石蜡切片技术

石蜡切片技术实验实验目的掌握动植物材料石蜡切片的方法及要求。

实验原理石蜡制片法是将材料经固定、脱水、透明、浸蜡后包埋在石蜡里面进行切片的方法。

此法适用范围，制片手段完备，能将材料切成极薄的片子（可切至2-8微米左右），并能制成连续的片子，这是其它制片法难以达到的，因此在光学显微镜的制片技术上它是最常用的一种方法。

除了一些经不住石蜡切片法中所应用的各种药剂处理的材料不能应用石蜡切片以外，一般的材料都可以用此法制片，但有制作时间较长，操作过程复杂以及材料易发硬或发脆等缺点。

该法多采用旋转式切片机进行切片。

实验材料小白鼠各种器官组织试剂１、７０％、８０％、９０％、９５％酒精及无水酒精：９５％以下的各级浓度酒精是用９５％酒精加蒸馏水稀释而成。

简单的稀释方法：所需稀释的浓度是多少，就量取多少毫升原浓度的酒精，再加蒸馏水至该酒精的原浓度即可。

例如，配制７０％酒精，就量取７０ml９５％酒精，然后加入２５ml蒸馏水即成。

２、固定液：常用的固定液有１０％福尔马林、Bouin氏液和Zenker氏液等。

Bouin氏液在组织学切片技术方面应用甚广，配方如下：苦味酸饱和水溶液７５ml福尔马林２５ml冰醋酸５ml３、蛋白甘油：蛋白甘油是粘贴蜡片用的粘片剂。

配方如下：取一新鲜鸡蛋的蛋白，充分搅拌成雪花状泡沫，然后滤去泡沫，加入等量甘油，搅拌均匀，再加入一小粒麝香草酚防腐。

４、染色液：以H.E.染色法为例，需配制苏木精染液和曙红染液。

⑴、苏木精染液：苏木精是一种碱性染料，它可将染色质染成蓝紫色。

配方有多种，现介绍Harris氏苏木精的配制：甲液：苏木精０.５ g９５％酒精５.０ ml乙液：硫酸铝钾（或硫酸铝铵）１０g蒸馏水１００ ml氧化汞０.２５g冰醋酸几滴先将甲液溶解，再将硫酸铝钾溶于蒸馏水中，并加热使溶解，然后将两液混合煮沸，离开火焰后缓缓加入氧化汞。

冷却后过滤，加入几滴冰醋酸即成。

⑵、０.５％曙红酒精溶液：即０.５g曙红溶于１００ml９５％酒精中。

石蜡切片的主要步骤石蜡切片是一种常用的制备薄片的技术，广泛应用于生物学、医学和材料科学等领域。

本文将介绍石蜡切片的主要步骤，并详细说明每个步骤的操作方法和注意事项。

1. 样品固定和处理在进行石蜡切片之前，首先需要对待切样品进行固定和处理。

固定样品的方法可以根据实验的需要选择，常用的有乙醛固定、冰醋酸固定和福尔马林固定等。

处理样品的方法也根据实验目的而定，可以包括染色、脱水、透明化等步骤，以便更好地观察和研究样品。

2. 包埋将处理好的样品包埋在石蜡中，以便进行切片。

首先，将样品放入石蜡溶液中，使其充分浸泡。

然后，将石蜡溶液转移到恒温水浴中，使其逐渐固化。

在固化过程中，要确保样品均匀分布在石蜡中，避免出现气泡和空洞。

3. 切片切片是石蜡切片过程中最关键的一步。

首先，将固化的石蜡块从模具中取出，并放置在切片机的夹持装置上。

然后，调整切片机的切片厚度和速度，根据需要选择合适的参数。

接下来，使用切片刀将石蜡块切割成薄片。

在切割过程中，要保持手稳定，避免切片厚度不均匀或出现断层。

4. 切片取片切片切割完成后，需要将切片从切片刀上取下。

首先，使用镊子将切片从切片刀上小心取下，避免损坏或弯曲切片。

然后，将切片放置在预先准备好的载玻片上。

在放置切片时，要注意避免气泡的产生，可以使用专门的工具如细管吸气来帮助排除气泡。

5. 去除石蜡和染色切片取片后，需要将切片上的石蜡去除，并进行染色处理。

首先，将切片放入去石蜡剂中，使其充分浸泡。

然后，将切片转移到浸泡染色剂中，进行染色处理。

在去石蜡和染色过程中，要注意时间控制和温度控制，以确保染色效果和切片质量。

6. 封片和封边染色完成后，需要将切片做成封片，以保护切片并便于保存。

首先，将切片用透明胶片或玻璃片覆盖。

然后，使用封片胶或封片胶带将切片和覆盖物固定在一起。

接下来，将切片的边缘进行封边处理，以避免切片脱落或污染。

7. 干燥和贴标封片完成后，需要将切片进行干燥处理，并进行贴标。

石蜡切片制备技术活的细胞或组织多为无色透明，各种组织间和细胞内各种结构之间均缺乏反差，在一般光镜下不易清楚区别出；组织离开机体后很快就会死亡和产生组织腐败，失去原有正常结构，因此，组织要经固定、石蜡包埋、切片及染色等步骤以免细胞组织死亡，而能清晰辨认其形态结构。

石蜡切片是组织学常规制片技术中最为广泛应用的方法。

石蜡切片不仅用于观察正常细胞组织的形态结构，也是病理学和法医学等学科用以研究、观察及判断细胞组织的形态变化的主要方法，而且也已相当广泛地用于其他许多学科领域的研究中。

教学中，光镜下观察切片标本多数是石蜡切片法制备的。

石蜡切片法是将组织经过一系列药品处理，使石蜡渗入组织，包埋成蜡块，再把组织蜡块切成极薄的片子，根据不同的需要用不同的染色方法以显示不同细胞和组织的形态，以及细胞和组织中某些化学或特殊（如抗原）成份含量的变化。

一、所需器材及试剂1，器材切片刀，切片机，恒温箱，熔蜡炉，蜡杯，酒精灯，蜡铲，铺片台，冷冻台，解剖刀，镊子，台木，毛笔，染色缸，盖玻片，载玻片，中性树胶，显微镜。

2，试剂各种浓度的酒精（70%、80%、90%、95%、100%）、二甲苯、石蜡、苏木精染液，0.5%伊红酒精溶液，1%盐酸酒精溶液等。

二、石蜡切片制备过程1，取材采集病料要及时，以防组织变质发生自溶。

病理组织材料要采取病变典型突出的部分，最好选病变与健康组织的交界处，以识别和探讨病变的发生和发展。

2，固定采集样品在滤纸上吸干后迅速放入4％甲醛溶液中固定七天以上，使组织细胞的蛋白质变性凝固，以防止细胞死后的自溶或细菌的分解，从而保持细胞原来的形态结构。

3，洗涤切取约1cm×1cm×0.3mm固定好的组织，放入带盖的网槽中用自来水冲洗过夜，调节流量使水从底部缓慢流出。

4，脱水透明组织经固定和水洗后含多量水分，水与透明剂、石蜡不能溶合，因此，在透明、浸蜡前必须进行脱水，把组织中的水份彻底驱除。

酒精为常用脱水剂，它既能与水相混合，又能与透明剂相混，为了减少组织材料的急剧收缩，应使用从低浓度到高浓度递增的顺序进行。

结构清晰可辨的组织切片，石蜡切片术
是最常用的经典技术
02 石蜡切片术基本步骤
取材和固定 脱水和包埋 切片和染色 封片ห้องสมุดไป่ตู้
03 HE 染色
最常用的染色方法是苏木精和伊红染色法，简称HE 染色法
原理： 苏木精（Hematoxylin）-- 伊红（Eosin）
碱性染料
酸性染料
嗜碱性
将嗜碱性物质 （本身酸性）
构具有被碱性染料着色的性质称嗜碱性。
光镜技术— 石蜡切片术和HE染色
目录
CONTENT
01 光镜技术概述
02 石蜡切片术
03 HE染色
01 光镜技术概述
应用一般光学显微镜(简称光镜)观察是组织学研究的最基本方法 放大倍数可达1500，分辨率约为0.2μm 光镜下能被分辨的微细结构称光镜结构（LM） 组织学研究需要制备能使光线透过、微细
染成蓝色
中性
细胞核中的染色质、 细胞质中的核糖体
将嗜酸性物质 （本身碱性） 染成红色
嗜酸性
细胞质、膜性结构（线粒体、溶 酶体、滑面内质网）、细胞间质
脑垂体，H&E, x400
特殊染色法
镀银染色法
醛复红染色法
活体染色法
小结
1. 组织学最常见的研究方法是采用光镜观察。 2. 石蜡切片术是光镜观察时标本制备最常用的经典技术。 3. 组织切片常用的染色法是苏木精—伊红染色法，称HE染色。 4. 凡组织结构具有被酸性染料着色的性质称嗜酸性，凡组织结

包埋过程中易出现的问题及解决办法
问题：包埋后的石蜡块应为均匀半透明状，有时出现白色浑浊 结晶（像雪花一样）部分，这样在切片时就有妨碍，不易切出 薄的切片。 原因：①组织内部或石蜡中混有透明剂；②脱水不干净；③石 蜡本身品质不良；④组织块移入纸盒时动作太慢，周围的石蜡 已成凝固状态；⑤冷却用水温度不够低，石蜡凝固太慢。 解决办法：属于前三个原因者应在包埋之前就须注意；属于后 二个原因者，可将包埋块再投入Ⅲ蜡中熔化后重新包埋，但必 须注意熔化包埋过的石蜡块的时间不宜过久。
脱水（常用脱水剂：乙醇；脱水原则：低浓度到高浓度）（目的？） 脱水时间：视材料的性质、大小而定 小鼠肝脏：在各级AL中停留0.5-1h； 植物叶片：在各级AL中停留2-4h； 注意：脱水应彻底，否则与二甲苯混合后混浊，必须倒回重脱水；如需过夜， 则停留在70%酒精中。
二、实验步骤（2）
透明（置换） 常用透明剂：二甲苯； 透明原则：低浓度到高浓度 （½ 二甲苯+ ½ 100%酒精 二甲苯 二甲苯） 透明时间：小鼠肝脏每级停留0.5-1h；植物叶片每级停留1-3h。
染色原理－－化学作用
化学作用的主要理论根据是染色剂的性质可分为酸性、碱性和 中性染色剂，而动、植物的细胞内—般也可区分为酸性(阴离子) 和碱性(阳离子)部分。当碱性染色剂溶液中的有色部分成为阳 离子时，就能与细胞的阴离子(酸件部分)较牢固地结合，当酸 性染色剂溶液中的有色部分成为阴离子时，就能与细胞内的阳 离子(碱性部分)较牢固地结合。 例如，细胞核，尤其是核内的染色质，主要由核酸组成，是酸 性的组成成分．故和碱性染色剂(苏木精)的亲和力很强，易于 着色。细胞质含碱性物质，故和酸性染色剂(伊红、曙红)的亲 和力很大，易于着色。
甲醛－醋酸－酒精液(FAA) 50%或70％酒精 90ml 冰醋酸 5ml 甲醛 5ml 特点：过去称”标准固定液“或”万能固定液“；是 组织形态中常用的固定液；同时兼作保存液。是植物 制片技术中较为良好的固定液和保存液。除单细胞和 丝状藻类外，均可用此液固定．也通用于昆虫和甲壳 类的固定。

9;s Fluid) 适用于一般植物 组织和细胞的固定,常用于根尖,花药压片及子房石 蜡切片等.有极快的渗透力,根尖材料固定15— 20min即可,花药则需1h左右,此液固定最多不超 过24h,固定后用95%酒精冲洗至不含冰醋酸为止; 如果材料不马上用,需转入70%酒精中保存.固定 液的重要特性是能迅速穿透细胞，将其固定并维 持染色体结构的完整性，还要能够增强染色体的 嗜碱性，达到优良染色效果。
流水冲洗：将小瓶用纱布蒙住，放入盆中，流 水冲洗，效果较静置冲洗为好，时间为 12~24h，但流水不能太大太急，也不能太长， 太长使组织变软肿胀，冲洗时间有时长达24h 左右，如木本植物的木质部。
3.注意事项
(1) 冲洗彻底——否则收缩、变硬、抽取 (2)不能时间太长太急——变软，肿胀（吸水） (3) 摇动有利于冲洗干净——加快分子运动
3注意事项： ▪ 要准 ▪ 要快 ▪ 避免损伤（方向，刀要快，不能挤压）
植物取材：用剪刀剪下材料时一定要植物生活正常，不要 因缺水、营养和温度光照发生明显改变，影响细胞结构， 同时发育程度、部位要准。
（二）固定
1.目的： 为了使取样的细胞在形态结构和成分方面保
持与生活的状态一样，就必须迅速杀死细胞避 免失水变形，自溶破坏结构等。 固定液的选择：快；不溶解；不收缩膨胀； 软硬适中；增加折光度；增加染色能力；长期 保存等7项。
混合固定：
用两种或两种以上的试剂混合在一起进行固定如： 卡诺氏固定液
酒精：冰醋酸（3：1） 酒精：冰醋酸：氯仿（6：1：3）适用于动植物一般 组织细胞。 FAA 福尔马林(38%甲醛)5 ml: 冰醋酸5ml:70%酒精90 ml 幼嫩材料用50%酒精代替70%酒精,可防止材料收 缩;还可加入5 ml甘油(丙三醇)以防蒸发和材料变硬. 但单细胞及丝状藻类除外，也不适于细胞学研究

材料自二甲苯中取出后,先移入二甲苯和石 蜡等量的 混合液中约30分钟，然后进入纯石蜡中约40—60分 钟，再换纯石蜡一次约40—60分钟。
三、包埋
是把被石蜡浸透的材料连同熔化的石蜡一起 倒入一定形状的容器内，并立即投入冷水中， 使它凝固成含材料的蜡块，以备切片。
从温箱中取出盛放纯石蜡的蜡杯，倒入包埋 用的纸盒中，取出存放材料的蜡杯，用温镊 子夹取材料平放于纸盒底部，使之排列整齐。 将纸盒两侧的把手提起，慢慢地平放在面盆 的水面，待石蜡的表面凝固，将 纸盒慢慢 浸入水中，待石蜡完全凝固（约30分钟） 后即可取出备用。
包埋前应先把必需的用具（恒温箱、温台、纸盒） 准备好。 包埋用的镊子要先放在温箱中预热。
第五节 切片、展片和贴片
一、切 片 是把包埋好的材料块用切片机切成所需厚度的切片带。 实验程序 1. 切片前的准备工作 （1）整修：用单面刀片将蜡块四周修整平行。 （2 ）石蜡块的固着：先将蜡块用刀片切成方形或长
四、注意事项
1 透明的注意事项
使用透明剂时，要随时盖紧盖子，以免空气中水 分进入； 更换透明剂，动作要迅速； 材料周围 出现白色雾状，应退回纯酒精中重新脱水。
2 透蜡的注意事项
动物材料常用的石蜡熔点为52-56ºC；植物材料 为54-60ºC。 透蜡温度要恒定，不可忽高忽低；
3 包埋的注意事项
第一节 动物的选择、杀死和取材
一、动物的选择 根据实验目的选择合适的动物和组织 如：健康状况的选择 观察不同组织、器官选择不同的动物（如：
肥大细胞、肝小叶、环层小体等）
二、动物致死法 根据动物的大小、种类和观察目的不同，进
行适当的选择。 1、麻醉法 2、空气栓塞法 3、断头法 4、击头法 5、股动脉放血法 要求动作迅速、及时取材、迅速固定

一、实验目的1. 掌握石蜡切片的制作过程，包括组织固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片和染色等步骤。

2. 了解石蜡切片技术在生物学研究中的应用。

3. 学会使用显微镜观察石蜡切片，识别不同组织结构。

二、实验原理石蜡切片技术是一种重要的生物学制片方法，用于观察组织、细胞等微观结构。

其基本原理是将组织固定后，通过一系列的脱水、透明、浸蜡等步骤，使组织在石蜡中充分浸渍，然后用切片机切成薄片，最后进行染色和观察。

三、实验材料1. 实验动物：小鼠2. 组织：肝脏、肾脏、心肌、骨骼肌等3. 试剂：卡诺氏固定液、FAA固定液、各种浓度的酒精、二甲苯、石蜡、蜂蜡、埃利希苏木精染液、1%伊红酒精溶液、1%盐酸酒精溶液、甘油蛋白粘片剂、郝普特氏粘片剂、中性树胶、1%番红、1%固绿、1%过碘酸、Schiff 试剂、0.5%偏重亚硫酸钠溶液、醋酸酐-吡啶混合液、0.5%~1%淀粉糖化酶溶液等4. 器材：切片刀、切片机、恒温箱、温台、熔蜡炉、蜡杯、酒精灯、蜡铲、展片台、解剖刀、解剖针、解剖剪、解剖盘、培养皿、吸管、镊子、单面刀片、台木、毛笔、洒精灯、包埋纸盒、染色缸、盖玻片、载玻片、玻片盘、树胶、树胶瓶、显微镜、温度计、脸盆、水浴锅等四、实验步骤1. 取材：取新鲜组织，固定于4%多聚甲醛24小时以上。

2. 脱水：将固定后的组织依次放入75%、85%、90%、95%酒精中浸泡1小时，然后放入无水乙醇I、无水乙醇II中浸泡30分钟，最后放入醇苯中浸泡5-10分钟。

3. 透明：将组织放入二甲苯I、二甲苯II中浸泡5-10分钟。

4. 浸蜡：将组织放入熔化的石蜡中浸泡1小时。

5. 包埋：将浸好蜡的组织放入包埋机内进行包埋，待石蜡凝固后取出并修整蜡块。

6. 切片：将修整好的蜡块置于石蜡切片机上切片，片厚约4微米。

7. 展片：将切片漂浮于摊片机40℃温水上，将组织展平，用载玻片将组织捞起，并放进60℃烤箱内烤片。

8. 染色：将烤干的切片进行染色，如苏木精-伊红染色。

（6）透明：纯酒精/二甲苯＝1∕1浸渍2小时，再转入纯的二甲苯中二 次，每次1小时，至大体呈明亮感即可。
（7）浸蜡：将组织留在透明剂中，轻轻倒上等体积已熔化的石蜡， 放入40℃的温箱10小时(过夜)，再加入熔化的石蜡至3/4体积，调 节温箱至48℃，透蜡3小时，再经3次纯蜡，温度56℃，每次约1 小时，直至透明剂完全排出。
3.脱水
材料洗涤后，其中含水，水与石蜡不能混合，必须除去。去水 用酒精，材料由水入酒精中，不能操之过急，须由低度酒精渐 至高度酒精。通常由30％、50％、70％、80％、90％、100％， 每次须经半小时或更长时间，材料大的，时间须延长。若暂时 不能埋蜡、材料可放在70％酒精中保存，经久不坏。在高度酒 精中，不能过久．因酒精能使材料硬化，过久则材料由硬而脆， 切时易于粉碎。
石蜡切片技术
植物组织石蜡切片技术
石蜡切片法是显微技术上最重要、最常用的一种 方法。它是把材料封埋在石蜡里面，用旋转切片 机切出很薄（6～8微米）的切片用于显微观察。
石蜡切片的一般步骤：
1．固定 2．洗涤 3．脱水 4．透明 2．封埋 6．切片 7．粘片 8．脱蜡 9．染色 10．脱水 11. 透明 12．封片
水稻幼穗组织爱氏苏木精整染法
（1） FAA固定液固定幼穗组织24小时以上。 （2） 50％酒精洗涤2~3次，每次1小时。 （3）爱氏苏木精稀释液中整染2天 。 （4）水洗，返蓝，换水2～3次，水洗1天。 （5） 脱水及复染 ：经20％，40％，60％，75%（过夜），85%
各级酒精，每级约2小时，0.5％伊红酒精（95％）染液4～6小 时，无水酒精脱水2次，每次1.5小时。
材料透明后，要进行浸蜡，才能进行埋蜡。浸蜡也宜于渐次进行，一般 先用石蜡和二甲苯的混合液（50%级和70%级）浸蜡，再用纯石蜡换三 次，每次的时间，视材料大小而定，通常每次半小时，材料大，时间必 须加长。在浸蜡的过程中，须注意温度，不能超过石蜡熔点2℃以上 。

石蜡切片制作步骤1、洗涤：将固定的样品放入70%的酒精中，数次更换至样品颜色变白。

2、脱水：80%酒精——→90%酒精——→95%酒精——→100%酒精——→100酒精（每步时间为1h）3、透明：酒精二甲苯（1:1）——→纯二甲苯——→纯二甲苯（每步时间为15min）4、透蜡：石蜡二甲苯（1:1）——→纯石蜡——→纯石蜡（每步时间为1h，在恒温箱60℃）5、包埋：将熔化石蜡倒入小盒中，加组织、调整、凝固（4h以上）6、切片：修整包埋好的的石蜡块，切片厚度为5μm（刀放置的倾斜角以10—20°为宜，刀刃与蜡块表面呈5°夹角。

包埋好，放置于4℃冰上，修成梯形。

）7、展片：载玻片加蛋白甘油——→加蜡条——→滴蒸馏水——→展片台加热（55℃水浴中展开，展开程度以带黄颜色的组织完全摊平为准。

）8、烘片：37℃恒温箱烘烤2—3dHE染色：9、脱蜡：纯二甲苯——→纯二甲苯——→二甲苯酒精（每步3min）10、复水：100%酒精——→100%——→95%——→95%——→90%——→80%——→70%——→双蒸水（每步3—5min）11、染色：苏木精——→水浇（10—20min）——→1%盐酸酒精（若干秒）——→水浇（1min）——→1%氨水（1—3min）——→水浇（1min）——→70%酒精——→80%——→90%——→95%——→0.5%伊红——→95%（30s）——→95%（30s）（迅速除去玻片上的伊红染液，迅速！未说明的每步时间为3—5min）12、脱水：100%乙醇——→100%乙醇（每步3—5min）13、透明：二甲苯酒精（1:1）——→纯二甲苯——→纯二甲苯（每步3—5min）14、封藏：切片取出，滴加中性树胶，盖上情结的盖玻片烘干，几天后显微镜下拍照。

石蜡切片的实验报告石蜡切片的实验报告石蜡切片是生物学和医学领域中常用的技术手段，它可以将组织样本固定在切片上，以便于观察和分析。

本次实验旨在探究石蜡切片技术的原理、步骤和应用。

一、石蜡切片技术的原理石蜡切片技术是一种常用的组织学研究方法，它的原理基于石蜡的透明性和稳定性。

石蜡是一种具有较高熔点的蜡状物质，具有良好的剪切性和切片稳定性。

在进行石蜡切片前，需要将组织样本进行固定、脱水和浸渍处理，使其具备适合切片的性质。

然后，将固定好的组织样本浸入石蜡中，石蜡渗透进入组织细胞中，将其包裹在石蜡中形成固定的切片。

最后，使用显微镜对切片进行观察和分析。

二、石蜡切片的步骤1. 组织样本的固定：将组织样本取出后，迅速进行固定处理。

常用的固定剂有福尔马林、乙醛等，可以使组织样本保持原有的形态结构。

2. 脱水处理：将固定好的组织样本进行脱水处理，以去除组织中的水分。

脱水过程中，需要逐渐使用浓度递增的酒精进行浸泡，使组织逐渐脱水至无水状态。

3. 浸渍处理：将脱水后的组织样本浸泡在石蜡溶液中，使其充分浸渍。

浸渍时间根据组织样本的大小和类型而定，一般需要数小时至数天。

4. 石蜡包埋：将浸渍好的组织样本放入石蜡模具中，加热使石蜡融化，将组织样本包裹在石蜡中。

包埋过程中需要控制温度和时间，以确保石蜡充分渗透到组织中。

5. 石蜡切片：使用石蜡切片机将包埋好的组织样本切割成薄片。

切片时需要调整切片机的切割速度和刀片的角度，以获得理想的切片质量。

6. 切片染色：将切好的石蜡切片进行染色处理，以增强组织结构的对比度和可见性。

常用的染色方法有血液学染色、组织学染色等。

7. 显微镜观察：将染色好的石蜡切片放置在显微镜下进行观察和分析。

通过显微镜的放大功能，可以清晰地观察到组织样本的细胞结构和组织构成。

三、石蜡切片技术的应用石蜡切片技术在生物学和医学领域中有广泛的应用。

首先，它可以用于病理学研究，帮助医生诊断和治疗疾病。

通过观察石蜡切片下的组织结构，医生可以了解病变的类型、程度和分布情况，从而制定相应的治疗方案。

⑥固定后不需冲洗，可直接投入70%的酒精中保存。
⑦固定材料适宜浓度为0.3%-5%。
（3）铬酸（chromic acid）
①穿透速度缓慢。
②能沉淀所有蛋白质，凝固核酸，增强核的着色能力，可作为核蛋白核核酸的固定液。能固定高尔基体及线粒体。常用于细胞学观察。
③只有铬酸能真正固定肝糖原，使之不溶于水。对脂类无影响；
③浓度50%以上酒精可溶解脂肪和类脂体。不能用于膜结构的研究，溶解血色素，破坏其他多种色素，所以不能用于脂肪、类脂类和色素的固定。一般用于组织学观察。
④使糖原沉淀，但能溶于水。
⑤是还原剂，在混合固定液中，酒精不能与氧化固定液混用。如铬酸、锇酸、重铬酸钾等。
⑥材料硬化、组织收缩明显。
⑦固定材料适宜浓度为70%-100%。不需冲洗，70%酒精可较长时间保存，若长期保存材料与甘油等量混合后使用。70%酒精：甘油=1：1
（3）木质小枝：直径小于5mm，切成15mm长木条和大枝：直径较大的,切成2-3cm厚，再分割成楔形小块。
二、固定
割取组织块后，应立即进行固定。
固定是制片极为关键的步骤，制片质量的优劣。除与材料的新鲜程度有关外，还取决于最初的固定是否适当和完全。
固定的意义
新鲜的组织被割取后,由于细胞内酶的作用和细菌的繁殖，可引起组织的自溶和腐败。因此，割取组织块后，应立即采用一种方法．将组织尽可能保持原有的形态结构，且有利于保存和适于制片的操作，这一步骤称为固定。固定的目的和作用
苦味酸、升汞、铬酸、碘均能使胞质蛋白和核蛋白凝固；酒精能沉淀胞质蛋白，而核蛋白沉淀后溶于水；醋酸不能凝固胞质蛋白,但能凝固核蛋白;福尔马林、锇酸、重铬酸钾对两种蛋白都不凝固。
1.凝结型固定液：
酒精
醋酸
铬酸

2 不足
制备石蜡切片需要复杂的操作和专业设备，同时样本可能发生失真和伪影。
石蜡切片技术的发展前景
科技创新
随着科技的
石蜡切片技术在不同领域的应 用将促进跨学科的合作和创新。
新发现
通过石蜡切片技术，我们将有 机会发现更多细胞和组织的奥 秘，推动科学的发展。
总结和展望
《石蜡切片技术》是一项重要的科学技术，它在医学和科学研究中发挥着重要作用。我们相信随着技术的不断 发展，石蜡切片技术将为我们带来更多的新发现和突破。
《石蜡切片技术》PPT课 件
欢迎来到《石蜡切片技术》的世界！让我们一起探索这个令人着迷的技术， 揭开它的奥秘！
技术背景
在科学研究和医学领域中，石蜡切片技术起着重要作用。了解其背景将有助于我们深入了解该技术的重要性和 应用。
石蜡切片技术的定义与原理
1
定义
石蜡切片技术是一种用于制作细胞切片的方法，它可以保持细胞结构的完整性。
2
原理
该技术的原理是将固定的组织样本浸入石蜡中，使其固化，然后使用显微切片机 切割出薄片。
3
挑战
石蜡切片技术需要严格的控制温度和时间，以确保薄片的质量和细胞结构的完整 性。
石蜡切片制备方法
石蜡切片技术有多种制备方法，包括冷冻切片、热切片和冷热切片等。每种 方法都有其适用的情况和优缺点。
石蜡切片技术的应用领域
医学研究
石蜡切片技术在病理学和生 物医学研究中广泛应用，有 助于揭示疾病发生的机制。
植物学
通过石蜡切片技术，科学家 可以观察植物的细胞结构、 组织构造和生长过程。
材料科学
该技术也用于材料科学中， 用于观察材料的结构和性能。
石蜡切片技术的优势与不足
1 优势

石蜡切片流程一、引言石蜡切片是生物学、医学和材料科学等领域中常用的一种实验技术，用于制备样品的薄片，以便进行显微观察和分析。

本文将介绍石蜡切片的流程及其关键步骤。

二、材料准备1. 石蜡：选择适合的石蜡材料，常见的有硬质石蜡和软质石蜡。

2. 样品：根据需要选择合适的样品，可以是生物组织、细胞、材料等。

3. 切片刀：选择切割尖锐且锋利的切片刀，常见的有玻璃刀片和钢刀片。

4. 切片机：使用专业的切片机设备，保证切片的精准度。

三、石蜡切片流程1. 固定样品：将样品进行固定处理，常用的方法有福尔马林固定、乙醛固定、冷冻固定等。

固定的目的是保持样品的形态结构和生物活性。

2. 除去水分：将固定后的样品通过醇溶液逐渐去除水分，一般采用浓度逐渐降低的醇溶液，如75%乙醇、50%乙醇、30%乙醇等。

3. 渗透石蜡：将去水后的样品用石蜡进行渗透处理。

首先将样品置于较低融点的石蜡中，然后逐渐转移到较高融点的石蜡中，这样可以保证样品逐渐与石蜡融合。

4. 包埋：将渗透后的样品放入石蜡模具中，待石蜡凝固后，取出石蜡块。

5. 切片：使用切片机将石蜡块切割成薄片，切片的厚度根据需要进行调整，一般为4-10微米。

6. 切片处理：将切好的薄片浸泡在温水中，使其展平，并将薄片转移到载玻片上。

7. 固定薄片：将载玻片放入烘箱中，以适当的温度和时间使薄片与载玻片充分固定。

四、注意事项1. 操作环境：保持实验室的清洁和安静，避免灰尘和噪音对实验结果的影响。

2. 刀片处理：在使用切片刀前，先将其清洗干净并消毒，以防止样品污染。

3. 温度控制：石蜡切片的各个步骤中，温度的控制非常重要，可以根据不同的样品选择适当的温度。

4. 切片厚度：不同的样品需要不同的切片厚度，要根据实验需要进行调整。

5. 质量控制：在每个步骤结束后，要对样品的质量进行严格检查，确保切片的质量。

6. 保存条件：切好的石蜡切片应妥善保存，防止受潮或受到外界环境的污染。

五、总结石蜡切片是一种常用的实验技术，通过固定、去水、渗透石蜡、切片等步骤，可以制备出精细的样品薄片，用于显微观察和分析。

石蜡切片免疫荧光技巧
石蜡切片免疫荧光技术是一种常用的免疫组织化学方法，用于检测或定位特定抗原在组织样本中的分布情况。

以下是石蜡切片免疫荧光技术的步骤：
1. 组织固定和包埋：将组织样本固定在含有4%的缓冲甲醛中，以保持其形态和结构。

之后，将组织样本包埋在去离子石蜡中，以增加其硬度和切片的稳定性。

2. 去除蜡并切片：用刀片将固定和包埋的组织样本切割成薄片，通常为4-10微米厚。

3. 抗原解蜡：将蜡切片浸泡在去蜡溶液中，以去除蜡，并将其进行再水化，以恢复组织的水合状态。

4. 抗原检测：用适当的抗体与特定的抗原结合。

首先，用一种可以结合到抗原的初级抗体处理组织切片。

然后，使用荧光标记的二级抗体结合到初级抗体上，从而使标记可见。

5. 荧光显微镜观察：使用荧光显微镜观察组织切片，并通过选择合适的滤光片来检测和分析特定抗原的荧光信号。

不同的荧光染料可用于标记不同的抗原，以实现多重标记和多抗体检测。

石蜡切片免疫荧光技术具有高度的灵敏性和特异性，可用于检测和研究生物标志物在各种疾病和组织中的分布和表达水平。

⑥固定后不需冲洗，可直接投入70%的酒精中保存。
⑦固定材料适宜浓度为0.3%-5%。
（3）铬酸（chromic acid）
①穿透速度缓慢。
②能沉淀所有蛋白质，凝固核酸，增强核的着色能力，可作为核蛋白核核酸的固定液。能固定高尔基体及线粒体。常用于细胞学观察。
③只有铬酸能真正固定肝糖原，使之不溶于水。对脂类无影响；
样品采集与分割取样部位取样部位玉米叶主根侧根不定根一级侧根二级侧根根尖分区根的初生构造有丝分裂核型分析胚囊的发育单核胚囊第一次有丝分裂二核胚囊第二次有丝分裂四核胚囊八核胚囊植物材料的分割取材根据不同的实验目的选择相应的材料材料要求新鲜准确完整材料要避免挤压挫伤干枯
石蜡切片法
以石蜡作包埋剂，用旋转切片机将材料切成薄片，经一系列处理制成永久制片的方法。
⑦固定材料适宜浓度为0.5-2%。
锇酸的配制：用重蒸水配成母液2%，使用时，用PH7.0、0.2M磷酸缓冲液稀释一倍到1%。
（2）戊二醛
①穿透速度很快。
②固定微管蛋白，是微管的很好的固定液。
③用PH6.8-7.0、0.2M磷酸缓冲液配成25%母液，固定材料适宜浓度为3-6%。
（3）丙烯酸
①固定蛋白、核酸和聚多糖。
⑥市售的为37-40%甲醛，称为福尔马林，固定和保存材料的适宜浓度是10%福尔马林。（四）混合固定液：
由几种试剂，适量配制而成。混合遵循原则：①优缺点互补；②膨胀与收缩相
互平衡；③强氧化剂与还原剂应分别配置。
Bouin氏液
卡诺(Carnoy)氏固定液：
福尔马林-醋酸-酒精混合液：（FAA）
铬酸-醋酸中液
苦味酸、升汞、铬酸、碘均能使胞质蛋白和核蛋白凝固；酒精能沉淀胞质蛋白，而核蛋白沉淀后溶于水；醋酸不能凝固胞质蛋白,但能凝固核蛋白;福尔马林、锇酸、重铬酸钾对两种蛋白都不凝固。

简单固定液又称单纯固定液，就是用一种化学试剂作为固定液，如乙醇、甲醛溶液、冰醋酸等,它们只是对细胞的某种成分固定得较好；不能将细胞所有的成分都保存下来。如升汞固定蛋白质、冰醋酸固定核蛋白、无水乙醇可固定糖原等，单纯固定液是有局限性的。
混合固定液就是用几种化学药品，按一定的比例混合配制而成的，由于各种药品的优缺点互相弥补，因此可产生较好的效果。良好的固定剂应该具备以下条件：
⑦固定材料适宜浓度为0.5-2%。
锇酸的配制：用重蒸水配成母液2%，使用时，用PH7.0、0.2M磷酸缓冲液稀释一倍到1%。
（2）戊二醛
①穿透速度很快。
②固定微管蛋白，是微管的很好的固定液。
③用PH6.8-7.0、0.2M磷酸缓冲液配成25%母液，固定材料适宜浓度为3-6%。
（3）丙烯酸
①固定蛋白、核酸和聚多糖。
痉挛而死。
上述动物若需麻醉后取材，则可用脱脂棉球蘸氯仿或乙醚、置于动物的鼻尖部，令其吸入麻醉。大动物(狗、猴等)应用氨基甲酸乙酯作静脉注射麻醉．剂量一般为每kg动物体重用1 g。麻醉后的动物也需放血后进行取材固定。
昆虫等小动物可投入充满氯仿或乙醚蒸气的大口瓶中，令其麻醉。若要杀死，可将其投入含氰化钾的毒瓶中。
（2）石蜡块也有一定限制，一般（5-6mm）。2.切割面一般分为两类：
（1）横切面：使用刀横越根、茎的横断面的切面，横切片可观察材料自外向内的各种组织。
（2）纵切面：刀的切向与根、茎的长轴方向平行的切面，这种切面又分为两种：
①半径切面：以刀穿过中心点与其半径吻合的切面，这种切面可观察到茎中各种组织纵走的情形及髓的排列、厚度等。
石蜡切片法步骤
一、取材
二、固定
三、抽气
四、冲洗
五、脱水
六、透明