下载文档原格式
篇一：酵母菌酒精发酵实验报告实验方案酵母菌酒精发酵的条件研究学院（部）：生物与化学工程学院专业：生物工程学生姓名：鑫学号：11018150 班级：生物工程二班指导教师：肖一、实验目的1、学会实验的设计和操作过程2、找到酵母菌发酵时的最优条件二、培养基和实验方法及材料的确定 1、玉米粉的糖化方法玉米粉的糖化采用双酶法，其工艺流程如下玉米粉→加水→液化→糖化→发酵→蒸馏→成品酒精试验中，发酵培养按照三角瓶100ml培养。
本次工做20组是要，共需发酵液20*100=2000ml。
培养液按照100g玉米粉、300ml水。
所以共需玉米粉700g。
液化：取１００ｇ玉米粉，加入３００ｍｌ的水，液化温度为９０℃，ｐｈ值为５．５，液化时间为３．５ｈ，液化酶的添加量为０．０３５ｇ／１００ｇ玉米粉糖化：糖化时的工艺条件为：糖化温度为５８℃，ｐｈ值为４．５，糖化时间为３．５ｈ，糖化酶的添加量为０．３ｇ／１００ｇ玉米粉。
2、活化培养基本实验在进行实验时采用察氏(czapck)培养基的配制，配方如下表一：表一3、扩大培养基扩大培养仍然用察氏(czapck)培养基，由于要用液体的，所以将其中的琼脂配料去掉。
4、发酵培养基糖化液稀释至l0%浓度，添加辅料（硫酸铵0.4%），ph5.5灭菌三、培养基的制备及酵母的活化1、准备酵母母菌一支常温下存放一天，增加菌种的活力。
在母菌存放期间制作各时期培养基2、准备固体培养基（察氏培养基）50ml，做成8支试管斜面，扩大培养基800ml（做扩大培养时使用）。
做成8个三角瓶，每瓶200ml。
120℃灭菌30min。
3、发酵液的制备（1）玉米粉的筛选实验前准备粉碎后的玉米粉700g。
（2）玉米粉的液化按照100g玉米粉、300ml水的配比对玉米粉进行液化，液化方案上文已经交代。
在1000ml 烧杯里，或者500ml烧杯分两次，水浴液化。
器材：烧杯500ml两个，玻璃棒一个，水浴锅一个，糖化酶0.225g 步骤：1、将糖化酶，玉米粉，水按照比例配置好在烧杯里。
「酵母菌酒精发酵实验方案」实验目的：本实验的目的是通过观察酵母菌在葡萄糖溶液中的发酵作用，了解酵母菌产生的酒精，并通过实验验证酵母菌是由于呼吸过程中产生的乙醛酸和二氧化碳的排出。
实验器材：1.酵母菌2.葡萄糖溶液3.饮用水4.试管5.实验台6.显微镜7.盖玻片8.滴管9.移液管10.测量杯实验步骤：1.准备酵母菌溶液。
将适量的酵母菌和葡萄糖溶液混合，搅拌均匀。
注意酵母菌数量不宜过多，否则会影响实验的效果。
2.将混合溶液倒入试管中，不要盖紧。
3.观察观察酵母菌发酵的现象。
可以用肉眼观察到溶液中产生气泡，并且试管中有一股酒精味道。
4.取出一部分发酵液，放在显微镜下观察。
可以看到液体中有大量的活跃酵母菌和气泡。
5.用滴管吸取一些发酵液，滴于甲醇中，观察是否有白色沉淀生成。
实验证明，白色沉淀是乙醛酸的反应产物，进一步证明酵母菌进行酒精发酵。
实验结果和讨论：在葡萄糖溶液中加入适量的酵母菌后，可以观察到发酵反应的现象。
酵母菌通过发酵过程产生大量的二氧化碳气体和酒精，导致溶液中产生气泡和特有的酒精味道。
通过显微镜观察发现，溶液中有大量的活跃酵母菌和气泡。
酵母菌在发酵过程中通过进行呼吸作用，消耗葡萄糖为能量，并同时生成二氧化碳和乙醇。
这一过程实验证明了酵母菌是通过产生酒精来发酵的。
将发酵液滴入甲醇中，观察到白色沉淀的生成，进一步证明了酵母菌进行酒精发酵的结果。
白色沉淀为乙醛酸的反应产物，进一步确认了酵母菌通过酒精发酵生成酒精的过程。
结论：通过本实验可以得出结论，酵母菌在葡萄糖溶液中进行酒精发酵，同时产生二氧化碳和酒精。
实验证明了酵母菌通过生成乙醛酸和二氧化碳来发酵，进一步验证了酒精发酵的过程。
注意事项：1.在实验中使用的酵母菌和葡萄糖溶液要保持无菌状态，避免其他细菌的污染影响实验结果。
2.在观察过程中要小心操作，避免溶液外溢或滴到其他地方。
3.实验后要彻底清洗实验器材，以免下次使用时受到污染。
淀粉质原料酒精发酵实验（综合实验）实验指导书本实验是在生物工艺实验单元操作基础上，综合运用酒精发酵工艺学课程中所学的基本原理和发酵方法，对淀粉质原料酒精发酵过程进行全程监测，模拟工业生产上的整个过程，因此是一个综合性很强的实验。
要求学生较灵活地运用基本知识，解决实验过程中出现的问题，并在实验后系统总结获得全面提高。
一、实验目的1、了解淀粉质原料酒精发酵的全过程。
2、掌握酒精发酵过程中各种监控数据的检测方法。
二、实验内容1．准备：(1) 发酵用三角瓶和蒸馏装置的准备。
(2) 温度计和酒精计的准备。
（3）粉碎机的使用方法的熟悉。
２．玉米的粉碎３．酒精发酵试验（1）调浆（加水比1：3，液化酶添加量为8U/g原料）（2）糊化（90℃，90~120min）（3）活性干酵母的活化（在100mL2%灭菌糖液中加入1~2g干酵母，30~33℃活化30~60min）。
（4）糖化（糊化醪冷却至60~62℃，添加120~150U/g原料的糖化酶，30~60min）。
（5）发酵（糖化醪冷却至30~33℃，按原料量的0.1%添加活性干酵母，发酵时间控制在60h左右）。
（6）蒸馏（将发酵醪全部或取100mL进行蒸馏）。
（7）计算原料出酒率。
三、分析方法1．发酵成熟醪酒精含量的测定：蒸馏——酒精计法。
2．发酵成熟醪酸度的测定：酸碱滴定法。
3．发酵成熟醪残总糖的测定：酸水解——斐林法。
4．发酵成熟醪残还原糖的测定：斐林法。
5. CO2释放量的测定：称重法。
四、知识准备（1）酒精发酵的基本理论和方法。
（2）常规发酵工业分析方法。
五、实验报告要求（1）绘制酒精发酵过程中CO2的释放量曲线图。
（2）计算原料出酒率并对发酵结果进行评价。
生物工程专业综合（设计）性大实验报告书(酒精发酵实验)学生姓名：***学号：**********班级：生工2102专业：生物工程指导教师：***生物工程专业设计（综合）实验安徽工程大学实验报告书学生姓名：吴丁柱学号：3102106216 专业班级：生工2102实验类型：□验证■综合□设计□创新实验日期：2013.12.17 实验成绩：一、当前酒精生产工艺的技术进展及现状1.1现状酒精是广泛应用在食品、化工、医药、国防和科研等各个领域的重要有机工业原料。
中国工业化生产酒精始于1900年俄国人在哈尔滨建的酒精厂，但发展非常缓慢，新中国成立时，我国酒精产量不到1万吨，专业性酒精厂生产规模大都是千吨小厂，基础十分薄弱。
五十多年来，特别是改革开放以来，随着国民经济的发展，我国酒精生产取得了巨大的发展。
现有酒精生产企业450多家，产量在3万吨以上的共26家，其中30万吨以上的3家、10～20万吨7家、3～5万吨9家。
2005年酒精产量达368.13万千升（按年销售收入500万元以上的企业计）（不包括自产自用的酒精），比2004年增长33.6%，居世界第三位。
2004年出口酒精74.44万吨比2003年增2.28倍，每吨酒精创汇418.73美元。
进口3433吨，其中变性酒精1802.18吨，用汇686.03美元/吨。
酒精生产实现了连续化、使用专用酶制作和商品酒精酵母，固定化酒精酵母，淀粉利用率达到90%以上，淀粉出酒率好的企业可以达到55~56%，（96°V/V）原料出酒率可到40~40.88%。
随着食用酒精和工业酒精国家标准的4次制订、修订和实施，高纯度特级酒精企业的日益增多，标志着我国酒精生产技术和产品质量水平得到了很大的提高。
但是，国外酒精生产技术自石油危机和美国大力发展汽油醇以来，有了更快的进步，特别是在节能、综合利用和自动化等方面，与我国拉开了差距。
我国每吨酒精平均能耗酒精800公斤以上，世界水平为300~400公斤。
生物工程专业综合（设计）性大实验报告书(酒精发酵实验)学生：吴丁柱学号：3102106216班级：生工2102专业：生物工程指导教师：胜华工程大学实验报告书学生：吴丁柱学号：3102106216 专业班级：生工2102实验类型：□验证■综合□设计□创新实验日期：2013.12.17 实验成绩：一、当前酒精生产工艺的技术进展及现状1.1现状酒精是广泛应用在食品、化工、医药、国防和科研等各个领域的重要有机工业原料。
中国工业化生产酒精始于1900年俄国人在建的酒精厂，但发展非常缓慢，新中国成立时，我国酒精产量不到1万吨，专业性酒精厂生产规模大都是千吨小厂，基础十分薄弱。
五十多年来，特别是改革开放以来，随着国民经济的发展，我国酒精生产取得了巨大的发展。
现有酒精生产企业450多家，产量在3万吨以上的共26家，其中30万吨以上的3家、10～20万吨7家、3～5万吨9家。
2005年酒精产量达368.13万千升（按年销售收入500万元以上的企业计）（不包括自产自用的酒精），比2004年增长33.6%，居世界第三位。
2004年出口酒精74.44万吨比2003年增2.28倍，每吨酒精创汇418.73美元。
进口3433吨，其中变性酒精1802.18吨，用汇686.03美元/吨。
酒精生产实现了连续化、使用专用酶制作和商品酒精酵母，固定化酒精酵母，淀粉利用率达到90%以上，淀粉出酒率好的企业可以达到55~56%，（96°V/V）原料出酒率可到40~40.88%。
随着食用酒精和工业酒精国家标准的4次制订、修订和实施，高纯度特级酒精企业的日益增多，标志着我国酒精生产技术和产品质量水平得到了很大的提高。
但是，国外酒精生产技术自石油危机和美国大力发展汽油醇以来，有了更快的进步，特别是在节能、综合利用和自动化等方面，与我国拉开了差距。
我国每吨酒精平均能耗酒精800公斤以上，世界水平为300~400公斤。
随着我国燃料乙醇的发展，引进、消化、吸收、创新，我国酒精生产技术正在得到飞跃发展和提高，深信21世纪初期一定可以赶上世界先进水平。
酒精发酵实验目的：让学生理解糖的无氧酵解途径并了解厌氧发酵的工艺过程，掌握测定发酵醪液酒精含量的方法。
实验原理：酒精发酵是典型的糖的无氧酵解途径。
在无氧的培养条件下，酵母菌利用糖发酵为酒精和二氧化碳的作用即为酒精发酵，反应式为：C 6H12O6→ 2C2H5OH ＋ 2CO2通过对发酵醪液酒精含量的测定，可以判断酒精发酵的进程。
实验材料及仪器发酵罐；酒精蒸馏装置；酒精表0-12%；甘薯粉；活性干酵母；BF-7658淀粉酶；糖化酶。
实验过程1、糖液制备（1）淀粉液化：用70-80℃的温水调17%粉浆1000毫升，立即加入BF-7658淀粉酶（4000u）2.5%，于电炉上加热至90-93℃保温5-10分钟，继续加热煮沸1小时，加热时需补充水分。
（2）淀粉糖化：将煮沸的醪液冷却至60-62℃，加入糖化酶（50000u）0.3%糖化30分钟，糖化完毕入发酵罐灭菌备用。
2、酒精发酵（1）活性干酵母活化：按糖液量0.5%称取活性干酵母，用2%蔗糖溶液，38-40 ℃保温活化30分钟。
（2）接种发酵：将活化好的酵母接入到发酵罐中，35-38℃培养发酵68-72小时。
（3）酒精含量测定：观察并记录酒精发酵工艺过程。
发酵醪温度每小时测1次，2小时记录1次；发酵醪液酒精含量每间隔5小时测定1次并记录。
注意事项（1）蒸馏过程中乙醇蒸汽的逃逸，会严重影响测定结果的准确性。
因此蒸馏前必须仔细检查仪器各连接处是否严密。
若蒸馏中出现漏气，必须重新测定。
（2）蒸馏时，应先小火加热，待溶液沸腾后再慢慢用大火焰。
对于易产生泡沫的酒样加少量消泡剂。
但是加过消泡剂的试样蒸馏残液，不能用来作浸出物的测定。
发酵时间(h) 酒精生成量(g/L)0 05 7.16 10 19.7 15 33.26 20 43.97 25 48.66 30 51.08 35 54.08 40 57.32 45 61.23 50 65.14 55 67.94 60 70.94 65 73.55 70 76.38。
生物工程专业综合（设计）性大实验报告书学生姓名：徐从富学号：3092106237班级：生工2092专业：生物工程指导教师：魏胜华2012年12月安徽工程大学实验报告书学生姓名：徐从富学号：3092106237专业班级：生物工程实验类型：□验证□综合□设计□创新实验日期：2012/12/19——2012/12/26实验成绩：（酒精发酵实验为例需学生完成以下主要内容）一、当前酒精生产工艺的技术进展及现状二、实验目的三、实验原理3.1酒精发酵工艺原理3.2酒精生产工艺流程及工艺参数选择与依据3.3酒精发酵工艺流程（方框图）3.3糖化工艺参数选择3.4发酵工艺参数选择四、材料与方法4.1原料、药品以及仪器设备4.2分析测定方法五、实验结果与分析六、讨论七、参考文献八、要求1.遵守实验室纪律，保持实验室卫生，每天实验结束后将实验室彻底打扫，离开实验室时保证水、电的安全，并注意关闭窗，门。
2.实验态度严肃，认真，实验前要对实验所用仪器、设备的使用方法和注意事项弄清楚，熟悉实验方法，购买所需原料、试剂，配制所需的溶液，实验前后认真清洗仪器设备。
3.实验采用分组方式，实验内容按任务书要求完成，如更改必须在指导教师同意下进行。
4.严格按照工艺流程和工艺参数进行操作；5.值班时定时取样，按标准分析方法，进行认真测定；填好试验纪录表，试验数据真实。
6.对原始记录进行必要的分析、整理。
包括实验数据与理论值的比较，产生误差的原因及减小误差的方法，实验故障原因的分析等。
总结试验结果，认真完成综合实验报告并附原始记录表，用打印纸打印装订。
7.总结本次实验的体会和收获。
8.实验报告应简单明了，语言通顺，图表数据齐全规范。
生物工程专业设计（综合）实验任务书设计（综合）实验名称：生物工程专业设计（综合）大实验实验时间：第十六～十九周实验内容：淀粉质原料发酵生产酒精大实验1.完成淀粉质原料成分的测定2.完成糖化试验及过程参数的测定；3.完成发酵试验及过程参数的测定；4.完成酒精蒸馏及参数的测定；5.计算酒精的得率。
化学实验教案酒精发酵反应的实验设计化学实验教案：酒精发酵反应的实验设计本实验旨在通过观察酵母在含糖溶液中的发酵作用来了解酒精发酵反应的原理和条件。
实验材料：1. 平底烧杯或实验瓶2. 醒发的酵母3. 葡萄糖或者果糖溶液4. 温度计5. 纱布或气球6. 实验室秤7. 实验室计时器8. 实验笔记本实验步骤：第一步：制备酵母悬浊液1. 取一小块酵母，用温水洗净。
2. 将洗净的酵母加入50毫升温水中，轻轻搅拌，直至完全溶解。
第二步：制备实验溶液1. 取平底烧杯或实验瓶，加入一定量的葡萄糖或果糖溶液（浓度约为5%），搅拌均匀使糖溶解。
第三步：观察和记录1. 使用实验室秤称取适量酵母悬浊液（约2克），加入实验溶液中。
2. 用温度计测量实验溶液的初始温度，并记录下来。
3. 盖上纱布或用气球封口，以允许二氧化碳的释放。
4. 在一定时间间隔内，观察实验溶液中的变化并记录下来，包括气泡的产生情况、液面的变化等。
实验结果：实验结果可以根据以下几个方面进行观察和记录：1. 发酵速率：观察实验溶液中气泡的产生情况。
记录气泡的数量和大小，并可以通过记录气泡产生的频率来评估发酵速率。
2. 产物和副产物：观察实验溶液的液面变化，以及发酵结束后对产物进行进一步的鉴定和分析，例如可以使用酒精计量器测量产生的酒精含量。
3. 温度对发酵的影响：可以通过设置不同的实验组，在不同温度条件下进行实验，分析温度对发酵速率的影响。
4. 酵母浓度对发酵的影响：可以通过设置不同的实验组，在不同酵母浓度条件下进行实验，分析酵母浓度对发酵速率的影响。
实验分析和讨论：1. 根据实验结果，计算并比较不同实验组中的发酵速率和产物产量。
观察不同变量对发酵反应的影响，例如温度和酵母浓度，进一步探讨反应速率的关系。
2. 分析实验中出现的问题和误差，并提出改进实验方法的建议。
3. 探讨酒精发酵反应的应用，例如酿酒、面包发酵等。
4. 总结实验的重点和实验设计的合理性，以及对化学实验的意义和应用的思考。
生物工程专业综合（设计）性大实验报告书学生姓名：徐从富学号：3092106237班级：生工2092专业：生物工程指导教师：魏胜华2012年12月安徽工程大学实验报告书学号：3092106237 专业班级：生物工程实验类型设计□创新实验日期：2012/12/19——2012/12/26 实验成绩：（酒精发酵实验为例需学生完成以下主要内容）一、当前酒精生产工艺的技术进展及现状二、实验目的三、实验原理3.1 酒精发酵工艺原理3.2酒精生产工艺流程及工艺参数选择与依据3.3酒精发酵工艺流程（方框图）3.3糖化工艺参数选择3.4发酵工艺参数选择四、材料与方法4.1 原料、药品以及仪器设备4.2分析测定方法五、实验结果与分析六、讨论七、参考文献八、要求1.遵守实验室纪律，保持实验室卫生，每天实验结束后将实验室彻底打扫，离开实验室时保证水、电的安全，并注意关闭窗，门。
2.实验态度严肃，认真，实验前要对实验所用仪器、设备的使用方法和注意事项弄清楚，熟悉实验方法，购买所需原料、试剂，配制所需的溶液，实验前后认真清洗仪器设备。
3.实验采用分组方式，实验内容按任务书要求完成，如更改必须在指导教师同意下进行。
4.严格按照工艺流程和工艺参数进行操作；5.值班时定时取样，按标准分析方法，进行认真测定；填好试验纪录表，试验数据真实。
6.对原始记录进行必要的分析、整理。
包括实验数据与理论值的比较，产生误差的原因及减小误差的方法，实验故障原因的分析等。
总结试验结果，认真完成综合实验报告并附原始记录表，用打印纸打印装订。
7.总结本次实验的体会和收获。
8.实验报告应简单明了，语言通顺，图表数据齐全规范。
生物工程专业设计（综合）实验任务书设计（综合）实验名称：生物工程专业设计（综合）大实验实验时间：第十六～十九周实验内容：淀粉质原料发酵生产酒精大实验1.完成淀粉质原料成分的测定2.完成糖化试验及过程参数的测定；3.完成发酵试验及过程参数的测定；4.完成酒精蒸馏及参数的测定；5.计算酒精的得率。
实验要求：1.完成实验设计报告书；2.完成实验记录表；3.完成实验总结报告；4.上述报告用A4纸打印装订成册打印要求：标题小4黑体字，正文小4楷体，单倍行距，页眉小5宋体（单页：生物工程专业设计（综合）实验，双页酒精发酵实验报告）。
注：实验报告、实验总结报告严禁雷同。
附：实验设计报告书内容格式（见实验指导书）附录：1.实验原始记录表2.实验过程参数选择记录酒精发酵生产设计（综合）实验原始记录表姓名：徐从富学号：3092106237实验时间：12/19——12/26同组成员：范振辉、汪加伟、郑晓丽、申珅、范捷测定指标1.** （填写你实验中所用的淀粉原料）淀粉主要质量控制指标的测定表1 淀粉质原料水分和淀粉含量表2 淀粉质原料糖化过程指标参数表3 糖化醪接种指标参数表4 糖化醪发酵过程指标参数注：1.酵母形态可语言描述，也可使用显微照片单独记录；计算1g纯淀粉（或1g淀粉质原料）的产酒精的理论值，并计算其产酒精的效率。
一淀粉质原料的水分测定水分在工业发酵中是一个极为重要的分析项目。
原料中水分，对原料的品质与保存关系甚大。
水分过高，原料在贮藏时容易发霉变质，影响原料的利用价值。
水分测定方法一般采用烘干法，即在100-105℃烘箱中直接干燥。
1 原理样品中的水分受热后产生的蒸汽压，高于空气在电热干燥箱中的分压，水分便从样品中挥发出来。
样品干燥的速度取决于这个压差的大小，在此条件下失去的主要是试样中的游离水。
试样的水分一般是指在100℃左右直接干燥的情况下，所失去的总量。
在此条件下失去的重量不仅是水分，还有微量的挥发性物质。
2 仪器与设备 （1）分析天平 （2）称量瓶 （3）干燥器 （4）电热恒温干燥箱 3 测定步骤准确称取约2克试样，置入经100-l05℃干燥恒重后的称量瓶中，在100-105℃烘箱中干燥3-4小时，取出，置入干燥器中冷却至室温，称重。
再于相同温度下干燥1小时左右，同上操作，直至恒重。
计算%100%0121⨯--=W W W W ）水分（式中 W0：称量瓶重（g ）W1：干燥前试样与称量瓶重（g ） W2：干燥后试样与称量瓶重（g ） 4 说明（1）原料的水分测定一般需采用100-105℃烘箱中直接干燥，其结果较为准确。
对生产过程中的水分快速测定，可采用更高温度下干燥(如120-140℃)或红外灯下干燥，以缩短分析时间。
（2）测定水分时，称量恒重指试样连续两次干燥后，称量之差不超过2mg 。
5 参考书（1）天津轻工业学院等，《工业发酵分析》，轻工业出版社，1980年二 原料中粗淀粉的测定1 原理淀粉经酸或水解生成葡萄糖：（C 6H 10O 5）n+nH 2OnC 6H 12O 6所生成的葡萄糖用斐林试剂测定。
斐林试剂由甲、乙液组成。
甲液为硫酸铜溶液，乙液为氢氧化钠与酒石酸钾钠溶液。
平时甲、乙液分别贮存，测定时甲、乙液等体积混合。
混合时，硫酸铜与氢氧化钠反应，生成氢氧化铜沉淀：2NaOH+CuSO 4=Cu(OH)2↓+Na 2SO 4所生成的氢氧化铜沉淀与酒石酸钾钠反应，生成酒石酸钾钠铜络合物，使氢氧化铜溶解：Cu(OH)2+CHOHCOOK COOH COONaCHOCOOK COO COONa Cu =+2H 2O酒石酸钾纳铜络合物中二价铜是一个氧化剂，能使还原糖中羰基氧化，而二价铜被还原生成一价的氧化亚铜沉淀：CHOHCOOK COOH CHO COOK COO COONaCu =+2H 2O 2+(CHOH)4HC CH 2OHO2(CHOH)4COOH2OH ++Cu 2O ↓（红色）反应终点用次甲基蓝指示剂显示。
因次甲基蓝氧化能力较二价铜弱，故待二价铜全部被还原后，过量一滴还原糖立即使次甲基蓝还原，溶液蓝色消失以示终点：=+(CHOH)4HC 2OHO (CHOH)4COOH CH 2OH+SN(CH 3)2NN +（CH 3）2Cl -+H 2O S H N(CH 3)2NN(CH 3)2+HCl次甲基蓝（蓝色）（无色）2 试剂 2.1 斐林试剂甲液：称取69.3克硫酸铜(CuSO4·15H2O)，用水溶解并稀释至1000毫升，如有不溶物可用滤纸过滤。
乙液：称取346克酒石酸钾钠，100克氢氧化钠，用水溶解并稀释至1000毫升。
2.2 2％盐酸溶液量取4.5毫升浓盐酸，用95.5毫升水稀释。
2.3 20％盐酸溶液量取20毫升浓盐酸，缓慢倒入80毫开水中。
2.4 20％氢氧化钠溶液称取200克氢氧化钠，用水溶解并稀释至1000毫升。
2.5 1％次甲基蓝溶液称取1克次甲基蓝，加100毫升水，加热溶解，贮存于棕色瓶中。
2.6 0.2％标准葡萄糖溶液准确称取2克无水葡萄糖(预先于100~l05℃烘干)，用水溶解，加5毫升浓盐酸，用水定容至1000毫升。
3 仪器与设备（1）三角瓶（2）长玻璃管(约1米)（3）容量瓶（4）分析天平（5）干燥器（6）电热恒温干燥箱（7）滴定管（8）称量瓶（9）移液管（10）pH试纸试验（11）电炉（12）小铜锅4 测定步骤4.1 试样水解粗淀粉测定中试样水解：准确称取试样1.5~2克，置入250毫升三角瓶中。
加l00毫升2%盐酸溶液，轻轻摇动三角瓶，使试样充分湿润。
瓶口按上回流冷凝器或长玻璃管(约1米)，于沸水浴中回流水解3小时(图2-1)。
取出，迅速冷却，用20％氢氧化钠溶液中和至中性或微酸性(用pH试纸试验)。
滤纸过滤滤液用500毫升容量瓶接收，用水充分洗搽残渣，然后用水定容至刻度，摇匀，为供试糖液。
4.2 斐林试剂的校正吸取斐林试剂甲、乙液各5毫升，置入250毫升三角瓶中，加20毫升水，并从滴定管中加入约24毫升0.2％标准葡萄糖溶液(其量应控制在后滴定时消耗0.2％标准葡萄糖溶液在1毫升以内)，摇匀，于电炉上加热至沸，并保持微沸2分钟。
加2滴1％次甲基蓝溶液继续用0.22％标准葡萄糖溶液滴定至蓝色消失，此滴定操作需在1分钟内完成。
总耗糖量为v 毫升。
图2-1 水解装置校正值的计算：先求得10毫升斐林试剂相当的葡萄糖克数(F)， F=CV式中 C ：标准葡萄糖溶液浓度(g/ml)再从斐林试剂糖量表(见附表2-1)查得V 毫升时相当的葡萄糖克数(F0)，斐林试剂校正值f 为：0F CVF F f ==4.3 定糖吸取斐林试剂甲、乙液各5毫升，置入250毫升三角瓶中，加20毫升水，并从滴定管中预先加入适量的水解糖液(其量应控制在后滴定时消耗水解糖液在1毫升以内)，摇匀，于电炉上加热至沸，并保持微沸2分钟。
加2滴1％次甲基蓝溶液，继续用水解糖液滴定至蓝色消失，此滴定操作需在1分钟内完成。
5 计算从附表2-1查得10毫升斐林试剂消耗水解糖液体积相当于100毫升水解糖液中所含葡萄糖量（G ），则1毫升水解糖液中含葡萄糖量为G/100，再乘以斐林试剂校正值，即为1毫升水解糖液中实际含葡萄糖量：)(100g f G ⨯%1009.01500100%⨯⨯⨯⨯⨯=Wf G ）粗淀粉（ 式中 500：试样稀释体积（ml ）W：试样重量（g）0.9：葡萄糖与淀粉的换算系数6 参考书（1）天津轻工业学院等，《工业发酵分析》，轻工业出版社，1980年附表1-1 斐林试剂糖量表三还原糖的测定1 原理原糖的测定采用快速法。
其反应与粗淀粉测定相似，不同点为斐林试剂甲液中硫酸铜量较小，适用于含糖量较少的试样。
另外，斐林试剂中加入亚铁氰化钾(黄血盐)，使红色氧化亚铜沉淀生成可溶性的复盐，反应终点更为明显。
Cu2O+K4Fe(CN)6+H2O=K2Cu2Fe(CN)6+2KOH(淡黄色)2 试剂2.1 斐林试剂甲液：称取35g硫酸铜，0.05g次甲基蓝，用水溶解并定容至1000ml。
乙液：称取117g酒石酸钾钠，126.4g氢氧化钠，9.4g亚铁氰化钾，用水溶解并定容至1000ml。
2.2 0.1%标准葡萄糖溶液精密称取1.0000g经95~105℃烘干的无水葡萄糖，用少量水溶解，加入5ml盐酸，用蒸馏水定容至1000ml，摇匀。
3 仪器与设备（1）三角瓶（2）容量瓶（3）分析天平（4）干燥器（5）电热恒温干燥箱（6）滴定管（7）称量瓶（8）移液管（9）电炉4 测定步骤4.1 斐林试剂的标定吸取斐林试剂甲、乙液各5毫升，置入250毫升三角瓶中，加10毫升水，并从滴定管中预先加入约20毫升0.1%标准葡萄糖溶液(其量控制在后滴定时消耗0.1%标准葡萄搪溶液1毫升以内)，摇匀，于电炉上加热至沸，立即以4~5秒钟1滴的速度继续用0.1%标准葡萄糖溶液滴定至蓝色消失，此滴定操作需在1分钟内完成，总耗糖量为V0毫升。
4.2 定糖预备试验：吸取斐林试剂甲、乙液各5毫升，置入250毫升三角瓶中，加入V1毫升试样稀释液(含葡萄糖量约为5~15毫克)及适量的0.1%标准葡萄糖溶液，摇匀，以下同标定时操作，总耗糖量为V2毫升。
