石蜡包埋步骤

石蜡包埋步骤（推荐五篇）第一篇：石蜡包埋步骤石蜡包埋步骤1组织脱水、渗透与包埋脱水：○50% 乙醇（90min）→70% 乙醇（90min）→85%乙醇(90min)→95%乙醇(90min)→100%乙醇(60min)→100%乙醇(60min)。

注：○1若组织数量过多时，应分开脱水（20个组织左右）○2脱水的体积至少为组织提及的4倍○3乙醇纯度越高时，脱水的时间减少，否则引起组织过硬○4 最好能搅拌，使脱水充分透明：○1/2乙醇＋1/2二甲苯→ 二甲苯→ 二甲苯，每步60min。

注：在二甲苯的时间不宜过短或过长。

时间过短引起透明不充分，影响后面渗透包埋；时间过长则引起组织变脆。

渗透：○ 1/2二甲苯＋1/2石蜡(90min)→石蜡I(120min)→石蜡II(120min),62℃。

注：若出现从脱水到渗透时间太长，可在1/2二甲苯＋1/2石蜡或石蜡I的步骤停下,即将进入1/2二甲苯＋1/2石或石蜡I后，立即冷却，将组织封进里面，到第二天复融；第二天融解时温度不能超过65℃，并且需到完全溶解时开始进入步骤算时间。

包埋：○将组织放入盛有石蜡的模具中，摆好位置，于石蜡包埋机的冷台上冷却。

注：包埋时，切忌用手按石蜡盒中间，因为冷凝后，中间仍较软。

切片和贴片将包埋好的组织块于切片机中约5µm，放于漂片机中展开，再将切片捞于多聚赖氨酸附膜载玻片上，编号，70℃干烤1h，贴片后60℃烤5h。

第二篇：石蜡包埋人体组织STR检验的探讨【摘要l目的探讨普通甲醛对人体组织dna的影响及提高str检出率的手段。

方法取少量石蜡包埋组织，65℃水浴脱蜡，chelex一100法提取dna，pcr扩增，循环次数分别为28次和28+6次，扩增产物经310型测序检测。

结果普通甲醛固定5 d以内的组织基本上可检出amel及15个str基因座。

固定时间延长，检出率下降；pcr循环次数增加，灵敏度增加，但有错误分型的情况。

包埋时间50%酒精：1个小时70%酒精：1个小时80%酒精：1个小时90%酒精：1个小时95%酒精：1个小时无水酒精1：1个小时无水酒精2：1个小时无水酒精:二甲苯1:1 1个小时二甲苯透明：时间不定二甲苯:石蜡1:1 20- 1个小时不等石蜡1：1个半小时石蜡2：1个半小时包埋的时间不确定，由组织块的大小来决定，像一般的比较小的而且比较容易脱水的如消化道的胃、小肠等脱水半个小时至四十分就行，蝌蚪整体的话因为有皮肤包着所以时间要长一些至少一个小时这样算下来包完一套需要至少12个小时，包埋的关键不是脱水，而是在那两步1：1上，只要这两个过度做好了其余的就很顺畅了，只要1:1时间够了透明时间就可以适当的短一些，一般不要超过1分钟，30秒左右就可以。

想做好石蜡切片从取材到染色每一步都很重要，可以说是环环相扣，哪一步没做好都会影响最终的结果。

现在从取材说起，取材时要迅速，以免组织自溶，固定要充分，固定液我们一般用的有两种，一是10%中性福尔马林溶液，第二是Bouin氏液，这个根据组织来决定用哪个，要是整体固定蝌蚪的话可以用浓度稍高一些的福尔马林，一般可以用12—15%的福尔马林。

取下的材料需固定一段时间，至少要过夜，若是固定时间比较长的话需要用流水冲洗一个晚上第二天再脱水包埋，时间短的话，第二天可以直接用水泡一个半小时即可进行包埋，当然这其中要换几次水。

包埋完切片，捞出的片子至少烘干一个晚上的时间。

二甲苯2：30分钟二甲苯1：30分钟酒精:二甲苯1:1：10分钟无水酒精2：5分钟无水酒精1：5分钟95%；5分钟90%：5分钟80%：5分钟70%：5分钟50%：5分钟流水冲洗苏木精时间不定，视当时染液的情况而定。

一般5-10分钟，甚至更长。

流水冲洗50%：5分钟70%：5分钟80%：5分钟90%：5分钟伊红30秒，吸水纸上吸一下染液95%：蘸三下无水酒精1：5分钟无水酒精2：5分钟酒精:二甲苯1:1 10分钟二甲苯1：30分钟二甲苯2：30分钟染色整个过程大约需要四个小时，每一步都要用吸水纸蘸几下；整个实验下来至少需要两天半时间。

石蜡包埋技术制作石蜡切片，切片前须将石蜡渗透组织包埋于石蜡中，而水与石蜡又是不相混合的，所以在浸蜡，包埋前必须将组织内所含的水分脱去。

而大多数的组织固定剂是水溶液，随后的水冲洗也使其含有大量水分，因此必须先行脱水，一般是浸入逐级增加浓度的酒精来完成。

由于酒精和石蜡不能混合，须再用一种石蜡的溶剂来置换酒精，因大多数石蜡溶剂有使组织的折光率增高并表现为透明或半透明状，所以此步骤又称透明。

最后用石蜡浸渍组织并铸制成坚实的蜡块。

常规的石蜡包埋过程包括五个基本步骤，即固定，脱水，透明，浸蜡和包埋，前一章中已述过固定。

第一节脱水脱水就是用脱水剂完全除去组织内的水分，为下一步透明及浸蜡创造条件。

此外，脱水还可以使组织再次发生一定的硬化，脱水剂必须是与水在任何比例下均能混合的液体。

一．常用的脱水剂1．酒精：是制片最常用的试剂，可与水在任何比例下相混合，酒精的脱水能力比较强，又能硬化组织。

但是酒精的船头速度很快，对于组织会有明显的收缩作用。

因此在以酒精作为脱水剂时，应该先从浓度较低的酒精开始，然后递增其浓度，这样可以避免组织过度收缩。

第一瓶酒精浓度随固定剂，脱水组织的大小和种类而异，经水溶性固定剂固定的细柔组织需要慢慢脱水，从50％酒精开始。

如眼球，组胚组织等大多数组织标本则是从70％酒精开始，再经80％，95％以至无水酒精。

但是有时为了某种特殊要求，例如要做糖元的切片标本或是要做尿酸结晶染色切片标本，为了防止糖元和尿酸结晶在水中消失却要直接投入无水酒精中固定，而不需要经过水洗和低浓度酒精的脱水过程。

经无水酒精固定后的组织只需要再经过换一次无水酒精脱水即可。

用AAF固定液固定的组织可直接置于95％酒精开始脱水。

用醇性固定剂（如Carnoy）则可置于高浓度无水酒精内，但应多次换液以除酸。

一般情况下，组织经过70％，80％，90％，95％，以至无水酒精的脱水程序，即可达到脱水的要求。

但是为了能使大量的组织块同时进行脱水，则要求保持液体的浓度以保证脱水的作用，最好是以两次95％酒精，两次100％酒精重复进行脱水，以保证组织的水分脱净。

组织块石蜡包埋的步骤：1.取材：尽量活杀，在处死30min内取材完毕，组织块的大小一般为（1.0-1.5cm）*1.0cm*(0.2-0.3cm)2.固定：常用甲醛液浓度为4%，是40%甲醛溶液和水按1:9比例配制而成。

固定时间以12-24h为宜。

（4℃冰箱可放置1-3个月）3.冲洗：将组织块放在固定的容器中用流水冲洗24h.4.脱水：一次70%酒精2h, 80%酒精2h, 90%酒精1h, 95%酒精40min,无水乙醇Ⅰ40min,无水乙醇Ⅱ30min。

可将组织放于70%酒精中过夜。

5.透明：将脱水后组织直接浸入二甲苯透明剂中（二甲苯Ⅰ, 二甲苯Ⅱ），每次透明为10min。

6.浸蜡：常规制片常用熔点高于56℃以上的石蜡，普通采用56℃-58℃石蜡。

先将组织浸入软蜡Ⅰ1h左右, 再浸入软蜡Ⅱ40min；硬蜡Ⅰ40min, 硬蜡Ⅱ1h。

（一般浸蜡时间为3-4h）软蜡熔点为45℃-50℃，硬蜡熔点为55℃-60℃。

7.包埋：将蜡液注入包埋硬具中，迅速将组织块平放入蜡液中，摆正并铺平，然后移至冷却台，使组织块同蜡液凝固在一起的过程。

（硬蜡凝固定型）石蜡切片法：在切片前应先切去标本周围过多的石蜡（此过程称为“修块”），但也不能留得太少，否则易造成组织破坏，连续切片时分片困难。

一般切片厚度为4-6μm。

贴片时先在干净的载玻片上涂一层蛋白甘油，然后于60℃恒温箱中烘烤1h，若未烤干可适当延长时间；若组织剥脱可涂一层蛋清加以固定。

做免疫组化时，玻片应涂多聚赖氨酸，亦可买防脱玻片。

HE染色的步骤：二甲苯Ⅰ5-10min→二甲苯Ⅱ5-10min→无水乙醇Ⅰ1-3min→无水乙醇Ⅱ1-3min→90%酒精1min→80%酒精1min→70%酒精1min→水洗→苏木精3-5min→水洗→盐酸酒精1-3s→水洗→饱和碳酸锂（氨水）10-30s→水洗→伊红3-5min→水洗（短）→70%酒精1-2s→80%酒精3-5min→90%酒精3-5min→95%酒精3-5min→无水乙醇5-10min→二甲苯Ⅰ3-5min→二甲苯Ⅱ3-5min→中性树胶封片染色液的配制：1.Harris苏木精的配制苏木精 1g硫酸铝钾 15g无水乙醇 10ml蒸馏水 200ml先用蒸馏水加热溶解硫酸铝钾，用无水乙醇溶解苏木精再倒入已溶解的硫酸铝钾蒸馏水中，煮沸1min后，稍冷却，慢慢加入红色氧化汞0.5g，继续加热至染液变为紫红色，用纱布盖瓶口，用滤纸过滤后每100ml加冰醋酸5ml。

试总结石蜡包埋的流程和实验要点下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。

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1.取材固定:离体的组织不及时固定，组织就会自溶，抗原就会扩散。

固定就是加入一些可以让蛋白质变性的物质(比如说甲醛)，使得蛋白质的结构被固定住，不再发生变化，同时也不会再发生一些活性反应，这样才好做后续的染色步骤。

常见固定液是4%的多聚甲醛和饱和苦味酸。

根据不同目的、组织特征代表性取材。

取的材料应该小而薄。

便于固定剂迅速渗入内部，一般厚度不超过2mm，大小不超过5X 5mm"。

每个组织最好多切几块。

新鲜组织固定(组织块不宜太大太厚，这样固定液很难进入里面，可能会导致在较短的时间内脱水不完全，引起一系列的问题，比如浸蜡不彻底，切片不好完成，切不完整。

导致后来切片染色的脱落，造成染色的失败。

组织块也不能太小，否则不能保证切片数量，且透明时间和浸蜡时间不能很好的把握。

)固定时间因固定剂种类而异，大多6-12 小时，一般不超过12小时。

视组织固定的难易程度而定。

后续如果做免疫组化，不应超过12小时;后续如果做HE染色，不应超过24小时。

固定完之后用水洗(目的:洗去渗入组织的固定液，终止固定以免影响对组织的内结构的观察，分析。

换液两次，一次半小时。

) 之后可直接脱水包埋或放入75%的乙醇4度可长期保存。

2.脱水从75%的乙醇中取出，分别放到80%，90%，100%( I )的乙醇中30min，再放入100%乙醇中。

固定完直接水洗包埋的，应从70%乙醇开始，易碎组织从50%乙醇开始。

组织脱水时间不应过长，尤其是高浓度乙醇，要特别注意控制时间。

3.透明透明的目的是置换组织内的脱水剂，为下一步浸蜡起到桥梁作用，二甲苯可以去除脂肪。

乙醇+-二甲苯(1:1) 2h；二甲苯(I )，二甲苯(II)各10min(根据组织的大小和透明的难易程度不同，透明的时间可以根据具体情况调整。

颜色浅的组织表面油亮，可以透过光时效果较好，颜色较深的组织至少边缘可以透光。

)4.浸蜡浸蜡目的是置换组织中的透明剂，为包埋作准备。

二甲苯+石蜡(1:1)2h；石蜡(I)1h;石蜡(II)2h.(浸蜡的时间也可以长一些)5.包埋在冰盒上进行，将融好的纯蜡(最好提前4小时以上开始融蜡，新蜡更难融)，倒入蜡盒(可以浸没组织就行，大约蜡盒的三分之一)由于蜡盒底部与冰盒接触，底部的蜡会先凝固，这样就可以把组织用镊子夹住立在底部。

常规的石蜡‎包埋过程包‎括五个基本‎步骤，即固定，脱水，透明，浸蜡和包埋‎制作石蜡切‎片，切片前须将‎石蜡渗透组‎织包埋于石‎蜡中，而水与石蜡‎又是不相混‎合的，所以在浸蜡‎，包埋前必须‎将组织内所‎含的水分脱‎去。

而大多数的‎组织固定剂‎是水溶液，随后的水冲‎洗也使其含‎有大量水分‎，因此必须先‎行脱水，一般是浸入‎逐级增加浓‎度的酒精来‎完成。

由于酒精和‎石蜡不能混‎合，须再用一种‎石蜡的溶剂‎来置换酒精‎，因大多数石‎蜡溶剂有使‎组织的折光‎率增高并表‎现为透明或‎半透明状，所以此步骤‎又称透明。

最后用石蜡‎浸渍组织并‎铸制成坚实‎的蜡块。

常规的石蜡‎包埋过程包‎括五个基本‎步骤，即固定，脱水，透明，浸蜡和包埋‎，前一章中已‎述过固定。

第一节脱水脱水就是用‎脱水剂完全‎除去组织内‎的水分，为下一步透‎明及浸蜡创‎造条件。

此外，脱水还可以‎使组织再次‎发生一定的‎硬化，脱水剂必须‎是与水在任‎何比例下均‎能混合的液‎体。

一．常用的脱水‎剂1．酒精：是制片最常‎用的试剂，可与水在任‎何比例下相‎混合，酒精的脱水‎能力比较强‎，又能硬化组‎织。

但是酒精的‎船头速度很‎快，对于组织会‎有明显的收‎缩作用。

因此在以酒‎精作为脱水‎剂时，应该先从浓‎度较低的酒‎精开始，然后递增其‎浓度，这样可以避‎免组织过度‎收缩。

第一瓶酒精‎浓度随固定‎剂，脱水组织的‎大小和种类‎而异，经水溶性固‎定剂固定的‎细柔组织需‎要慢慢脱水‎，从50％酒精开始。

如眼球，组胚组织等‎大多数组织‎标本则是从‎70％酒精开始，再经80％，95％以至无水酒‎精。

但是有时为‎了某种特殊‎要求，例如要做糖‎元的切片标‎本或是要做‎尿酸结晶染‎色切片标本‎，为了防止糖‎元和尿酸结‎晶在水中消‎失却要直接‎投入无水酒‎精中固定，而不需要经‎过水洗和低‎浓度酒精的‎脱水过程。

经无水酒精‎固定后的组‎织只需要再‎经过换一次‎无水酒精脱‎水即可。

石蜡包埋组织切片制作过程石蜡包埋组织切片制作是组织学研究中常用的一种技术，它可以将组织样本固定、包埋、切片、染色等一系列步骤完成，以便于观察和分析组织结构和功能。

下面将详细介绍石蜡包埋组织切片制作的过程。

1. 组织固定需要将待研究的组织样本进行固定，以保持其形态和结构。

常用的固定剂有福尔马林、乙醛、甲醛等。

固定时间和温度根据不同的组织类型和固定剂而异，一般需要固定4-24小时。

2. 组织脱水固定后的组织需要进行脱水处理，以去除其中的水分，使其能够与石蜡相容。

脱水一般采用乙醇逐渐升级浓度的方法，如70%、80%、95%、100%乙醇，每个浓度的时间一般为1-2小时。

3. 组织清洁脱水后的组织需要进行清洁处理，以去除其中的脂肪和其他杂质。

清洁一般采用苯、甲苯、氯仿等有机溶剂，每个溶剂的时间一般为1-2小时。

4. 组织浸渍清洁后的组织需要进行浸渍处理，以使其与石蜡相容。

浸渍一般采用苯、甲苯、氯仿等有机溶剂，每个溶剂的时间一般为1-2小时。

5. 组织包埋浸渍后的组织需要进行包埋处理，以使其能够被切片机切割。

包埋一般采用石蜡，将组织样本浸泡在石蜡中，然后在石蜡中进行固化。

固化时间和温度根据不同的组织类型和石蜡而异，一般需要固化4-24小时。

6. 组织切片包埋后的组织需要进行切片处理，以便于观察和分析组织结构和功能。

切片一般采用微型切片机，将石蜡包埋的组织样本切成薄片，厚度一般为4-6微米。

7. 组织染色切片后的组织需要进行染色处理，以便于观察和分析组织结构和功能。

常用的染色剂有血液学染色剂、组织学染色剂等。

染色时间和方法根据不同的染色剂而异，一般需要染色5-30分钟。

石蜡包埋组织切片制作过程是一个复杂的过程，需要进行多个步骤的处理，以保证组织样本的完整性和可观察性。

这种技术在组织学研究中具有重要的应用价值，可以为疾病的诊断和治疗提供重要的参考依据。

石蜡切片及HE染色过程一石蜡切片1. 取材: 刀片要求锋利而薄,组织厚度约2—3mm, 大小1.5×1.5×0.2～0.3cm为宜. 取材时间越快越好.2. 固定: 组织取下后应立即放入10%福尔马林(相当于4%甲醛)固定.注意: (1). 固定液量应为组织块体积的40倍.(2) 固定时间固定时间与使用的固定液种类和组织块大小, 温度等有关. 一般为3—24h.(3)固定温度大多可在室温固定, 在低温(4℃)时间应延长.(4)固定容器应大些.3. 漂洗: 流水冲洗2—10h.4. 脱水: 从低浓度酒精到高浓度酒精.70%(数分钟)→80%(60-120’)→90%(60-120’)→95%(60-120’)→95%(60-120’)→100%(60-120’)→100%(6 0-120’).5. 透明: 组织块脱水后必须经过一种既能与酒精混合又能溶解石蜡的溶剂, 而使石蜡进入组织块. 常用二甲苯, 一般浸泡30m即可.6. 浸蜡: 组织经透明后在熔化的石蜡内浸渍的过程称浸蜡. 一般需经2—3次浸渍才能完成, 总时间为3—4h. 用于浸蜡的石蜡熔点为52—56℃.7. 包埋: 先将熔化的石蜡倒入包埋框再用加热的镊子将组织块放入. 包埋面必须平整. 包埋后石蜡稍凝后可移入冷水或冰箱中加速凝固.8. 切片: 修块→切片→展片→捞片→烤片.二HE染色1. 染色前切片处理(1) 脱福尔马林色素.(2) 脱汞盐结晶.(3) 脱黑色素.2. 染色步骤二甲苯脱蜡(10’)→ 无水乙醇洗去二甲苯(1’×2次)→95%酒精(1’)→90%酒精(1’)→85%酒精(1’)→自来水洗(2’)→苏木精染色(1—5’)→自来水洗(1’)→1%盐酸酒精分化20s→自来水洗(1’)→稀氨水(1%)反蓝30s→自来水或蒸馏水洗(1’)→伊红染色(20s—5min)→自来水洗(30s)→85%酒精脱水(20s)→90%酒精脱水(30s)→95%酒精(1’)→95%酒精(1’)→100%酒精(2’)→100%酒精(2’)→二甲苯(2’)→中性树胶封片.3. 染色结果: 细胞核呈兰色, 胞浆呈红色.三盐酸酒精的配制浓盐酸0.5—1ml + 75%酒精99ml.此液用一段时间后需延长或更换液体, 新液体分化时间要短.脑组织的石蜡包埋过程中有很多干预因素，一个环节处理的不好就会影响整个实验，我把我们的制作方法说一下，供参考。

步骤一：取材与固定：取动物新鲜组织块(一般厚度不超过0．5厘米)投入预先配好的固定液中(10％福尔马林，Bouin氏固定液)使组织、细胞的蛋白质变性凝固，以防止细胞死后的自溶或细菌的分解，从而保持细胞本来的形态结构。

步骤一：脱水透明：一般用由低浓度到高浓度酒精作脱水剂，逐渐脱去组织块中的水份。

再将组织块置于既溶于酒精，又溶于石蜡的透明剂二甲苯中透明，以二甲苯替换出组织块的中酒精，才能浸蜡包埋。

步骤三：浸蜡包埋：将已透明的组织块置于已溶化的石蜡中，放入溶蜡箱保温。

待石蜡完全浸入组织块后进行包埋：先制备好容器(如折叠一小纸盒)，倒入已溶化的石蜡，迅速夹取已浸透石蜡的组织块放入其中。

冷却凝固成块即成。

包埋好的组织块变硬，才能在切片机上切成很薄的切片。

步骤四：切片与贴片：将包埋好的蜡块固定于切片机上，切成薄片，一般为5—8微米厚。

切下的薄片往往皱折，要放到加热的水中烫平，再贴到载玻片上，放45℃恒温箱中烘干。

步骤四：脱蜡常用HE染色，以增加组织细胞结构各部分的色彩差异，利于观察。

苏木精(Hematoxylin，H)是一种碱性染料，可将细胞核和细胞内核糖体染成蓝紫色，被碱性染料染色的结构具有嗜碱性。

伊红(Eosin，E)是一种酸性染料，能将细胞质染成红色或淡红色，被酸性染料染色的结构具有嗜酸性。

染色前，须用二甲苯脱去切片中的石蜡，再经由高浓度到低浓度酒精，最后入蒸馏水，就可染色。

酒精用了2次先有低到高，再有高到低，这是为什么？步骤五：染色HE染色过程是：①将已入蒸馏水后的切片放入苏木精水溶液中染色数分钟。

②酸水及氨水中分色，各数秒钟。

③流水冲洗1小时后入蒸馏水片刻。

④入70％和90％酒精中脱水各10分钟。

————又要脱水！⑤入酒精伊红染色液染色2—3分钟。

步骤六：脱水透明：染色后的切片经纯酒精脱水，再经二甲苯使切片透明。

又要用一次无水酒精，这是为什么？步骤七：封固：将已透明的切片滴上加拿大树胶，盖上盖玻片封固。