石蜡切片技术

石蜡切片技术实验实验目的掌握动植物材料石蜡切片的方法及要求。

实验原理石蜡制片法是将材料经固定、脱水、透明、浸蜡后包埋在石蜡里面进行切片的方法。

此法适用范围，制片手段完备，能将材料切成极薄的片子（可切至2-8微米左右），并能制成连续的片子，这是其它制片法难以达到的，因此在光学显微镜的制片技术上它是最常用的一种方法。

除了一些经不住石蜡切片法中所应用的各种药剂处理的材料不能应用石蜡切片以外，一般的材料都可以用此法制片，但有制作时间较长，操作过程复杂以及材料易发硬或发脆等缺点。

该法多采用旋转式切片机进行切片。

实验材料小白鼠各种器官组织试剂１、７０％、８０％、９０％、９５％酒精及无水酒精：９５％以下的各级浓度酒精是用９５％酒精加蒸馏水稀释而成。

简单的稀释方法：所需稀释的浓度是多少，就量取多少毫升原浓度的酒精，再加蒸馏水至该酒精的原浓度即可。

例如，配制７０％酒精，就量取７０ml９５％酒精，然后加入２５ml蒸馏水即成。

２、固定液：常用的固定液有１０％福尔马林、Bouin氏液和Zenker氏液等。

Bouin氏液在组织学切片技术方面应用甚广，配方如下：苦味酸饱和水溶液７５ml福尔马林２５ml冰醋酸５ml３、蛋白甘油：蛋白甘油是粘贴蜡片用的粘片剂。

配方如下：取一新鲜鸡蛋的蛋白，充分搅拌成雪花状泡沫，然后滤去泡沫，加入等量甘油，搅拌均匀，再加入一小粒麝香草酚防腐。

４、染色液：以H.E.染色法为例，需配制苏木精染液和曙红染液。

⑴、苏木精染液：苏木精是一种碱性染料，它可将染色质染成蓝紫色。

配方有多种，现介绍Harris氏苏木精的配制：甲液：苏木精０.５ g９５％酒精５.０ ml乙液：硫酸铝钾（或硫酸铝铵）１０g蒸馏水１００ ml氧化汞０.２５g冰醋酸几滴先将甲液溶解，再将硫酸铝钾溶于蒸馏水中，并加热使溶解，然后将两液混合煮沸，离开火焰后缓缓加入氧化汞。

冷却后过滤，加入几滴冰醋酸即成。

⑵、０.５％曙红酒精溶液：即０.５g曙红溶于１００ml９５％酒精中。

石蜡切片的主要步骤石蜡切片是一种常用的制备薄片的技术，广泛应用于生物学、医学和材料科学等领域。

本文将介绍石蜡切片的主要步骤，并详细说明每个步骤的操作方法和注意事项。

1. 样品固定和处理在进行石蜡切片之前，首先需要对待切样品进行固定和处理。

固定样品的方法可以根据实验的需要选择，常用的有乙醛固定、冰醋酸固定和福尔马林固定等。

处理样品的方法也根据实验目的而定，可以包括染色、脱水、透明化等步骤，以便更好地观察和研究样品。

2. 包埋将处理好的样品包埋在石蜡中，以便进行切片。

首先，将样品放入石蜡溶液中，使其充分浸泡。

然后，将石蜡溶液转移到恒温水浴中，使其逐渐固化。

在固化过程中，要确保样品均匀分布在石蜡中，避免出现气泡和空洞。

3. 切片切片是石蜡切片过程中最关键的一步。

首先，将固化的石蜡块从模具中取出，并放置在切片机的夹持装置上。

然后，调整切片机的切片厚度和速度，根据需要选择合适的参数。

接下来，使用切片刀将石蜡块切割成薄片。

在切割过程中，要保持手稳定，避免切片厚度不均匀或出现断层。

4. 切片取片切片切割完成后，需要将切片从切片刀上取下。

首先，使用镊子将切片从切片刀上小心取下，避免损坏或弯曲切片。

然后，将切片放置在预先准备好的载玻片上。

在放置切片时，要注意避免气泡的产生，可以使用专门的工具如细管吸气来帮助排除气泡。

5. 去除石蜡和染色切片取片后，需要将切片上的石蜡去除，并进行染色处理。

首先，将切片放入去石蜡剂中，使其充分浸泡。

然后，将切片转移到浸泡染色剂中，进行染色处理。

在去石蜡和染色过程中，要注意时间控制和温度控制，以确保染色效果和切片质量。

6. 封片和封边染色完成后，需要将切片做成封片，以保护切片并便于保存。

首先，将切片用透明胶片或玻璃片覆盖。

然后，使用封片胶或封片胶带将切片和覆盖物固定在一起。

接下来，将切片的边缘进行封边处理，以避免切片脱落或污染。

7. 干燥和贴标封片完成后，需要将切片进行干燥处理，并进行贴标。

石蜡切片制备技术活的细胞或组织多为无色透明，各种组织间和细胞内各种结构之间均缺乏反差，在一般光镜下不易清楚区别出；组织离开机体后很快就会死亡和产生组织腐败，失去原有正常结构，因此，组织要经固定、石蜡包埋、切片及染色等步骤以免细胞组织死亡，而能清晰辨认其形态结构。

石蜡切片是组织学常规制片技术中最为广泛应用的方法。

石蜡切片不仅用于观察正常细胞组织的形态结构，也是病理学和法医学等学科用以研究、观察及判断细胞组织的形态变化的主要方法，而且也已相当广泛地用于其他许多学科领域的研究中。

教学中，光镜下观察切片标本多数是石蜡切片法制备的。

石蜡切片法是将组织经过一系列药品处理，使石蜡渗入组织，包埋成蜡块，再把组织蜡块切成极薄的片子，根据不同的需要用不同的染色方法以显示不同细胞和组织的形态，以及细胞和组织中某些化学或特殊（如抗原）成份含量的变化。

一、所需器材及试剂1，器材切片刀，切片机，恒温箱，熔蜡炉，蜡杯，酒精灯，蜡铲，铺片台，冷冻台，解剖刀，镊子，台木，毛笔，染色缸，盖玻片，载玻片，中性树胶，显微镜。

2，试剂各种浓度的酒精（70%、80%、90%、95%、100%）、二甲苯、石蜡、苏木精染液，0.5%伊红酒精溶液，1%盐酸酒精溶液等。

二、石蜡切片制备过程1，取材采集病料要及时，以防组织变质发生自溶。

病理组织材料要采取病变典型突出的部分，最好选病变与健康组织的交界处，以识别和探讨病变的发生和发展。

2，固定采集样品在滤纸上吸干后迅速放入4％甲醛溶液中固定七天以上，使组织细胞的蛋白质变性凝固，以防止细胞死后的自溶或细菌的分解，从而保持细胞原来的形态结构。

3，洗涤切取约1cm×1cm×0.3mm固定好的组织，放入带盖的网槽中用自来水冲洗过夜，调节流量使水从底部缓慢流出。

4，脱水透明组织经固定和水洗后含多量水分，水与透明剂、石蜡不能溶合，因此，在透明、浸蜡前必须进行脱水，把组织中的水份彻底驱除。

酒精为常用脱水剂，它既能与水相混合，又能与透明剂相混，为了减少组织材料的急剧收缩，应使用从低浓度到高浓度递增的顺序进行。

石蜡切片的基本操作流程石蜡切片是一种常用的组织学技术，用于制备组织切片，以便进行显微镜观察和研究。

以下是石蜡切片的基本操作流程：1. 组织固定：首先，将待切片的组织标本进行固定，以保持组织结构的完整性和稳定性。

常用的固定剂包括福尔马林、酒精和乙醛等。

固定时间的长短取决于组织的大小和类型，一般为数小时至数天。

2. 组织去水化：固定后的组织需要去除固定剂并脱水，以防止切片过程中的破损和变形。

通常采用逐渐增加乙醇浓度的脱水步骤，常见的乙醇浓度为70%、80%、90%和100%。

3. 组织浸渍：脱水后，组织需要进一步浸渍到石蜡中，以增加组织的硬度和支持性。

首先将组织放入浸渍剂中，如甲醛或乙醇中的苯麻油，然后逐渐增加石蜡浓度，常见的石蜡浓度为50%、70%和100%。

4. 组织包埋：在组织浸渍后，将组织放入包埋模具中，然后倒入熔化的石蜡，使其完全包裹住组织。

包埋完成后，将模具放入冷却台或冷冻器中，使石蜡迅速固化。

5. 石蜡切片：将冷却固化的石蜡块从模具中取出，使用切片机将其切割成薄片。

切片机通常配有刀片、切片夹和切片盒等工具，切片时需要注意切片的方向和角度，以获取最佳的切片效果。

6. 切片染色：切片完成后，可以对切片进行染色，以便更好地观察和分析组织结构和细胞形态。

常用的染色方法包括血液染色、组织染色和免疫组化染色等。

7. 切片封片：染色后，将切片放置在载玻片上，并使用透明的封片剂将其覆盖。

封片剂可以保护切片，防止切片脱落和变形，并提高显微镜观察的清晰度。

8. 切片观察：最后，将封片的切片放置在显微镜下进行观察和分析。

可以使用不同的显微镜镜头和放大倍数来观察组织细节和细胞结构，同时可以使用图像分析软件对切片图像进行处理和测量。

总体而言，石蜡切片的基本操作流程包括组织固定、去水化、浸渍、包埋、切片、染色、封片和观察等步骤。

每个步骤都需要严格控制条件和操作技巧，以确保获得高质量的组织切片用于研究和诊断。

石蜡切片制作步骤1、洗涤：将固定的样品放入70%的酒精中，数次更换至样品颜色变白。

2、脱水：80%酒精——→90%酒精——→95%酒精——→100%酒精——→100酒精（每步时间为1h）3、透明：酒精二甲苯（1:1）——→纯二甲苯——→纯二甲苯（每步时间为15min）4、透蜡：石蜡二甲苯（1:1）——→纯石蜡——→纯石蜡（每步时间为1h，在恒温箱60℃）5、包埋：将熔化石蜡倒入小盒中，加组织、调整、凝固（4h以上）6、切片：修整包埋好的的石蜡块，切片厚度为5μm（刀放置的倾斜角以10—20°为宜，刀刃与蜡块表面呈5°夹角。

包埋好，放置于4℃冰上，修成梯形。

）7、展片：载玻片加蛋白甘油——→加蜡条——→滴蒸馏水——→展片台加热（55℃水浴中展开，展开程度以带黄颜色的组织完全摊平为准。

）8、烘片：37℃恒温箱烘烤2—3dHE染色：9、脱蜡：纯二甲苯——→纯二甲苯——→二甲苯酒精（每步3min）10、复水：100%酒精——→100%——→95%——→95%——→90%——→80%——→70%——→双蒸水（每步3—5min）11、染色：苏木精——→水浇（10—20min）——→1%盐酸酒精（若干秒）——→水浇（1min）——→1%氨水（1—3min）——→水浇（1min）——→70%酒精——→80%——→90%——→95%——→0.5%伊红——→95%（30s）——→95%（30s）（迅速除去玻片上的伊红染液，迅速！未说明的每步时间为3—5min）12、脱水：100%乙醇——→100%乙醇（每步3—5min）13、透明：二甲苯酒精（1:1）——→纯二甲苯——→纯二甲苯（每步3—5min）14、封藏：切片取出，滴加中性树胶，盖上情结的盖玻片烘干，几天后显微镜下拍照。

石蜡切片的实验报告石蜡切片的实验报告石蜡切片是生物学和医学领域中常用的技术手段，它可以将组织样本固定在切片上，以便于观察和分析。

本次实验旨在探究石蜡切片技术的原理、步骤和应用。

一、石蜡切片技术的原理石蜡切片技术是一种常用的组织学研究方法，它的原理基于石蜡的透明性和稳定性。

石蜡是一种具有较高熔点的蜡状物质，具有良好的剪切性和切片稳定性。

在进行石蜡切片前，需要将组织样本进行固定、脱水和浸渍处理，使其具备适合切片的性质。

然后，将固定好的组织样本浸入石蜡中，石蜡渗透进入组织细胞中，将其包裹在石蜡中形成固定的切片。

最后，使用显微镜对切片进行观察和分析。

二、石蜡切片的步骤1. 组织样本的固定：将组织样本取出后，迅速进行固定处理。

常用的固定剂有福尔马林、乙醛等，可以使组织样本保持原有的形态结构。

2. 脱水处理：将固定好的组织样本进行脱水处理，以去除组织中的水分。

脱水过程中，需要逐渐使用浓度递增的酒精进行浸泡，使组织逐渐脱水至无水状态。

3. 浸渍处理：将脱水后的组织样本浸泡在石蜡溶液中，使其充分浸渍。

浸渍时间根据组织样本的大小和类型而定，一般需要数小时至数天。

4. 石蜡包埋：将浸渍好的组织样本放入石蜡模具中，加热使石蜡融化，将组织样本包裹在石蜡中。

包埋过程中需要控制温度和时间，以确保石蜡充分渗透到组织中。

5. 石蜡切片：使用石蜡切片机将包埋好的组织样本切割成薄片。

切片时需要调整切片机的切割速度和刀片的角度，以获得理想的切片质量。

6. 切片染色：将切好的石蜡切片进行染色处理，以增强组织结构的对比度和可见性。

常用的染色方法有血液学染色、组织学染色等。

7. 显微镜观察：将染色好的石蜡切片放置在显微镜下进行观察和分析。

通过显微镜的放大功能，可以清晰地观察到组织样本的细胞结构和组织构成。

三、石蜡切片技术的应用石蜡切片技术在生物学和医学领域中有广泛的应用。

首先，它可以用于病理学研究，帮助医生诊断和治疗疾病。

通过观察石蜡切片下的组织结构，医生可以了解病变的类型、程度和分布情况，从而制定相应的治疗方案。

石蜡切片流程一、引言石蜡切片是生物学、医学和材料科学等领域中常用的一种实验技术，用于制备样品的薄片，以便进行显微观察和分析。

本文将介绍石蜡切片的流程及其关键步骤。

二、材料准备1. 石蜡：选择适合的石蜡材料，常见的有硬质石蜡和软质石蜡。

2. 样品：根据需要选择合适的样品，可以是生物组织、细胞、材料等。

3. 切片刀：选择切割尖锐且锋利的切片刀，常见的有玻璃刀片和钢刀片。

4. 切片机：使用专业的切片机设备，保证切片的精准度。

三、石蜡切片流程1. 固定样品：将样品进行固定处理，常用的方法有福尔马林固定、乙醛固定、冷冻固定等。

固定的目的是保持样品的形态结构和生物活性。

2. 除去水分：将固定后的样品通过醇溶液逐渐去除水分，一般采用浓度逐渐降低的醇溶液，如75%乙醇、50%乙醇、30%乙醇等。

3. 渗透石蜡：将去水后的样品用石蜡进行渗透处理。

首先将样品置于较低融点的石蜡中，然后逐渐转移到较高融点的石蜡中，这样可以保证样品逐渐与石蜡融合。

4. 包埋：将渗透后的样品放入石蜡模具中，待石蜡凝固后，取出石蜡块。

5. 切片：使用切片机将石蜡块切割成薄片，切片的厚度根据需要进行调整，一般为4-10微米。

6. 切片处理：将切好的薄片浸泡在温水中，使其展平，并将薄片转移到载玻片上。

7. 固定薄片：将载玻片放入烘箱中，以适当的温度和时间使薄片与载玻片充分固定。

四、注意事项1. 操作环境：保持实验室的清洁和安静，避免灰尘和噪音对实验结果的影响。

2. 刀片处理：在使用切片刀前，先将其清洗干净并消毒，以防止样品污染。

3. 温度控制：石蜡切片的各个步骤中，温度的控制非常重要，可以根据不同的样品选择适当的温度。

4. 切片厚度：不同的样品需要不同的切片厚度，要根据实验需要进行调整。

5. 质量控制：在每个步骤结束后，要对样品的质量进行严格检查，确保切片的质量。

6. 保存条件：切好的石蜡切片应妥善保存，防止受潮或受到外界环境的污染。

五、总结石蜡切片是一种常用的实验技术，通过固定、去水、渗透石蜡、切片等步骤，可以制备出精细的样品薄片，用于显微观察和分析。

一、实习背景石蜡切片技术是生物学、医学、病理学等领域中常用的技术手段之一，通过将组织或细胞固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、染色等步骤，制作出可供显微镜观察的切片。

为了提高我的实践能力，我参加了石蜡切片技术的实习。

二、实习目的1. 熟悉石蜡切片技术的原理和操作步骤。

2. 掌握石蜡切片技术的基本操作技能。

3. 提高实验操作规范性和安全性。

三、实习内容1. 实验原理石蜡切片技术是将组织或细胞固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、染色等步骤制作成可供显微镜观察的切片。

该技术具有切片厚度均匀、保存时间长、操作简便等优点。

2. 实验步骤（1）取材：选取新鲜、无病虫害的组织或细胞。

（2）固定：将组织或细胞浸入固定液中，使蛋白质凝固，防止细胞自溶。

（3）洗涤：用蒸馏水冲洗固定后的组织或细胞，去除固定液。

（4）脱水：将组织或细胞逐步浸入浓度递增的酒精溶液中，去除水分。

（5）透明：将组织或细胞浸入透明液中，使细胞质变得透明。

（6）浸蜡：将组织或细胞浸入熔化的石蜡中，使组织包埋在石蜡中。

（7）包埋：将浸蜡后的组织或细胞嵌入石蜡块中。

（8）切片：使用切片机将包埋在石蜡块中的组织或细胞切成薄片。

（9）脱蜡：将切片逐步浸入浓度递减的酒精溶液中，去除石蜡。

（10）染色：将切片浸入染色液中，使细胞结构着色。

（11）脱水：将切片逐步浸入浓度递增的酒精溶液中，去除水分。

（12）透明：将切片浸入透明液中，使细胞质变得透明。

（13）封片：将切片贴在载玻片上，滴加封片剂，制成永久性玻片标本。

3. 实验操作在实习过程中，我严格按照实验步骤进行操作，注意以下几点：（1）取材要新鲜、无病虫害。

（2）固定液要充分浸渍组织或细胞。

（3）脱水、透明、浸蜡等步骤要逐步进行，避免过度处理。

（4）切片厚度要均匀，避免过厚或过薄。

（5）染色要充分，确保细胞结构清晰。

（6）封片要牢固，避免切片脱落。

四、实习总结通过本次石蜡切片技术实习，我掌握了石蜡切片技术的基本原理和操作步骤，提高了实验操作规范性和安全性。