双抗体夹心一步法及两步法测HBsAg的结果分析

应用双试剂检测HBsAg在兵检中检测结果分析在征兵体检中，我县已多年应用双试剂检测HbsAg，结果令人满意，大大地提高了征兵的质量，进一步杜绝了漏检、退兵地现象。

选择两家合格厂家生产的HbsAg试剂，对同一标本在同等条件下，严格按试剂盒说明书进行操作。

现将最近3年内我县适龄青年采用双试剂检测结果作浅显分析。

资料与方法征兵体检抽血人数1059人。

试剂：上海荣盛生物技术有限公司；郑州安图绿科生物有限公司。

两家公司的产品均采用ELISA法进行HBsAg检测，严格按照试剂盒说明书操作。

实验步骤：①取出一定量的包被孔，编号。

留一孔做空白对照、其余加入阴性对照三孔和阳性对照二孔50μl/孔及待测标本50μl/孔于相应的反应孔内。

②除空白孔以外，各孔分别加入酶结合物50μl(或1滴/孔)。

③在微型振荡器上振荡30秒使孔内液体混合均匀(该步骤非常重要)。

④贴上板贴，置37℃下温育30分钟。

⑤撕下板贴，洗板：甩去孔内液体，洗板6次，最后在吸水纸上拍干。

⑥每孔加入底物液、显色剂各50μl(或1滴/孔)，37℃避光温育10分钟。

⑦加终止液50μl/孔(或1滴/孔)。

轻轻振荡混匀后，立即测试结果。

⑧使用酶标仪测量：单波长测定，以空白孔调零，450nm测定各孔的OD值；直接采用450nm/(620～630nm)双波长测定各孔的OD值。

结果两家公司的产品均采用ELISA法进行HBsAg检测。

讨论对照表表明，如果单用上海荣盛生产的试剂盒，漏检率1.04%，如果单用郑州安图绿科生产的试剂盒，漏检率0.85%。

采用双试剂对同一样本进行检测，可使漏检率大大减低，从而大大提高了兵检的质量。

针对两组存在的差异，本文认为是由于试剂本身存在包被抗原的组成、长短、合成方式等方面的不同及使用单克匹配位点的不同，或试剂盒的生产工艺、保存、运输等环节的差异也会影响其质量，加之不同地区、人群的流行感染株的差异及感染者体内抗体模式的多样化及标本自身因素存在干扰因子(内源性物质和外源性物质)等因素的影响，另外试剂采用的方法学本身差异、操作因素的影响等等，有时就会出现极个别的标本在不同的试剂间有不同的结果；甚至同一标本在不同时间检测结果亦不一致的情况。

应用双抗原夹心法和间接法两种方法检测丙型肝炎病毒抗体的准确性对比分析【摘要】目的：评估丙型肝炎病毒抗体检测患者实施双抗原夹心法和间接法检测的应用价值。

方法：对158例本医院实施治疗的丙型肝炎病毒抗体检测予以项目研究，选于2020年7月至2020年1月，全部患者均予以间接法、双抗原夹心法，分析两组方案的诊断准确性。

结果：（1）丙型肝炎病毒抗体检测患者确诊结果阳性59例，占比37.34%；阴性99例，占比62.66%。

间接法阳性67例，占比42.41%；阴性91例，占比57.59%。

双抗原夹心法检测阳性63例，占比39.87%；阴性95例，占比60.13%。

（2）丙型肝炎病毒抗体检测患者双抗原夹心法检测诊断结果灵敏度（94.92%）、特异度（92.93%）、准确性（93.67%）均明显高于间接法（77.97%、78.79%、78.48%），两者差异明显（P＜0.05）。

结论：丙型肝炎病毒抗体检测患者予以双抗原夹心法检测准确性相对较高。

【关键词】丙型肝炎病毒抗体检测；间接法；双抗原夹心法丙型肝炎病毒感染是一种全球性公共卫生问题，影响着数百万人的健康，准确地检测丙型肝炎病毒抗体对于早期诊断、治疗选择以及预防疫情扩散至关重要[1]。

在丙型肝炎病毒抗体检测中，双抗原夹心法和间接法是常用的两种方法，本研究针对丙型肝炎病毒抗体检测方式进行分析，讨论双抗原夹心法和间接法两种方法检测的应用价值。

1临床资料与方法1.1临床资料对2020年7月至2020年1月本医院实施治疗的丙型肝炎病毒抗体检测予以项目研究，选于138例，丙型肝炎病毒抗体检测患者年龄最高值是63岁，年龄最低值是24岁，年龄平均值经计算为（44.19±10.15）岁。

1.2方法全部患者均予以间接法、双抗原夹心法，间接法：按照说明书进行操作，步骤为：试验前处理-样本加入-一级抗体结合-洗涤-二级抗体结合-洗涤-荧光显微镜观察，判断样本中是否存在丙型肝炎病毒抗体[2]。

实验二十三斑点免疫层析试验(Dot immunogold chromatographic assay)斑点金免疫层析试验是将胶体金标记技术和蛋白质层析技术相结合的以硝酸纤维素膜为载体的快速的固相膜免疫分析技术。

本法除层析条装置外，不需任何仪器设备。

本实验以双抗体夹心法测定HBsAg为例。

【实验原理】金标抗HBsAg抗体(兔型)干片粘贴在近下端，抗HBsAg单克隆抗体(鼠型)羊抗兔IgG抗体分别包被在NC膜的测试区和质控区。

测试时，试纸条下端浸入血清样品中或滴加血清样品，通过层析作用，上端移动，流经干片时将金标抗HBsAg抗体复溶，若待检血清中含HBsAg，即形成金标抗HBsAg-HBsAg复合物，移至测试区时，形成金标抗HBsAg-HBsAg-抗HBsAg复合物，金标抗HBsAg 被固定下来显示红色线条，呈阳性反应，多余的金标抗HBsAg抗体移至质控区被羊抗兔免疫球蛋白抗体捕获，呈现红色质控线条。

【主要试剂与器材】1.胶体金层析条所用试剂全部为干试剂被组合在该层析条上，有商品供应。

2.样品待检血清和HBsAg阳性质控血清【操作方法】1.将试剂条标记线一端浸入待检样品中2～5秒或在样品加样处加一定量待检样品，平放于水平桌面上。

2.室温下5～15min，目测观察结果。

【结果判断】结果判断见图23-1。

HBsAg阳性(+)：两条紫红色条带出现，样品中含有乙肝表面抗原。

HBsAg阴性(-)：仅质控区(C)出现一条紫红色条带，样品中检测不出乙肝表面抗原。

试剂条无效：质控区(C)未出现紫红色条带，表明不正确的操作过程或试剂盒已变质失效。

图23-1 斑点免疫层析试验结果判断示意图【注意事项】1.打开试剂条包装后应在1h内应使用。

2.将试剂条插入血清/血浆样品中，血清/血浆样品液面不能超过试剂条的标记线。

3.若发现试剂条无效，应再次仔细阅读说明书，并用新的试剂盒重新测试。

如果问题仍然存在，应立即停止使用此批号产品。

ELISA一步法检测HBsAg假阴性结果分析发表时间：2014-05-19T09:03:25.263Z 来源：《医药前沿》2014年第6期供稿作者：陈静[导读] 一步法检测,与质控物吸光度比较,从开始出现弱阳性为该标本最低稀释比。

陈静（沈阳市第四人民医院 110031）【摘要】目的探讨采用ELISA一步法检测导致出现(HBsAg) 钩状效应（HBsAg假阴性）的原因。

方法选择我院健康体检者150例，其中，HBeAg阳性HBsAg阴性标本35例,倍比稀释标本后分别应用ELISA二步法和一步法检测HBsAg,观察两种方法的阳性率及不同稀释比与吸光度的变化。

结果检测35份标本原血清结果,一步法HBsAg均为阴性,二步法均为阳性；一步法,大部分标本从原血清至1: 7均为阴性，吸光度值OD为0.076,1: 17稀释后OD值逐渐升高,从1:126至1: 1 023吸光度变化不大(OD值:3.30±0.15),1:2058后OD值逐渐下降；二步法从原血清到1:266吸光度变化不大(OD值:3.20±0.17)),1:524后OD值逐渐下降。

结论 ELISA二步法可避免HBsAg浓度过高致钩状效应所引起的HBsAg检测结果假阴性。

【关键词】酶联免疫吸附(ELISA)实验乙肝病毒表面抗原HBsAg 钩状效应【中图分类号】R441 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2014）06-0198-01酶联免疫吸附(ELISA)实验[1],按其操作步骤分为一步法和二步法。

一步法因为操作更简单而深受广大用户的青睐, 但是在一步法实际工作中，我们发现ELISA一步法钩状效应明显[2]，就会出现HBsAg假阴性，易造成漏检现象。

同时，我们采用二步法检测HBeAg及抗-HBc双项阳性血清标本中的HBsAg，将标本倍比稀释后检测吸光度OD值的变化，对比一步法出现钩状效应，引起HBsAg假阴性结果出现的原因。

乙肝二对半测定结果的临床分析乙肝病毒感染是一种全球性公共卫生问题，感染乙肝病毒（HBV）的个体可能患上急性乙肝，也可能成为慢性乙肝携带者。

乙肝二对半测定是一种常用的诊断乙肝病毒感染的方法，通过测定乙肝表面抗原（HBsAg）和乙肝表面抗体（Anti-HBs）的结果来判断个体的感染状态。

本文将对乙肝二对半测定的结果进行临床分析，以帮助医学工作者更好地理解和解读相关检测结果。

一、乙肝二对半测定的原理和步骤乙肝二对半测定是采用酶联免疫吸附试验（ELISA）的方法进行的。

ELISA是一种常用的免疫学检测方法，通过利用酶与抗原或抗体之间的反应来检测目标物质的存在与否。

乙肝二对半测定主要包含两个步骤：1. 测定乙肝表面抗原（HBsAg）：这是一项检测乙肝病毒感染的关键指标。

如果HBsAg呈阳性，即表示个体目前被乙肝病毒感染。

但需要注意的是，HBsAg阳性并不一定意味着个体一定会发展成为慢性乙肝携带者，一部分人会在感染后自愈。

2. 测定乙肝表面抗体（Anti-HBs）：这是一种抗体，它能够识别并结合乙肝表面抗原。

如果个体血液中含有足够浓度的Anti-HBs，那么可以判断他/她之前已经感染过乙肝病毒并产生了免疫反应。

这种情况下，一般认为个体已经康复或者接种过乙肝疫苗。

二、乙肝二对半测定结果的解读根据乙肝二对半测定的结果，可以将个体分为以下几种情况：1. HBsAg阴性、Anti-HBs阴性：这种结果表示个体没有乙肝病毒感染的迹象，可以认为个体是健康的。

但需要注意的是，虽然结果是阴性，但并不能排除最近被感染或者乙肝病毒携带者的可能性。

在某些情况下，个体可能需要进行更多的检测以确认结果的准确性。

2. HBsAg阳性、Anti-HBs阴性：这种情况下，个体目前被乙肝病毒感染。

需要进一步的检测来判断是否属于慢性感染，以及是否需要进行进一步的治疗。

个体在这个阶段应该采取预防措施，避免传播给他人，同时也需要遵循医生的建议进行治疗。

用二种方法检测乙肝病毒表面标志物结果分析摘要】目的: 比较胶体金法与酶联免疫法(ELISA ) 检测乙型肝炎病毒(HBV) 表面标志物（HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc，以下简称乙肝两对半）的结果，探讨这二种方法的符合率。

方法: 分别用酶联免疫法和胶体金法检测200 例成人血清标本乙肝两对半，将两种检测结果进行分析、比较。

结果:200 例标本中，ELISA 法和胶体金法检测HBsAg 结果差异无统计学意义(P ＞0.05)，两法的HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb 总符合率分别为100%、100%、100%、98.00%、99.00%；结论: ELISA 法灵敏度高，易观察，适合大规模标本的测定。

胶体金法简便快速，特异性较高，不需要特殊设备，易于观察结果，但存在一定假阳性或假阴性率，不能完全替代ELISA 法进行乙肝病毒血清标志物的检测，适合在基层医疗单位、急诊标本和单份标本初筛时使用。

【关键词】酶联免疫法(ELISA) 胶体金法乙肝两对半据世界卫生组织报道，全球约20 亿人曾感染过HBV，其中3.5 亿人为慢性HBV 感染者，每年约有100 万人死于HBV 感染所致的肝衰竭、肝硬化和原发性肝细胞癌。

据估计，全世界现有乙肝病毒携带者3.6 亿，其中我国约有1.3 亿。

乙型肝炎的流行不仅影响人们的健康，也给社会带来沉重的经济负担。

随着人们健康意识的增强，乙型两对半检测已成为人们的日常体检、门诊常规检查项目。

目前最常用的是用ELISA 法检测乙肝两对半，ELISA 法由于具有较高的灵敏度和特异性，且容易开展，因而成为实验室普遍使用的方法，但检测时间长，操作较繁琐，不便单个标本快速检测。

胶体金法是近年来开展的一种快速检测方法，其操作简便，不需要特殊设备和条件，可在基层医疗单位开展，目前也常应用于门诊体检和急诊患者的单个标本检测等。

现用ELISA 法和胶体金法对200 名成人血清进行乙肝两对半检测，并对结果进行分析比较，以探讨这二种方法的符合程度。