脾气虚动物模型-讲义

脾气虚证动物模型造模方法综述季婧２００２２０７１３７上海中医药大学摘要：脾气虚证动物模型是重要的动物模型之一，其主要的造模方法有泻下法、偏食法（偏食醋法、偏食酒加醋法、偏食苦味法）、饮食失节法（限制饮食法、肥甘过度法、饥饱失常法）、耗气破气法、现代医学造模法（利血平法、秋水仙碱法、环磷酰胺法、Ｘ射线法）、综合法（耗气破气加苦寒泻下法、耗气破气加饮食失节法、劳倦过渡加苦寒泻下法、劳倦过度加饮食失节法、劳倦过度加饮食失节加苦寒泻下法、病证结合造模法）等。

本文对这几种方法作了介绍，并讨论了现存的一些问题。

关键词：脾气虚动物模型综述中医的现代研究离不开动物实验，而辩证是中医的特点之一，因此中医证动物模型的应用已成为中医科研方法体系的一个重要组成部分，是开展中医证候及中药新药实验研究的一个重要方法。

脾气虚证模型是重要的动物模型之一，近几年来不断发展和规范，现将目前主要的脾气虚证模型的造模方法作一综述。

１．泻下法李东垣在《脾胃论》中有苦寒之药损其脾胃，泄泻致虚的论述。

根据这一理论，采用苦寒泻下法来制造脾气虚证模型。

常用药物为大黄、番泻叶等。

例如有学者给ｌ８～２０ｇ的雌雄昆明种小鼠喂饲大黄水煎剂，剂量为１．２ｇ／ｋｇ，连续用药１Ｏ天①；给２００～３００ｇ的ＳＤ大鼠灌服１ｇ／ｍＬ的生大黄煎剂，剂量为２０ｍｌ／ｋｇ，每天２次，连续用药１８天②；给２２０～２５Ｏｇ的雄性ｗｉｓｔａｒ大鼠灌服１０～２０％的番泻叶水浸剂３～４ｍｌ／ｄ，连续用药１２天③；给１８０ｇ的雄性Ｗｓｉｔａｒ大鼠喂饲药物饲料（大黄：芒硝：普通饲料＝０．８５：０．１５：９．００），连续用药２２天④等来复制脾气虚证动物模型。

２．偏食法中医理论认为，五味入五脏，偏嗜五味，损伤五脏。

据此产生了不少偏食法塑造脾虚证动物模型的方法。

比较成功的有偏食醋法、偏食酒加醋法、以及偏食苦味法。

《素问生气通天论》中有云：味过于酸，肝气以津，脾气乃绝。

因此有用食醋法制造脾气虚证动物模型。

脾气虚证动物模型造模方法与模型评价的研究概述曾梅艳;陈雪莲;宋厚盼;陈小娟;陈新怡;赵沅;蔡雄;喻嵘;谢梦洲【摘要】脾气虚证为临床常见的病证之一,证候动物模型是中医临床研究病因病机与疾病发展的基础,其中脾气虚证动物模型的建立对于脾胃病证的研究意义重大.在三十余年来的研究发展进程中,脾气虚证动物模型的构建经历了从单因素造模方法到复合因素造模方法的发展过程,研究取得一定成果的同时也暴露了一些问题.本文整理了脾气虚证动物模型的构建方法及模型评价方法,对其存在的问题进行探讨,以期为今后脾胃病的基础与临床研究提供参考.【期刊名称】《湖南中医药大学学报》【年(卷),期】2019(039)002【总页数】6页(P284-289)【关键词】脾气虚证;动物模型;模型评价【作者】曾梅艳;陈雪莲;宋厚盼;陈小娟;陈新怡;赵沅;蔡雄;喻嵘;谢梦洲【作者单位】湖南中医药大学中医诊断学湖南省重点实验室,湖南长沙 410208;湖南中医药大学数字中医药协同创新中心,湖南长沙410208;湖南中医药大学中医学院,湖南长沙 410208;湖南中医药大学医学院,湖南长沙 410208;湖南中医药大学中医诊断学湖南省重点实验室,湖南长沙 410208;湖南中医药大学数字中医药协同创新中心,湖南长沙410208;湖南中医药大学中医学院,湖南长沙 410208;湖南中医药大学中医诊断学湖南省重点实验室,湖南长沙 410208;湖南中医药大学数字中医药协同创新中心,湖南长沙410208;湖南中医药大学中医学院,湖南长沙 410208;湖南中医药大学中医诊断学湖南省重点实验室,湖南长沙 410208;湖南中医药大学数字中医药协同创新中心,湖南长沙410208;湖南中医药大学中医学院,湖南长沙410208;湖南中医药大学中医诊断学湖南省重点实验室,湖南长沙 410208;湖南中医药大学数字中医药协同创新中心,湖南长沙410208;湖南中医药大学中医学院,湖南长沙 410208;湖南中医药大学中医诊断学湖南省重点实验室,湖南长沙 410208;湖南中医药大学数字中医药协同创新中心,湖南长沙410208;湖南中医药大学中医学院,湖南长沙 410208;湖南中医药大学中医学院,湖南长沙 410208;湖南中医药大学中医诊断学湖南省重点实验室,湖南长沙 410208;湖南中医药大学数字中医药协同创新中心,湖南长沙410208【正文语种】中文【中图分类】R223.1脾气虚证是由于脾的运化统血功能失常，导致脾不能正常地将水谷转化为精微物质，并输运到全身各个组织，引起消化、免疫等多系统和器官功能紊乱，从而导致一系列证候，临床以纳少、腹胀、便溏、疲乏为主要表现。

一、肺脾气虚动物模型的复制方法：模型的建立方法：模型组采用<实用中医证侯动物模型学》之"烟熏法肺气虚证动物模型"复制法，并复合木瓜蛋白酶雾化吸人法复制SD大鼠"肺气虚证"模型。

番泻叶冷服泻下法复制"脾气虚证"模型。

具体方法如下：将以上3组大鼠分别置于特制的lm3烟室中。

用刨花、锯末、烟叶各30-50g，另加硫磺5-10g，点燃烟熏，每日2次，每次30分钟，注意适当通风，以防大鼠窒息。

造模期6o天。

并于造模开始后第3o、32、34、36天给以上各组大鼠木瓜蛋白酶雾化吸人，具体方法如下：在大鼠清醒状态下，每次将5只大鼠放入一40×40×40cm的与超声波雾化器相连的透明雾化箱中，通过雾化管向箱中喷入用0．9％Nacl液稀释为3g的木瓜蛋白酶，每次雾化量2ml。

造模第20天开始，以浓度为lg／ml冰冷的番泻叶浸液，按lml／100g体重的剂量给大鼠灌胃，每日1次，持续3o天。

正常对照组，分室常规喂养，不做任何处理。

参考文献：李亚光，曹柏龙，贾东岩.慢性阻塞性肺疾病"肺脾气虚证"复合证型动物模型的研究.内蒙古中医药,2005年第5期：18-19.二、肺气虚动物模型的复制方法：1. 造模方法：气管内注入脂多糖(LPS)并烟熏方法复制肺气肿/COPD肺气虚证大鼠模型。

(此法最常用)具体方法：于模型复制的第1和14天用10％水合氯醛腹腔麻醉后，行气管内注入LPS200ug ／200ul，庆大霉素局部抗炎，缝合皮肤并消毒。

术后第2～13、15～28天，置于1 m×1 m ×1 m的烟室中，香烟(焦油量为12 mg，烟气烟碱量为1．1 mg)烟熏，每日30 min；自由进食、饮水。

对照组：将每只大鼠于第1、14天气管内注入0．9％氯化钠注射液200 u1；于第2～13、15-28天，置于无烟熏同样环境中饲养，余法同模型组。

脾虚模型的制作以及评价为了探讨动物脾虚的临床症状、病理变化以及通过对脾虚动物进行相关研究来评价脾虚模型的制作是否成功，我们进行了此次综合大实验。

脾位于腹内，其主要功能为主运化，统血，主肌肉四肢。

脾开窍于口，在液为涎。

脾的经脉络于胃，与胃相表里。

脾主运化，运指运输，化，即消化吸收，或者指转化，主要是指它有消化、吸收、运输营养物质及水湿的功能；脾主统血，是指脾有统摄血液在脉中正常运行，不致溢出脉外的功能；脾主肌肉四肢指脾可为肌肉四肢提供营养，肌肉四肢的生长发育及丰满有力，主要依赖脾所运化水谷精微的濡养。

脾气通于口，脾和则能知五谷，若脾失键运，则动物食欲减退。

若脾虚则运化功能失调，食欲不振，贫血，四肢无力，精神不振，脾虚泄泻，因此可以得知长时间的腹泻必然引起脾的虚弱。

大承气汤的组成是大黄、芒硝、枳实、厚朴，大黄是攻下药，芒硝是泻下药，枳实、厚朴都是理气药，其中芒硝药效更强为破气药，可以导致腹泻；番泻叶也是一种泻下药但效力于大承气汤不同，因此试验中决定设立两组实验组，一组小鼠灌服大承气汤，另一组小鼠灌服番泻叶，为了增加实验结果的可靠性，还要设立一个空白对照组，灌服生理盐水。

每组有五只小鼠。

作为一个综合大实验，实验过程所需时间长，而且是脾虚病理模型的制作，要导致脾虚也需要时间。

因此决定试验时间设定为五天，第一组小鼠每天灌服生理盐水1ml，第二组小鼠每天灌服大承气汤0.5ml，第三组小鼠每只灌服番泻叶浸出液1ml，每天观察小鼠的体温，精神状态，背毛的状况，食欲，饮水，粪便情况。

等到第五天灌药之后可以简单的通过一些实验来评价模型的制作是否成功。

脾虚之后会影响到小鼠的体力、抵抗力、免疫力。

考虑到现有的实验条件决定用耐疲劳试验（游泳试验）、耐缺氧试验（在密闭空间存活时间）、耐寒冷试验（环境低温存活时间）三个实验来评价脾虚模型是否成功。

一、药液的制备1、大承气汤的制备：其中大黄、芒硝、枳实、厚朴的成分比例为1；2；1：1，生药的含量要求是1g/ml，根据实验要求，以及实验过程中所需要的用量，称取大黄、枳实、厚朴各40g，芒硝80g，加入五倍量的水煎熬45分钟后将药液过滤进烧杯中，再加入适量的水在药渣中加热煮沸30分钟，将两次的药液混合在一起，过滤。

多因素复合建立脾气虚证大鼠模型及以方测证研究摘要目的：以大黄法、游泳力竭法、饥饿法多因素复合建立一种新的脾气虚证大鼠模型。

方法：动物随机分为对照组、模型组及中药组，以多因素复合法对模型组及中药组大鼠进行造模，21天后处理部分大鼠，检测指标。

其余大鼠继续实验，以黄芪建中汤灌服中药组，生理盐水灌服对照组及模型组，21天后处理大鼠，检测指标。

结果：造模大鼠血清木糖浓度、血清肌酸磷酸激酶活性、血清胃泌素水平下降，胃窦G细胞数减少，与对照组比较差异有统计学意义(P0．05)。

结论：多因素复合复制的脾气虚证大鼠模型稳定性良好，克服了单因素造模持续时间短、自愈性强的缺点，经得起药物反证，是一种可行而稳定的脾气虚证造模方法。

关键词多因素脾气虚证大鼠模型以方测证脾气虚证的造模方法虽多，但较多存在稳定性、重复性差等不足。

本实验尝试采用大黄法、游泳力竭法、饥饿法多因素复合的方法制作脾气虚证大鼠模型，并以健脾中药反证，以期找寻一种稳定、可靠的脾气虚造模方法。

1 材料与方法1．1 动物与分组：清洁级Wistar大鼠48只，由浙江中医药大学实验动物中心提供，雌雄各半，体重180±20g。

动物随机分为对照组、模型组、中药组，各组16只。

1．2 药物与试剂：大黄制剂液：将生大黄饮片碎成粉，用蒸馏水浸泡，置于50℃水浴6h，去渣取汁。

黄芪建中汤(黄芪、桂枝、生姜各9g，炙甘草6g，白芍18g，大枣12g，饴糖30g)水煎剂：常规煎煮，浓缩为含生药6kg／L。

D—木糖试剂盒，南京建成生物工程研究所；胃泌素放免试剂盒，北京北方生物技术研究所；兔抗大鼠胃泌素抗，北京北方生物技术研究所；酶标记HRP二抗，美国DAKO公司；二氨基联苯胺(DAB)，北京中山生物技术公司。

1．3 主要仪器：SN-695型智能放免γ测量仪、LX-20型Beckman全自动生化分析仪、722型光栅分光光度计、石蜡包埋机、Leitz1512型组织切片机、OLYMPUS双目显微镜、LEICADMLB偏光摄像显微镜。

脾虚证动物模型的研究进展蒋琦彭怡雯沈淑怡黄越燕*（嘉兴学院医学院，浙江嘉兴314001）【摘要】脾虚证是临床常见证型，在脾虚证模型基础上复制病证结合动物模型，可以为中医药实验研究提供中医理论基础及新的研究方案和手段。

本文对近年来脾虚证动物模型的研究现状进行了综述。

【关键词】脾虚证动物模型研究现状综述Research progress on animal medels of spleen deficiency syndromeJiang Qi，Peng Yiwen，Shen Shuyi.The Medical School of Jiaxing University，Jiaxiang，Zhejiang314001【Abstract】Spleen deficiency syndrome is a common clinical syndrome.It can provide a theoretical basis of traditional Chinese medicine and a new research program and means for experimental research of traditional Chinese medicine.This paper reviews the research status of animal models of spleen deficiency syndrome in recent years.【Key Words】Spleen deficiency syndrome Animal medels Research siatus Revlew中图分类号：R4文献标识码：B文章编号：1672-1721（2021）13-1903-03DOI：10.19435/j.1672-1721.2021.13.064以动物证候实验为科研先导，弥补临床研究的不足，揭示中医理论本质，科学评价中药新药，对推动中药现代化发展具有重要的促进作用。

脾气虚证代谢综合征大鼠模型的复制杨宇峰;滕飞;石岩【摘要】目的:观察通过劳倦加饮食不节造模方法能否成功复制出脾气虚证代谢综合征动物模型.方法:健康雄性SD大鼠40只,体质量180±20g,随机分为空白对照组(n=10)和模型组(n =30)2组.模型组单日喂食甘蓝15～20g/只,游泳至耐力极限；双日高糖高脂膳食持续喂养,共计12周.结果:造模结束后模型组出现高胰岛素血症、胰岛素抵抗,符合本研究拟建立的脾气虚证、代谢综合征的评估标准.【期刊名称】《中国中医基础医学杂志》【年(卷),期】2013(019)004【总页数】3页(P392-393,396)【关键词】脾气虚;代谢综合征;动物模型【作者】杨宇峰;滕飞;石岩【作者单位】辽宁中医药大学,沈阳 110032;辽宁中医药大学,沈阳 110032;辽宁中医药大学,沈阳 110032【正文语种】中文【中图分类】R589成功建立代谢综合征(metabolic syndrome，MS)动物模型是研究MS的基础和必须。

目前MS的基础研究多选用大鼠MS模型，按照造模方法一般将MS鼠类模型分为三类，即遗传型模型、喂养型模型和药物型模型。

喂养型模型主要是使用无特殊遗传背景的大鼠为造模对象，并给予长期高热量、高脂肪、高盐等摄入诱导其表现出MS的相关临床症状。

因其比较稳定可靠，且方法简单易行、成本低、成模率高，广泛应用于MS实验研究。

本实验以期建立一种经济、可靠、易于操作、成模周期短、更适合用于研究MS机制的动物模型，同时考虑到多吃少动的现代生活方式所导致的肥胖是MS重要的致病因素［1］，通过喂饲大鼠高糖高脂饲料成功诱导大鼠MS的模型，为MS的发病机制研究提供了可靠的研究平台。

1 材料1.1 实验动物健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠50只，体质量180±20g，由辽宁中医药大学教学实验中心提供(动物合格证号 SCXK(辽)2004-0018)。

脾气虚证动物模型造模方法与模型评价的研究概述作者：曾梅艳陈雪莲宋厚盼陈小娟陈新怡赵沅蔡雄喻嵘谢梦洲来源：《湖南中医药大学学报》2019年第02期〔摘要〕脾气虚证为临床常见的病证之一，证候动物模型是中医临床研究病因病机与疾病发展的基础，其中脾气虚证动物模型的建立对于脾胃病证的研究意义重大。

在三十余年来的研究发展进程中，脾气虚证动物模型的构建经历了从单因素造模方法到复合因素造模方法的发展过程，研究取得一定成果的同时也暴露了一些问题。

本文整理了脾气虚证动物模型的构建方法及模型评价方法，对其存在的问题进行探讨，以期为今后脾胃病的基础与临床研究提供参考。

〔关键词〕脾气虚证;动物模型;模型评价〔中图分类号〕R223.1; ; ; ;〔文献标志码〕A; ; ; ;〔文章编号〕doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2019.02.031脾氣虚证是由于脾的运化统血功能失常，导致脾不能正常地将水谷转化为精微物质，并输运到全身各个组织，引起消化、免疫等多系统和器官功能紊乱，从而导致一系列证候，临床以纳少、腹胀、便溏、疲乏为主要表现。

中医证候模型是利用动物的某些生物体表特征来模拟人体证候特征的一类生物表征模型，以此来诠释中医理论或解决中医临床问题[1]。

本文总结了当前脾气虚证各种造模方法及检测评价指标，分析现有模型存在的弊端，探究未来的研究方向，旨在寻求更符合临床症状与体征的脾气虚证动物模型。

1 脾气虚证动物模型的构建方法1.1; 单因素造模方法1.1.1; 苦寒泻下法; 北京师范大学生物系消化生理科研组根据“大忌苦寒之药损其脾胃”的论述，选取昆明种雄性小鼠进行试验，给予中药大黄煎剂1 g/mL进行造模，发现模型组动物出现体质量减轻并有纳怠、少动、四肢无力、脱肛、便溏、毛发枯涩、畏寒、耐寒力低等与临床相似的“脾气虚”症状，以四君子汤反证，则症状好转[2]。

樊慧杰等[3]通过给大鼠灌服大黄煎剂20 g/（kg·d），连续灌胃18 d，大鼠出现便溏、消瘦、精神萎靡、懒动、蜷缩、行动缓慢、脱肛等脾气虚症状。