荧光定量 PCR 法检测乙肝病毒 DNA 和乙肝病毒标志物检测的临床价值分析

乙肝病毒核酸定量测定的临床价值贾中华1谢爱国2陈素花31,2江西省高安市人民医院检验科3江西省高安市灰埠中心卫生院[摘要]目的:研究乙型肝炎患者HBV-DNA定量检测与血清学免疫标志物及丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平之间的关系.方法:用荧光定量PCR法检测326份乙肝表面抗原阳性标本中的HBV-DNA,同时检测血清免疫标志物和ALT.结果:326例乙肝表面抗原携带标本中HBV-DNA定量高于103拷贝/ml血清有213例,阳性率为65.34%(213/326),ALT异常率为37.42%(122/326). 113例乙肝表面抗原阳性、HBV-DNA定量低于103拷贝/ml标本中小三阳67例,占59.29%(67/113), HBsAg、抗-HBc阳性31例,占24.73%(31/113),其它15例,占13.27%(15/113).ALT异常率6.19%.结论: HBV-DNA检测低于检测线下限并不代表体内HBV-DNA已被完全清除,结合其它血清学免疫指标和生化学指标更能客观反映体内HBV病毒状态,正确判断预后和治疗.[关键词]乙型肝炎;乙肝病毒核酸(HBV-DNA);荧光定量聚合酶联反应(FQ-PCR);丙氨酸氨基转移酶(ALT)1 材料与方法1.1 对象2006年8月本院门诊和住院部乙肝病毒表面抗原携带者326例,年龄3-80岁,平均25.80岁.男性231例,女性95例.1.2方法1.2.1 HBV-DNA检测采用杭州博日公司的line-gene检测分析系统进行实时荧光定量PCR检测.试剂盒采用广州中山医科大学达安基因股份有限公司的乙型肝炎病毒(HBV)核酸扩增(PCR)荧光定量检测试剂盒.检测步骤按试剂盒使用说明书. 分别设阴性质控品,阳性质控品,空白对照以及阳性定量质控标准品梯度.检测结果＞103拷贝/ml判断为阳性,否则为低于检测线下限.1.2.2 HBV血清学免疫标志物检测用酶联免疫法(ELISA)检测HBsAg,抗-HBs,HBeAg,抗-HBe,抗-HBc共5个项目.采用华美生物工程公司的乙型肝炎诊断试剂盒,测定步骤参照说明书. 分别设阴性,阳性,空白对照,用酶标仪读数,样品OD值≥阴性对照平均OD值×2.1判断为阳性,否则为阴性.1.2.3 ALT检测采用生化自动分析仪检测,正常值＜40U/L.1.2.4 资料统计采用excel 2000 软件进行处理.2 结果2.1 326例乙肝表面抗原携带标本中HBV-DNA定量高于103拷贝/ml血清有213例,阳性率为65.34%(213/326),ALT异常率为37.42%(122/326). 113例乙肝表面抗原阳、HBV-DNA定量低于103拷贝/ml标本中小三阳67例,占59.29%(67/113), HBsAg、抗-HBc阳性31例,占24.73%(31/113),其它15例,占13.27%(15/113).ALT异常率6.19%.2.2 HBV-DNA定量与血清学免疫标志物检测结果比较见表12.3 HBV-DNA定量与ALT异常率比较见表23讨论实时荧光定量PCR是目前临床检测血清HBV-DNA常用的分子生物学方法.本系统充分利用了Taqman酶独特的生物学活性和荧光激活、淬灭性质,合成了分别携有荧光集团和淬灭集团近距引物、探针,在循环进行中即可检测荧光强度并用软件与内参比进行定量分析.由于无需开盖检测PCR产物,避免了以往传统PCR易产生假阳性污染物的缺点.检测重复性好,而且实时荧光定量PCR还解决了抗病毒药物疗效观察的一大难题.326份乙肝表面抗原携带标本中HBV-DNA定量高于103拷贝/ml血清有213例,阳性率为65.34%(213/326),ALT异常率为37.42%(122/326).其中,大三阳86例,阳性率100%(86/86),小三阳76例,阳性率53.15%(76/143), HBsAg、抗-HBc阳性率为60.27%(47/78),其它情况阳性率25.00%(5/20).本文中113例乙肝表面抗原阳性、HBV-DNA定量低于103拷贝/ml标本中小三阳67例, 占59.29%(67/113), HBsAg、抗-HBc阳性31例, 占24.73%(31/113),其它15例, 占13.27%(15/113).ALT异常率6.19%.可能是由于这些病例经过抗病毒治疗,使病毒复制减弱或停止,从而检测结果低于检测线下限.血清HBV-DNA荧光定量PCR测定可以直接反映病毒复制状态,具有很多临床价值, 但检测费用较高[1]、[2],而且不能完全反映病毒复制静息期肝细胞内HBV病毒状态,HBV-DNA检测低于检测线下限并不代表体内HBV-DNA已被完全清除,结合其它血清学免疫指标和生化学指标更能客观反映体内HBV病毒状态,正确判断预后和治疗.参考文献1曹红卫,卫国,冯文曦,等.乙肝病毒DNA荧光定量PCR检测及其意义.第三军医大学学报,2001,23,866-867.2张立国,张琚.实时定量PCR持术的介绍.生物技术,2003,13:39.。

荧光定量PCR法检测乙肝病毒DNA和ELISA法检测乙肝病毒标志物的临床价值刘娇;王大明;宋春丽;刘青;肖利佳;柯娟玉【期刊名称】《中国医药科学》【年(卷),期】2018(8)21【摘要】目的探究荧光定量PCR法检测乙肝病毒DNA和ELISA法检测乙肝病毒标志物的临床价值.方法本研究选取于2016年1月～2018年2月在本院就诊的乙肝患者共4355例,采用ELISA法,对患者进行定性检测,采用荧光定量PCR法,对患者的病毒水平进行检测.结果 4355例乙肝患者,1(+)、3(+)、5(+)模式的阳性率最高,与其他组间比较差异有统计学意义(P<0.05).4355例乙肝患者,1(+)、4(+)、5(+)模式的患者数量最多,2(+)、4(+)模式患者数量最少,与其他组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论在不同的HBV-DNA定量测定模式下,所测量出来的阳性率及HBV-DNA水平存在着一定的差异,为了提升乙肝病毒的临床诊断准确率,在乙肝病毒DNA(HBV-DNA)和乙肝病毒标志物(HBV-M)中的临床诊断中,应采用荧光定量PCR法及ELISA法,为乙肝病毒的高效治疗提供依据.【总页数】3页(P111-113)【作者】刘娇;王大明;宋春丽;刘青;肖利佳;柯娟玉【作者单位】南方医科大学深圳医院临床医学检验中心,广东深圳 518000;南方医科大学深圳医院临床医学检验中心,广东深圳 518000;南方医科大学深圳医院临床医学检验中心,广东深圳 518000;南方医科大学深圳医院临床医学检验中心,广东深圳 518000;南方医科大学深圳医院临床医学检验中心,广东深圳 518000;南方医科大学深圳医院临床医学检验中心,广东深圳 518000【正文语种】中文【中图分类】R446.6;R512.62【相关文献】1.荧光定量PCR法检测乙肝病毒DNA和乙肝病毒标志物检测的临床价值分析 [J], 陈海雁;张桂花;罗锦彬;黄舒婷2.实时荧光定量PCR法检测乙肝病毒DNA的价值分析与研究 [J], 杜锴3.实时荧光定量PCR法检测乙肝病毒DNA和乙肝病毒标志物的价值 [J], 姚兆基4.荧光定量PCR法检测338例血清乙肝病毒DNA的结果分析 [J], 陈静;林寿榕5.实时荧光定量PCR法在乙肝病毒DNA及血清标志物检测中的应用价值 [J], 张艳奇因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

荧光定量PCR检测HBV—DNA与乙肝五项检测结果的相关性探讨乙型肝炎是世界上最常见的传染病之一，世界卫生组织(WHO)估计，本病每年造成100万人死亡，慢性乙型肝炎是HBV感染的一种严重后果。

HBV-DNA是直接反映乙肝病毒存在，活动性复制及具有传染性的可靠指标。

但目前我国现状HBV感染者多以其血清感染标志物(乙肝五项，HBV-M)判定，由于其组合模式复杂多样，从而导致了临床上对部分发病患者的HBV感染复制状况难以判断，有时甚至会出现漏诊的情况。

定量PCR法的应用，使得我们进行HBV-DNA的检测的同时得以对其进行相对的量化，这对于乙肝患者体内的HBV的复制以及传染性有更直接的了解，同时也更有利于对临床HBV感染的诊断、治疗方案的选择及疗效的判断。

本文采用荧光定量RCR(FQ-PCR)对307例疑假装乙肝患者标本血清的不同HBV血清学标志物组合进行了HBV-DNA检测，闭幕式对结果进行了统计学处理，以探讨 HBV-M与HBV-DNA复制水平的关系，现报告如下：1资料与方法1.1 标本来源均系2007年7月至2009年8月到我院就诊的所有同时做过乙肝五项及HBV-DNA检测的疑似乙肝的门诊和住院患者，共307例，其中女129人，男178人，年龄17～78岁，平均39岁。

1.2 检测仪器1.2.1 LightCycler定量扩增仪(德国)。

1.2.2 Alisei全自动酶标仪(德国)。

1.3 检测方法和试剂1.3.1 HBV-M检测用酶联免疫吸附试验(ELISA法)检测，试剂由上海科华生物技术有限公司，并严格按说明书操作。

1.3.2 HBV-DNA定量分析采用荧光定量PCR(FQ-PCR)法检测，试剂由上海复星医学科技发展有限公司提供，严格按说明书的步骤进行操作。

1.4 统计学处理根据HBV血清标志物分为8组，将各组的HBV-DNA拷贝数进行对数变换，以指数表示(±S)，定量测量范围仍用实际检测值表示；采用X2检验进行组间HBV-DNA阳性率显著性检验，采用两样本均数的t检验比较拷贝数。

实时荧光PCR在乙肝病毒DNA检测中的临床意义目的对采用血清学标志物检测确定为乙型肝炎的患者进行实时荧光PCR 检测，探讨实时荧光PCR 检测的临床应用价值。

方法首先要对患者采用血清学标志物这种方法检测，进一步确定他是乙型肝炎的患者。

再次就是选择500例患者进行检测，这样有利于保证实验的准确性。

结果几种乙肝模式中，“大三阳”患者的DNA阳性检出率和拷贝数均比其他模式高，并有显著性差异。

PreS1-Ag的阳性率与乙肝DNA的阳性率有很好的一致性，但由于两者检测的成分和表达的意义不完全一致，因此不能等同于或代替HBV-DNA的检测。

结论PCR定量测定H13V-DN13可以真实反映体内乙肝病毒感染和复制及病毒载量情况，更有利于临床治疗和疗效观察。

标签：乙型肝炎病毒；实时荧光PCR；DNA；临床意义乙肝是目前世界上最常见、最广泛、危害最严重的病毒性肝炎之一，其传播广，危害性较大，易形成持续性带病毒状态而转为慢性感染，少数甚至转变为肝硬化一、原发性肝细胞癌。

荧光PCR技术融合了PCR和DNA探针杂交技术的优点，解决了PCR定量和防污染等问题，而且具有快速、准确、特异等特点。

本研究采用实时荧光PCR法进行HBV-DNA检测共500例，报道如下。

1、资料与方法1.1一般资料首先选择可能携带乙型肝炎的患者，这些患者最好是年龄跨度较大，在15一70岁的年龄段中都有患者存在，这样更有利于实验的准确}h}，防止出现偏差。

然后采用血清学标志法进一步确定他们是乙肝患者，这样可以使实验结果的偏差较小。

最重要的是要记录好乙型肝炎患者中乙肝病毒DNA的数据，并且要注意保存仔细。

然后将这500位乙肝病毒携带者和患者，再用荧光PCR的方法对其进行检测，然后仔细记录这些数据。

最后把用血清学标志法检验的乙肝病毒DNA 数据与用荧光PCR方法检验的乙肝病毒DNA数据做比较，然后把比较的数据进行分析，并用论文的形式呈现出来。

1.2 方法1.2.1 试剂和仪器乙肝血清标志物检测试剂盒来自兰州标佳生物技术有限公司，批号分别为：表面抗原20081206，表面抗体20090302，E抗原20090201，E抗体20081104，核心抗体20090201，前S1抗原为20081002；HBV-DNA试剂购于中山大学达安基因股份有限公司；酶标仪为上海瑞美公司MultisKanMK3；PCR仪为中山大学达安基因股份有限公司核酸扩增实时荧光检测系统DA7600型。

血清HBV-DNA荧光定量PCR检测与乙肝病毒标志物模式的相关因素探讨背景：乙肝病毒感染是世界上重要的公共卫生问题之一。

其中，在中国，乙肝病毒感染率很高，每年有数百万的乙肝患者需要接受治疗。

乙肝病毒能引起肝炎、肝硬化和肝癌等疾病。

因此，及时检测和治疗乙肝病毒感染是至关重要的。

目前，乙肝水平的监测方法主要是通过检查乙肝病毒标志物和血清HBV-DNA荧光定量PCR检测。

乙肝病毒标志物模式被广泛应用于诊断和分析乙肝感染情况。

然而，血清HBV-DNA荧光定量PCR检测也被认为是比乙肝病毒标志物模式更灵敏和准确的方法。

因此，对于乙肝病毒感染及其治疗的有效监测和预测，对这两种方法的相关因素进行探究是非常重要和必要的。

相关因素：1. 国家（地区）和种族：不同国家和地区的乙肝感染率和治疗方法可能不同。

因此，在不同国家和地区使用乙肝病毒标志物模式和血清HBV-DNA荧光定量PCR检测的效果可能也会有所不同。

同时，种族因素也可能对检测结果产生一定的影响。

2. 年龄和性别：年龄和性别因素可能会影响乙肝病毒感染的严重程度。

男性和老年人乙肝感染率较高，而且病情可能更为严重。

由于血清HBV-DNA荧光定量PCR具有更高的敏感性，受感染年龄和性别等因素的影响可能更为突出。

3. 检测方法和技术：不同的检测方法和技术也会对检测结果产生一定的影响。

乙肝病毒标志物模式通常是通过血清学方法来检测的，而血清HBV-DNA荧光定量PCR是一种基于DNA分析的检测方法。

因此在不同的试验体系和实验室中使用这两种方法时，其检测的灵敏度和准确性可能也会有差异。

4. 乙肝病毒感染程度：乙肝病毒感染的程度与病情的严重程度密切相关。

在感染初期，患者的病毒水平通常会快速升高，但随着感染的持续时间，病毒水平可能会下降。

血清HBV-DNA荧光定量PCR检测通常可以检测到极其微小的病毒水平。

因此，对于不同程度的乙肝病毒感染，血清HBV-DNA荧光定量PCR检测和乙肝病毒标志物模式的检测效果也会有所不同。

乙肝病毒DNA荧光定量PCR检测对临床诊断的意义发表时间：2017-02-27T14:48:38.107Z 来源：《健康世界》2017年第1期作者：许建助[导读] 荧光定量PCR测定 HBV DNA在多种模式的乙肝病毒标志阳性血清或阴性血清都可查出。

云南省腾冲市妇幼保健计划生育服务中心云南腾冲 679100摘要：目的分析乙肝病毒DNA（HBV-DNA）的荧光定量PCR（FQ-PCR）检测对临床诊断的意义方法对我院2015年3月到2016年3月收治的420名乙肝患者作为研究对象，抽取420名患者的临床血清标本通过ELISA法进行定性检测，根据乙肝两对半定性结果进行分组，最后采用荧光定量PCR技术进行定量检查。

结果 95份乙肝病毒标志物HBsAg、HBeAg、HBcAb标本中有89份 HBV-DNA为阳性，阳性率为93.7%，荧光定量PCR拷贝数为（4.19±1.16）×10 7 /ml；130份乙肝病毒标志物 HBsAg、HBeAb、HBcAb标本有92份HBV-DNA阳性，阳性率达到71.7%，荧光定量PCR拷贝数为（4.73±2.49）×10 5/ml；38份乙肝病毒标志物HBsAg、HBcAb标本中有13份 HBV-DNA为阳性，阳性率为34.2%，荧光定量PCR拷贝数为（2.13±1.37）×10 4/ml；75份乙肝病毒标志物 HBsAb的标本HBV-DNA阳性23例，阳性率为3.1%，荧光定量PCR拷贝数为（6.07±0.86）×10 3；82份乙肝病毒标志物全阴性的标本 HBV-DNA阳性11例，阳性率为1.3%，荧光定量PCR拷贝数（2.77±0.79）×10 4 /ml.结论荧光定量PCR测定 HBV DNA在多种模式的乙肝病毒标志阳性血清或阴性血清都可查出，能较真实反映体内HBV感染、复制和病毒载量情况，具有一定的临床早期诊断的价值。

实时荧光定量PCR检验乙肝DNA的检测结果的分析【摘要】目的利用实时荧光定量PCR针对乙肝DNA开展检测，分析为检测结果产生影响的各方面因素。

方法此次研究针对300例病例，且全部确诊为乙型肝炎病毒感染，收治开始和结束时间分别为2021年3月、2022年2月，对患者血液标本开展采集，利用实时荧光定量PCR对其进行检测，分析检测结果。

结果300例标本中，实时荧光定量PCR诊断乙肝DNA准确260例，占比86.67%；漏诊误诊40例，占比13.33%。

实时荧光定量PCR诊断准确率和临床诊断无较大差异（P＜0.05）。

结论在针对乙肝DNA进行检测的过程中，使用实时荧光定量PCR可以产生较高的价值，但是可能会出现误诊等情况，所以需要进行综合预防。

【关键词】实时荧光定量PCR；乙肝DNA[Abstract] objective to detect hepatitis B DNA by real-time fluorescent quantitative PCR and analyze the factors influencing the detection results. Methods in this study, 300 cases were diagnosed as hepatitis B virus infection. The start and end time of admission were March 2021 and February 2022 respectively. Blood samples were collected, detected by real-time fluorescence quantitative PCR, and the detection results were analyzed. Results among the 300 samples, 260 cases (86.67%) of hepatitis B DNA were diagnosed accurately by real-time fluorescent quantitative PCR; 40 cases were missed and misdiagnosed, accounting for 13.33%. There was no significant difference between the diagnostic accuracy of real-time fluorescence quantitative PCR and clinical diagnosis (P < 0.05). Conclusion in the process of detecting hepatitis B DNA, real-time fluorescentquantitative PCR can produce high value, but it may be misdiagnosed,so comprehensive prevention is needed.[Key words] real time fluorescence quantitative PCR; Hepatitis B DNA乙型肝炎病毒是诱发慢性肝炎等一些疾病的主要病毒，属于一种嗜肝病毒科。

实时荧光PCR法检测乙肝病毒DNA在临床中的应用探讨实时荧光PCR法检测乙肝病毒DNA在临床中的应用。

针对200例临床乙肝病毒携带者的血清标本用ELISA法进行定性检测，再用实时荧光PCR定量检测，对两种检测结果进行相关性分析。

得出PCR定量测定HBV-DNA可以真实地反映体内乙肝病毒感染和复制及病毒载量情况，更有利于临床治疗和疗效的观察。

并且实时荧光PCR法检测HBV-DNA具有快速、准确等优点，而且对低复制持续感染乙肝病人也能诊断。

标签：荧光PCR;血清标志物;HBV-DNA乙肝是目前世界上最常见、最广泛、危害最严重的病毒性肝炎之一，据世界卫生组织估计，此病已造成世界上大约每年总共100万多人死亡[1]。

慢性乙肝携带者占世界总人口的10% 以上，急性乙肝中有20%会转为慢性，进而发展为肝硬化和肝癌。

因此，准确、快速诊断对乙肝的治疗和预后极为重要。

但目前随着乙肝模式的复杂化，临床上对患者的HBV感染复制情况难以判断，有时甚至出现漏诊。

HBV-DNA是直接反应乙肝病毒存在、活动性复制及具有传染性的可靠指标，荧光定量PCR法在进行HBV-DNA检测的同时，可以对其进行相对的量化，这对于乙肝患者体内的HBV复制以及传染性有更直接的了解，同时也更有利于临床诊断HBV感染、选择治疗方案及判断预后。

1 材料与方法1.1 标本来源300例标本均来自2014年6月1日-6月30日我院感染科的病人及本院体检者中发现的乙型肝炎患者，其中男180例，女120例，15～79岁，平均为47岁。

1.2 试剂和仪器乙肝血清标志物检测试剂盒来自上海科华生物工程股份有限公司HBV-DNA试剂购于中山大学达安基因股份有限公司;酶标仪为ST-360酶标仪。

1.3 检测方法ELISA法：按检测试剂盒说明书操作，乙肝标志物检测项顺序设定为HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb;PCR定量检测：采用核酸扩增实时荧光检测，完全按试剂盒说明书操作。