姜黄素对人前列腺增生间质细胞增殖的抑制作用

山东医药２００７年第４７卷第３２期　姜黄素对人前列腺增生间质细胞增殖的　抑制作用　

陈志强，莫曾南　（广西医科大学第一附属医院，广西南宁５３００２１）　

【摘要］　目的研究姜黄素对人前列腺增生问质细胞增殖及基因表达情况的影响。方法Ｍ，ＩＴ法测定姜黄　素抗增殖效应；ＲＴ—ＰＣＲ技术检测ｂｃｌ－２和ＰＣＮＡ　ｍＲＮＡ的表达。结果　各实验组的姜黄素对增生细胞的生长均有　抑制作用，这种抑制作用具有时间／剂量依赖性（Ｐ＜Ｏ．０５）。姜黄素作用于问质细胞２４　ｈ，ｂｅｌ－２和ＰＣＮＡ的表达水　平下降，呈剂量相关性（Ｐ＜０．０５）。结论姜黄素可以抑制人良性前列腺增生问质细胞的增殖。其机制可能与姜　黄索下调ｂｃｌ－２和ＰＣＮＡ　ｍＲＮＡ的表达有关。　［关键词］姜黄素；前列腺增生；凋亡；ｂｃｌ－２　［中图分类号］　Ｒ９６３　［文献标识码］　Ａ　［文章编号］　１００２－２６６Ｘ（２００７）３２－００１６－０３　

Ａｎｔｉｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｃｕｒｃｕｍｉｎ　ｏｎ　ｈｕｍａｎ　ｐｒｏｓｔａｔｉｃ　ｓｔｒｏｍａＩ　ｃｅｌｌｓ　ＣＨＥＮ　Ｚｈｉ—ｑｉａｎｇ，ＭＯ　ｚｅ　一ｎａｎ　（Ｔｈｅ　Ｆｉｒｓｔ　Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｇｕａｎｇｘｉ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｕｉｔｙ，Ｎａｎｎｉｎｇ　５３００２１，尸．兄Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：［Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ］Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｃｕｒｃｕｍｉｎ　ｏｎ　ｈｕｍａｎ　ｐｒｏｓｔａｔｉｃ　ｓｔｒｏｍａｌ　ｃｅｌｌｓ．［Ｍｅｔｈｏｄｓ］Ｍ，ＩＴ　ｍｅｔｈｏｄ　ｗａｓ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｅｘａｍｉｎｅ　ｔｈｅ　ｃｅｌｌ　ｇｒｏｗｔｈ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ｐｒｏｓｔａｔｉｃ　ｓｔｒｏｍａｌ　ｃｅｌｌｓ　ａｆｔｅｒ　ｂｅｉｎｇ　ｔｒｅａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｄ￣ｅｍｎｔ　ｄｏｓｅｓ　ｏｆ　ｃｕｒ－　ｃｕｍｉｎ．Ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｌｅｖｅｌ　ｏｆ　ＰＣＮＡ　ａｎｄ　ｂｅｌ－２　ｇｅｎｅｓ　ａｔ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　ｌｅｖｅｌ　Ｗａｓ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｂｙ　ＲＴ－ＰＣＲ．［Ｒｅｓｕｌｔｓ］Ｃｕｒｃｕｍｉｎ　ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ　ｃｅｌｌ　ｇｒｏｗｔｈ　ａｎｄ　ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｅｄ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＰＣＮＡ　ａｎｄ　ｂｃｌ－２　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ｐｍｓｔａｔｍ。　ｓｔｒｏｍａｌ　ｃｅｌｌｓ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｆ　Ｐ　＜０．０５）．［Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ］Ｃｕｒｃｕｍｉｎ　ｃａｎ　ｉｎｈｉｂｉｔ　ｔｈｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ｐｒｏｓｔａｔｉｃ　ｓｔｒｏｍａｌ　ｃｅｌｌｓ　ｂｙ　ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ　ＰＣＮＡ　ａｎｄ　ｂｃｌ－２．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｃｕｒｃｕｍｉｎ；ｐｒｏｓｔａｔｉｃ　ｈｙｐｅｒｐｌａｓｉａ；ａｐｏｐｔｏｓｉｓ；ｂｅｌ－２　

姜黄素是多年生草本植物姜黄的根茎提取物，　为橙黄色结晶粉末。大量研究报道，姜黄素有抗炎、　抗氧化、抑制增殖、诱导肿瘤细胞凋亡、广谱的抗微　生物活性等生物学作用　Ｊ。２００６年１Ｏ月～２００７年　１月，我们用姜黄素对人良性前列腺增生（ＢＰＨ）问　质细胞进行干预实验，观察姜黄素对前列腺增生细　胞的生长抑制作用。　１材料与方法　１．１　主要材料及试剂　细胞来源取人良性前列腺　增生移行带组织做原代培养；１６４０培养基、胎牛血　清、胰蛋白酶购自Ｇｉｂｃｏ公司；姜黄素、溴化二甲噻唑　二苯四氮唑（ＭＴＴ）、二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）均购自　Ｓｉｇｍａ公司；反转录试剂盒购自Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ公司；引物　序列由上海生工生物公司合成；ＤＮＡ　ｌａｄｄｅｒ购自东　［基金项目］国家自然科学基金资助项目（３０３６０１２４）。　・通讯作者，Ｅ－ｍａｉｌ：ｍ０ｚｅｎ　ｌ　＠２６３．ｎｅｔ　１６　盛生物公司。　１．２前列腺增生间质细胞的分离培养标本来源　于在我院诊断ＢＰＨ并接受耻骨上前列腺切除术的　患者，术后均经病理证实。将人前列腺移行带组织　用眼科剪反复剪切成１　ｍｉｌｌ　大小的组织块　Ｊ，放人　预先铺有胶原蛋白ｓ的２５　ｃｍ　进口塑料培养瓶中，　置于３７℃含５％ＣＯ：的培养箱中培养，细胞生长覆　盖培养瓶底的大部分后传代，第３代细胞用于实验。　细胞培养于含１０％胎牛血清的１６４０培养液中，培养　基内加人１００　Ｕ／ｍｌ青霉素和１００　ｇ／ｍｌ链霉素。　１．３　ＭＴＴ比色取生长良好、对数生长期的人前列　腺间质细胞０．２５％胰酶消化接种于９６孔培养板，每　孔加人细胞１×１０　个，培养液２００　ｌ，每组设６个复　孔。接种２４　ｈ细胞贴壁后更换培养液。共分４组，　分别以终浓度为１Ｏ、２Ｏ、４０　ｐ￣ｍｏｌ／Ｌ的姜黄素处理实　验组，加人等体积的生理盐水作为阴性对照。１２、　２４、３６　ｈ后，ＭＴＴ比色法测定。每孔加入５　ｍｇ／ｍｌ　

维普资讯 http://www.cqvip.com 山东医药２００７年第４７卷第３２期　ＭＴＩ＂２０　ｌ继续培养４　ｈ，然后小心吸弃孑Ｌ内培养上　清液，每孔加入ＤＭＳＯ　１５０　ｌ，置微孔振荡器上振荡　１０　ｍｉｎ待紫色结晶完全溶解后，于５７０　ｎｔｌｌ测定吸光　度值（Ａ）变化。计算细胞生长抑制率（ＩＲ）。ＩＲ（％）　＝（１一实验组平均吸光度Ａ值／对照组平均吸光度　Ａ值）×１００％　１．４　ＲＴ—ＰＣＲ　取生长良好、对数生长期细胞　０．２５％胰酶消化接种于６孔板，每孔１０　Ｘ　１０　个细　胞，３７　ｃ【＝、５％ＣＯ　孵育过夜。换无血清培养基后，分　别用不同浓度姜黄素处理细胞，阴性加等量生理盐　水继续培养２４　ｈ。用Ｔｒｉｚｏｌ法提取每组细胞ＲＮＡ；　经紫外分光光度仪测定，其纯度要求ＯＤ　∞／ＯＤ　。。＞　１．８，经１％琼脂糖凝胶电泳鉴定其完整性，２８Ｓ／１８Ｓ　约等于２，置于一７０℃冰箱中保存。ｅＤＮＡ合成按　ＲＴ试剂盒说明书进行。ＰＣＲ：分别扩增ＧＡＰＤＨ、ＰＣ—　ＮＡ、ｂｅｌ一２，退火温度６０℃，内参扩增２９个循环，Ｐｃ—　ＮＡ和ｂｅｌ一２扩增３４个循环。２％琼脂糖凝胶分离　ＰＣＲ产物，凝胶成像软件对结果进行半定量分析。　引物序列如下：①ＧＡＰＤＨ：Ｆ：５　一ＡＣＣＡＣＡＧＴＣＣＡＴ—　ＧＣＣＡＴＣＡＣ一３　，Ｒ：５　一ＴＣＣＡＣＣＡＣＣＣＴＧＴＩ＇ＧＣＴＧＴＡ一　３　，产物长度４５２　ｂｐ；￣）ＰＣＮＡ：Ｆ：５　一ＡＧＧＣＡＣＴＣＡＡＧ—　ＧＡＣＣＴＣＡＴＣＡ一３　，　Ｒ：　５　一ＧＡＧＴＣＣＡＴＧＣＴＣＴＧＣＡＧ—　Ｇ，ｒＩ　一３　，产物长度７６　ｂｐ；③ｂｅｌ一２：Ｆ：５　一ＴＣＣＧＣＡＴ—　ＣＡＧＧＡＡＧＧＣＴＡＧＡ一３　，　Ｒ：　５　一ＡＧＧＡＣＣＡＧＧＣＣＴＣ—　ＣＡＡＧＣＴ一３　，产物长度１　１３　ｂｐ。　１．５统计学方法采用ＳＰＳＳ　１２．０软件包建立数据　库，所得数据以ｘ－４－ｓ表示。成组设计多个样本均数　的比较采用ＡＮＯＶＡ检验，每两个均数比较采用ｑ检　验。　２结果　２．１　姜黄素对人前列腺增生问质细胞增殖的影响　见表１。由表１可见，１０、２０、４０￣ｍｏｌ／Ｌ浓度的姜　黄素处理前列腺间质细胞１２～３６　ｈ后，细胞体外生　长活性均被不同程度地抑制，并呈时间和剂量依赖　性特点。　表１　不同浓度、不同时间姜黄素对人前列腺问质　细胞增殖的抑制率（％。　±ｓ）　注：与前一组比较，　Ｐ＜Ｏ．０５；与前一时段比较，　Ｐ＜Ｏ．ｏ５　２．２姜黄素对ＰＣＮＡ和ｂｅｌ一２　ｍＲＮＡ表达的影响　图１为ｂｅｌ－２和ＰＣＮＡ在人前列腺间质细胞中的表　达琼脂糖凝胶电泳结果。由图ｌ可见，与未经处理　的对照相比较，姜黄素作用的细胞中ＰＣＮＡ和ｂｅｌ一２　转录产物的丰度明显降低，随姜黄素浓度的增加而　减少，呈剂量相关性。姜黄素对人前列腺间质细胞　ＰＣＮＡ、ｂｅｌ一２　ｍＲＮＡ表达的半定量结果见表２。　

５００　ｂｐ　４００　ｂｐ　

１　５０　ｂｐ　１００　ｂｐ　

５Ｏ１）。　Ｍ　ＮＳ　姜黄素０ｘｍｏｌ／Ｌ）　

图１　ｂｃｌ一２和ＰＣＮＡ　ＲＴ－ＰＣＲ产物凝胶电泳图　

注：Ｍ为ｍａｒｋｅｒ；ＮＳ为生理盐水　表２　姜黄紊对人前列腺问质细胞ＰＣＮＡ、　ｂｃｌ－２　ｍＲＮＡ表达的影响（ｉ±　）　

注：与前一组比较，　Ｐ＜０．０５　３讨论　大量研究报道姜黄素有许多重要的生物作用，　而且它在啮齿类动物和人体内的毒副作用很小。最　新研究表明，人体用量多至１２　ｄ，患者未出现任何　不良反应　Ｊ。关于姜黄素在前列腺增生治疗中的研　究报道较少，鉴于前列腺增生主要表现在问质细胞　的增生，我们在体外用姜黄素作用于人良性前列腺　增生问质细胞，观察其对前列腺增生的生长抑制作　用。结果发现姜黄素能够明显抑制问质的增殖，抑　制效应呈时间和剂量依赖性。　原癌基因ｂｅｌ－２是细胞凋亡调控中最重要的基　因，它能抑制多种模型中细胞凋亡的发生－４１。ＰＣＮＡ　是ＤＮＡ聚合酶８的辅酶，其表达随着有丝分裂水平　的上升而增加，与细胞动力学密切相关，是评价细胞　增殖活性的可靠指标　Ｊ。本研究ＲＴ—ＰＣＲ结果显　示，姜黄素作用后，人前列腺间质细胞中ｂｅｌ－２和Ｐｃ—　ＮＡ　ｍＲＮＡ水平表达降低，提示姜黄素可能是通过下　调ｂｅｌ一２和ＰＣＮＡ的表达，抑制前列腺增生细胞的增　殖，诱导其凋亡的发生。　［参考文献］　［１］Ｍａｈｅｓｈｗａｒｉ　ＲＫ，Ｓｉｎｇｈ　ＡＫ．Ｇａｄｄｌｐａｔｉ　Ｊ，ｅｔ　ａ１．Ｍｕｌｔｉｐｌｅ　ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｏｆ　ｃｕｒｃｕｍｉｎ：ａ　ｓｈｏｒｔ　ｒｅｖｉｅｗ［Ｊ］．Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉ，２００６，７８（１８）：　２０８１之０８７．　［２］谢克基，汤平，魏鸿蔼，等．盐酸持拉唑嗪诱导人前列腺问质细胞　１７　

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