稻米及制品中抗性淀粉的测定

实验粮食中淀粉含量的测定一、实验目的掌握粮食中淀粉含量测定的原理、试剂、仪器设备及操作要点。

二、实验原理试样经除去脂肪及可溶性糖类后，其中淀粉用淀粉酶水解成二糖，再用盐酸水解成具有还原性的单糖，最后按还原糖测定，并折算成淀粉含量。

三、实验试剂1.淀粉酶溶液：称取α-淀粉酶0.5g，加100mL水溶解，加入数滴甲苯或三氯甲烷，防止长霉。

2.碘溶液：称取3.6g碘化钾溶于20mL水中，加入1.3g碘，溶解后加水稀释至100mL。

3.85%乙醇。

4.6mol/L盐酸：取盐酸50mL加水至100mL。

5.200g/L氢氧化钠溶液。

6.甲基红指示液：称取0.1g甲基红用95%乙醇溶液定容至100mL。

7.乙醚。

8.蒸馏水。

四、仪器设备1、粉碎磨：40目筛。

2、天平：分度值0.01g。

3、锥形瓶：250mL。

4、回流冷凝装置：与250mL锥形瓶匹配。

5、容量瓶：250mL。

6、抽滤装置。

7、恒温水浴锅。

五、操作步骤待测样品，用粉碎磨粉碎至全部通过40目筛，充分混合，保存备用。

试样水分含量的测定：105℃烘干至恒重，计算。

1、称取试样约2~5g（精确至0.01g），置于放有滤纸的漏斗内，先用50mL 乙醚分5次洗涤去除脂肪，再用约100mL乙醇洗涤除去可溶性糖类，将残留物移入250mL烧杯，并用50mL水洗滤纸及漏斗，洗液并入烧杯内。

2、将烧杯置于沸水浴加热15min，使淀粉糊化。

3、将糊化的试样，放置冷却至60℃以下，加20mL α-淀粉酶溶液，在恒温水浴锅中55~60℃保温水解1h，并经常搅拌。

4、取酶解液1滴加1滴碘溶液，应不显蓝色，否则再加热糊化并加适量酶溶液，继续保温，直至加碘不显蓝色为止。

5、将酶解液加热至沸，冷却后移入250mL容量瓶加水定容至刻度，混匀，过滤，弃去初滤液。

6、取50mL滤液，置于250mL锥形瓶中，加5mL盐酸，装上回流冷凝管，在沸水浴中回流1h。

冷却后加2滴甲基红指示液，用氢氧化钠溶液中和至中性，溶液转入100mL容量瓶，洗涤锥形瓶，洗液并入100mL容量瓶中，加水定容至刻度，混匀备用。

饼干抗性淀粉含量的测定[21]采用3,5-二硝基水杨酸法制作葡萄糖标准曲线。

分别精密吸取0、0.2、0.4、0.6、0.8、1mL 葡萄糖标准液(2.0 mg/mL)。

相对应的加入1、0.8、0.6、0.4、0.2、0mL 的蒸馏水，再分别在每支试管中加入2.0mL 的DNS 试剂，混和均匀后再放于沸水浴中加热2 min 进行显色反应，取出后立即冷却至室温，最后各加入蒸馏水9.0mL ，充分摇匀后，静止2min 在分光光度计下用540 nm 波长处测定光吸收值。

以葡萄糖含量(mg/mL)为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线如图1。

DNS 溶液配制DNS 试剂：称取 10g 3,5- 二硝基水杨酸溶于 600m L 水中，逐渐加入氢氧化钠10g ，50℃水浴溶解后，加入 200g 酒石酸钾钠、2g 苯酚和 5g 无水亚硫酸钠，待溶解并澄清后，取出冷却至室温。

水定容至 1000m L ，过滤。

贮存于棕色试剂瓶中，于暗处放置 7 天后使用。

将饼干碾成粉末，先在试管中加入PH=6.0的柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液，再加入过量α-淀粉酶（500 U/g ），放入水浴锅中在37℃的条件下下酶解16 h 。

用4 mol/L 的柠檬酸调节PH 至4.0-4.5 加入过量葡萄糖淀粉酶（5000 U/L ），在60℃的水浴锅中 酶解1 h 。

然后将样品放入离心管，4000 r/min ，离心10 min ，弃上清液，用蒸馏水洗涤沉淀，重复2次。

在沉淀中加入5 mL 的氢氧化钾溶液（2 mol/L ），剧烈振荡30 min ，使抗性淀粉充分溶解。

用1 mol/L 的醋酸溶液调节PH 至4.0-4.5，加入过量葡萄糖淀粉酶，60℃ 酶解1h 。

然后4000 r/min ，离心10 min ，收集上清液至100 mL 容量瓶中，经蒸馏水洗涤沉淀，离心，重复2次，合并上清液，最后定容。

用DNS 法[22]测定其还原糖含量。

专利名称：批量测定水稻抗性淀粉含量的方法专利类型：发明专利
发明人：罗嘉锐,竺正航,郝晴文,杨维丰,姚惠珂申请号：CN202111450144.3
申请日：20211201
公开号：CN114136960A
公开日：
20220304
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种批量测定水稻抗性淀粉含量的方法，利用双酶水解法测定水稻中抗性淀粉含量，即先用胰α‑淀粉酶将非抗性淀粉水解成葡萄糖，再用钢珠和KOH溶解抗性淀粉，然后用淀粉葡糖苷酶(AMG)溶液使抗性淀粉水解成葡萄糖，并利用GOPOD法测定葡萄糖含量，从而根据标准曲线计算出抗性淀粉的含量。

相比于传统AOAC法耗时长、效率较低、费用高等缺点，本发明所提供一种批量测定水稻抗性淀粉含量的方法，具有成本低，重复性好，正确度较高，能实现批量操作等优势。

申请人：华南农业大学
地址：510640 广东省广州市天河区五山
国籍：CN
代理机构：杭州中成专利事务所有限公司
代理人：金祺
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抗性淀粉及总淀粉测定方法采用Megazyme抗性淀粉试剂盒法，测定方法见试剂盒说明书（下附）原理（AOAC法2002.02 ;AACC法32-40）抗性淀粉的测定方法：样品使用α-胰淀粉酶和淀粉葡糖苷酶（AMG）37℃振荡水浴孵育16小时，在这期间，通过两种酶的联合作用，非抗性淀粉被溶解，水解成D-葡萄糖，孵育结束后，加入等体积的乙醇或工业甲基化酒精（IMS,变性乙醇）终止反应。

离心上述溶液，收集上清勿弃，底部残留絮状团即为样品中的RS，用含水的IMS或乙醇（50%v/v）洗涤絮状团，洗涤后离心，再重复一次洗涤离心，收集离心后获得的上清，与之前收集的上清混合。

小心倒出试管残留的液体，将絮状团置于冰水浴中，加入2M KOH溶解，溶解的同时用磁力搅拌机剧烈搅拌。

用醋酸盐缓冲液将这个溶液调至中性，用AMG将淀粉定量水解成葡萄糖。

D-葡萄糖用葡糖氧化酶/过氧化物酶试剂（GOPOD）测定，这也是对样品中RS含量的测定。

非抗性淀粉（可溶性淀粉）的测定可通过集中的上清液并定容至100mL，再用GOPOD测定D-葡萄糖完成。

总淀粉测定方法：即抗性淀粉与非抗性淀粉总和。

抗性淀粉检测试剂盒K-RSTAR（100次分析）应用性和精确性这个方法需要样品中RS含量多于2% w/w。

如RS含量多于2% w/w，常规标准误差为±5%。

少于2% w/w RS的误差更高。

试剂盒瓶子1：淀粉葡糖苷酶AMG，12 mL，3300U/ mL，条件为pH4.5，40℃下，底物为可溶性淀粉，[单位或为200U/mL，条件为pH4.5，40℃下，底物为对硝基苯基β-麦芽糖苷]。

AMG溶液应完全没有可检测到的游离D-葡萄糖。

4℃下稳定性> 3年。

瓶子2：α-胰淀粉酶(胰酶，10g，3Ceralpha U/mg)。

4℃下稳定性> 3年。

瓶子3：GOPOD 试剂缓冲液。

磷酸钾缓冲液（1M，pH7.4），对羟基苯甲酸（0.22M）和叠氮化钠（0.4%W/V）。

抗性淀粉的制取与检测精品课件(一)随着人们生活水平的提高，越来越多的人开始注重健康饮食。

而淀粉则是人们日常饮食中不可缺少的营养物质之一。

但是淀粉也有一些缺点，如容易被消化吸收，引起身体健康问题。

于是，人们开始研究抗性淀粉的制取与检测。

一、什么是抗性淀粉抗性淀粉是淀粉的一种形式，经特殊制备后，不容易被消化吸收。

相比普通淀粉，抗性淀粉在人体内能起到更好的保健作用，如降低血糖、降低胆固醇、增加益生菌等。

二、抗性淀粉的制取方法目前，抗性淀粉的制取主要有以下方法：1.化学法。

通过酸或酶的作用来使淀粉变成抗性淀粉。

2.物理法。

如高压处理、超声波处理等。

3.生物法。

利用乳酸菌等微生物来发酵淀粉，制备出抗性淀粉。

三、抗性淀粉的检测方法抗性淀粉的检测方法主要有以下几种：1.酶解法。

将抗性淀粉样品用酶解液处理，然后测定样品中的葡萄糖含量。

2.显微镜法。

将淀粉样品烘干后加入碘液，用显微镜观察淀粉颗粒的大小和形状。

3.分子筛法。

通过分子筛分离方式来检测淀粉样品中的抗性淀粉含量。

四、抗性淀粉的应用抗性淀粉目前被广泛应用于食品、药品、保健品等领域。

在食品方面，抗性淀粉能够增加食品的纤维素含量，提高食品的口感和营养价值。

在药品方面，抗性淀粉可用于治疗肠道疾病、调节血糖和血脂等。

在保健品方面，抗性淀粉可补充肠道内的益生菌，改善肠道微生态平衡。

综上所述，抗性淀粉是一种非常重要的营养物质，对人们的健康有着重要的保健作用。

而在抗性淀粉的制取和检测过程中，科学家们也在不断地探索创新，为人们提供更好的健康食品。