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实验粮食中淀粉含量的测定一、实验目的掌握粮食中淀粉含量测定的原理、试剂、仪器设备及操作要点。
二、实验原理试样经除去脂肪及可溶性糖类后，其中淀粉用淀粉酶水解成二糖，再用盐酸水解成具有还原性的单糖，最后按还原糖测定，并折算成淀粉含量。
三、实验试剂1.淀粉酶溶液：称取α-淀粉酶0.5g，加100mL水溶解，加入数滴甲苯或三氯甲烷，防止长霉。
2.碘溶液：称取3.6g碘化钾溶于20mL水中，加入1.3g碘，溶解后加水稀释至100mL。
3.85%乙醇。
4.6mol/L盐酸：取盐酸50mL加水至100mL。
5.200g/L氢氧化钠溶液。
6.甲基红指示液：称取0.1g甲基红用95%乙醇溶液定容至100mL。
7.乙醚。
8.蒸馏水。
四、仪器设备1、粉碎磨：40目筛。
2、天平：分度值0.01g。
3、锥形瓶：250mL。
4、回流冷凝装置：与250mL锥形瓶匹配。
5、容量瓶：250mL。
6、抽滤装置。
7、恒温水浴锅。
五、操作步骤待测样品，用粉碎磨粉碎至全部通过40目筛，充分混合，保存备用。
试样水分含量的测定：105℃烘干至恒重，计算。
1、称取试样约2~5g（精确至0.01g），置于放有滤纸的漏斗内，先用50mL 乙醚分5次洗涤去除脂肪，再用约100mL乙醇洗涤除去可溶性糖类，将残留物移入250mL烧杯，并用50mL水洗滤纸及漏斗，洗液并入烧杯内。
2、将烧杯置于沸水浴加热15min，使淀粉糊化。
3、将糊化的试样，放置冷却至60℃以下，加20mL α-淀粉酶溶液，在恒温水浴锅中55~60℃保温水解1h，并经常搅拌。
4、取酶解液1滴加1滴碘溶液，应不显蓝色，否则再加热糊化并加适量酶溶液，继续保温，直至加碘不显蓝色为止。
5、将酶解液加热至沸，冷却后移入250mL容量瓶加水定容至刻度，混匀，过滤，弃去初滤液。
6、取50mL滤液，置于250mL锥形瓶中，加5mL盐酸，装上回流冷凝管，在沸水浴中回流1h。
冷却后加2滴甲基红指示液，用氢氧化钠溶液中和至中性，溶液转入100mL容量瓶，洗涤锥形瓶，洗液并入100mL容量瓶中，加水定容至刻度，混匀备用。
饼干抗性淀粉含量的测定[21]采用3,5-二硝基水杨酸法制作葡萄糖标准曲线。
分别精密吸取0、0.2、0.4、0.6、0.8、1mL 葡萄糖标准液(2.0 mg/mL)。
相对应的加入1、0.8、0.6、0.4、0.2、0mL 的蒸馏水，再分别在每支试管中加入2.0mL 的DNS 试剂，混和均匀后再放于沸水浴中加热2 min 进行显色反应，取出后立即冷却至室温，最后各加入蒸馏水9.0mL ，充分摇匀后，静止2min 在分光光度计下用540 nm 波长处测定光吸收值。
以葡萄糖含量(mg/mL)为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线如图1。
DNS 溶液配制DNS 试剂：称取 10g 3,5- 二硝基水杨酸溶于 600m L 水中，逐渐加入氢氧化钠10g ，50℃水浴溶解后，加入 200g 酒石酸钾钠、2g 苯酚和 5g 无水亚硫酸钠，待溶解并澄清后，取出冷却至室温。
水定容至 1000m L ，过滤。
贮存于棕色试剂瓶中，于暗处放置 7 天后使用。
将饼干碾成粉末，先在试管中加入PH=6.0的柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液，再加入过量α-淀粉酶（500 U/g ），放入水浴锅中在37℃的条件下下酶解16 h 。
用4 mol/L 的柠檬酸调节PH 至4.0-4.5 加入过量葡萄糖淀粉酶（5000 U/L ），在60℃的水浴锅中 酶解1 h 。
然后将样品放入离心管，4000 r/min ，离心10 min ，弃上清液，用蒸馏水洗涤沉淀，重复2次。
在沉淀中加入5 mL 的氢氧化钾溶液（2 mol/L ），剧烈振荡30 min ，使抗性淀粉充分溶解。
用1 mol/L 的醋酸溶液调节PH 至4.0-4.5，加入过量葡萄糖淀粉酶，60℃ 酶解1h 。
然后4000 r/min ，离心10 min ，收集上清液至100 mL 容量瓶中，经蒸馏水洗涤沉淀，离心，重复2次，合并上清液，最后定容。
用DNS 法[22]测定其还原糖含量。
淀粉的国标测定方法测定食物中淀粉的方法有酶水解法、酸水解法、可消化淀粉和抗性淀粉的测定方法（酶-直接法）一、酶水解法1.原理样品经除去脂肪及可溶性糖类后,其中淀粉用淀粉酶水解成双糖,再用盐酸将双糖水解成单糖，最后按还原糖测定,并折算成淀粉。
2。
适用范围GB5009。
9-85，适用于所有含淀粉的食物。
3.仪器（1） 回流冷凝器(2） 水浴锅4。
试剂除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。
（1） 乙醚（2） 0.5 ％ 淀粉酶溶液：称取淀粉酶（Sigma 公司， E 。
C3.2。
1.1）0。
5 g ，加100ml 水溶解,加入数滴甲苯或三氯甲烷，防止长霉，贮于冰箱中.（注：配成溶液的淀粉酶破坏很快，最好邻用现配。
）（3） 碘溶液：称取3.6 g 碘化钾溶于20 ml 水中，加入1。
3 g 碘，溶解后加水稀释至100 ml 。
（4） 85 ％乙醇.(5) 其余试剂同《蔗糖测定方法》5.操作方法5。
1 样品处理称取2~5 g 样品，置于放有折叠滤纸的漏斗内，先用50 ml 乙醚分5次洗除脂肪(注：如果脂肪含量少，此步骤可免），再用约100 ml85 ％乙醇洗去可溶性糖类（注:此步骤目的是去除可溶性糖)，将残留物移入250 ml 烧杯内，并用50ml 水洗滤纸及漏斗,洗液并入烧杯内，将烧杯置沸水浴上加热15 min,使淀粉糊化，放冷至60 ℃以下,加20ml 淀粉酶溶液，再55～60 ℃保温1h,并时时搅拌(注：温度过高,淀粉酶的活性破坏）。
然后取1滴此液加1滴碘溶液，应不现兰色,若显兰色，再加热糊化并加20ml 淀粉酶溶液，继续保温，直至加碘不显兰色为止。
加热至沸，冷后移入250ml 容量瓶中,并加水至刻度，混匀，过滤.(注：此时淀粉已水解成双糖,过滤可去除残渣和纤维素）弃去初滤液，取50 ml 滤液,置于250ml 锥形瓶中，加5 ml 6 mol/L 盐酸，装上回流冷凝器，在沸水浴中回流1h ，冷后加2滴甲基红指示剂,用5mol/L 氢氧化钠溶液中和至中性,溶液转入100 ml 容量瓶中，洗涤锥形瓶，洗液并入100ml 容量瓶中，加水至刻度，混匀备用.（淀粉在沸水浴条件下糊化是淀粉水解的第一步反应，然后在淀粉酶的作用下，分解成短链淀粉、糊精、麦芽糖等低聚合的糖，所以在淀粉酶解后需用酸进一步水解得到葡萄糖。
![批量测定水稻抗性淀粉含量的方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s1/m/d59e8beedb38376baf1ffc4ffe4733687f21fc70.png)
专利名称：批量测定水稻抗性淀粉含量的方法专利类型：发明专利
发明人：罗嘉锐,竺正航,郝晴文,杨维丰,姚惠珂申请号：CN202111450144.3
申请日：20211201
公开号：CN114136960A
公开日：
20220304
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种批量测定水稻抗性淀粉含量的方法，利用双酶水解法测定水稻中抗性淀粉含量，即先用胰α‑淀粉酶将非抗性淀粉水解成葡萄糖，再用钢珠和KOH溶解抗性淀粉，然后用淀粉葡糖苷酶(AMG)溶液使抗性淀粉水解成葡萄糖，并利用GOPOD法测定葡萄糖含量，从而根据标准曲线计算出抗性淀粉的含量。
相比于传统AOAC法耗时长、效率较低、费用高等缺点，本发明所提供一种批量测定水稻抗性淀粉含量的方法，具有成本低，重复性好，正确度较高，能实现批量操作等优势。
申请人：华南农业大学
地址：510640 广东省广州市天河区五山
国籍：CN
代理机构：杭州中成专利事务所有限公司
代理人：金祺
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淀粉的国标测定方法The final revision was on November 23, 2020淀粉的国标测定方法测定食物中淀粉的方法有酶水解法、酸水解法、可消化淀粉和抗性淀粉的测定方法（酶-直接法）一、酶水解法1.原理样品经除去脂肪及可溶性糖类后，其中淀粉用淀粉酶水解成双糖，再用盐酸将双糖水解成单糖，最后按还原糖测定，并折算成淀粉。
2.适用范围，适用于所有含淀粉的食物。
3.仪器（1）回流冷凝器（2）水浴锅4.试剂除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。
（1）乙醚（3）碘溶液：称取 g碘化钾溶于20 ml水中，加入 g碘，溶解后加水稀释至100 ml。
（4） 85 %乙醇。
（5）其余试剂同《蔗糖测定方法》5.操作方法样品处理称取2～5 g样品，置于放有折叠滤纸的漏斗内，先用50 ml乙醚分5次洗除脂肪（注：如果脂肪含量少，此步骤可免），再用约100 ml85 %乙醇洗去可溶性糖类（注：此步骤目的是去除可溶性糖），将残留物移入250 ml烧杯内，并用50ml水洗滤纸及漏斗，洗液并入烧杯内，将烧杯置沸水浴上加热15 min，使淀粉糊化，放冷至60 ℃以下，加20ml淀粉酶溶液，再55～60 ℃保温1h，并时时搅拌（注：温度过高，淀粉酶的活性破坏）。
然后取1滴此液加1滴碘溶液，应不现兰色，若显兰色，再加热糊化并加20ml淀粉酶溶液，继续保温，直至加碘不显兰色为止。
加热至沸，冷后移入250ml容量瓶中，并加水至刻度，混匀，过滤。
（注：此时淀粉已水解成双糖，过滤可去除残渣和纤维素）弃去初滤液，取50 ml 滤液，置于250ml锥形瓶中，加5 ml 6 mol/L盐酸，装上回流冷凝器，在沸水浴中回流1h，冷后加2滴甲基红指示剂，用5mol/L氢氧化钠溶液中和至中性，溶液转入100 ml容量瓶中，洗涤锥形瓶，洗液并入100ml容量瓶中，加水至刻度，混匀备用。
（淀粉在沸水浴条件下糊化是淀粉水解的第一步反应，然后在淀粉酶的作用下，分解成短链淀粉、糊精、麦芽糖等低聚合的糖，所以在淀粉酶解后需用酸进一步水解得到葡萄糖。
实验粮食中淀粉含量的测定
实验粮食中淀粉含量的测定
一、实验目的
掌握粮食中淀粉含量测定的原理、试剂、仪器设备及操作要点。
二、实验原理
试样经除去脂肪及可溶性糖类后，其中淀粉用淀粉酶水解成二糖，再用盐酸水解成具有还原性的单糖，最后按还原糖测定，并折算成淀粉含量。
三、实验试剂
1.淀粉酶溶液：称取α-淀粉酶0.5g，加100mL水溶解，加入数滴甲苯或
三氯甲烷，防止长霉。
2.碘溶液：称取
3.6g碘化钾溶于20mL水中，加入1.3g碘，溶解后加水
稀释至100mL。
3.85%乙醇。
4.6mol/L盐酸：取盐酸50mL加水至100mL。
5.200g/L氢氧化钠溶液。
6.甲基红指示液：称取0.1g甲基红用95%乙醇溶液定容至100mL。
7.乙醚。
8.蒸馏水。
四、仪器设备
1、粉碎磨：40目筛。
2、天平：分度值0.01g。
3、锥形瓶：250mL。
稻米及制品中抗性淀粉的测定
抗性淀粉是指由食物中摄入而对消化酶无效的完整淀粉结晶体，抗性淀粉主要来源于稻米，是作为一种天然存在的有机物质，有营养价值但不参与营养转化过程。
随着国内稻米和制品消费的不断增加，抗性淀粉的存在日益受到广大消费者的重视，因此如何准确地测定抗性淀粉是重要的事情。
首先，根据研究所需的实验材料，我们需要准备净稻米或其他制品样品，然后用实验室常规技术对样品进行脱水和研磨，将样品中的抗性淀粉提取出来。
然后将提取出来的抗性淀粉分别加入不同浓度的葡萄糖溶液中通过琼脂糖凝胶电泳法将抗性淀粉分离成不同粒径的抗性淀粉结晶体，以计算抗性淀粉含量。
之后，可以将抗性淀粉以元素计数的方式测定出抗性淀粉的原子质量，并对其计算抗性淀粉的含量，从而得出最终的抗性淀粉测定结果。
抗性淀粉的准确测定对于评估稻米及制品中营养素的品质有重要意义，只有正确测定其中抗性淀粉的含量，才能了解营养物质的水平，为稻米及制品的进一步发展奠定坚实的基础。
几种常见饲料原料中抗性淀粉含量的测定
Resistant starch,简称RS，这一概念由Englyst提出，国内大多数文章译为抗性淀粉，也有的将其译为抗淀粉及抗消化淀粉，1993 年，欧洲抗性淀粉研究协会（EURESTA）将其定义为“健康者小肠中不被吸收的淀粉及其降解产物的总称”。
抗性淀粉一般分为4类：ＲS1型（生理不可消化性截留淀粉）；ＲS2型(抗性淀粉颗粒)；ＲS3型(老化淀粉)；ＲS4型(化学改性淀粉)，杨光和丁霄霖(2002)分别就抗性淀粉的测定方法进行了讨论，但测定结果却不尽一致，本文通过参考 Megazyme公司试剂盒提供的方法，结合国内实际情况，研究出一套准确，方便、快捷测定饲料中抗性淀粉含量的方法，为饲料行业测定抗性淀粉提供一种新的方法。
1 原理
先用胰α-淀粉酶（Pancreatic α-amylase）将非抗性淀粉水解成葡萄糖，再利用抗性淀粉能溶于KOH中的性质，用淀粉葡萄糖苷酶（Amyloglucosidase,AMG）使其水解成葡萄糖，然后测定糖的含量，从而推算出非抗性和抗性淀粉的含量。
2 仪器与试剂
2.1 仪器
GILSON移液枪，DSHZ-300多用途水浴恒温振荡器（江苏太仓王秀实验设备厂），分析天平（0.000 1g），Beckman Synchron CX4/Pro全自动生化分析仪，WH-1微型旋涡混合仪（上海沪西分析仪器厂），离心机（Eppendorf Centrifuge 5810 R）。
2.2 溶液的配制
2.2.1 马来酸缓冲液（0.1M，pH=6.0）将2
3.2g马来酸溶解于1 600ml蒸馏水中，用4M（160g/l）NaOH调pH至6.0，加入0.6g CaCl22H2O和0.4g叠氮钠，蒸馏水定容至2L，室温保存。
2.2.2 醋酸钠缓冲液（1.2M，pH=
3.8）取69.6ml冰醋酸于800ml蒸馏水中，用4M NaOH调PH至3.8，蒸馏水定容至1L，室温保存。
2.2.3 氢氧化钾（2M）称取112.2g KOH溶于900ml去离子水中，用玻璃棒搅动，使之溶解，去离子水定容至1L。
2.2.4 乙醇（50%，V/V）取526ml 95%乙醇于1L容量瓶中，蒸馏水定容，混匀，室温保存。
2.2.5 淀粉葡萄糖苷酶（Amyloglucosidase,AMG）工作液（300U/ml）：取 1.0ml AMG母液（3300U/ml，Megazyme公司试剂盒提供），用马来酸缓冲液稀释到11ml. （注意：此试剂要求现配现用）
2.2.6胰α-淀粉酶（Pancreatic α-amylase）反应液：称取1.0g胰α-淀粉酶(Megazyme 公司试剂盒提供)用适量马来酸缓冲液溶解，转入于100ml容量瓶，加入 1.0mlAMG工作液，振摇5min，摇匀，用马来酸缓冲液定容。
溶液于12 000r/min离心10min，取出上清液，以备后用（注意：此试剂要求现配现用）
3 测定步骤
3.1 称取100mg（±5mg）样品于15ml离心试管（带盖）中，并轻轻敲打试管，使样品掉入试管底部。
3.2 每管内加胰α-淀粉酶（Pancreatic α-amylase）反应液
4.0ml（现配现用）。
3.3 盖紧盖子，旋涡混匀，然后用橡皮筋扎紧（一般为六个试管一扎）。
3.4 将扎好的试管放入37℃的水浴恒温振荡器中（200次/min）水解，16h后取出。
3.5 用纸巾将试管外的水擦干，加入
4.0ml乙醇（95%）旋涡混匀。
3.6 在离心机上于1 500g(大约3 000r/min)离心12min。
3.7 轻轻将试管移出（因为是低速离心，过重摇晃会使沉淀松散）将上清液倒入100ml容量瓶中，向剩下的沉淀中加入2ml乙醇（50%）旋涡混匀，再加入6ml乙醇（50%）旋涡混匀，仍然在1 500g离心12min
3.8 重复步骤3.7一次。
3.9 将上清液倒入原先的100ml容量瓶中，将试管倒置，用滤纸吸干试管内液体（防止非抗性淀粉水解成的糖转入下一步抗性淀粉的水解过程中）注意：只有在沉淀吸附得比较牢固时才能用，当沉淀比较松散时则尽量将上清液倒出后立即扶正试管。
3.10 将上述100ml容量瓶用蒸流水定容，摇匀。
吸取100μl溶液至Beckman Synchron CX4/Pro 全自动生化分析仪样品杯中，测定葡萄糖（GLU），计算出非抗性淀粉含量。
3.11 向试管中加入2.0ml KOH溶液（2M）冰浴振荡20min（注意不能旋涡混匀）
3.12 向每管中加8.0ml醋酸钠缓冲溶液(1.2M，pH3.8)摇匀。
3.13 加入100μl AMG酶液（3 300U/ml），盖紧盖子，反复摇匀，用橡皮筋扎紧，放入50℃水浴恒温振荡器中（200次/min），30min后取出。
3.14 1 500g离心12min，吸取100μl上清液至Beckman Synchron CX4/Pro全自动生化分析仪样品杯中，测定葡萄糖（GLU），计算出抗性淀粉含量。
4 计算公式
非抗性淀粉含量=G×（100/W）×0.9×100%
抗性淀粉含量=G×（10.3/W）×0.9×100%
总淀粉含量=非抗性淀粉含量+抗性淀粉含量
式中：G——水解样中葡萄糖含量(mg/ml)
W——样品干物质重量(mg)
0.9为淀粉与葡萄糖的转换系数
A式中100代表体积100ml；
B式中10.3为一经验值，表示步骤3.14中上清液的总体积为10.3ml。
5 应用实例
根据上述方法，对不同物质中抗性淀粉与非抗性淀粉的含量进行了测定。
由此不难看出：土豆粉和芋头中抗性淀粉的含量非常之高，其次为玉米等，而小米，燕麦等物质中抗性淀粉的含量则比较少。
