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AOAC2002抗性淀粉（中文翻译）抗性淀粉的测量C.实验试剂(a)马来酸钠缓冲液：0.1M,pH6.0.取23.2g的马来酸溶解在1600ml的蒸馏水中，用4M(160g/L)的NaOH调节pH值到6.0 ，加入0.6gCaCl2.2H2O和0.4g的叠氮化钠，然后定容到2L。
4℃保存1年。
(b)马来酸钠缓冲液：1.2M,pH3.8,69.6ml的冰醋酸溶解在800ml 的蒸馏水中，用4M的NaOH调节pH值到3.8.用蒸馏水定容到1L。
室温下保存1年。
(c)马来酸钠缓冲液：100mM,pH4.5.5.8ml的冰醋酸溶解在900ml的蒸馏水中，用4M的NaOH调节pH值到4.5，最后用蒸馏水定容到1L,4℃下保存1年。
(d)氢氧化钾溶液：2M,取112.2KOH溶解在900ml的去离子水中，定容到1L(e)IMS溶液：50%V/V。
取500ml的乙醇（95%或99%）或工业甲基化酒精（IMS,变性乙醇；95%乙醇加5%的甲醇），用水定容到1L,密封保存1年。
(f)AMG储备液：12ml,3300U/ml溶解在50%的甘油中，呈粘性。
在4℃下保存5年。
（注：1U:在40℃，pH4.5的条件下，AMG分解可溶性淀粉产生1μmol 的葡萄糖所需要的酶量）。
(g)淀粉葡萄糖苷酶稀释液：300U/ml，将2ml的AMG储备液用0.1M,PH马来酸缓冲液C(a)稀释到22ml,等分为5ml冷冻保存在聚丙烯管中，使用时可以反复冻融，-20℃下保存5年。
(h)胰a-淀粉酶（10mg/ml）+AMG(3U/ml)：1g的胰a-淀粉酶加100ml马来酸缓冲液C(a),搅拌5min,加1.0mlAMG（300U/ml），搅拌离心，＞1,500g,10min。
小心倒出上清液。
现配现用。
(i)葡萄糖氧化酶-过氧化物酶-氨基安替比林溶液（GOPOD）:制备GOPOD通过稀释50ml的缓冲液到1.0L,用部分稀释缓冲液溶解冻干的GOPOD混合液，将小瓶内的酶液转移到1.0L的容量瓶中，用稀释缓冲液定容到1.0L.葡萄糖氧化酶＞12000U/L;过氧化物酶＞650U/L;4-氨基安替比林溶液0.04mM4℃保存2~3月，-20℃保存＞2年缓冲液的制备：溶解136gkH2PO4,42gNaOH,30g的4-羟基苯甲酸，溶解在900ml水中，用1MHCL和2MNaOH调节pH7.4,稀释到1L,添加0.4g 叠氮化钠混合至溶解。
抗性淀粉检测试剂盒K-RSTAR（100次分析）前言抗性淀粉（RS）是指在人小肠内不能被酶解的淀粉，在大肠部分或完全发酵。
RS是总膳食纤维的组分之一。
原理（AOAC法 ;AACC法32-40）抗性淀粉的测定方法：样品使用α-胰淀粉酶和淀粉葡糖苷酶（AMG）37℃振荡水浴孵育16小时，在这期间，通过两种酶的联合作用，非抗性淀粉被溶解，水解成D-葡萄糖，孵育结束后，加入等体积的乙醇或工业甲基化酒精（IMS,变性乙醇）终止反应。
离心上述溶液，收集上清勿弃，底部残留絮状团即为样品中的RS，用含水的IMS或乙醇（50%v/v）洗涤絮状团，洗涤后离心，再重复一次洗涤离心，收集离心后获得的上清，与之前收集的上清混合。
小心倒出试管残留的液体，将絮状团置于冰水浴中，加入2M KOH溶解，溶解的同时用磁力搅拌机剧烈搅拌。
用醋酸盐缓冲液将这个溶液调至中性，用AMG将淀粉定量水解成葡萄糖。
D-葡萄糖用葡糖氧化酶/过氧化物酶试剂（GOPOD）测定，这也是对样品中RS含量的测定。
非抗性淀粉（可溶性淀粉）的测定可通过集中的上清液并定容至100mL，再用GOPOD测定D-葡萄糖完成。
应用性和精确性这个方法需要样品中RS含量多于2% w/w。
如RS含量多于2% w/w，常规标准误差为+5%。
少于2% w/w RS的误差更高。
试剂盒瓶子1：淀粉葡糖苷酶AMG，12 mL，3300U/ mL，条件为，40℃下，底物为可溶性淀粉，[单位或为200U/mL，条件为，40℃下，底物为对硝基苯基β-麦芽糖苷]。
AMG溶液应完全没有可检测到的游离D-葡萄糖。
4℃下稳定性> 3年。
瓶子2：α-胰淀粉酶(胰酶，10g，3Ceralpha U/mg)。
4℃下稳定性> 3年。
瓶子3：GOPOD 试剂缓冲液。
磷酸钾缓冲液（1M，），对羟基苯甲酸（0.22M）和叠氮化钠（%W/V）。
4℃下稳定性> 3年。
瓶子4：GOPOD试剂酶。
葡糖氧化酶（>12,000U）加上过氧化物酶（>650U）和4-氨基安替比林（80mg）。
胰淀粉酶测定试剂盒(免疫抑制-EPS底物法)适用范围：本试剂用于体外定量测定人血清、血浆或尿液中胰淀粉酶的含量。
1.1规格液体双剂型试剂1（R1）：60mL×2，试剂2（R2）：15mL×2；试剂1（R1）：60mL×1，试剂2（R2）：15mL×1；试剂1（R1）：40mL×1，试剂2（R2）：10mL×1。
1.2规格划分说明根据净含量划分规格。
1.3主要组成成分试剂盒由试剂1（R1）液体、试剂2（R2）液体组成。
1.3.1 试剂1（R1）液体：氯化钙0 .075 mmol/L氯化钠90 mmol/L氯化镁13 mmol/LHEPES50 mmol/Lα-葡萄糖苷酶 >4 U/mL 鼠抗唾液淀粉酶单克隆抗体50 mg/L1.3.2 试剂2（R2）液体：亚乙基-4-NP-麦芽庚糖苷18mmol/LHEPES50 mmol/L2.1 外观试剂盒中各组件的外观应满足：a) 试剂1（R1）应为无色或淡黄色透明溶液，无杂质、无絮状物，外包装完整无破损；b) 试剂2（R2）应为无色透明溶液，无杂质、无絮状物，外包装完整无破损。
2.2 净含量液体试剂净含量应不少于标示值。
2.3 试剂空白吸光度在波长405nm（光径1cm）处，试剂空白吸光度（A）应≤0.5000，试剂空白吸光度变化率（ΔA/min）的绝对值应≤0.0100。
2.4 准确度测定胰淀粉酶纯品, 回收率应在80%～120%范围内。
2.5 分析灵敏度对应于浓度为175U/L的胰淀粉酶所引起的吸光度变化率（△A/min）的绝对值应在0.0200～0.2000的范围内。
2.6 重复性重复测定高、低浓度样本，变异系数（CV）应≤10%。
2.7 批间差测定同一样本，批间差（R）应≤10%。
2.8 线性范围在[3，1300] U/L范围内，线性相关系数（r）应≥0.990；在[3，100] U/L范围内，线性绝对偏差应不超过±15U/L；在(100，1300] U/L范围内，线性相对偏差应不超过±15%。
前言:谷类淀粉的许多特性决定其最终用途，这些取决于直链淀粉/支链淀粉的比率。
这些特性包括糊化和凝胶化，溶解度，抗性淀粉的形成以及整颗大米的烹饪和构造特性。
因此，淀粉中直链淀粉含量的测定是淀粉加工的一个重要的质量参数。
最常用的测定谷物淀粉中直链淀粉含量的方法是利用电势，电流测定或直链淀粉的碘结合能力比色测定直链淀粉-碘色合配合物。
然而，这些方法具有不确定性。
支链淀粉-碘复合物也可以形成，这样降低了利用非比色法测定的游离碘离子的浓度，并且用比色法测量时，该复合物可能和直链淀粉-碘复合物吸收相同波长的光。
这种复合物致使直链淀粉的测定含量超过实际含量，需要进行校正。
Gibson等详细列举了使用这些方法所遇到的许多其他问题。
支链淀粉结合ConA的特殊复合物为淀粉中直链淀粉的测定提供了一种替代方法，而且不存在不确定性问题。
在指定pH值，温度和离子强度的条件下，ConA特异性结合分支多糖并形成沉淀，这种结合以多个非还原性末端基团上的α-D-吡喃葡萄糖基或α-D-吡喃甘露糖基单位为基础。
因此，ConA可以有效结合淀粉中的支链淀粉成分，但是不能结合线性为主的直链淀粉成分。
此方法是Yun和Matheson改进的ConA方法。
分析之前用乙醇预处理去除脂质。
原理：淀粉样品通过加热完全地溶解在二甲基亚砜（DMSO）里。
用乙醇沉淀淀粉去除其中的脂质，回收沉淀的淀粉。
用醋酸/盐溶液溶解沉淀的样品，加入ConA，特异性沉淀支链淀粉，离心去除沉淀。
单位体积上清液中的直链淀粉用酶水解为D-葡萄糖，然后用葡萄糖氧化酶/过氧化物酶试剂进行测定。
另外一份单位体积醋酸/盐溶液中的总淀粉同样用酶水解为D-葡萄糖，然后加入葡萄糖氧化酶/过氧化物酶，用比色法测定。
根据ConA沉淀样品的上清液和与总淀粉样品中的GOPOD在510 nm处的吸光光度值之比判断直链淀粉在总淀粉中的含量。
该方法适用于所有的纯淀粉和谷物粉。
精确性样品如为纯淀粉，相对标准偏差为<5%。
淀粉含量检测试剂盒说明书微量法UPLC-MS-4133100T/96S试剂名称规格保存条件试剂一液体65mL×1瓶2-8℃保存试剂二液体65mL×1瓶2-8℃保存试剂三粉剂×2瓶2-8℃保存标准品粉剂×1支2-8℃保存溶液的配制：1、标准品：临用前加入1mL 蒸馏水使其溶解，制备10mg/mL 葡萄糖标准液，2-8℃保存两周。
2、工作液的配制：临用前取1瓶试剂三加入2.625mL 蒸馏水后，缓慢加入14.875mL 浓硫酸，不断搅拌，充分溶解，待用，用不完的试剂可以2-8℃保存一周。
淀粉是植物中糖的主要储存形式，其含量测定对于评价食品营养价值和调查植物体内糖代谢都有重要意义。
利用80%乙醇可以把样本中可溶性糖与淀粉分开，进一步采用酸水解法分解淀粉为葡萄糖，采用蒽酮比色法测定葡萄糖含量，即可计算淀粉含量。
StarchH 2SO 4Glucose H 2SO 45-Hdroxymethylfurfural AnthroneFurfural Derivatives最低检出限：0.0074mg/mL 线性范围：0.008-0.7mg/mL注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿或者96孔板、研钵、冰、浓硫酸（不允许快递）、蒸馏水。
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、称取约0.03g 样本于研钵中研碎，加入0.6mL 试剂一，充分匀浆后转移到EP 管中，80℃水浴提取30min ，3000g ，常温离心5min ，弃上清，留沉淀。
2、沉淀中加入0.3mL 双蒸水，放入沸水浴中糊化15min （盖紧，以防止水分散失）。
3、冷却后，加入0.6mL 试剂二，放入沸水浴中提取15min ，振荡3-5次。
4、冷却后，8000g ，常温离心15min ，取上清液待测。
支链淀粉含量检测试剂盒说明书微量法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号：BC4275规格：100T/96S产品简介：支链淀粉又称胶淀粉，一般由几千个葡萄糖残基组成，淀粉中直链淀粉和支链淀粉的比例和含量对淀粉产品的加工、物化特性、糊化温度等有着直接的影响。
支链淀粉和碘形成红紫色络合物，利用乙醇分开样品中的可溶性糖和淀粉，再用碘与其反应得到支链淀粉含量试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计/酶标仪、天平、台式离心机、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、乙醚、无水乙醇、EP管。
产品内容：试剂一：液体110mL×1瓶，4℃保存；试剂二：乙醚100mL×1瓶，自备；试剂三：液体55mL×1瓶，4℃保存；O=9mL：91mL混匀，现用现配，4℃保存半年。
试剂四：将试剂三：H2试剂五：液体2mL×1瓶，4℃保存；粉剂一：粉剂×1瓶，4℃保存；粉剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；试剂六的配制：将粉剂一倒入粉剂二，用蒸馏水定容至10mL，4℃避光保存一个月。
标准品：10mg支链淀粉×1支，4℃避光保存。
临用前加入0.1mL无水乙醇和0.9mL试剂三，混匀后封口膜封口，沸水浴至溶解，即10mg/mL的支链淀粉。
吸取0.1mL加入0.9mL蒸馏水配制为1mg/mL的标准溶液待用。
操作步骤：一、支链淀粉的提取：称取0.005g烘干样本（建议称取约0.01g）于研钵中研碎，加入1mL试剂一，充分匀浆后转移到EP 管中，80℃水浴提取30min，3000g，25℃离心5min，弃上清，留沉淀，加入1mL试剂二（乙醚）振荡5min，3000g，25℃离心5min，弃上清，留沉淀，加入5mL试剂四充分溶解，90℃水浴10min，冷却后3000g，25℃离心5min，取上清待测。
二、测定步骤：1、分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节双波长至530nm和755nm，蒸馏水调零。
α-淀粉酶（α-AL ）活性检测试剂盒说明书微量法注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC0615规格：100T/48S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称规格保存条件试剂一液体20 mL×1瓶常温保存试剂二液体5 mL×2瓶2-8℃保存试剂三粉剂×2支2-8℃保存标准品粉剂×1支2-8℃保存溶液的配制：1、试剂一：若有黄色晶体析出，需加热溶解后再用；2、试剂二：临用前取1支试剂三加入1瓶试剂二中，置于常温水中并加热至煮沸，期间不断搅拌粉剂至溶解，用不完的试剂2-8℃保存4周；3、标准品：10 mg 无水葡萄糖。
临用前加1 mL 蒸馏水，配成10 mg/mL 葡萄糖标准液，2-8℃保存两周。
产品说明：淀粉水解酶，包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。
α-AL (EC 3.2.1.1)随机催化淀粉中α-1,4-糖苷键水解，生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖，同时使淀粉的粘度降低，因此又称为液化酶。
淀粉水解酶催化淀粉水解生成还原糖，还原糖还原3,5-二硝基水杨酸生成棕红色物质，在540nm 有吸收峰；通过测定540nm 吸光度增加速率，计算淀粉酶活性。
α-AL 耐热，但是β-淀粉酶可在70℃钝化15min 。
因此粗酶液经过70℃钝化15min ，就只有α-AL 能够催化淀粉水解。
Reducing Sugar3-Amino-5-Nitrosalicylate (540nm)注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：酶标仪/可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、96孔板/微量玻璃比色皿、研钵/匀浆器和蒸馏水。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）称取约0.1g 样本，加0.8mL 蒸馏水匀浆；匀浆后在室温下放置提取15min ，每隔5min 振荡1次，使其充分提取；6000g ，室温离心10min ，吸取上清液并且加蒸馏水定容至10mL ，摇匀，即为淀粉酶原液。
本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断植物（Plant）淀粉酶（Amylase）ELISA检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。
往预先包被淀粉酶（Amylase）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。
用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的淀粉酶（Amylase）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品活性。
样品收集、处理及保存方法1.样本不能含叠氮钠（NaN3），因为叠氮钠（NaN3）是辣根过氧化物酶（HRP）的抑制剂。
2.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行。
3.植物萃取液或其它相关样本：请1000x g离心20分钟，取上清即可检测。
4.保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品1.酶标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3.37℃恒温箱操作注意事项1.试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。
从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
3.浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。
4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5.所有液体组分使用前充分摇匀。
试剂盒组成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无样本稀释液6mL3mL无检测抗体-HRP10mL5mL无20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释底物A6mL3mL无底物B6mL3mL无终止液6mL3mL无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、250、500、1000、2000、4000U/L试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
直链淀粉含量检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号：BC4260规格：50T/48S产品简介：直链淀粉是D-葡萄糖基以α-(1,4)糖苷键链接的多糖链，直链淀粉含量影响着食品的食用品质和外观品质，与食品安全息息相关。
直链淀粉和碘形成蓝色络合物，利用乙醇分开样品中的可溶性糖和淀粉，再用碘与其反应得到直链淀粉含量。
试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计、天平、台式离心机、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、乙醚、无水乙醇、EP管。
产品内容：试剂一：液体60mL×1瓶，4℃保存；试剂二：乙醚50mLmL×1瓶，自备；试剂三：液体30mL×1瓶，4℃保存；O=9mL：91mL混匀，现用现配，4℃保存半年。
试剂四：将试剂三：H2试剂五：液体1.5mL×1支，4℃保存；粉剂一：粉剂×1瓶，4℃保存；粉剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；试剂六的配制：将粉剂一倒入粉剂二，用蒸馏水定容至10mL，4℃避光保存一个月。
标准品：10mg直链淀粉×1支，4℃避光保存。
临用前加入0.1mL无水乙醇和0.9mL试剂三，混匀后封口膜封口，沸水浴至溶解，即10mg/mL的直链淀粉。
吸取0.1mL加入0.9mL蒸馏水配制为1mg/mL的标准溶液待用。
操作步骤：一、直链淀粉的提取：称取0.005g烘干样本于研钵中研碎，加入1mL试剂一，充分匀浆后转移到EP管中，80℃水浴提取30min，3000g，25℃离心5min，弃上清，留沉淀，加入1mL试剂二（乙醚）振荡5min，3000g，25℃离心5min，弃上清，留沉淀，加入5mL试剂四充分溶解，90℃水浴10min，冷却后3000g，25℃离心5min，取上清待测。
二、测定步骤：1、分光光度计预热30min以上，调节双波长至550nm和485nm，蒸馏水调零。
α-淀粉酶（α-AL）活性检测试剂盒说明书微量法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。
货号：BC0615规格：100T/48S产品内容：试剂一：液体20mL×1瓶，室温保存。
若有黄色晶体析出，可适当加热溶解后再用。
试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。
临用前加入10mL蒸馏水，置于常温水中并加热至煮沸，期间不断搅拌粉剂至溶解。
标准品：粉剂×1支，10mg无水葡萄糖，临用前加1mL蒸馏水，配成10mg/mL葡萄糖标准液。
产品说明：淀粉水解酶，包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。
α-AL(EC 3.2.1.1)随机催化淀粉中α-1,4-糖苷键水解，生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖，同时使淀粉的粘度降低，因此又称为液化酶。
淀粉水解酶催化淀粉水解生成还原糖，还原糖还原3,5-二硝基水杨酸生成棕红色物质，在540nm有吸收峰；通过测定540nm吸光度增加速率，计算淀粉酶活性。
α-AL耐热，但是β-淀粉酶可在70℃钝化15min。
因此粗酶液经过70℃钝化15min，就只有α-AL能够催化淀粉水解。
需自备的仪器和用品：酶标仪或可见分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、96孔板/微量比色皿、研钵和蒸馏水。
操作步骤：一、粗酶液提取：称取约0.1g样本，加0.8mL蒸馏水匀浆；匀浆后在室温下放置提取15min，每隔5min振荡1次，使其充分提取；6000g，室温离心10min，吸取上清液并且加蒸馏水定容至10mL，摇匀，即为淀粉酶原液。
二、测定步骤和加样表（在EP管中依次加入下列试剂）：1、分光光度计预热30min以上，调节波长到540nm，蒸馏水调零。
2、将葡萄糖标准液用蒸馏水稀释为1、0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.015625、0.0078和0.0039mg/mL的标准溶液。
3、按操作表依次加入各试剂：试剂（μL）对照管测定管标准管空白管α-淀粉酶原液7575--蒸馏水---75标准溶液（mg/mL）--75-70℃水浴15min左右，冷却试剂一150---将以上对照管、测定管和试剂二置于40℃恒温水浴中保温10min左右试剂二75757575在40℃恒温水浴中准确保温5min试剂一-150150150混匀，90℃水浴10min，取200μL至96孔板或微量比色皿中，540nm处读取对照管、测定管、标准管、空白管的吸光度，分别记为A对照、A测定、A标准和A空白，计算ΔA测定=A测定-A对照，ΔA标准=A标准-A空白。
简介：小麦磨粉引起小麦粉中一定比例淀粉颗粒的物理损坏。
淀粉损伤程度直接影响吸水和面团混合性能，因而具有重要的技术意义。
此外，受损的颗粒迅速水合并被α-和β-淀粉酶被水解产生可发酵的糖。
在传统长期发酵过程的后期，当面粉中的天然糖被酵母发酵完后，破损淀粉酶解产生的麦芽糖进一步提供发酵底物。
当这种传统可发酵糖缺乏时，出现产气不足，所生产的面包体积小硬度大。
用于测量破损淀粉的方法大致可分为四大类，提取法（“蓝值”），染料染色法，近红外法和酶消化法。
酶消化法通常在这些方法中优先选择。
酶消化法利用α-淀粉酶，β-淀粉酶或这些酶的组合。
谷物和真菌α-淀粉酶制剂已被用作粗麦芽提取或粗发酵液。
传统上一直使用的非特异性还原糖法测定水解程度，如铁氰化钾滴定法，或与二硝基水杨酸（DNS）反应法来测定。
原理：在本方法中，利用真菌α-淀粉酶小心地处理使受损的淀粉颗粒经水合和水解成麦芽糖加和α-极限糊精。
真菌α-淀粉酶处理的目的是使受损的淀粉颗粒完全溶解而完好颗粒分解极少。
通过加稀硫酸终止反应，试样经过量的纯化淀粉葡糖苷酶处理，而使淀粉衍生的糊精完全降解为葡萄糖。
用高纯度葡萄糖氧化酶/过氧化物酶试剂混合物进行测定葡萄糖含量。
测定值表示为淀粉（损坏）占面粉原样重量的百分比。
精度：我们实验内通常能得到±3％的标准误。
实验室间测试的汇总于这本小册子的7-8页。
试剂盒：Megazyme 公司的试剂盒可测试淀粉破损值200次。
试剂盒包括测试方法和以下内容：瓶1：真菌α-淀粉酶（10mL，，pH6.0和40℃时分析Ceralpha试剂是1000U/mL）硫酸铵溶液。
4℃可存放3年以上。
瓶2：淀粉葡糖苷酶（4mL，pH4.5和40℃时分析可溶性淀粉是200 U / mL的可溶性淀粉在pH4.5和40℃）。
硫酸铵溶液。
4℃可存放3年以上。
瓶3：GOPOD试剂缓冲液。
缓冲液（48mL，pH值7.4），对羟基苯甲酸和叠氮化钠（0.4％w/v）。
Megazyme淀粉总量检测试剂盒产品编号：K-TSTA（100次）(淀粉葡糖苷酶/α-淀粉酶方法)AOAC法996.11 /AACC法76.13改进版1.简介淀粉测定方法分为酸水解法和酶分析法。
酸水解只能应用于纯淀粉样品。
酶分析方法在前处理步骤，淀粉凝胶化、液化和糊化，糊精水解成葡萄糖、葡萄糖测定步骤等方面存在不同。
AACC 76-11法采用淀粉在高压蒸汽灭菌锅中及含水的条件下凝胶化，并用淀粉葡糖苷酶将淀粉转化为葡萄糖，再测定葡萄糖含量。
采用AACC 76-11法会导致许多样品和材料中（包括高直链淀粉玉米淀粉和谷物制品）淀粉含量检测结果偏低。
目前，许多方法采用在淀粉凝胶化结束后立即加入耐热α-淀粉酶处理。
对于难以凝胶化的样品如高直链淀粉玉米淀粉，用氢氧化钠或DMSO处理。
在膳食纤维的测定方法中为确保淀粉完全溶解，Englyst和Cumming（1988）加入了淀粉脱支化酶，普鲁兰酶。
为了满足极端样品中总淀粉含量定量测定的需要，Megazyme公司研发出一种使用耐热α-淀粉酶和淀粉葡糖苷酶的淀粉总量检测试剂盒。
该方法已被AOAC和AACC采用。
近来，我们将检测方法进行了改进，使耐热α-淀粉酶和淀粉葡糖苷酶可以在相同的pH(pH 5.0)下进行孵育，这样简化了测定步骤，并将麦芽酮糖生成的可能性降到最低。
Megazyme淀粉总量试剂盒可测定大部分食品、饲料、植物和谷物制品（天然或加工过的）。
对于大部分样品（如小麦粉），样品中的淀粉在孵育中（大约100℃，并加入耐热α-淀粉酶）会完全溶解。
含有大量抗性淀粉的样品（如高直链玉米淀粉），需用2M KOH或热DMSO进行预溶解。
含有可溶性淀粉或麦芽糊精的样品，不需要用耐热α-淀粉酶处理。
2.产品性能●特异性：可用于测定α-葡聚糖（包括淀粉、糖原、植物糖原和非抗性麦芽糊精）。
●灵敏度：最小吸光度差异为0.10吸光度单位。
这相当于当样品体积为1.00 mL时，D-葡萄糖的浓度为1.0mg/L或淀粉浓度为0.9 mg/L。
三种降糖米中抗性淀粉含量的测定1982年Englyst等人在进行膳食纤维定量分析时，发现在不溶性膳食纤维中包埋有淀粉成分，称之为抗性淀粉(Resistant Starch，RS)，至此，抗性淀粉引起学者们研究其营养特性的兴趣。
1992年FAO(世界粮农组织)将其定义为“健康者小肠中不吸收的淀粉及其降解产物”。
近年的研究已经初步证明，抗性淀粉不能被小肠消化吸收和提供葡萄糖，但在大肠中能部分被肠道微生物菌群发酵，产生多种短链脂肪酸，改善肠道环境；抗性淀粉本身含热量极低，作为低热量添加剂添加到食物中，可起到与膳食纤维相似的生理功能。
更重要的是，抗性淀粉还具有调节血糖、防止心脑血管疾病、预防结肠直肠癌的作用，故抗性淀粉有着比膳食纤维更为广泛的保健意义。
本文通过参考Megazyme公司试剂盒提供的方法，结合国内实际情况，研究一套准确、方便、快捷测定原料中抗性淀粉含量的方法，为研究人员测定抗性淀粉提供一种新的方法。
1原理（AOAC法 2002.02 ;AACC法32-40）先用α-胰淀粉酶（Pancreaticα-amylase）将非抗性淀粉溶解成D-葡萄糖，再利用抗性淀粉能溶解于 KOH中的性质，用淀粉葡萄糖苷酶（Amyloglucosidase,AMG）使其水解成葡萄糖，然后测定糖的含量，从而推算出抗性淀粉的含量。
2 试验仪器与试剂2.1 仪器水浴恒温振荡器，移液枪、分析天平、涡旋混匀器、离心机、磁力搅拌器2.2 溶液的配制2.2.1顺丁烯二酸钠（马来酸钠）缓冲液(0.1M，pH6.0)用1600mL蒸馏水溶解23.2g顺丁烯二酸，用4M（160g/L）氢氧化钠调节pH 至6.0，加入0.74g二水氯化钙和0.4g叠氮化钠，溶解定容至2L。
2.2.2 醋酸钠缓冲液（1.2M，PH3.8）将69.6mL的冰醋酸（1.05g/mL）加至800 mL的蒸馏水中，用4M氢氧化钠调节pH至pH3.8。
用蒸馏水定容至1L，室温下可保存一年。
几种常见饲料原料中抗性淀粉含量的测定Resistant starch,简称RS，这一概念由Englyst提出，国内大多数文章译为抗性淀粉，也有的将其译为抗淀粉及抗消化淀粉，1993 年，欧洲抗性淀粉研究协会（EURESTA）将其定义为“健康者小肠中不被吸收的淀粉及其降解产物的总称”。
抗性淀粉一般分为4类：ＲS1型（生理不可消化性截留淀粉）；ＲS2型(抗性淀粉颗粒)；ＲS3型(老化淀粉)；ＲS4型(化学改性淀粉)，杨光和丁霄霖(2002)分别就抗性淀粉的测定方法进行了讨论，但测定结果却不尽一致，本文通过参考 Megazyme公司试剂盒提供的方法，结合国内实际情况，研究出一套准确，方便、快捷测定饲料中抗性淀粉含量的方法，为饲料行业测定抗性淀粉提供一种新的方法。
1 原理先用胰α-淀粉酶（Pancreatic α-amylase）将非抗性淀粉水解成葡萄糖，再利用抗性淀粉能溶于KOH中的性质，用淀粉葡萄糖苷酶（Amyloglucosidase,AMG）使其水解成葡萄糖，然后测定糖的含量，从而推算出非抗性和抗性淀粉的含量。
2 仪器与试剂2.1 仪器GILSON移液枪，DSHZ-300多用途水浴恒温振荡器（江苏太仓王秀实验设备厂），分析天平（0.000 1g），Beckman Synchron CX4/Pro全自动生化分析仪，WH-1微型旋涡混合仪（上海沪西分析仪器厂），离心机（Eppendorf Centrifuge 5810 R）。
2.2 溶液的配制2.2.1 马来酸缓冲液（0.1M，pH=6.0）将23.2g马来酸溶解于1 600ml蒸馏水中，用4M（160g/l）NaOH调pH至6.0，加入0.6g CaCl22H2O和0.4g叠氮钠，蒸馏水定容至2L，室温保存。
2.2.2 醋酸钠缓冲液（1.2M，pH=3.8）取69.6ml冰醋酸于800ml蒸馏水中，用4M NaOH调PH至3.8，蒸馏水定容至1L，室温保存。
大鼠抵抗素(Resistin)elisa试剂盒使用说明书Elisa kit规格：48孔配置/96孔配置标准品稀释液：1.5ml×1瓶酶标试剂：3 ml×1瓶（48）/6 ml×1瓶（96）【大鼠抵抗素(Resistin) elisa试剂盒】本试剂仅供研究使用计算：以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
试剂盒组成：封板膜:2片（48）/2片（96）说明书:1份密封袋:1个标准品：2700ng/L 0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存酶标包被板: 1×48 1×96 2-8℃保存样品稀释液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液: 3ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液: 3ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存终止液: 3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液:（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠抵抗素(Resistin) 水平。
用纯化的大鼠抵抗素(Resistin) 抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入抵抗素(Resistin) ，再与HRP标记的抵抗素(Resistin) 抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的抵抗素(Resistin) 呈正相关。
抗性淀粉检测试剂盒K-RSTAR（100次分析）前言抗性淀粉（RS）是指在人小肠内不能被酶解的淀粉，在大肠部分或完全发酵。
RS是总膳食纤维的组分之一。
原理（AOAC法 ;AACC法32-40）抗性淀粉的测定方法：样品使用α-胰淀粉酶和淀粉葡糖苷酶（AMG）37℃振荡水浴孵育16小时，在这期间，通过两种酶的联合作用，非抗性淀粉被溶解，水解成D-葡萄糖，孵育结束后，加入等体积的乙醇或工业甲基化酒精（IMS,变性乙醇）终止反应。
离心上述溶液，收集上清勿弃，底部残留絮状团即为样品中的RS，用含水的IMS或乙醇（50%v/v）洗涤絮状团，洗涤后离心，再重复一次洗涤离心，收集离心后获得的上清，与之前收集的上清混合。
小心倒出试管残留的液体，将絮状团置于冰水浴中，加入2M KOH溶解，溶解的同时用磁力搅拌机剧烈搅拌。
用醋酸盐缓冲液将这个溶液调至中性，用AMG将淀粉定量水解成葡萄糖。
D-葡萄糖用葡糖氧化酶/过氧化物酶试剂（GOPOD）测定，这也是对样品中RS含量的测定。
非抗性淀粉（可溶性淀粉）的测定可通过集中的上清液并定容至100mL，再用GOPOD测定D-葡萄糖完成。
应用性和精确性这个方法需要样品中RS含量多于2% w/w。
如RS含量多于2% w/w，常规标准误差为+5%。
少于2% w/w RS的误差更高。
试剂盒瓶子1：淀粉葡糖苷酶AMG，12 mL，3300U/ mL，条件为，40℃下，底物为可溶性淀粉，[单位或为200U/mL，条件为，40℃下，底物为对硝基苯基β-麦芽糖苷]。
AMG溶液应完全没有可检测到的游离D-葡萄糖。
4℃下稳定性> 3年。
瓶子2：α-胰淀粉酶(胰酶，10g，3Ceralpha U/mg)。
4℃下稳定性> 3年。
瓶子3：GOPOD 试剂缓冲液。
磷酸钾缓冲液（1M，），对羟基苯甲酸（0.22M）和叠氮化钠（%W/V）。
4℃下稳定性> 3年。
瓶子4：GOPOD试剂酶。
葡糖氧化酶（>12,000U）加上过氧化物酶（>650U）和4-氨基安替比林（80mg）。
冻干粉，-20℃下稳定性>5年。
瓶子5：D-葡萄糖标准溶液（5 mL,mL）溶于苯甲酸%（w/v）。
室温下稳定性>5年。
瓶子6：抗性淀粉对照。
抗性淀粉含量如表所示。
室温下稳定性>5年。
溶液/悬浮液的制备1.使用瓶子1中提供的的产品（AMG；溶液1）。
这个溶液是有粘性的，因此应使用正向4℃下稳定性> 3年。
稀释AMG（300 U/ mL）。
取2 mL瓶子1中的AMG浓缩液用0.1M顺丁烯二酸钠缓冲液（0.1M，下面有清楚解释怎么调pH；试剂1，非提供）稀释至22mL。
以5 mL为单位分装后用聚丙烯管冷冻保存。
反复冻融不会影响稳定性，稳定性-20℃>5年。
用前制备2.用100mL顺丁烯二酸钠缓冲液(100mM，；试剂1，非提供)悬浮2中的产品(α-胰淀粉酶)，搅拌5分钟。
加入稀释的AMG（300 U/ mL），混匀。
>1500g离心10分钟，慢慢倒出上清液，这就是制备的溶液2。
溶液2制备后应当天使用。
3.用蒸馏水稀释瓶子3中的产品（GOPOD 试剂缓冲液）稀释至1L，这就是制备的溶液3。
制备后马上使用。
全部用，下一步里有备注：（1）如果浓缩缓冲液在-20℃下储存，它将形成结晶盐，因此必须要完全溶解才可以用蒸馏水稀释。
（2）这个缓冲液包含%（w/v）的叠氮化钠。
因此这是个有毒化学物，应进行相应的处理。
4.取瓶3中制备好的溶液320mL溶解瓶子4里全部的产品，定量转移这个溶液至装有剩余溶液3的瓶子中。
用铝箔封盖瓶子以遮光。
这就是葡萄糖测定试剂（GOPOD 试剂），可以在2-5℃保存3个月或者-20℃下保存一年。
如果试剂要以冷冻态储存，应分装后再冻存。
当试剂是新鲜制备的，它的颜色应是浅黄色或浅粉色。
在4℃储存2-3个月时会演变成深粉色。
当以蒸馏水为对照时，这个溶液的吸光度应小于。
5&6.使用瓶子5或6提供的产品。
室温下稳定性>5年。
没有提供的试剂（应购买分析纯级）1.顺丁烯二酸钠（马来酸钠）缓冲液(100mM，加上5mM二水氯化钙和叠氮化钠（%w/v）.用1600mL蒸馏水溶解23.2g顺丁烯二酸，用4M（160g/L）氢氧化钠调节pH至，加入0.74g二水氯化钙和0.4g叠氮化钠，并溶解。
定容至2L。
4℃下可保存一年。
2.醋酸钠缓冲液（1.2M，）将的冰醋酸（1.05g/mL）加至800 mL的蒸馏水中，用4M氢氧化钠调节pH至。
用蒸馏水定容至1L，室温下可保存一年。
3.醋酸钠缓冲液（100mM，）将的冰醋酸加至900 mL的蒸馏水中，用4M氢氧化钠调节pH至。
用蒸馏水定容至1L，4℃保存2个月。
4.氢氧化钾溶液（2M）将加至900 mL的去离子水中，搅拌溶解。
定容至1L，密封保存。
室温下可保存2年。
5.含水乙醇（或者IMS）（大约50%v/v）将500mL乙醇（95%v/v或者99%v/v）或者工业甲基化酒精（IMS；变性乙醇；95% v/v 乙醇加上5%甲醇）至500mL的水中。
密封保存，室温下稳定保存>2年。
备注：一系列包含RS的对照样品%-78%w/w可从Megazyme公司购买。
设备（推荐）1. 离心式粉碎机，带有齿轮转子和1.0mm筛子，或类似的装置。
小型样品可选择旋风磨碎机替代。
2.绞肉机-手动或电动的，装有4.5mm筛。
3.台式离心机-能够放入16×120mm玻璃试管，速度大约1500g(3000rpm)4.振荡水浴器，可设定为每分钟100次直线运动（振荡速度为每分钟200里程），振荡距离35mm,37℃。
5.水浴锅-能够保持在50+0.1℃。
6.涡旋混匀器。
7.磁力搅拌器。
8.磁力搅拌棒-5×15mm。
计10.计时器11.分析天平（精确到毫克）12.分光光度计-能够设定510nm（10mm路径长度）μL移液器及一次性枪头14.连续分配器-配有50mL管嘴，能够移取，和。
15.培养管-螺旋帽，16×125mm16.玻璃试管-16×100mm，14mL容量17.塑料盒，可放置试管架，也可作为冰盒使用。
18.温度计-能够读取37+0.1℃和50+0.1℃。
19.容量瓶-100mL，200mL，500mL，1L，2L样品制备用磨碎机研磨大约50g谷物样品或冻干植物或食品，使样品粉末可过1.0mm筛。
转移所有的材料至广口瓶，颠倒振荡混匀。
工业淀粉一般不用研磨。
用绞肉机粉碎鲜样（如罐装的豆子，香蕉，土豆），过4.5mm筛。
用AOAC法（15），测定干样中的含水量，根据AOAC法，冻干后烘炉干燥测定鲜样中的含水量。
分析方法（a）水解和溶液化非抗性淀粉1.准确称取100mg（±5 mg）样品后直接倒入有螺旋帽的试管里，轻柔的拍打试管以保证样品集中在底部。
注意：对于湿样，样品大概为0.5g(准确称重)，这些材料的含水量通常为60-80%。
2.每个试管中加入 mLα-胰淀粉酶（10 mg/mL）其中含有AMG（3 U/mL）（溶液2）3.盖紧试管盖子，用涡旋振荡器混匀，卧式放入振荡水浴器，与运动方向平行。
如下图所示：4.连续振荡，37℃孵育，精确孵育时间为16小时。
（备注：200里程/min）5.把试管从水浴锅中拿出，用纸巾擦掉多余的水。
拿开盖子，加入乙醇（99% v/v）或者IMS（99% v/v），用涡旋器涡旋。
6.1500g离心，10分钟（不加盖）7.小心倒出上清，加入2mL 50%乙醇或50% IMS重悬浮，用涡旋器涡旋，再加入6mL 50%IMS，混合，1500g离心，10分钟8.小心倒出上清，重复上述重悬浮和离心步骤。
9.小心倒出上清，翻转试管，用纸巾吸除多余的液体。
（b）测定抗性淀粉含量1.将试管冰浴，再向每个试管中加入磁力搅拌棒和2 mL2M的KOH，用磁力搅拌机在冰浴/水浴状态下搅拌20min，以重悬浮絮状物和溶解RS。
如下图所示：备注：（1）不要使用涡旋器混匀，那将会导致淀粉乳化。
（2）确保边加入KOH溶液边剧烈搅拌试管里的样品。
这将会避免形成难溶的淀粉块。
2.向每个试管中加入8 mL1.2M的醋酸钠缓冲液（），并用磁力搅拌机搅拌。
立即加入（溶液1；3300U/mL）,混匀，并放入50℃水浴。
3.孵育30min,期间用涡旋器间歇混匀。
4.对于RS含量>10%的样品，用水洗瓶定量转移试管里的样品至100mL容量瓶，当用洗瓶洗涤试管中的溶液时用外磁铁保持试管中的磁力棒。
用蒸馏水定容至100mL，并混匀。
以单位体积离心溶液，1500g，10min。
5.对于RS含量<10%的样品，直接离心1500g,10min（非稀释）。
对于这些的样品，试管里的最终体积大约为（体积可能会变化，如果分析的是湿样，在计算数值时应注意折扣）6.将稀释的（4.）或非稀释的（5.）上清液以为单位转移至玻璃试管（16×100mm），一式两份，加入试剂（溶液4），50℃孵育20分钟。
7.测量每一个溶液的在510nm下相对于空白试剂的吸光度值。
制备空白试剂准备空白试剂：通过混匀的100mM的醋酸钠缓冲液（）和的GOPOD试剂制备D-葡糖糖标准品（一式四份）通过混合葡萄糖（1mg/mL）和的GOPOD试剂制备D-葡糖糖标准品。
（c）计算非抗性（可溶性的）淀粉1.收集起始孵育[(a)7.]过程中离心获得上清液和两次50%乙醇洗涤[(a)8.和9.]获得的上清液至容量瓶中。
用100mM的醋酸钠缓冲液（）定容至100mL。
混匀。
2.以 mL为单位孵育溶液（一式两份）并加入10μL稀释的AMG溶液(300U/mL), 50℃孵育20分钟,加入 mL GOPOD试剂（溶液4），50℃孵育20分钟。
3.计算在510nm下相对于空白试剂的吸光度值。
4.计算非抗性淀粉的含量。
计算计算样品中抗性淀粉含量，非抗性淀粉含量和总淀粉含量（%，在干重的基础上），计算模板如下：抗性淀粉（g/100g样品）（样品包含>10%RS）=⊿E×F×100/×1/1000×100/W×162/180=⊿E×F/W×90抗性淀粉（g/100g样品）（样品包含<10%RS）=⊿E×F××1/1000×100/W×162/180=⊿E×F/W×非抗性淀粉含量（g/100g样品）=⊿E×F×100/×1/1000×100/W×162/180=⊿E×F/W×90总淀粉含量=抗性淀粉含量+非抗性淀粉含量⊿E=相对于空白试剂的吸光度值F=从吸光度值到微克的转换（在GOPOD反应中100μgD-葡萄糖的吸光度值是确定的，F=100（D-葡萄糖的μg数）除以这100μgD-葡萄糖的GOPOD吸光度值）100/=体积校正（从100mL取）1/1000=从微克到毫克W=分析样本的干重=重量×（100-含水量）/100100/ W=RS在样品重量中百分比因子162/180=从测定获得的游离D-葡萄糖转换到淀粉中存在的脱水-D-葡萄糖的因子=体积校正（从 mL取），对于含有0-10%RS，当孵育溶液时没有被稀释，最终体积为 mL。
