下载文档原格式
石蜡切片技术实验实验目的掌握动植物材料石蜡切片的方法及要求。
实验原理石蜡制片法是将材料经固定、脱水、透明、浸蜡后包埋在石蜡里面进行切片的方法。
此法适用范围，制片手段完备，能将材料切成极薄的片子（可切至2-8微米左右），并能制成连续的片子，这是其它制片法难以达到的，因此在光学显微镜的制片技术上它是最常用的一种方法。
除了一些经不住石蜡切片法中所应用的各种药剂处理的材料不能应用石蜡切片以外，一般的材料都可以用此法制片，但有制作时间较长，操作过程复杂以及材料易发硬或发脆等缺点。
该法多采用旋转式切片机进行切片。
实验材料小白鼠各种器官组织试剂１、７０％、８０％、９０％、９５％酒精及无水酒精：９５％以下的各级浓度酒精是用９５％酒精加蒸馏水稀释而成。
简单的稀释方法：所需稀释的浓度是多少，就量取多少毫升原浓度的酒精，再加蒸馏水至该酒精的原浓度即可。
例如，配制７０％酒精，就量取７０ml９５％酒精，然后加入２５ml蒸馏水即成。
２、固定液：常用的固定液有１０％福尔马林、Bouin氏液和Zenker氏液等。
Bouin氏液在组织学切片技术方面应用甚广，配方如下：苦味酸饱和水溶液７５ml福尔马林２５ml冰醋酸５ml３、蛋白甘油：蛋白甘油是粘贴蜡片用的粘片剂。
配方如下：取一新鲜鸡蛋的蛋白，充分搅拌成雪花状泡沫，然后滤去泡沫，加入等量甘油，搅拌均匀，再加入一小粒麝香草酚防腐。
４、染色液：以H.E.染色法为例，需配制苏木精染液和曙红染液。
⑴、苏木精染液：苏木精是一种碱性染料，它可将染色质染成蓝紫色。
配方有多种，现介绍Harris氏苏木精的配制：甲液：苏木精０.５ g９５％酒精５.０ ml乙液：硫酸铝钾（或硫酸铝铵）１０g蒸馏水１００ ml氧化汞０.２５g冰醋酸几滴先将甲液溶解，再将硫酸铝钾溶于蒸馏水中，并加热使溶解，然后将两液混合煮沸，离开火焰后缓缓加入氧化汞。
冷却后过滤，加入几滴冰醋酸即成。
⑵、０.５％曙红酒精溶液：即０.５g曙红溶于１００ml９５％酒精中。
石蜡切片的主要步骤石蜡切片是一种常用的制备薄片的技术，广泛应用于生物学、医学和材料科学等领域。
本文将介绍石蜡切片的主要步骤，并详细说明每个步骤的操作方法和注意事项。
1. 样品固定和处理在进行石蜡切片之前，首先需要对待切样品进行固定和处理。
固定样品的方法可以根据实验的需要选择，常用的有乙醛固定、冰醋酸固定和福尔马林固定等。
处理样品的方法也根据实验目的而定，可以包括染色、脱水、透明化等步骤，以便更好地观察和研究样品。
2. 包埋将处理好的样品包埋在石蜡中，以便进行切片。
首先，将样品放入石蜡溶液中，使其充分浸泡。
然后，将石蜡溶液转移到恒温水浴中，使其逐渐固化。
在固化过程中，要确保样品均匀分布在石蜡中，避免出现气泡和空洞。
3. 切片切片是石蜡切片过程中最关键的一步。
首先，将固化的石蜡块从模具中取出，并放置在切片机的夹持装置上。
然后，调整切片机的切片厚度和速度，根据需要选择合适的参数。
接下来，使用切片刀将石蜡块切割成薄片。
在切割过程中，要保持手稳定，避免切片厚度不均匀或出现断层。
4. 切片取片切片切割完成后，需要将切片从切片刀上取下。
首先，使用镊子将切片从切片刀上小心取下，避免损坏或弯曲切片。
然后，将切片放置在预先准备好的载玻片上。
在放置切片时，要注意避免气泡的产生，可以使用专门的工具如细管吸气来帮助排除气泡。
5. 去除石蜡和染色切片取片后，需要将切片上的石蜡去除，并进行染色处理。
首先，将切片放入去石蜡剂中，使其充分浸泡。
然后，将切片转移到浸泡染色剂中，进行染色处理。
在去石蜡和染色过程中，要注意时间控制和温度控制，以确保染色效果和切片质量。
6. 封片和封边染色完成后，需要将切片做成封片，以保护切片并便于保存。
首先，将切片用透明胶片或玻璃片覆盖。
然后，使用封片胶或封片胶带将切片和覆盖物固定在一起。
接下来，将切片的边缘进行封边处理，以避免切片脱落或污染。
7. 干燥和贴标封片完成后，需要将切片进行干燥处理，并进行贴标。
石蜡切片制备技术活的细胞或组织多为无色透明，各种组织间和细胞内各种结构之间均缺乏反差，在一般光镜下不易清楚区别出；组织离开机体后很快就会死亡和产生组织腐败，失去原有正常结构，因此，组织要经固定、石蜡包埋、切片及染色等步骤以免细胞组织死亡，而能清晰辨认其形态结构。
石蜡切片是组织学常规制片技术中最为广泛应用的方法。
石蜡切片不仅用于观察正常细胞组织的形态结构，也是病理学和法医学等学科用以研究、观察及判断细胞组织的形态变化的主要方法，而且也已相当广泛地用于其他许多学科领域的研究中。
教学中，光镜下观察切片标本多数是石蜡切片法制备的。
石蜡切片法是将组织经过一系列药品处理，使石蜡渗入组织，包埋成蜡块，再把组织蜡块切成极薄的片子，根据不同的需要用不同的染色方法以显示不同细胞和组织的形态，以及细胞和组织中某些化学或特殊（如抗原）成份含量的变化。
一、所需器材及试剂1，器材切片刀，切片机，恒温箱，熔蜡炉，蜡杯，酒精灯，蜡铲，铺片台，冷冻台，解剖刀，镊子，台木，毛笔，染色缸，盖玻片，载玻片，中性树胶，显微镜。
2，试剂各种浓度的酒精（70%、80%、90%、95%、100%）、二甲苯、石蜡、苏木精染液，0.5%伊红酒精溶液，1%盐酸酒精溶液等。
二、石蜡切片制备过程1，取材采集病料要及时，以防组织变质发生自溶。
病理组织材料要采取病变典型突出的部分，最好选病变与健康组织的交界处，以识别和探讨病变的发生和发展。
2，固定采集样品在滤纸上吸干后迅速放入4％甲醛溶液中固定七天以上，使组织细胞的蛋白质变性凝固，以防止细胞死后的自溶或细菌的分解，从而保持细胞原来的形态结构。
3，洗涤切取约1cm×1cm×0.3mm固定好的组织，放入带盖的网槽中用自来水冲洗过夜，调节流量使水从底部缓慢流出。
4，脱水透明组织经固定和水洗后含多量水分，水与透明剂、石蜡不能溶合，因此，在透明、浸蜡前必须进行脱水，把组织中的水份彻底驱除。
酒精为常用脱水剂，它既能与水相混合，又能与透明剂相混，为了减少组织材料的急剧收缩，应使用从低浓度到高浓度递增的顺序进行。
石蜡切片的基本操作流程石蜡切片是一种常用的组织学技术，用于制备组织切片，以便进行显微镜观察和研究。
以下是石蜡切片的基本操作流程：1. 组织固定：首先，将待切片的组织标本进行固定，以保持组织结构的完整性和稳定性。
常用的固定剂包括福尔马林、酒精和乙醛等。
固定时间的长短取决于组织的大小和类型，一般为数小时至数天。
2. 组织去水化：固定后的组织需要去除固定剂并脱水，以防止切片过程中的破损和变形。
通常采用逐渐增加乙醇浓度的脱水步骤，常见的乙醇浓度为70%、80%、90%和100%。
3. 组织浸渍：脱水后，组织需要进一步浸渍到石蜡中，以增加组织的硬度和支持性。
首先将组织放入浸渍剂中，如甲醛或乙醇中的苯麻油，然后逐渐增加石蜡浓度，常见的石蜡浓度为50%、70%和100%。
4. 组织包埋：在组织浸渍后，将组织放入包埋模具中，然后倒入熔化的石蜡，使其完全包裹住组织。
包埋完成后，将模具放入冷却台或冷冻器中，使石蜡迅速固化。
5. 石蜡切片：将冷却固化的石蜡块从模具中取出，使用切片机将其切割成薄片。
切片机通常配有刀片、切片夹和切片盒等工具，切片时需要注意切片的方向和角度，以获取最佳的切片效果。
6. 切片染色：切片完成后，可以对切片进行染色，以便更好地观察和分析组织结构和细胞形态。
常用的染色方法包括血液染色、组织染色和免疫组化染色等。
7. 切片封片：染色后，将切片放置在载玻片上，并使用透明的封片剂将其覆盖。
封片剂可以保护切片，防止切片脱落和变形，并提高显微镜观察的清晰度。
8. 切片观察：最后，将封片的切片放置在显微镜下进行观察和分析。
可以使用不同的显微镜镜头和放大倍数来观察组织细节和细胞结构，同时可以使用图像分析软件对切片图像进行处理和测量。
总体而言，石蜡切片的基本操作流程包括组织固定、去水化、浸渍、包埋、切片、染色、封片和观察等步骤。
每个步骤都需要严格控制条件和操作技巧，以确保获得高质量的组织切片用于研究和诊断。
石蜡切片制作步骤1、洗涤：将固定的样品放入70%的酒精中，数次更换至样品颜色变白。
2、脱水：80%酒精——→90%酒精——→95%酒精——→100%酒精——→100酒精（每步时间为1h）3、透明：酒精二甲苯（1:1）——→纯二甲苯——→纯二甲苯（每步时间为15min）4、透蜡：石蜡二甲苯（1:1）——→纯石蜡——→纯石蜡（每步时间为1h，在恒温箱60℃）5、包埋：将熔化石蜡倒入小盒中，加组织、调整、凝固（4h以上）6、切片：修整包埋好的的石蜡块，切片厚度为5μm（刀放置的倾斜角以10—20°为宜，刀刃与蜡块表面呈5°夹角。
包埋好，放置于4℃冰上，修成梯形。
）7、展片：载玻片加蛋白甘油——→加蜡条——→滴蒸馏水——→展片台加热（55℃水浴中展开，展开程度以带黄颜色的组织完全摊平为准。
）8、烘片：37℃恒温箱烘烤2—3dHE染色：9、脱蜡：纯二甲苯——→纯二甲苯——→二甲苯酒精（每步3min）10、复水：100%酒精——→100%——→95%——→95%——→90%——→80%——→70%——→双蒸水（每步3—5min）11、染色：苏木精——→水浇（10—20min）——→1%盐酸酒精（若干秒）——→水浇（1min）——→1%氨水（1—3min）——→水浇（1min）——→70%酒精——→80%——→90%——→95%——→0.5%伊红——→95%（30s）——→95%（30s）（迅速除去玻片上的伊红染液，迅速！未说明的每步时间为3—5min）12、脱水：100%乙醇——→100%乙醇（每步3—5min）13、透明：二甲苯酒精（1:1）——→纯二甲苯——→纯二甲苯（每步3—5min）14、封藏：切片取出，滴加中性树胶，盖上情结的盖玻片烘干，几天后显微镜下拍照。
