高速逆流色谱分离技术

高速逆流色谱原理(HSCCC：High Speed Counter-Current Chromatography)液相色谱系统构成高速逆流色谱系统构成TBE300A＋ÄKTA Prime逆流色谱原理萃取：利用物质在两种互不相溶（或微溶）的溶剂中溶解度或分配系数的不同，使物质从一种溶剂内转移到另外一种溶剂中。

逆流色谱原理液－液分配色谱：利用样品中各组分在两相溶剂间分配比的差异，进行分离。

它是不用固态载体的全液态的液-液分配色谱技术.优点：不存在样品的不可逆吸附，理论回收率为100％极大地避免了样品的变性问题操作简单，无需太多样品前处理等。

HSES 流体静力平衡体系在充满下（上）相的螺旋管内慢慢注入上（下）相，最终会形成整个管柱里上下两相交替分段分布的状态。

无论哪一相作为流动相，都能建立起流体静力平衡状态。

如果流动相与管壁亲和性强，它会均衡沿管壁流过形成连续流，如果亲和性较弱，会形成小滴穿过固定相。

液滴逆流色谱(DCCC)旋转腔室逆流色谱(RLCCC)离心分配逆流色谱仪(CPC)利用离心力产生的恒定立场讲固定相保留在又管道连接的一系列腔体中。

优点：噪声小、平衡性好，多数溶剂系统都可在该仪器使用，流动相流速为数毫升每分钟。

由于死体积存在，两相溶剂难以充分混合，与同体积的流体动力学的逆流色谱仪相比分离效率差。

这类一起都是采用旋转密封接头，不可避免产生溶剂渗漏问题。

HDES流体动力平衡体系螺旋管力能保留住任一相充当的固定相，并能形成在数量上超过螺旋单元数的分配单元。

在螺旋管的各个部位，由大量小滴构成了两相间广阔的界面，这些小滴在支撑相里剧烈而稳定的震荡，减小了质点传递阻力，避免了使样品区带展宽的层流的产生。

螺旋管里不存在完全由流动相占据的无效空间，无论以哪一相做流动相，在整个螺旋管的有效空间里总是有一相会形成剧烈而稳定震动小滴，靠这样的运动和分布能开发出有效的逆流色谱仪。

两相不相溶的溶剂在一根绕自身轴旋转的螺旋管内，其中一相的小液滴会向首端迁移，另一相向尾端迁移。

1922010, Vol. 31, No. 20食品科学※工艺技术高速逆流色谱法分离纯化红曲色素组分郑允权 1 ，李泳宁 1 ，王阿万 2 ，陈芬玲 2 ，石贤爱 2 ，郭养浩 1 , 2 , *(1.福州大学药物生物技术与工程研究所，福建 福州 2.福建省医疗器械与医药技术重点实验室，福建 福州 350002； 350002)摘 要：采用高速逆流色谱法(HSCCC)分离纯化红曲发酵产品中 6 种 Azaphilone 类色素组分。

筛选弱极性分离溶剂 系统正己烷 - 醋酸乙酯 - 甲醇 - 水，研究 6 种色素组分在不同溶剂体系中的分配系数，建立两步逆流萃取分离的技术 路线。

经过 HPCCC 分离纯化和丙酮结晶操作，得到 6 种高纯度的 Azaphilone 类色素组分，纯度均大于 98.5%，得 率达到 81.40%～84.78%，所得的 6 种色素组分的摩尔吸光系数分别为 13313、13877、9380、9360、25621、25849 L/(mol·cm)。

本研究可提供一种新型的制备高纯度红曲 Azaphilone 类色素组分的技术路线。

关键词：红曲色素；高速逆流色谱；分离纯化Separation and Purification of Monascus Pigments by High-speed Counter-current ChromatographyZHENG Yun-quan1，LI Yong-ning1，WANG A-wan2，CHEN Fen-ling2，SHI Xian-ai 2，GUO Yang-hao1,2,* (1. Institute of Pharmaceutical Biotechnology and Engineering, Fuzhou University, Fuzhou 350002, China； 2. Fujian Key Laboratory of Medical Instrumentation and Pharmaceutical Technology, Fuzhou 350002, China) Abstract： azaphilone-type pigments were separated from Monascus-fermented solid medium and purified/fractionated by Six by high-speed counter-current chromatography (HSCCC). A solvent system with weak polarity involving four components nhexane, ethyl acetate, methanol and water was selected and used for HSCCC. Based on a comparative analysis of partition coefficients of target compounds in different solvent systems, a two-step HSCCC routine was developed. After separation by HSCCC and crystallization with acetone, six azaphilone-type pigments with high purity were obtained. The purity of each pigment was above 98.5% and their yields were between 81.40% and 84.78%. Their molar absorption coefficients were 13313, 13877, 9380, 9360, 25621 L/(mol·cm) and 25849 L/(mol·cm), separately. Key words：Monascus pigments；high-speed counter-current chromatography；separation and purification 中图分类号：TS202；Q819 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2010)20-0192-04红曲霉菌发酵产品的生产与应用在我国已有一千多 年历史，主要用于食品着色、酿酒和传统中药材。

·药品检验·2012年9月第9卷第26期中国医药导报CHINA MEDICAL HERALD丁公藤，是旋花科植物丁公藤（Erycibe obtusifolia Benth.）或光叶丁公藤（Erycibe schmidtii Craib ）的干燥藤茎，全年均可采收，切段或片，晒干[1]，制成中药饮片，具有解表发汗、抗炎、疏风祛湿、舒筋活络、消肿止痛等功效。

丁公藤的化学成分主要有东莨菪内酯、东莨菪苷、咖啡酸和氯原酸等[2-3]，其中东茛菪内酯具有祛风、抗炎、止痛、抗真菌和抗肿瘤作用[4]，因此建立东莨菪内酯的分离提纯方法具有重要意义。

高速逆流色谱（high-speed counter-current chromatogra -phy ，HSCCC ）是近年来发展起来的新型、不使用固态支撑体或载体的连续液-液分配色谱技术，具有分离速度快、样品吸附低、分离重现性好等优点[5-6]，已被广泛应用于天然药物成分的分析鉴定及分离制备。

东莨菪内酯为香豆素类化合物，目前香豆素的传统分离多采用柱色谱和薄层色谱法，操作繁琐，本实验采用半制备型高速逆流色谱仪从丁公藤粗提物中成功分离纯化出东莨菪内酯，经高效液相色谱峰面积归一化法分析，纯度达到98.04%，为香豆素类化合物的高效、方便和快速分离提供了有效借鉴。

1仪器与试剂1.1仪器TBE 300B 高速逆流色谱仪（上海同田生物技术有限公司），AKTA prime 泵及检测系统（美国通用电器医疗集团），LC-20AT 型高效液相色谱仪（日本岛津公司），HH-1型数显恒温水浴锅（江苏省荣华仪器制造有限公司），9312A 型电热恒温鼓风干燥箱（上海跃进医疗器械厂），DFT-100J 型手提式高速中药粉碎机（天津泰斯特仪器有限公司），C3860型超声波清洗器（河南省巩义市英峪予华公司），Milli-Q Academic 超纯水器（法国密理博有限公司）。

1.2试剂东莨菪内酯标准品（购自中国药品生物制品检定所，批号：110768-200504），粗提物的制备及高速逆流所用的有机溶剂正己烷、乙酸乙酯和甲醇均为分析纯（天津市科密欧化学试剂有限公司），HPLC 分析用甲醇为色谱纯（美国Fisher 公司），实验室用水是自制的超纯水。

高速逆流色谱法一次性分离制备藏药蓝玉簪龙胆中的三个化合物李姗;赵野;刘圆;张志锋【摘要】目的:通过高速逆流色谱法(HSCCC)从藏药材蓝玉簪龙胆中分离制备得到三个高纯度化合物.方法:选择乙酸乙酯-正丁醇-水(4∶0.5∶5,v/v/v)为二相溶剂系统,上下两相分别作为固定相、流动相,主机转速设置为900 r/min,流动相溶剂流速为2 mL/min,紫外检测波长为254nm,柱温为20℃.所采集的组分减压浓缩后烘干得到龙胆苦苷、异荭草素、异牡荆苷,应用ESI-MS/MS分析鉴定,并用HPLC测定其质量分数.结果:在260 min内可一步纯化150 mg藏药材蓝玉簪龙胆水粗提物中的龙胆苦苷、异荭草素、异牡荆苷,三者完全分离,纯度分别达到98.2％、94.5％、96.0％.结论:利用高速逆流色谱法可快速、简单、高效地富集蓝玉簪龙胆中龙胆苦苷、异荭草素、异牡荆苷三种化合物.【期刊名称】《西南民族大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2016(042)006【总页数】5页(P660-664)【关键词】高速逆流色谱;蓝玉簪龙胆;龙胆苦苷;异荭草素;异牡荆苷【作者】李姗;赵野;刘圆;张志锋【作者单位】西南民族大学药学院,四川成都610041;西南民族大学药学院,四川成都610041;西南民族大学青藏高原研究院,四川成都610041;西南民族大学青藏高原研究院,四川成都610041【正文语种】中文【中图分类】R284藏药蓝玉簪龙胆为龙胆科龙胆属植物蓝玉簪龙胆(Gentianaveitchiorum Hemsl.)的干燥地上部分，藏语学名为“邦见温保”[1-2].性寒、味苦；归肝、胆经；具清热解毒功效；现代药理研究表明蓝玉簪龙胆可减轻肝肺部的炎症，保护肝肺功能，抑制肝肺纤维化的形成[3-4].龙胆中主要化学成分是裂环烯醚萜苷及黄酮类化合物，杨红澎等使用传统分离方法从蓝玉簪龙胆花中分离鉴定了2α-羟基熊果酸、落干酸、远志脑苷(polygalacerebroside)、熊果酸、龙胆苦苷、异荭草素-3′-甲醚、异牡荆苷和异荭草素等化合物[5-6].高速逆流色谱(HSCCC)[7]是一种连续高效的快速液-液分配色谱分离技术，具有回收率高，连续高效，制备量大等特点，可直接用于分离制备粗提物[8-9].该法中化合物的分离只依赖于溶解性的不同，由此避免了因不可逆性吸附造成的样品损失及由于表面化学等诸因素引起的化学分析物变性，因而广泛应用于天然产物中活性物质的分离制备[10-11].本实验采用高效逆流色谱建立分离制备蓝玉簪龙胆中的三种化合物的方法，该操作简单，分离时间短，产物纯度高，对蓝玉簪龙胆化合物的分离及其药理药效的进一步研究具有重要意义.1.1 仪器与试剂高速逆流色谱仪(TBE-300B，TBE-20A，上海同田生化技术有限公司)；Waterse2695高效液相色谱仪，含Waters 2489紫外/可见光分光光度检测器，Empower色谱工作站、自动进样器、四元梯度泵、柱温箱. UHPLC–PDA–QTOF–MS为Waters Acquity UHPLC I-Class系统(Waters，USA).质谱为双重四级杆飞行时间质谱和电喷雾电离质谱(ESI)(Waters MS Technologies，UK).藏药蓝玉簪龙胆采于四川省红原县，由四川大学张浩教授鉴定为龙胆科龙胆属植物蓝玉簪龙胆(Gentianaveitchiorum Hemsl.)全草；HSCCC分离所用的乙酸乙酯、正丁醇均为分析醇；HPLC分析中所用甲醇为色谱醇，水为超纯水；D101大孔树脂(西安蓝晓科技有限公司).1.2 方法1.2.1 蓝玉簪龙胆粗提物的制备将干燥的蓝玉簪龙胆2 kg粉碎，用75%乙醇浸泡3次，每次3 d，料液比为1∶20；过滤，滤渣纯水回流提取两次；滤液过D101大孔树脂，依次用水，10%，30%，50%，70%，100%六个梯度乙醇-水洗脱，分段收集洗脱液；减压浓缩.将浓缩得到的浸膏冷冻干燥至粉末，得到乙醇粗提浸膏及水粗提浸膏，干燥器中保存备用.准确称取150 mg水粗提物溶解于10 mL下相，4℃下保存备用.1.2.2 HPLC及UHPLC-PDA-QTOF-MS色谱分析条件采用HPLC法对HSCCC分离的各组分进行检测，并按照面积归一化法判断各组分的纯度.色谱柱: YMC-Triart C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，甲醇(A)-水(B)为流动相梯度洗脱(0～50 min，20%～50%A)；进样量为10 μL；流速:1 mL·min-1；检测波长:240 nm；柱温:35℃.采用UHPLC–PDA–QTOF–MS为结构鉴定，根据二级质谱碎片推测化合物结构.色谱柱:Acquity HSS C18柱(100 mm×2.1 mm，1.8 μm)，0.1%乙酸水(A)和甲醇(B)为流动相，0～15 min，20～50%B梯度洗脱；进样量为1 μL；流速:0.2 mL· min-1；检测波长240 nm；柱温:35℃.质谱量子范围，m/z100～1 500；干燥气体的流量(N2)、800 L/h；干燥气体温度450℃；氮气，30 L/h；离子源温度100℃；毛细管电压2 500 V和筒内压力40 V.1.2.3 溶剂体系选择根据待分离物质的物理性质及溶剂极性，确定选用乙酸乙酯-正丁醇-水为两相溶剂体系，配置两相溶剂不同体积比(7∶0∶5，4∶0.5∶5，4∶1∶5，7∶1∶5)的溶剂体系.上相为固定相，下相为流动相，充分混匀后平衡6-10h，超声脱气20min，紫外检测波长为254nm.根据文献[12]计算分配系数K＝Aupper/Alower，K值结果见表1.1.2.4 高速逆流色谱分离制备经过优化筛选出乙酸乙酯-正丁醇-水溶剂体系，将其充分混匀后再静置分层，上下两层分别为固定相、流动相.固定相溶剂以20 mL/min的流速泵入HSCCC螺旋管柱中，等到固定相溶剂流出约20 mL后停泵.主机设置为正转，转速调至900r/min，再以2 mL/min的流速泵入流动相溶剂，待流动相溶剂流出且达到两相动态平衡时，将100 mL水粗提物样品注入HSCCC仪中，打开色谱工作站采集数据:检测波长为254 nm，柱温为20℃.监测色谱图并收集各组分，浓缩后烘干.2.1 蓝玉簪龙胆水相粗提物的HPLC分析由图1可知，HPLC外标法分析蓝玉簪龙胆水相粗提物，测得提取物中三个化合物的含量分别为33.2%，36.5%，24.0%.2.2 HSCCC分离制备结果由表1可知乙酸乙酯-正丁醇-水(4∶0.5∶1)为最优溶剂体系，经微调后直接进行制备，分离谱图见图1，在该条件下，可分离出三个化合物，且重现性良好.2.2 纯度分析及结构鉴定组分I，II，III，IV减压浓缩后烘干分别得到23.2 mg，11.6 mg，5.1 mg，6.8 mg粉末，精确称取各组分3 mg，甲醇溶解后制成1 mg/mL样品，以1.2.2节中的色谱条件对收集的各组分进行检测，采用HPLC外标法测定，得到组分I为杂质，组分II纯度98.2%，组分III纯度94.5%，组分IV纯度96.0%.对三个组分采用ESI-MS/MS分析鉴定化合物(见图3-II)，组分II分子离子峰为[M-H＋COOH]－m/z 401.1084，分子式鉴定为C16H20O9，基于CID-MS2显示碎片峰为m/z 391.0801，376.0054，225.0128，179.0558，149.0548，112.9838质谱图数据与文献(13)中报道的龙胆苦苷质谱数据一致，分析鉴定结构为龙胆苦苷(如图3-II).组分III分子离子峰为[M－H]＋m/z 447.0925，分子式为C21H20O11，基于CID-MS2显示碎片峰为m/ z285.0393，可能为[M－H－162]－，即脱去一个糖；碎片峰m/z 429.0815可能为苯环上两个羟基的缩合；碎片峰m/z 327.0503是失去一分子水和一分子P-hydroxyPhenyl-prop-enyl后得到，质谱图数据与文献(14-15)中报道的异荭草素质谱数据一致，即鉴定结构为异荭草素(如图3-III).组分IV分子离子峰为[M－H]－m/z 431.0976基于CID-MS2显示碎片峰为m/z 311.0548，295.0601，283.0601，269.0441，161.0244，117.0335，与文献(16)中报道的异牡荆苷质谱数据一致，即鉴定结构为异牡荆苷(如图3-IV).本实验采用高效逆流色谱实现了蓝玉簪龙胆中三种主要成分龙胆苦苷，异荭草素，异牡荆苷三种不同化合物的完全分离.通过多次验证获得最佳HSCCC分离体系为乙酸乙酯-正丁醇-水(4:0.5:5，v/v/ v)，并成功通过一步纯化从150 mg蓝玉簪龙胆水相粗提物中获得龙胆苦苷，异荭草素，异牡荆苷三种不同化合物，纯度分别达到98.2%，94.5%，96.0%，分离时间260 min.龙胆苦苷是中国药典规定的龙胆类植物中的标志性成分，具有广谱的药理活性，黄酮类化合物也以成为国内外天然产物研究热点，本文中分离得到的两个黄酮类化合物在蓝玉簪龙胆水提物中含量很高，因此对蓝玉簪龙胆中的黄酮类物质研究具有较大的实用价值.本文方法可以一步纯化得到高纯度的龙胆苦苷和黄酮类化合物，更省时、简便，可为蓝玉簪龙胆的化合物纯化分离及其药理作用的进一步研究提供物质基础.【相关文献】[1]杨永昌.藏药志[M].西宁:青海人民出版社，1991.[2]帝玛尔·丹增彭措.晶珠本草[M].毛继祖，译.上海:上海科学技术出版社，1986.[3]侯颖，曹蔚，李涛，等.蓝玉簪颗粒治疗小鼠慢性支气管炎作用机理的研究[J].第四军医大学学报，2008，14:1331-1333.[4]ZHANG ZF，LIU Y，LU LY，et al.Hepatoprotective activity of Gentiana veitchiorum Hemsl.against carbon tetrachloride-induced hepatotoxicity in mice[J].Chinese Journal of Natural Medicines 2014，12(7):0488-0494.[5]杨红澎，确生，吴锡冬，等.蓝玉簪龙胆中苷类成分的研究[J].中国中药杂志，2008，33(21):2505-2507.[6]邹琼宇，梁健，廖循，等.蓝玉簪龙胆的化学成分研究[J].华西药学杂志，2010，5:512-514.[7]ITO Y，BOWMAN R L.Countercurrent chromatography:Liquid-liquid partition chromatography without solid support[J].Science，1970，167 (3916):281-283.[8]邸多隆，郑媛媛，陈小芬，等.高速逆流色谱技术分离纯化天然产物中黄酮类化合物的研究进展[J].分析化学，2011，39(02):269–275.[9]成超，尹鹭，曹学丽，等.儿茶素和表儿茶素异构体的高速逆流色谱分离制备[J].食品化学，2012，33(15):140–143.[10]ITOY，CONWAY W D.High speed countercurrent chromatography [M].New York:John Wiley，1996.[11]曹学丽.高速逆流色谱分离技术及应用[M].北京:化学工业出版社，2005.[12]MAN DAVA N B，ITOY.Counter current chromato graphy，theory andpractice[M].New york:Marcel Dekker，1998:443.[13]DANIIL N，OLENNIKOV，NINA I，et al.Iridoids and Flavonoids of Four Siberian Gentians:ChemicalProfile and Gastric Stimulatory Effect [J].Molecules，2015，20:19172-19188.[14]WANG EJ，MA YB，ZHANG XM，et al.Five alkaloids from vine stems of Diploclisia affinis[J].China Journal of Chinese Materia Medica，2008，33:2505-2507.[15]N SASAKI，Y NISHIZAKI，E YAMADA，et al.Identification of the glucosyltransferase that mediates direct flavone C-glucosylation in Gentiana triflora[J].FEBS Letters，2015，589:182-187.[16]HUANG MQ，ZHANG YP，XU SY，et al.Identification and quantification of phenolic compounds in Vitexnegundo L.var.cannabifolia(Siebold et Zucc)ingliquid chromatography combined with quadrupole time-of-flight andtriple quadrupole mass spectrometers[J].Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis，2015，108:11-20.。

溶菌酶研究现状2010级基地班马冬珂10104109关键词：溶菌酶基本性质活性检测酶学性质提取，分离，纯化纯度检测一：溶菌酶的基本性质：１９０７年，Ｎｉｃｏｌｌｅ最早发表了枯草杆菌溶菌因子的报告，两年后，Ｌａｓｃｈｔｓｃｈｅｎｋｏ指出，鸡蛋也有较强溶菌活性，并把它命名为溶菌酶（Ｌｙｓｏｚｙｍｅ，ＥＣ３．２．１．１７）。

紧接着Ｆｌｅｍｉｎｇ和Ｍｅｙｅｒ等证实植物中也含有溶菌酶，以后人们对溶菌酶的特性有了更深入的认识。

【1】作用机制：溶菌酶是一种广泛存在于各种动植物有机物中的糖苷水解酶，作用于Ｎ一乙酰氨基葡萄糖和Ｎ一乙酰胞壁之间的β—１，４糖苷键，能使某些细菌细胞壁中的粘多糖成分分解，破坏肽聚糖支架，在内部渗透压的作用下，细胞胀裂，细菌裂解，而人和动物细胞无细胞壁结构，也无肽聚糖，故溶菌酶对人体细胞无毒性作用，但具有溶解细胞壁的能力。

【2】溶菌酶分子量的测定：溶菌酶原料相对分子质量测定采用ＳＤＳＰＡＧＥ凝胶电泳法测定，分离胶浓度为１２％，采用考马斯亮蓝染色。

溶菌酶是由１２９个氨基酸残基组成的碱性球蛋白，等电点在ｐＨ值１０．８左右，分子量为１４０００，化学性质非常稳定。

当ｐＨ值在１．２—１１．３的范围剧烈变化时，其结构几乎不变。

在酸性环境下，溶菌酶对热的稳定性很强；ｐＨ值低于４时，溶菌酶可以长期在室温下存放。

其纯品为白色或微黄、黄色的结晶体或无定型粉末，无异味，，微甜，易溶于水，遇碱易被破坏，不溶于乙醚. 280nm的消光系数为13.0。

酶活性可被该酶活性可被一些金属离子Cu2+，Fe2+，Zn2+（10-5～10-3M）以及N-乙酰葡萄糖胺所抑制，能被Mg2+,Ca2+（10-5～10-3M）、NaCl所激活。

应用：在国外，溶菌酶普遍的应用在食品的杀菌，保险，防腐以及微生物发酵和生物工程技术中菌体内容物的提取，如核酸，蛋白质，抗生素，酶等的提取，在医药和临床上，溶菌酶制成的各种药物具有抗菌抗病毒，消炎消肿，增强抗生素疗效等作用，检测血清尿中的酶的活性，临床上可用于诊断白血病。

高速逆流色谱分离环氧化合物开环反应产物作者：于文博朱军来源：《科技视界》 2012年第29期于文博朱军（杭州职业技术学院临江学院浙江杭州310018）【摘要】环氧苯乙烷在乙醇中与二正丁胺发生开环反应，反应体系经过初步处理，所得混合物应用高速逆流色谱分离纯化，得到目标产物β氨基仲醇，产物结构用1HNMR进行了确定。

【关键词】高速逆流色谱；环氧化合物开环；分离纯化Separation of Compounds from Epoxides Ring Opening Reaction Mixtures by High Speed Countercurrent ChromatographyYU Wen-bo ZHU Jun（Hangzhou Vocational and Technical Collage，Hanghzou Zhejing，310018，Chnia）【Abstract】β-amino alcohols were prepared by ring-opening of epoxides with dibutylamine use alcohol as solvent.The product was separated from the raction mixtures by HSCCC, and confirmed by 1HNMR.【Key words】HSCCC；epoxide ring-openning；Sepatation环氧化合物是有机合成中一个很有用的结构单元，也是一种比较活泼的化合物，在多种试剂及物理因素作用下都可以进行开环反应，它是合成二醇、卤代醇、氨基醇、及其它醇的衍生物的重要中间体，常用的亲核试剂主要是胺，醇，硫醇以及卤素等[1-2]。

环氧化合物与胺的发生的开环反应，产物为β氨基醇是合成天然化学品和药物的重要中间体在有机合成中具有广阔的应用前景。

但在开环反应过程中，因亲核反应位点的不同而区域选择性地产生不同的异构体产物，如果图1. 化合物1为空间有利的产物，但也会有部分2作为副产物产生，化合物1和2为异构体，采用一般的分离手段较难分离[3]。

逆流色谱原理简介任何熟悉液液萃取（使用分液漏斗）和色谱（例如HPLC）技术的人都很容易理解逆流色谱液液萃取的原理(countercurrentchromatography(CCC))。

液液萃取为化学家们分离大量的化学物质提供了一个简单的方法，而且使用的溶剂最少。

把样品溶在两相溶剂系统中，振摇使两相充分混合，静置后，两相重新分层。

这些步骤是分离样品组分的关键。

这种经典的液液萃取在色谱工作者看来，最大的缺点是它在分离过程中只有一个理论塔板数。

（事实上，这种情况下没什么理论可言。

这一个分离塔板数是源自于工业上的分馏。

因此，化学工作者要么设计一合适的单步分离方法去适应自己的需要，要么就用多次液液萃取去提高分离度。

通常使用前者，因为后者太麻烦了。

（尽管多次液液萃取经常用到，但溶剂系统在不同的提取中通常要改变，以便提高效率。

）为了改善分液漏斗，以经过许多的尝试。

克雷格逆流分布仪是其中一个最引人注意的突破。

这套精妙的仪器，把一系列的分液漏斗有效的排成链，重复的进行系列的步骤：振摇（混合）、静置、分离，再重头开始，这样就提高了塔板数。

假如有足够的塔板数，那这套仪器可以达到色谱级的分离。

液滴逆流色谱（DCCC）在发展过程中又开发出了液滴逆流色谱（DropletCounterCurrentChromatograph）。

这个仪器把一系列垂直的管子用毛细管连接起来。

液体固定相留有直管中，把流动相慢慢的泵进去，（如果流动相比较重就从上方泵进去；反之，则从下方）。

象所有的色谱那样，组分比较容易溶于流动相中的就移动的快；而比较容易溶于固定相中就滞后了。

于是就分离开来了。

很显然，每一个直管只有最小可能的理论塔板数。

所以，要有显著的效能就要用大量这样的直管。

其分离步骤如下：把样品液滴与流动相混合，通过不移动的固定相，期间没有发生振摇。

液滴的大小与其他溶剂系统的参数限制了溶质在两质中的分配。

静置最终在直管末端形成，在这儿，流过固定相的流动相在通过毛细管进入下一根直管前先聚集起来。

高速逆流色谱法在中药有效成分分离中的应用研究【摘要】高速逆流色谱是近几年发展起来的新型色谱技术，由于其独特之处已被广泛应用于各个领域，本文就人们关心的热点中药有效成分的分离，采用新的色谱技术高速逆流色谱技术分离取得的成就进行总结，并展望未来的前景。

【关键词】高速逆流色谱法；中药有效成分；分离；应用中图分类号r283 文献标识码 b 文章编号1674-6805（2012）35-0156-01近年来，随着中国经济的高速发展，中草药已经越来越受到人们的关注。

而中药的有效成分复杂，如何获得高效的有效成分，分离效果成为研究的热点。

高速逆流色谱法（high-speed countercurrent chromatography，hsccc）具有分析能量大、分离效率高、结果重现性好等其他色谱无法替代的优点。

现高速逆流色谱技术这种新型的液-液分配色谱已广泛应用于医药、农林、化工等各领域[1]。

应用新型的高速逆流色谱分离成分复杂的中药有效成分可取得良好的效果，具体总结如下。

1 工作原理高速逆流色谱hsccc是应用不同物质在固液两相中的分配系数不同进行分离。

一台高速逆流色谱仪是由输液泵、分离柱、检测器、工作站、数据采集系统及馏分收集器等组成。

首先选择固定相，是将两相预先平衡好的溶剂中的一相填充满螺旋管柱，将流动相以一定的流速泵入高速旋转的螺旋管柱内。

在有液体流动相流出时，说明体系达到平衡，此时将样品注入高速逆流色谱体系中，螺旋管分离柱将依据不同成分在固液两相中的分配系数不同达到分离，依据工作站和数据采集系统将分离后的结果进行记录并积分处理。

在仪器运行的时候，可调节溶剂、固定相、流动相、样品浓度、柱温、洗脱方式、进样方式、流动相的流速及转速等使分离效果达到最好。

还需要根据所检测样品的特点，选择不同的检测器，uv-vis（紫外-可见光检测器）、elsd（蒸发光散射检测器）或者质谱检测器等[2]。

2 中药的有效成分各种植物中所含的有效成分分类为生物碱、黄酮、苷、萜、蒽醌、木脂素、香豆素、有机酸等。

简述中药提取分离新技术【关键词】中药；提取分离；综述近年来,在中药提取分离方面出现了许多新技术、新方法,如超临界流体萃取技术、大孔树脂吸附法、半仿生提取法、高速离心分离技术等,这些新技术和方法的应用,使得中药提取既符合传统的中医药理论,又能达到提高有效成分的收率和纯度的目的。

因此,运用新提取技术研究中药,是实现中药现代化的重要途径,必将为中药现代化研究注入新的活力。

笔者就近年来几种新方法在中药提取过程中的应用进行简单的概述。

1中药提取新技术1.1超临界流体萃取技术超临界流体是指处于临界温度和临界压力以上,物理性质介于气体与液体之间的流体。

这种流体兼有气体和液体的特点,它具有和气体相当的高渗透能力和低粘度,又具有和液体相近的密度和对许多物质优良的溶解能力。

超临界流体萃取是以超临界流体代替常规有机溶剂对目标组分进行萃取和分离的新型技术,与传统的提取分离法相比,其最大的优点是可以在近常温条件下提取分离不同极性、不同沸点的化合物,几乎保留中药中全部有效成分,无有机溶剂残留,因此,其中药有效成分提取的纯度高,而且收率高,操作简单、节能。

1.2大孔树脂吸附法大孔树脂吸附分离技术是以采用特殊的吸附剂从中药复方煎液中有选择地吸附其中的有效成分、除去无效成分的一种提取精制的新工艺。

此外,大孔吸附树脂还可应用于中药有效成分样品组成含量测定前的预分离。

该方法具有设备简单、操作方便、节省能源、成本低、产品纯度高、不吸潮等优点,因此,大孔树脂吸附法在中药研究和生产中的应用日益广泛,取得了相当显著的成果。

1.3半仿生提取法半仿生提取法是指从生物药剂学的角度,模仿1∶3服药物及其在胃肠道的转运过程,采用一定dh的酸水和碱水依次连续提取,其目的是提取含指标成分高的活性混合物。

它与纯化学观点“酸碱法”是不能等同的又因为此种提取方法的工艺条件要适合工业化生产的实际.不可能完全与人体条件完成相同,仅“半仿生”而已,故称“半仿生提取法”。