尿尿素检测试剂盒(脲酶波氏比色法)

一、脲酶测定(比色法)脲酶是对尿素转化起关键作用的酶，它的酶促反应产物是可供植物利用的氮源，它的活性可以用来表示土壤供氮能力。

1、试剂配制：（1）pH6.7柠檬酸盐溶液：取368g柠檬酸溶于600mL蒸馏水中，另取295g 氢氧化钾溶于水，再将两种溶液合并，用1N氢氧化钠将pH调至6.7，并用水稀释至2L。

（2）苯酚钠溶液：称取62.5g苯酚溶于少量乙醇中，加2mL甲醇和18.5mL 丙酮，后用乙醇稀释至100mL（A液），保存再冰箱中。

称取27g氢氧化钠溶于100mL水中（B液），保存于冰箱中。

使用前，取A、B两液各20mL混和，并用蒸馏水稀释至100mL备用。

（3）次氯酸钠溶液：用水稀释制剂至活性氯的浓度为0.9％，（1.9g次氯酸钠溶于1L水中）溶液稳定。

（4）10％尿素溶液：10g尿素溶于100mL水中。

（5）N的标准溶液：精确称取0.4717g硫酸铵溶于水稀释至1L，则得1mL 含0.1mgN的标液，再将此液稀释10倍制成氮工作液（0.01mg/mL）。

2、操作步骤称取5ｇ土置于50mL容量瓶中,加1mL甲苯处理,加塞塞紧轻摇15ｍｉｎ;往瓶中加入5mL10%尿素液和10mL的柠檬酸盐缓冲液(ｐＨ6.7),仔细混匀。

在37℃恒温箱中培养24ｈ。

然后用热至38℃的蒸馏水稀释至刻度(甲苯应浮在刻度以上),摇荡,将悬液过滤。

取滤液1mL置于50mL容量瓶中,用蒸馏水稀释至10mL,然后加入4mL苯酚钠溶液,并立即加入3mL次氯酸钠溶液，加入每一试剂后,立即将混合物摇匀,20ｍｉｎ后,将混合物稀释至刻度,在波长578ｎｍ处测定吸光值。

脲酶活性以样品所得的吸光值减去对照样品吸光值之差,根据标准曲线求出氨态氮量。

标准曲线绘制：分别取0、1、3、5、7、9、11、13mL氮工作液置于50mL容量瓶中，加蒸馏水至20mL，再加4mL苯酚钠溶液和3mL次氯酸钠溶液，随加随摇匀，20min后显色，定容。

1h内再分光光度计上于578nm处比色。

摘要：本实验旨在利用酶标仪检测脲酶活性，通过酶联免疫吸附测定（ELISA）技术，研究不同条件下脲酶的活性变化。

实验结果表明，酶标仪能够准确、快速地测定脲酶活性，为相关研究提供有力工具。

关键词：酶标仪；脲酶；ELISA；活性测定一、引言脲酶是一种广泛存在于生物体内的酶，主要催化尿素分解为氨和二氧化碳。

脲酶在生物体内具有重要作用，如参与氮代谢、氮循环等。

近年来，脲酶的研究在农业、医药、环保等领域具有重要意义。

为了准确、快速地测定脲酶活性，本研究采用酶标仪进行ELISA实验，探讨不同条件下脲酶活性的变化。

二、实验材料与仪器1. 实验材料：- 脲酶试剂盒（包括标准品、酶联试剂、洗涤剂等）- 样品（如尿液、组织等）- 0.05 mol/L磷酸盐缓冲液（pH 7.4）2. 实验仪器：- 酶标仪- 洗板机- 移液器- 低温离心机- 培养箱三、实验方法1. 样品处理：- 将样品按照试剂盒说明书进行稀释和预处理。

- 将预处理后的样品置于低温离心机中，离心5分钟，取上清液。

2. ELISA实验：- 将酶联试剂按照说明书进行配制，加入待测样品，进行酶联反应。

- 加入底物，进行显色反应。

- 加入终止液，终止反应。

- 使用酶标仪在450 nm波长下测定吸光度。

3. 数据处理：- 将实验数据与标准曲线进行拟合，计算脲酶活性。

四、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：- 以酶联试剂的浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

- 标准曲线线性良好，相关系数R²>0.99。

2. 不同条件下脲酶活性变化：- 在不同pH、温度、酶浓度等条件下，脲酶活性存在显著差异。

- 在pH 7.4、温度37℃、酶浓度1 U/mL的条件下，脲酶活性最高。

3. 实验结果分析：- 本实验采用酶标仪进行ELISA实验，能够准确、快速地测定脲酶活性。

- 不同条件下脲酶活性存在显著差异，可能与酶的稳定性、活性位点暴露程度等因素有关。

五、结论本实验通过酶标仪ELISA技术，成功测定了不同条件下脲酶的活性。

核转录因子-κB、正肝型脂肪酸结合蛋白与新生儿窒息肾损伤的相关性分析贺秀文;邓世霞;娄金环【摘要】目的探讨血清核转录因子-κB(NF-κB)、正肝型脂肪酸结合蛋白(L-FABP)与新生儿窒息Apgar评分的相关性.方法选取2014年7月至2017年7月我院儿科收治的窒息新生儿178例为研究组,根据肾功能损伤情况,将患儿分为急性肾损伤组(AKI组,58例)和非急性肾损伤组(非AKI组,120例),根据窒息严重程度将AKI患儿分为重度窒息组和轻度窒息组;选取同期在我院产科出生的健康足月新生儿50例作为对照组.检测比较AKI组、非AKI组、对照组小儿NF-κB、L-FABP、血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)水平及Apgar评分,对窒息患儿NF-κB、L-FABP水平与肾功能、Apgar评分的关系进行Spearman相关分析.结果 AKI组患儿NF-κB、L-FABP、BUN、Scr水平均显著高于非AKI组患儿和对照组小儿,1 min Apgar评分显著低于非AKI组患儿和对照组小儿,差异有统计学意义(P＜0.05);非AKI组惠儿NF-κB、L-FABP水平均显著高于对照组小儿,1 min Apgar评分显著低于对照组小儿,差异有统计学意义(P＜0.05).重度窒息AKI患儿NF-κB、L-FABP、BUN、Scr水平均显著高于轻度窒息AKI患儿,1 min Apgar评分显著低于轻度窒息AKI 患儿,差异有统计学意义(P＜0.05).窒息患儿的NF-κB、L-FABP水平与BUN或Scr水平呈正相关,与1 min Apgar评分呈负相关.NF-κB、L-FABP联合检测诊断窒息新生儿肾损伤的灵敏度、特异度及准确度分别84.4％、90.0％和88.2％.结论窒息新生儿的NF-κB、L-FABP水平与BUN或Scr水平正相关,与1 min Apgar 评分呈负相关;联合检测NF-κB和L-FABP水平早期诊断窒息新生儿肾损伤具有较高的准确率.【期刊名称】《内科》【年(卷),期】2018(013)004【总页数】4页(P606-609)【关键词】新生儿窒息;肾损伤;核转录因子-κB;正肝型脂肪酸结合蛋白;相关分析【作者】贺秀文;邓世霞;娄金环【作者单位】甘肃省酒泉市妇幼保健计划生育服务中心检验科,酒泉市735000;甘肃省酒泉市第二人民医院检验科,酒泉市735000;甘肃省酒泉市妇幼保健计划生育服务中心妇科,酒泉市735000【正文语种】中文【中图分类】R722;R692新生儿窒息是产科常见病，是指新生儿在娩出后有心跳、但无自主呼吸或规律呼吸的缺氧状态，患儿机体出现大量炎性介质释放，引起脑、心、肾等多器官损伤，严重影响患儿的身体发育[1]。

第十一章肾功能及早期肾损伤的检查一、A11、正常成人每日通过肾小球滤过的原尿约（）。

A、1.5LB、3LC、50LD、100LE、180L2、不与碱性苦味酸试剂反应的是（）。

A、乙酰乙酸B、丙酮C、丙酮酸D、氨基酸E、维生素C和葡萄糖3、所谓选择性蛋白尿是（）。

A、肾小球有选择性地保留了尿中的蛋白B、肾小管有选择性地重吸收了尿中的蛋白C、分子量＜70000的蛋白可通过肾小球滤过及出现在尿中D、分子量＞70000的蛋白可通过肾小球滤过及出现在尿中E、尿蛋白定性阴性4、肾病综合征低蛋白血症的主要原因是（）。

A、肾小管重吸收不足B、肝脏合成清蛋白不足C、清蛋白分解代谢增强D、蛋白质摄入量减少E、肾小球滤膜通透性增强5、某患者血肌酐为88.4μmol/L，尿肌酐浓度为4420μmol/L，24h尿量为1584ml，其内生肌酐清除率为（）。

A、35ml/minB、55ml/minC、50ml/minD、175ml/minE、3300ml/min6、急性肾小球肾炎时，肾小球的滤过功能改变是（）。

A、大部分病人正常B、正常C、下降D、正常或增高E、增高7、检查远端肾小管功能的试验是（）。

A、尿微量白蛋白测定B、血肌酐测定C、酚红排泌试验D、浓缩-稀释试验E、血β2-微球蛋白测定8、正常情况下能被肾小管完全重吸收的物质是（）。

A、尿素B、肌酐C、尿酸D、白蛋白E、葡萄糖9、由近端肾小球以胞饮形式重吸收的β2微球蛋白是（）。

A、59.9%B、69.9%C、79.9%D、89.9%E、99.9%10、几乎不被肾小管重吸收的物质是（）。

A、尿素B、氨基酸C、肌酐D、谷胱甘肽E、肌酸11、素氮测定（脲酶法）时，无蛋白血滤液中之尿素经尿素酶作用后可产生（）。

A、氨基硫脲B、硫酸钠C、碳酸钠D、氨E、NH4+12、急性肾小球肾炎尿中以哪种蛋白为主（）。

A、白蛋白B、α1球蛋白C、α2球蛋白D、β球蛋白E、β2微球蛋白13、肾小球滤过的葡萄糖被重吸收最多的部位是（）。

实验四脲酶活力测定(纳氏试剂比色法)一、实验原理脲酶催化尿素水解成氨和二氧化碳，最适反应pH 7.0。

反应式：(NHO2CO+ HO ^脲酶＞2NH3 + CO2氨与纳氏试剂反应生成黄色配合物，其吸光度与氨浓度成正比，故可用以测定服酶的活力大小。

反应式：NH・ F2O+ 2KHgl4 + 3KOH ■—HgO • HgNH + 7KI + 3H 20(纳氏试剂) (碘化氨氧合汞)二、实验步骤将待测酶液用磷酸盐缓冲液适当稀释后，按下述顺序操作：取3支干净干燥试管，编号：1空白；2、标准；3、样品。

按下表步骤加入实验制备的酶液及试剂：(7)从样品管加尿素开始计时，准确反应5min,立即向样品管(3号管)加1 mol -L HSQ 1.00mL，终止反应。

(8)另取3支干净试管，分别对应于上面各反应液进行显色(9)各管混匀后，30min内，用分光光度计测试:比色记录A260nm A i A A3三、结果计算脲酶活力(U • mL -1) = ( A 3 - A 1 ) *标准管中的NH微摩尔数(A 2 - A 1 ) * min * 酶样品毫升数式中：n为酶样品的稀释倍数四、仪器和试剂1 、分光光度计、恒温水浴器、试管等。

2、“有机溶剂沉淀法制备大豆脲酶”实验中制备的脲酶提取液和粗酶液，用磷酸盐缓冲液适当稀释。

3 、3 ％尿素底物溶液：3g 高纯尿素用磷酸盐缓冲液溶解，并定容至100mL 。

4、磷酸盐缓冲液（pH7.0）: 6.70 g Na2HPO4 • 2 H2O , 3.25 g KH2PO4，溶于蒸馏水并定容至100 mL 。

5、 1 mol • L -1 HSQ溶液：56mL浓硫酸，缓慢加入盛有约600 mL蒸馏水的容量瓶中，冷却后加水定容至1000mL。

6、硫酸铵标准溶液：称取在60° C干燥至恒重的分析纯硫酸铵1.322g，蒸馏水溶解，并定容至100mL。

此溶液含NH3为40卩mol • mL-1。

实验十七实验名称：尿素的测定实验目的与要求：掌握测定血清尿素的基本原理实验仪器、试剂：半自动生化分析仪、尿素测定试剂盒实验原理：尿素经脲酶水解生成NH3与CO2,在谷氨酸脱氢酶（GLDH）的作用下，氨与α-酮戊二酸及还原型辅酶Ⅰ（NADH）反应生成谷氨酸和NAD+，NADH在340nm 处的吸光度下降速率与待测样品中尿素的含量成正比。

操作方法：1、将试剂R1：R2=4：1混合，即为工作液2、按下列顺序加入各试剂单位ml 空白标准样本蒸馏水0.01 ——样本－－0.01标准液－0.01 －工作液 1.0 1.0 1.03、混匀各管，340nm,空白管调零，延时30秒，读取初始吸光度A1，60秒后读取A2，计算ΔA实验现象与数据：记录ΔA结果分析与结论：尿素＝ΔA样/ΔA标×C标（8.32 mmol/l）参考范围：1.7-8.3mmol/l临床意义：实验十八实验名称：血清尿酸的测定实验目的与要求：掌握尿酸酶-过氧化物酶耦联法测定尿酸的基本原理实验仪器、试剂：尿酸测定试剂盒，722E/723分光光度计实验原理：尿酸酶氧化尿酸，生成尿囊素和过氧化氢，在过氧化物酶催化下，过氧化氢使ESBmT和4－氨基安替比林缩合成有色化合物，其在546nm吸光度与尿酸浓度成正比。

操作方法：按以下步骤操作单位ml 标准测定空白样本－0.025 －标准液0.025 －－蒸馏水－－0.025酶试剂 1.0 1.0 1.0混匀37℃温浴5min，以空白管调零。

546nm，0.5cm比色杯，测定各管的A 实验现象与数据：记录各管的A结果分析与结论：血清尿酸浓度＝A样/A标×C标（357μmol/l）参考值：男202－416μmol/L，女142-339μmol/L临床意义：思考题：P223第2题。

养殖与饲料2017年第9期摘要尿素氮的检测方法很多，本文对其检测过程和检测结果的准确性及稳定性进行综述，并指出使用方便、推广性较强的检测方法。

关键词奶牛；乳尿素氮；蛋白质；检测方法奶牛尿素氮检测方法王玲玲辽宁省畜牧业经济管理站，沈阳110032收稿日期：2017-06-01王玲玲，女，1984年生，畜牧师。

奶牛生产中所用的尿素氮是指乳尿素氮（milk urea nitrogen ，MUN ），是牛群改良计划必备的日常监测指标，奶牛日粮中蛋白质的需要量和利用率、能量平衡、繁殖率以及诊断代谢疾病已成为世界范围内奶牛科学研究的热点[1]。

测定MUN 的方法主要有二乙酰-肟法、脲酶-波氏比色法、红外光谱法。

自20世纪90年代中期欧美已将测定MUN 作为DHI 检测的重要指标之一[2]，但国内外都没有MUN 的标准方法。

本文总结了4种检测方法，为寻找操作更为简单、检测速度快和实用的MUN 检测方法提供参考。

乳尿素氮（Milk Urea Nitrogen ，MUN ）是指尿素在乳中的浓度，单位为mg/dL ，是评定日粮蛋白质利用率的一个重要指标。

目前我国奶牛MUN 值是15.5mg/dL ，美国MUN 标准浓度为10～14mg/dL ，加拿大MUN 标准浓度为8～14mg/dL ，欧洲MUN 标准浓度为15～30mg/dL [3]。

1监测乳尿素氮的意义根据MUN 的测定值来分析蛋白代谢的有效性和牛群瘤胃中氮代谢的效率，确保奶牛能氮平衡和最大效率地利用饲料蛋白质。

测定值过高，说明饲料中的蛋白质利用率不好，导致能氮不平衡，造成日粮氮的浪费，影响奶牛的繁殖；若测定值过低，说明蛋白质补充不足，影响奶牛的生产性能。

根据MUN 的测定值来限制蛋白质供给量，提高氮的利用率，并监测奶牛场氨的排放。

根据MUN 的测定，了解牛群的整体营养状况与繁殖情况，及时调整奶牛饲料配方，实现对牛群的精细化管理。

2尿素氮的检测方法2.1直接法1）红外法。

植物类黄酮检测试剂盒(比色法)简介：类黄酮(Flavonoids)是植物重要的一类次生代谢产物，它以结合态（黄酮苷）或自由态（黄酮苷元）形式存在于水果、蔬菜、豆类和茶叶等许多食源性植物中。

Leagene 植物类黄酮检测试剂盒(比色法)检测原理是类黄酮溶于有机溶剂，以有机溶剂粗提类黄酮，根据提取液的吸收光谱特性，可利用分光光度计在特定波长(325nm)处测定其吸光度，通过与标准曲线比较，计算出类黄酮含量，主要用于植物组织或果实中类黄酮的提取以及定量检测类黄酮含量。

该试盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：自备材料：1、 实验材料：桃子、李子、苹果、杏等果实或其他植物组织2、 研钵或匀浆器3、 离心管4、 滤纸或纱布5、 比色杯6、 分光光度计操作步骤(仅供参考)：1、 类黄酮提取：①取果实或其他植物组织，洗净，擦干，称取剪碎的新鲜样品，置于4℃预冷的研钵或匀浆器。

②加入4℃预冷的 Flavonoids Assay buffer ，充分研磨或匀浆后转入10ml 离心管中。

用Flavonoids Assay buffer 冲洗研钵或匀浆器并转移至离心管中，补加Flavonoids Assay buffer 至。

③4℃避光静置，期间摇动2~3次，然后过滤至离心管中，滤液即为类黄酮粗提液。

2、 稀释Flavonoids 标准溶液：取适量的Flavonoids 标准(1mg/ml)，按下表进行稀释：编号 名称TP1113 50T Storage试剂(A): Flavonoids 标准(1mg/ml) 5ml 4℃ 避光 试剂(B): Flavonoids Assay buffer 500mlRT 避光 使用说明书1份加入物(ml) 1 2 3 4 5 6 Flavonoids标准(1mg/ml) 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 1蒸馏水0.9 0.8 0.6 0.6 0.50 Flavonoids浓度(mg/ml) 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 1 3、加样：按照下表设置空白管、对照管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡，小心混匀。

一、实验目的1. 掌握尿素快速测定方法的基本原理和操作步骤。

2. 学习使用尿素检测试剂盒进行尿液中尿素含量的快速测定。

3. 熟悉实验数据的处理和分析方法。

二、实验原理本实验采用尿素酶法进行尿液中尿素含量的快速测定。

尿素酶能够将尿素分解为氨和二氧化碳，氨在碱性条件下与水生成氢氧化铵，进而与纳氏试剂中的硫酸铜反应生成黄色的络合物，颜色深浅与尿素含量成正比。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 尿液样本- 尿素检测试剂盒（包括试剂A、试剂B、纳氏试剂、pH缓冲液等）- 试管、移液管、滴定管、量筒等2. 实验仪器：- 酶标仪- 移液器- 恒温水浴锅四、实验步骤1. 样本准备：取适量尿液样本，加入试剂A，混匀后静置5分钟。

2. 滴定：向上述溶液中加入适量的试剂B，混匀后用移液管吸取纳氏试剂，逐滴加入混合溶液中，直至溶液呈现稳定的黄色。

3. 测定：将混合溶液置于酶标仪中，在特定波长下测定吸光度值。

4. 数据处理：根据吸光度值和标准曲线，计算尿液样本中的尿素含量。

五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：使用已知浓度的尿素标准溶液，按照上述实验步骤进行测定，绘制标准曲线。

2. 尿素含量测定：根据尿液样本的吸光度值，从标准曲线上查得对应的尿素浓度。

六、实验讨论1. 实验结果与理论值的一致性：本实验测定的尿素含量与理论值基本一致，说明实验方法可靠。

2. 影响实验结果的因素：尿液样本的保存、试剂的浓度、操作步骤等均可能影响实验结果。

3. 改进措施：为提高实验结果的准确性，可以采取以下措施：- 严格控制尿液样本的保存条件，避免细菌污染。

- 精确配制试剂，确保试剂浓度准确。

- 严格按照实验步骤进行操作，避免人为误差。

七、实验结论本实验采用尿素酶法对尿液样本中的尿素含量进行了快速测定，结果表明该方法简便、快速、准确，可用于临床检测和健康评估。

八、实验报告（以下为实验报告的详细内容，可根据实际情况进行修改和补充）1. 实验目的：掌握尿素快速测定方法的基本原理和操作步骤，学习使用尿素检测试剂盒进行尿液中尿素含量的快速测定。

一、实验目的1. 学习快速脲酶实验的原理和方法。

2. 掌握利用快速脲酶实验检测尿液中的脲酶活性。

3. 了解脲酶在临床诊断中的应用。

二、实验原理脲酶是一种催化脲分解成氨和二氧化碳的酶。

在正常情况下，人体代谢产生的尿素在肾脏通过脲酶的作用分解为氨和二氧化碳，氨在肾脏内与碳酸氢盐结合，形成碳酸铵，然后通过尿液排出体外。

当肾脏功能异常时，尿素在体内积累，导致脲酶活性升高。

因此，通过检测尿液中的脲酶活性，可以间接反映肾脏功能。

快速脲酶实验采用比色法，利用脲酶催化脲分解产生氨，氨与对硝基苯酚反应生成黄色化合物，通过比色测定脲酶活性。

三、实验材料1. 实验仪器：分光光度计、微量移液器、移液管、试管、烧杯等。

2. 实验试剂：脲酶试剂盒、对硝基苯酚、盐酸、氢氧化钠、磷酸盐缓冲液等。

3. 实验样品：尿液。

四、实验方法1. 样品处理：取尿液5ml，加入10ml的磷酸盐缓冲液，混匀，静置10分钟。

2. 标准曲线绘制：根据试剂盒说明书，配制一系列脲酶标准品溶液，分别加入对应的试剂，按照实验步骤进行反应，测定吸光度，以脲酶浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

3. 样品检测：按照标准曲线绘制步骤，将尿液样品进行处理，加入试剂，反应后测定吸光度。

4. 结果计算：根据标准曲线，查得样品对应的脲酶浓度，即为尿液脲酶活性。

五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：绘制标准曲线，线性范围为0.1～1.0 U/ml。

2. 样品检测：将尿液样品进行处理，加入试剂，反应后测定吸光度，查得样品对应的脲酶浓度为0.5 U/ml。

3. 结果分析：根据尿液脲酶活性检测结果，可以判断肾脏功能是否正常。

当尿液脲酶活性超过正常值时，提示肾脏可能存在功能障碍。

六、实验结论通过快速脲酶实验，成功检测了尿液中的脲酶活性，为临床诊断肾脏功能提供了有力依据。

实验结果表明，尿液脲酶活性与肾脏功能密切相关，对于早期发现肾脏疾病具有重要意义。

七、实验讨论1. 实验过程中，尿液样品处理和试剂配制要准确无误，避免误差。

尿素测定试剂盒（尿素酶-谷氨酸脱氢酶法）适用范围：用于体外定量测定人血清中尿素的浓度。

1.1.包装规格a) 试剂1：2×60ml，试剂2：2×15ml；b) 试剂1：4×60ml，试剂2：4×15ml；c）试剂1：2×80ml，试剂2：2×20ml；d) 试剂1：2×40ml，试剂2：2×10ml；e）试剂1：2×400ml，试剂2：2×100ml；f) 试剂1：2×72ml，试剂2：2×18ml；g）试剂1：1×40ml，试剂2：1×10ml；h）试剂1：12×16ml，试剂2：12×4ml。

1.2.试剂主要组成成分试剂1主要组成成分Tris缓冲液（PH 6.0-9.0） 115mmol/Lα-酮戊二酸 8mmol/L腺苷二磷酸（ADP） 2mg/L谷氨酸脱氢酶（GLDH）≥0.8KU还原型辅酶I（NADH） 0.35mmol/L试剂2主要组成成分Tris缓冲液（PH 6.0-9.0） 115mmol/Lα-酮戊二酸 8mmol/L 尿素酶（URH）≥40K2.1外观和性状2.1.1 试剂盒各组分应齐全、完整、液体无渗漏；外包装完好、无破损，标签完好、字迹清晰。

2.1.2 试剂1应为无色或淡黄色透明溶液;试剂2应为无色或淡黄色透明溶液。

2.2净含量应不低于试剂瓶标示装量。

2.3试剂空白2.3.1 试剂空白吸光度测定试剂空白吸光度，应≥1.0；2.3.2 试剂空白吸光度变化率试剂空白吸光度变化率△A/min≤0.04。

2.4分析灵敏度测试30mmol/L的被测物时，吸光度变化率（△A/min）应不低于0.025。

2.5准确度测定值与靶值相对偏差不超过±15%。

2.6精密度2.6.1批内精密度变异系数（CV）应不超过5％。

2.6.2批间精密度批间相对极差应不大于10%。

第十三章非蛋白含氮化合物及总胆汁酸测定非蛋白含氮化合物包括除蛋白质以外的尿素、肌酐、肌酸、尿酸、氨基酸、核苷酸、嘌呤、谷胱甘肽等多种含氮有机物。

临床上应用较多的有尿素、肌酐、尿酸和肌酸及它们的最终代谢产物氨，含血红素蛋白的代谢产物胆红素，以及肝脏合成的胆汁酸。

尿素、肌酐、尿酸和肌酐清除率可作为肾小球滤过功能的指标，尿酸水平还能反映嘌呤代谢紊乱的情况；尿肌酸测定能反映肌肉损害性疾病。

血氨是肝功能衰竭的指标，胆红素和胆汁酸可反映肝胆功能。

第一节血清尿素测定检测尿素的方法有二乙酰一肟法、半酶法和全酶法。

二乙酰一肟法需煮沸反应，检测精密度较差，目前临床实验室基本上已不使用。

半酶法是直接或间接测定经脲酶作用后由尿素转变成的氨，氨的测定方法有：①离子选择性电极法；②用波氏比色法；③干化学法。

脲酶－波氏比色法在基层实验室较多用。

全酶法用脲酶和谷氨酸脱氢酶偶联，使用连续监测法测定，可自动化，目前在多数医院普遍使用。

实验79 二乙酰一肟法测定血清尿素【原理】二乙酰在强酸条件下与尿素缩合成红色的4，5-二甲基-2-氧咪唑化合物，颜色深浅与尿素含量成正比。

因二乙酰不稳定，故由试剂中二乙酰一肟与强酸作用产生二乙酰。

【试剂】1．酸性试剂在三角烧瓶中加去离子水约100ml，然后加入浓硫酸44ml、85%磷酸66ml。

冷至室温，加入氨基硫脲50mg及硫酸镉(CdSO4·8H2O)2g，溶解后用去离子水稀释至1L。

置棕色瓶中，4℃可保存半年。

2．179.9mmol/L二乙酰一肟溶液称二乙酰一肟20g溶于去离子水中并定容至1L。

置棕色瓶中，4℃可保存半年。

3．尿素标准贮存液(100mmol/L) 精确称取于60～65℃干燥恒重的尿素(Mw为60.06)0.6g，溶解于无氨去离子水，并定容至100ml，加0.1g叠氮钠防腐，4℃可保存6个月。

4．尿素标准应用液(5mmol/L) 取5ml上述贮存液用无氨去离子水稀释至100ml。

货号：MS1814 规格：100管/48样脲酶（Urease，UE）测定试剂盒说明书微量法注意：正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：UE能够水解尿素，产生氨和碳酸。

UE活性与有机物质含量、全氮和速效氮含量呈正相关，反应了氮素状况。

测定原理：-N。

利用靛酚蓝比色法测定脲酶水解尿素产生的NH3自备实验用品及仪器：可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰、甲苯（不允许快递）和蒸馏水。

试剂的组成和配制：提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存；试剂一：粉剂×1瓶，临用前加入9mL蒸馏水，充分溶解待用，4℃保存；用不完的试剂4℃保存；试剂二：液体19mL×1瓶，4℃保存；试剂三A液：液体×1支，4℃保存；试剂三B液：液体×1瓶，4℃保存；临用前将A液倒入B液中混合，待用；用不完的试剂4℃保存一周；试剂四：液体2mL×1瓶，4℃保存；样本的前处理：1、细菌、细胞或组织样品的制备：细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。

8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2、血清（浆）样品：直接检测。

测定步骤：1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至578nm，蒸馏水调零。

2、将上清液稀释10倍（取0.1mL上清液，加入0.9mL蒸馏水）。

个对照管。

UE活力计算a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下标准条件下测定的回归方程为y = 0.0915x +0.0373；x为标准品浓度（μg/mL），y为吸光值A。

明胶培养基简介：明胶(Gelatin)是以动物的皮、骨为主要原料，通过洗浸、水解、过滤、凝胶、粉碎等工序制成的一种粉末，明胶的主要组成为氨基酸以及组成相同而分子量分布很宽的多肽分子混合物，分子量一般在几万至十几万。

细菌的生化试验(也称生化反应)是指由于不同细菌具有各自的酶系统，对底物的分解能力不同，由此产生的代谢产物也不同，通过生物化学的方法测定这些代谢产物的过程。

生化试验主要包括碳水化合物的生化试验、氨基酸和蛋白质的代谢试验、碳源和氮源的利用试验、酶类的代谢试验等。

不同的细菌对蛋白质的分解能力不同，一般先由胞外酶把蛋白质分解为短肽或氨基酸，侵入细菌体内后由胞内酶把肽类分解为氨基酸。

Leagene 明胶培养基又称明胶液化培养基，多用于明胶液化实验，其原理是细菌蛋白酶(胞外酶)可将明胶水解，由原来的固态变为液态，即为明胶液化，据此可判断该细菌有无分解蛋白的能力。

明胶培养基主要由高纯度明胶、蛋白胨、去离子水等组成，经无菌处理，室温下多呈淡黄色粘稠液体或胶冻状，如果需要液体形态则加热溶解后使用。

该试剂仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：自备材料：1、接种环2、恒温培养箱操作步骤(仅供参考)：1、 取幼龄菌株，穿刺接种于明胶培养基中，以不接种做对照，恒温箱培养。

2、 2天后取出，观察菌株的生长情况、培养基是否液化以及液化形状。

3、 如果需要液体形态则加热溶解后使用。

如用做穿刺培养，应加热溶解后分装成小份。

注意事项：1、 注意无菌操作，避免微生物污染。

2、 室温下多呈淡黄色粘稠液体或胶冻状，如果需要液体形态则加热溶解后使用。

编号 名称 CM0351 CM0351 Storage 明胶培养基 10×10ml 100ml 4℃ 使用说明书 1份3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期：6个月有效。

相关：编号名称CC0007 磷酸缓冲盐溶液(10×PBS,无钙镁)CM0004 LB培养基DC0032 Masson三色染色液DF0135 多聚甲醛溶液(4% PFA)NR0001 DEPC处理水(0.1%)PS0013 RIPA裂解液(强)TC1167 尿素(Urea)检测试剂盒(脲酶波氏比色法)。

尿素测定方法的概述【摘要】尿素是人体内蛋白质代谢的最终产物，由肝脏合成主要通过肾脏排出。

血清尿素的测定是临床上用于诊断和观察各种肾脏疾病的一项重要指标。

尿素浓度处于各个不同的医学决定水平有着不同的临床意义。

并且尿素的检测对慢性肾脏疾病的病程、病情观察及预后判断均有意义，但它并不是肾功能损伤的特异性指标[1]。

以往测定尿素采用尿素氮报告结果，但无论在生理或病理情况吓，能够确切反映肾功能、体液渗透压等有效成分实为尿素而非为尿素氮。

固现推荐统一采用尿素报告结果。

换算公式为：1mmol/L尿素氮=1/2mmol/L[2]。

【关键词】尿素;脲酶;比色法1 标本血清和肝素抗凝血浆在二乙酰一肟法，脲酶/GLDH，离子导电法中均可应用。

氟化物能抑制脲酶反应，故不能用氟化物作为血清的抗凝剂，肝素铵抗凝剂也不能在脲酶法中使用。

尿标本按照1：20到1：50稀释后，可用以上三种方法测定。

由于尿素易于被细菌降解，故血清和尿样品在分析前应放置在4—8℃。

2 测定方法血清尿素的测定是临床上用来诊断和观察各种肾脏疾病的重要生化指标，尿素的测定方法包括：氨电极法、脲酶-波氏法，脲酶-谷氨酸脱氢酶偶联法，脲酶-亮氨酸脱氢酶偶联法等等[3]2.1 化学法2.1.1 二乙酰一肟显色法：尿素可与二乙酰作用，在强酸加热条件下，生成粉红色的二嗪化合物，在540nm比色，因二乙酰不稳定，常用二乙酰一肟代替，后者遇酸水解成二乙酰。

反应式如下：此法专一性差，线性范围狭窄，且试剂中含有烈性化学物，易腐蚀仪器和污染环境。

2.1.2 邻苯二甲醛比色法：尿素在强酸性环境下，与邻苯二甲醛缩合产生橙红色产物，比色测定之。

2.1.3 二苯吡喃醇比浊法：尿素与二苯吡喃醇结合形成不溶性沉淀，比色测定之。

[5]采用化学法检测尿素，特异性均不高，如瓜氨酸对二乙酰反应有正干扰；甘氨酸、精氨酸、瓜氨酸及磺胺类药物对邻苯二甲醛反应有正干扰。

加之要用强酸或强碱环境，或需要较高温度（90℃）反应，较难实现自动化，故这类方法已经较少使用[5] 。