石蜡包埋步骤
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心肌组织石蜡包埋与切片
多聚甲醛配制:
1×PBS + 4%多聚甲醛(PH值7.2-7.4)
1×PBS:Na
2HPO
4
.12H
2
O 2.88g
NaH
2PO
4
.2H
2
O 0.296g
NaCl 8.5g
定容至1L。
熔蜡过程:
新蜡块最好提前放入烤箱,反复凝熔3次以上,再做浸蜡包埋。
1)大鼠心室经4%多聚甲醛固定24h以上,将组织放入包埋框内,用铅笔做
好标记;
2)将包埋框与组织一起放入0.01M PBS,震荡冲洗30min×2次;
3) 弃去PBS,心脏组织经乙醇梯度脱水:75%乙醇4h,80%乙醇4h,95%乙醇Ⅰ2h,95%乙醇Ⅱ2h,100%乙醇Ⅰ1h 20min,100%乙醇Ⅱ1h 40min;
4) 二甲苯透明:二甲苯:乙醇(1:1)10min,二甲苯Ⅰ20min,二甲苯Ⅱ20min;
5) 浸蜡:石蜡Ⅰ40min,石蜡Ⅱ2h;石蜡I、石蜡II与包埋蜡反复凝固融化3次,浸蜡时温度控制在56-60 ℃。
6) 石蜡包埋:将熔化的石蜡(注意保持石蜡密度的均一性)倒入包埋框,用加热的镊子将浸蜡后的组织块放入包埋框内,温度控制在56-60℃(整个操作过程尽可能快),待石蜡凝固后取下石蜡块准备切片;
7) 切片:每个标本取10张切片,切片厚度为5μm左右。将切片铺于预先用多聚赖氨酸包被的载玻片上,60℃置于烤片机中烘烤60min。染色前将切片置于37℃烤箱中过夜或60℃ 2h。