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1.显微镜的各部件的名称是什么，各有何作用？操作讲解。
2.显微镜物镜的几个镜头如何辨认？如何调节光线强弱？与哪些部件有关？边说边操作。
3.显微镜油镜的使用原理和注意事项是什么？请用显微镜找到标准片上的微生物，可能是什么菌？图示。
4.用油镜观察完细菌后显微镜应如何处理？5.细菌在染色前为何要固定？热固定有注意哪些问题？请做纯培养涂片固定。
制作细菌涂片，做美蓝染色。
6.为什么革兰氏染色后阳性菌和阴性菌呈现不同颜色？革兰氏染色法的步骤是什么？做革兰氏染色，涂片为什么不能过于浓厚？染色成败的关键一步是什么？请做革兰氏染色。
7.操作一下悬滴法制酵母美蓝染色片。
用显微镜找一下酵母菌细胞。
何以区别酵母菌的死活细胞？8.试述根霉与毛霉、青霉与曲霉的区别。
请在显微镜下找一下霉菌，图示。
请注明曲霉、青霉各部名称。
9.如何用目镜测微尺和镜台测微尺测定微生物的大小？操作。
10.用显微镜直接计数法测定酵母菌数时，应选择哪五个计数中格？若菌体位于格线上，则如何计数？若酵母菌上有芽体时，如何计数？11.比较显微镜直接计数法和平板菌落计数法的优缺点。
12.消毒灭菌的方法很多，其中（1）桌面和手如何消毒？（2）超净工作台如何灭菌？（3）接种环如何灭菌？（4）涂布棒如何灭菌？（5）空培养皿干热灭菌的条件是多少？13.适合用高压蒸汽灭菌的对象有什么？营养琼脂培养基的灭菌使用的温度和时间一般是多少？本实验用高压蒸气灭菌锅的操作注意事项有哪些？进行操作。
14.在实验中适合用干热灭菌箱来进行灭菌的对象是什么？其灭菌所需的温度和时间是多少？干热灭菌箱使用注意事项是什么？（干热灭菌温度不能超过多少？开箱取物温度有何要求？）进行操作。
15.微生物实验室常用的玻璃器皿有哪些？新玻璃器皿如何处理？16.在吸管的包装时，为什么要在其粗头端塞一小段棉花？包扎一支移液管。
17.包扎一组培养皿。
包扎三个试管。
制作一个棉塞。
18.什么叫培养基？制备培养基的一般程序有哪些？19.将配制好的牛肉膏蛋白胨培养基分装于试管和三角瓶，包扎。
复习一、重要专业名词1.SPA：葡萄球菌蛋白A。
是金黄色葡萄球菌细胞壁上的表面蛋白，能够及人类IgG的Fc段结合，而不影响Fab段及相应抗原的特异性结合，常用于协同凝集试验。
2.OT试验：是应用结核菌素,进行皮肤试验来测定机体对结核分支杆菌能否引起迟发型超敏反应的一种实验。
3.异染颗粒：胞质颗粒中有一种主要成分为RNA和多偏磷酸盐的颗粒，嗜碱性强，用亚甲蓝染色时着色较深呈紫色，称为异染颗粒。
4.包涵体：某些受病毒感染的细胞内，用普通光镜可看到及正常细胞结构和着色不同的圆形或椭圆形斑块，称为包涵体。
5.鞭毛：许多细菌，包括所有的弧菌和螺菌，约半数的杆菌和个别球菌，在菌体上附有细长并呈波状弯曲的丝状物，这种丝状物称为鞭毛，是细菌的运动器官。
6.Vi抗原：表面抗原。
是一种不耐热的酸性多糖的聚合体,存在于菌体的最表面,有抗吞噬和保护细菌免受相应O抗体凝集和补体的溶菌作用。
7.二相性真菌：有些真菌可因营养、温度、氧气等环境条件的改变，而两种形态发生互变，称为二相性，这类真菌称为二相性真菌。
8.肥达反应：肥达反应是用已知伤寒菌的H(鞭毛)和O(菌体)以及甲型(A)及乙型(B)副伤寒沙门氏菌的标准液及病人血清做凝集试验，用于伤寒副伤寒的辅助诊断或用于流行病学调查的免疫凝集实验9.回归热：体温急剧上升至39℃或以上，持续数天后又骤然下降至正常水平。
高热期及无热期各持续若干天后规律性交替一次。
见于回归热疏螺旋体感染、霍奇金病等。
10.荚膜：包绕于细菌细胞壁外的一层黏液性物质，主要成分为糖和多肽，是细菌的特殊结构。
11.菌落：由单个细菌分裂繁殖而来的一堆肉眼可见的细菌集团。
12.抗酸杆菌：细菌细胞壁含有大量类脂，一般不容易着色，但经加温或延长染色时间着色后，能抵抗盐酸乙醇的脱色，故称为抗酸杆菌。
13.灭菌：杀灭物体上所有微生物，包括病原体、非病原体，繁殖体和芽胞的方法。
14.内毒素：是革兰阴性菌细胞壁中的脂多糖成分，只有菌体裂解后才释放出来。
一、以下每一道考题下面有A、B、C、D、E五个备选答案。
请从中选择一个最佳答案，并在答题卡上将相应题号的相应字母所属的方框涂黑。
1机体抵抗病原微生物的屏障结构包括A皮肤与黏膜B血脑脊液屏障C胎盘屏障D免疫系统E B和C2有关内毒素的描述哪一项是错误的A均由革兰阴性菌产生B其化学成分为脂多糖C160℃，2～4小时才被破坏D毒害效应具有组织器官选择性E毒性作用较弱3下列描述哪一项是错误的A病原菌致病力的强弱程度称为毒力B毒力主要由侵袭力和毒素所决定C破伤风毒素属于内毒素D侵袭力是指病原菌突破宿主机体的防御功能，并能在体内定居、繁殖和扩散的能力E以上均不是4下列哪种成分不属于外毒素A脂多糖B痉挛毒素C肉毒毒素D表皮剥脱毒素E霍乱肠毒素5下列哪种成分不属于外毒素A金黄色葡萄球菌肠毒素B产毒性大肠杆菌肠毒素C白喉毒素D表皮剥脱毒素E类脂A6内毒素的毒性作用包括A发热反应B白细胞反应C内毒素血症与内毒素休克D以上都是E A和C7慢性志贺菌感染的病程一般在多少以上A2周B1个月C2个月D6周E7周8志贺菌随饮食进入体内，导致人体发病，其潜伏期一般为A1天之内B1～3天C5～7天D7～8天E8天以后9下列关于结核分枝杆菌描述正确的是A类脂质为胞壁中含量最多的成分B产生外毒素C产生内毒素D耐药性低E一般采用革兰染色10我国的卫生标准中，每升饮用水中不得超过多少个大肠杆菌A1个B3个C5个D7个E8个11大肠杆菌指数测定时，37℃培养24小时，能发酵乳糖并具有下列何种特征者为阳性A产酸B产酸产气C产酸不产气D产气不产酸E以上都不产生12下列何种细菌为革兰阴性菌A脑膜炎奈瑟菌B结核分枝杆菌C铜绿假单细胞D枯草芽胞杆菌E白喉棒状杆菌13下列何种细菌为革兰阳性杆菌A大肠杆菌B铜绿假单细胞C产气肠杆菌D结核分枝杆菌E肺炎克雷伯杆菌14下列何种细菌为革兰阴性球菌A乙型溶血性链球菌B肺炎链球菌C铜绿假单细胞D脑膜炎奈瑟菌E肺炎克雷伯菌15下列何种细菌革兰染色阴性A乙型溶血性链球菌B军团菌C肺炎链球菌D金黄色葡萄球菌E结核分枝杆菌16下列何种微生物培养时会产生β溶血环现象A肺炎链球菌B军团菌C乙型溶血性链球菌D肺炎支原体E肺炎衣原体17肠炎型沙门菌感染的潜伏期一般为A6小时以内B6～24小时C24～28小时D48～72小时E72小时18人类感染沙门菌，最常见的是A伤寒和副伤寒B肠炎型C败血症型D慢性携带者E以上都不是19以下细菌感染，可以出现玫瑰疹的是A ETECB EPECC志贺菌D伤寒沙门菌E假结核耶尔森菌20以下关于伤寒沙门菌感染后，人体免疫情况的描述中，错误的是A病愈后，有牢固的免疫力B主要是细胞免疫C血流中的特异性抗体对胞内菌作用很大D胃肠炎的恢复与局部生成的分泌型ＩgA有关E可形成健康携带者21狂犬病毒街毒经过系列传代适应特定宿主后可称之为A固定毒B野毒株或街毒C病毒原型D减毒株E强毒株22近年来随着分子病毒学研究的不断深入，相继研究出了多种用基因工程的方法构建的疫苗，这些疫苗不包括下列哪一种A亚单位疫苗B基因工程疫苗C活载体疫苗D减毒活疫苗E分子疫苗23第二次抗原刺激时，由于下列哪一个原因使得ＩgG量显著增高A自身保护免疫B强化免疫C免疫回忆D免疫持久性E免疫应答24以下哪种说法是错误的A细菌分离培养法包括平板划线法B细菌分离培养法包括倾注平板法C细菌分离培养法包括液体培养基接种法D纯种细菌接种法包括斜面培养基接种法E纯种细菌接种法包括穿刺接种法25细菌诊断中标本采集和运送的原则包括A标本必须新鲜，采集后尽快送检B在送检过程中，对脑膜炎球菌标本要进行保温C在检验容器上要贴好标签D尽可能采集病变明显部位的材料E以上都是26下列哪项属于内毒素的特征A主要由革兰阴性菌产生B为蛋白质C60℃～80℃，30分钟被破坏D毒害效应具有组织器官选择性E毒性作用强27下列哪一项不属于外毒素的特征A来源于革兰阳性菌和部分革兰阴性菌B甲醛液处理不形成类毒素C60℃～80℃，30分钟被破坏D毒作用效应具有组织器官选择性E毒性作用强28恙虫病在国外最早首先描述本病A于1610年B于1710年C于1810年D于1910年E于1920年29恙虫病在国外最早首先描述本病A美国人B加拿大C法国人D日本人E英国30我国首次分离出恙虫病立克次体是A在上海B在北京C在天津D在广州E在重庆31我国首次分离出恙虫病立克次体是A1928年B1938年C1948年D1958年E1968年32纽扣热主要分布在A美洲B亚洲C非洲D欧洲E澳洲33在对微生物进行灭菌时，根据不同的微生物种类采用不同的灭菌方法和时间是很重要的，以下哪种说法错误的是A高压蒸汽灭菌法是一种最有效的灭菌方法B煮沸法5分钟可杀灭细菌的芽胞C在煮沸法灭菌时，水中加1%～2%的碳酸氢钠可提高沸点D在煮沸法灭菌时，水中加入1%～2%的碳酸氢钠可防止金属器皿生锈E间歇灭菌法适合于不耐100℃物质的消毒34加利福尼亚鼠型斑疹伤寒主要分布在A美洲B亚洲C非洲D欧洲E澳洲35传染性单核细胞增多症是由下列哪一种立克次体引起的A查菲埃立克体B杆菌样巴立克体C腺热埃立克体D汉赛巴通体E人粒细胞埃立克体36某实验室在进行肠道菌鉴别诊断时,进行了大量生化鉴定,有关VP试验,哪种说法是错误A主要鉴别大肠杆菌和产气杆菌B VP试验阳性时，产生黄色化合物C大肠杆菌VP试验阴性D产气杆菌VP试验阳性E大肠杆菌和产气杆菌均能分解葡萄糖产生丙酮酸37有关细菌学检验的描述哪一项是错误A原则上所有标本均应作病原分离培养B需3～4周才长菌落C结核杆菌需4～8周才长成菌落D分离培养的阳性率一般比直接涂片镜检的阳性率为低E布鲁司杆菌初次培养时需5%～10%的CO238以下哪种说法是错误的A霍乱红试验阳性为霍乱弧菌所特有反应B尿素试验阳性时呈红色C变形杆菌等尿素酶试验阳性D霍乱弧菌能液化明胶E沙门菌硫化氢试验为阳性39以下哪种说法是错误的A硫化氢试验常用于区别肠道杆菌的种类B志贺菌硫化氢试验阴性C产气杆菌硫化氢试验阴性D大肠杆菌硫化氢试验阳性E沙门菌硫化氢试验阳性40以下哪种说法是错误的A在甲基红试验中，呈现红色为阳性B甲基红试验阳性时，培养物酸碱度在pH45或更低C大肠杆菌的枸橼酸盐利用试验为阳性D产气杆菌VP试验阳性E枸橼酸利用试验阳性反应时呈深蓝色41以下哪种说法是错误的A在甲基红试验中，呈现红色为阳性B甲基红试验阳性时，培养物的酸碱度在pH45或更低C大肠杆菌甲基红试验阴性D产气杆菌VP试验阳性E大肠杆菌和产气杆菌均能分解葡萄糖产生丙酮酸42以下哪种说法是不正确的A微生物数量越大，消毒越困难B一般是温度越高，消毒灭菌效果越好C洗必泰在碱性时杀菌作用减弱D硫代硫酸钠可中和氯或氯化物E以上均是43哪种消毒剂的效果受蛋白质等有机物的影响较小A季铵盐类B乙醇C次氯酸盐D戊二醛E以上均是44某乡镇卫生院大夫，在采集到可疑流脑病人细菌培养用标本后，因缺少培养条件，需送上级医院进行进一步病原培养，所遵循的如下标本采集和运送原则中哪一项是错误的A注意无菌操作。
微生物复习提纲一、常用培养基的制备、消毒1、培养基的分类P902、培养基配制P211（1）计算根据配方计算出实验中各种药品所需要的量，然后再分别称量。
（2）称量准确称取各种成分。
一些不易称量的成分如牛肉膏，可用玻璃棒取出放称量纸（或小烧杯）称量。
（3）溶解向烧杯内加入合适的水量，将牛肉膏、蛋白腺、氯化钠等用水洗下后加热搅拌至全溶后，再加入琼脂进行溶解，最后补足水量。
（4）调pH值用酸度计或精密pH试纸测定其pH值，并用NaOH或HC1标准溶液调至所需pH值，必要时用滤纸或脱脂棉过滤。
一般比要求的pH 高出0.2,因为高压蒸汽灭菌后，pH常降低。
（5）分装根据不同需要，可将配好的培养基分装入配有棉塞的试管或三角瓶内。
注意分装时避免培养基挂在瓶口或管口上引起杂菌污染。
如液体培养基，应装试管高度的1/4左右；固体培养基装试管高度的1/5左右；装入三角瓶的量以三角瓶容量的一半为限。
（6）包扎试管扎成捆。
试管和三角瓶的棉塞外用硫酸纸或牛皮纸包扎，纸上标明培养基的名称、配制日期等。
（7）灭菌培养基用0.1Mpa（121摄氏度）高压蒸汽灭菌15〜20min。
3、消毒（高压蒸汽灭菌锅使用）灭菌方法：1、加水于灭菌器内到规定的水平面。
2、需灭菌的物品（分装在试管、三角烧瓶中的固、液体培养基），棉塞、硅胶泡沫塞等用防潮纸包好（防止锅内水汽把棉塞淋湿），放入灭菌锅内的套筒中。
摆放要疏松，不可太挤，否则阻碍蒸汽流通，影响灭菌效果。
3、将灭菌锅盖旋转，使锅盖向下紧压锅体，切勿漏气。
4、设定灭菌温度和时间:121摄氏度，20分钟；5、打开放气阀，加热，热蒸汽上升，以排除锅内冷空气，当温度到达100摄氏丿芟左右，关闭放气阀。
6、关闭放气阀后，整个灭菌锅成为密闭状态，而蒸汽又不断增多，这时压力和温度都上升，直至压力表指针达到所需压力时，温度达到121摄氏度，灭菌开始计时，通过调节热源，维持此压力到所需时间。
7、灭菌完毕，待压力自然降至0时，打开放气阀，注意不能打开过早，否则突然降压致使培养基冲腾，使棉塞、硅胶泡沫塞沾污，甚至冲出容器以外。
食品微生物检验复习资料回答题一菌落总数的检测方法答：菌落总数的检测方法主要是平板菌落计数法。
1检样，取25g(ml)样品置于225ml无菌生理盐水中制成1：10的样品匀液，固体或半固体样品放入盛有225ml稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1-2min。
2 10倍系列稀释，用1ml无菌吸管吸取1：10样品均液1ml，沿管壁缓慢注入盛有9ml稀释液的无菌试管，振摇试管使其混匀，制成1：100的样品均液。
3选择2-3个适宜稀释度的样品匀液，每个稀释度分别吸取1mL样品匀液于2个无菌平皿内。
同时分别取1mL稀释液加入2个无菌平皿作空白对照每个培养皿加入15-20ml平板计数琼脂（PCA）培养基，混匀4培养，琼脂凝固后，将平板翻转，36℃±1℃，培养48h±2h5菌落计数，可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。
选取菌落数在30cfu～300cfu之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。
6结果报告，称重取样以CFU/g为单位报告，体积取样以CFU/ml为单位报告二大肠菌群的检测方法答大肠菌群的检测老方法是30-3步法，新方法是大肠菌群MPN计数法老方法30-3步法1检样，取25g(ml)样品置于225ml无菌生理盐水中制成1：10的样品匀液，固体或半固体样品放入盛有225ml稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1-2min。
2 10倍系列稀释，用1ml无菌吸管吸取1：10样品均液1ml，沿管壁缓慢注入盛有9ml稀释液的无菌试管，振摇试管使其混匀，制成1：100的样品均液。
3初发酵，选择适宜3个连续稀释度的样品匀液，每个稀释度接种3管乳糖胆盐发酵培养基，双料管，取10ml/管1：10的稀释液，单料管，取1ml/管1：10的稀释液和取1ml/管1：100的稀释液，置于36℃±1℃培养箱，培养24h±2h，观察倒管内是否产气，都未产气者，则报告大肠菌群阴性，如产气，则进行下一步实验4分离培养，将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，置于36℃±1℃培养箱，培养18h-24h，观察菌落形态，并作革兰氏染色和证实试验，5在上述平板上，调取可疑菌落1-2个进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，置36℃±1℃培养箱，培24±2h，观察产气情况，凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性的无芽孢杆菌，即可报告为大肠菌群阳性6根据证实为大肠菌群阳性管数，查MPN检索表，报告每100ml(g)大肠菌群的MPN值。
