚甲基兰溶液2滴，盖住表面皿，保持沸腾以避免空气中氧气的干扰，在沸腾状态下用标准葡萄糖液滴定至蓝色消失为止。
