细菌检验基本技术
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现代微生物学检验基本技术随着现代医学及相关科学技术的发展,各学科相互交叉和渗透,医学微生物学检验技术已深入到细胞、分子和基因水平,许多新技术、新方法已在临床微生物实验室得到广泛应用。
医学微生物学实验室的基本任务之一是利用微生物学检验技术,准确、快速检验和鉴定临床标本中的微生物,并对引起感染的微生物进行耐药性监测,为临床对感染性疾病诊断、治疗、流行病学调查及研究等提供科学依据。
第一节微生物形态学检查细菌形态学检查是细菌检验的重要方法之一,它是细菌分类和鉴定的基础,可根据其形态、结构和染色反应性等,为进一步鉴定提供参考依据。
一、显微镜检查由于细菌个体微小,肉眼不能看到,必须借助显微镜的放大才能看到。
一般形态和结构可用光学显微镜观察,其内部的超微结构则需用电子显微镜才能看清楚。
常用显微镜有如下几种。
1.普通光学显微镜采用自然光或灯光为光源,其波长约为0.4μm。
显微镜的分辨率为波长的二分之一,即0.2μm,而肉眼可见的最小形象为0.2mm。
故用油(浸)镜放大1 000倍,能将0.2μm的微粒放大成肉眼可见的0.2mm。
普通光学显微镜可用于细菌、放线菌和真菌等的观察。
2.暗视野显微镜常用于观察不染色微生物形态和运动。
在普通显微镜安装暗视野聚光器后,光线不能从中间直接透入,视野呈暗色,当标本接受从聚光器边缘斜射光后可发生散射,因此可在暗视野背景下观察到光亮的微生物如细菌或螺旋体等。
3.相差显微镜相差显微镜利用相差板的光珊作用,改变直射光的光位相和振幅,将光相的差异转换为光强度差。
在相差显微镜下,当光线透过不染色标本时,由于标本不同部位的密度不一致而引起光相的差异,可观察到微生物形态、内部结构和运动方式等。
4.荧光显微镜荧光显微镜与普通光学显微镜基本相同,主要区别在于光源、滤光片和聚光器。
目前大多数使用的是落射光装置,常用高压汞灯作为光源,可发出紫外光或蓝紫光。
滤光片有激发滤光片和吸收滤光片二种。
用蓝光的荧光显微镜除可用一般明视野聚光器外,也可用暗视野聚光器,以加强荧光与背景的对比。
第一章细菌检验基本技术一、名词解释1.培养基2.Gram stain二、选择题【A1型题】1.做细菌培养时,采集标本的最佳时间是A、应用抗菌药物之前采集标本B、应用抗菌药物之后采集标本C、一边应用抗菌药物一边采集标本D、采集标本与是否应用抗菌药物没有关系E、应用抗菌药物一天后采集标本2.采集窦道标本进行细菌学检查,应选择A、坏死组织B、窦道底部取活组织C、窦道口取标本D、窦道流出的液体E、窦道中央的脓液3.盛装细菌学检查标本的容器A、用75%酒精浸泡24小时后直接应用B、用碘酒浸泡12小时后直接应用C、高压灭菌,煮沸或干热灭菌D、用浓H2SO4处理后,直接应用E、用水洗后直接应用4.尿液做厌氧菌培养时A、取消毒中段尿B、无菌注射器从耻骨上缘行膀胱穿刺术抽取C、自然导尿D、放入无菌试管送检E、盛装尿液的容器不必将标本与空气隔绝5.怀疑肠热病患者,应如何采集标本A、发病的第一周采集血液,第二周采集尿液,第三周采集粪便B、发病的第一周采集尿液,第二周采集血液,第三周采集粪便C、发病的第一周采集尿液,第二周采集粪便,第三周采集血液D、发病的第一周采集血液,第二周采集粪便,第三周采集尿液E、发病的第一周采集粪便,第二周采集血液,第三周采集粪便6.标本不需要保温送检的病原体是A、脑膜炎柰瑟菌B、淋病C、流感嗜血杆菌D、阿米巴滋养体E、大肠埃希菌7.采用运输拭子采集标本做细菌培养可延长保存时间,但一般不超过多长时间A、1天B、2天C、3天D、4天E、5天8.细菌不用染色直接镜检主要用于检查A、细菌的动力及运动状况B、细菌的排列.C、细菌的形态D、细菌的夹膜E、细菌的鞭毛9.常用的碱性染料是A、伊红B、刚果红C、结晶紫D、瑞氏染料E、姬姆萨染料10.常用的酸性染料是A、结晶紫B、美蓝C、瑞氏染料D、姬姆萨染料E、伊红11.细菌经革兰染色,结果是A、革兰阳性菌为红色,革兰阴性菌为紫色B、革兰阳性菌为紫色,革兰阴性菌为红色C、革兰阳性菌为紫色,革兰阴性菌为兰色D、革兰阳性菌为兰色,革兰阴性菌为红色E、革兰阳性菌为兰色,革兰阴性菌为紫色12.下列不是抗酸性细菌的是A、金黄色葡萄球菌B、人结核分枝杆菌C、牛结核分枝杆菌D、非结核分枝杆菌E、异染颗粒染色13.敏感性最强的染色方法是A、革兰染色B、抗酸染色C、鞭毛染色D、荧光染色E、异染颗粒染色14.为进一步观察白喉棒状杆菌的形态,应做下列哪种染色A、革兰染色B、抗酸染色C、鞭毛染色D、荧光染色E、异染颗粒染色15.为观察细菌的运动情况,常用下列哪种方法A、悬滴法B、革兰染色法C、抗酸染色法D、鞭毛染色法E、墨汁染色法16.下列不是细菌生长所需营养物质的是A、蛋白质B、肉浸液C、牛肉膏D、琼脂E、血液17.在制备培养基时,为有利于检出病原菌而抑制非病原菌,常加入一定量的抑制剂,下列属于抑制剂的是A、维生素B、氨基酸C、胆盐D、嘌呤E、嘧啶18.血琼脂平板培养基属于A、基础培养基B、营养培养基C、鉴别培养基D、选择培养基E、特殊培养基19.SS琼脂平板培养基属于A、基础培养基B、营养培养基C、鉴别培养基D、选择培养基E、特殊培养基20.克氏双糖铁琼脂(KIA)属于A、基础培养基B、营养培养基C、鉴别培养基D、选择培养基E、特殊培养基21.糖发酵管属于A、基础培养基B、营养培养基C、鉴别培养基D、选择培养基E、特殊培养基22.巧克力琼脂平板属于A、基础培养基B、营养培养基C、鉴别培养基D、选择培养基E、特殊培养基23.疱肉培养基属于A、基础培养基B、营养培养基C、鉴别培养基D、选择培养基E、特殊培养基24.可用碱性琼脂或TCBC琼脂培养基分离的细菌是A、霍乱弧菌B、沙门菌C、志贺菌D、大肠埃希菌E、铜绿假单胞菌25.氧化-发酵试验(O/F试验)主要用于肠杆菌科细菌与非发酵菌的鉴别,其原因是A、肠杆菌科细菌与非发酵菌均为发酵型B、肠杆菌科细菌与非发酵菌均为氧化型C、肠杆菌科细菌为发酵型,非发酵菌为氧化型或产碱型D、肠杆菌科细菌为氧化型,非发酵菌为发酵型E、肠杆菌科细菌与非发酵菌均为产碱型26.七叶苷水解试验主要用于D群链球菌与其他链球菌的鉴别,该试验阳性的细菌是A、肺炎链球菌B、无乳链球菌C、化脓链球菌D、肠球菌E、草绿色链球菌27.硫化氢试验主要用于肠杆菌科细菌属及种的鉴别,不产生硫化氢的细菌是A、沙门菌属B、肠杆菌属C、枸橼酸杆菌属D、变形杆菌属E、亚利桑那菌属28.氧化酶试验阴性的细菌是A、奈瑟菌属B、莫拉菌属C、葡萄球菌属D、铜绿假单胞菌E、弧菌29.过氧化氢酶试验(触酶试验)主要用于革兰阳性球菌的初步分群,下列正确的是A、葡萄球菌阴性,链球菌属阳性B、微球菌阴性,链球菌属阳性C、葡萄球菌与链球菌均阴性D、葡萄球菌阳性,链球菌阴性E、葡萄球菌与链球菌均阴性30.葡萄球菌可产生两种凝固酶,一种是结合凝固酶,另一种是分泌至菌体外的游离凝固酶,下列说法正确的是A、结合凝固酶可用玻片法检出,游离凝固酶可用试管法检出B、结合凝固酶可用试管法检出,游离凝固酶可用玻片法检出C、结合凝固酶和游离凝固酶均可用玻片法检出D、结合凝固酶和游离凝固酶均可用试管法检出E、结合凝固酶和游离凝固酶不能用玻片法和试管法检出31.下列CAMP试验阳性的细菌是A、A群链球菌B、B群链球菌C、C群链球菌D、D群链球菌E、F群链球菌32.下列对杆菌肽敏感的细菌是A、A群链球菌B、B群链球菌C、C群链球菌D、D群链球菌E、F群链球菌33.下列对optochin纸片敏感的细菌是A、A群链球菌B、B群链球菌C、肺炎链球菌D、草绿色链球菌E、肠球菌34.对沙门菌属及志贺菌属进行血清分型时,一般采用的凝集反应试验是A、玻片法凝集试验B、反向间接血凝试验C、胶乳凝集试验D、协同凝集试验E、试管法凝集试验35.用分子生物学方法检测耐β-内酰胺抗生素的TEM型β-内酰胺酶基因(bla-TEM-1)时,常用的方法是A、Southern印迹B、Northern印迹C、斑点杂交D、PCRE、生物芯片技术36.下列可产生内毒素的病原体是A、革兰阳性细菌B、真菌C、抗酸性细菌D、病毒E、革兰阴性细菌37.有关细菌培养基的描述,不正确的是A、按物理状态可分为液体、固体和半固体B、血琼脂平板属于营养培养基C、SS培养基属于鉴别培养基D、疱肉培养基属于厌氧培养基E、蛋白胨水为常用的基础培养基38.细菌检查最快速的检测方法是A、电镜检查B、动物试验C、分离培养D、直接涂片镜检E、血清学试验39.用鲎试验测定的物质是A、类毒素B、肠毒素C、神经毒素D、外毒素E、内毒素40.细菌染色法中,最常用最重要的鉴别染色法是A、革兰染色B、抗酸染色C、鞭毛染色D、荚膜染色E、芽胞染色41.为鉴定肠杆菌科细菌进行IMViC试验,不属于IMViC试验项目的是A、VP试验B、甲基红试验C、硝还试验D、枸橼酸盐利用试验E、吲哚试验42.芽胞、鞭毛、荚膜及异染颗粒等的染色称为A、美兰染色B、革兰氏染色C、抗酸染色D、特殊染色E、复红染色43.革兰染色阴性的细菌颜色是A、蓝色B、紫色C、红色D、黄色E、白色44.适于用麦康凯(MacConKey)琼脂培养基培养的细菌是A、肠道菌B、分离培养鼠疫杆菌C、白喉棒状杆菌D、培养布鲁氏菌E、百日咳杆菌45.常用痰涂片抗酸染色光镜检查进行初步诊断的细菌是A、军团菌B、支原体C、流感嗜血杆菌D、肺炎链球菌E、分枝杆菌46.患者6岁,春节后突然发热、剧烈头痛、喷射状呕吐、颈项强直。
食品题细菌检测方法
食品中细菌的检测方法主要包括以下几种:
1. 培养分离法:这是最经典和最常用的细菌检测方法。
样品经过适当的处理和增菌后,在选择性培养基上进行分离培养,通过观察菌落特征、生化反应等进行鉴定。
2. 免疫学技术法:利用抗原-抗体反应的特异性进行检测,包括酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫荧光技术(IFT)等。
该方法具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点。
3. 分子生物学方法:利用细菌的特异性基因序列进行检测,如聚合酶链式反应(PCR)、基因芯片等。
该方法具有快速、灵敏度高、特异性强的优点,但需要相应的设备和专业人员。
4. 电阻抗法:通过测量培养基中细菌生长时引起的电阻变化来检测细菌数量。
该方法具有快速、简便、自动化等优点,适合大规模生产中的质量控制。
5. 浊度法:通过测量培养液的浊度变化来检测细菌数量。
该方法具有快速、简便、自动化等优点,但受其他因素影响较大,需要校准和控制。
以上是食品中细菌的几种主要检测方法,不同方法各有其优缺点,可以根据具体需要进行选择。
同时,为了提高检测的准确性和可靠性,建议采用多种方法进行检测,并进行交叉验证。
细菌的一般检验方法
细菌是一类微小的生物体,它们存在于自然界的各个角落,有
些对人类健康有益,有些则可能引发疾病。
因此,对细菌进行检验
是非常重要的。
下面将介绍一般的细菌检验方法。
首先,最常见的细菌检验方法之一是培养法。
培养法是通过将
样本置于适当的培养基上,利用培养基中的营养物质和条件,促使
细菌在培养皿中生长和繁殖。
在适当的环境条件下,细菌会形成典
型的菌落,通过观察菌落的形态、大小、颜色等特征,可以初步判
断细菌的种类。
其次,鉴定细菌的生化试验也是一种常用的方法。
生化试验是
通过检测细菌在特定生化反应条件下的代谢产物,来判断细菌的特性。
比如,利用氧化酶试验来判断细菌是否具有氧化酶酶活性,利
用大肠杆菌培养基来区分大肠杆菌等。
除此之外,PCR法也是一种常用的细菌检验方法。
PCR法是一种
快速、高效的分子生物学技术,通过扩增细菌DNA片段,再通过电
泳等手段来检测细菌的存在。
PCR法的优点是操作简便、灵敏度高,可以快速准确地检测出细菌。
最后,抗生素敏感性试验也是细菌检验的重要环节。
抗生素敏感性试验是通过将不同抗生素涂布在培养皿上,观察细菌对不同抗生素的敏感性,从而选择出对患者病情最有利的治疗方案。
总的来说,细菌的一般检验方法包括培养法、生化试验、PCR 法和抗生素敏感性试验。
这些方法各有优势,可以相互补充,提高细菌检验的准确性和可靠性。
在实际操作中,需要根据具体情况选择合适的方法,以确保检验结果的准确性和可靠性。
希望本文介绍的细菌检验方法对您有所帮助。
细菌检验基本技术一、学习目标1.掌握:革兰氏染色的原理、操作与结果判断,细菌接种技术与培养方法,细菌在培养基中的生长现象。
细菌生化反应的原理、方法及应用。
2.熟悉:细菌染色标本检查的基本程序,细菌培养常用培养基与器材,药敏检测的原理与应用。
3.了解:细菌不染色标本的检查方法和用途,免疫学技术、分子生物学技术、药敏检测技术以及自动化检测技术在鉴定微生物方面的运用。
二、主要内容三、习题(一)名词解释1.培养基2.平板划线法3.细菌的生化反应4.药敏试验(二)单项选择题A1型题1.革兰染色所用染液的顺序是A.稀释复红一碘液一酒精一结晶紫B.结晶紫一酒精一碘液一稀释复红C.稀释复红一结晶紫一碘液一酒精D.结晶紫一碘液一酒精一稀释复红E.稀释复红一酒精一结晶紫一碘液2.细菌染色多采用的染料是A.酸性染料B.中性染料C.碱性染料D.复合染料E.单纯染料3.不属于细菌形态学观察的是A.平板分区划线观察单个菌落B.革兰染色观察细菌染色性C.鞭毛染色观察细菌的动力D.光镜观察细菌形态E.暗视野显微镜观察细菌动力4.细菌染色过程中固定的作用主要是A.使其易与染料结合B.使其失去抗原性C.杀死细菌D.利于保存E.破坏细菌结构5. 下列哪些方法动力与检测细菌动力无关A.压滴法B.鞭毛染色C.细菌半固体培养基接种D.细菌革兰染色E.暗视野显微镜观察活菌6.下列培养基与其分类的组合中不正确的是A.蛋白胨水—基础培养基B.克氏双糖铁琼脂—鉴别培养基C.胆盐肉汤管——营养培养基D.SS培养基——选择培养基E.高渗培养基——特殊培养基7.从有正常菌群存在的部位所采取的标本应接种在哪种培养基中分离培养病原体A.基础培养基B.营养培养基C.增菌培养基D.选择鉴别培养基E.特殊培养基8.不能作为培养基指示剂的是A.溴酚蓝B.孔雀绿C.溴甲酚紫D.酚红E.甲基红9.下列培养基中不属于营养培养基的是A.血琼脂培养基B.巧克力琼脂培养基C.吕氏血清培养基D.卵黄双抗培养基E.鸡蛋斜面培养基10.培养基的保存,叙述错误的是A.制备好的培养基应保存于低温环境中B.温度越低,保存时间越长C.不同性质的培养基,保存期限不同 E.保存培养基应避免强光照射D.放在塑料袋中密封,可延长保存时间11.制备培养基所必须的步骤不包括A.调配成分B.成分溶解C.灭菌D.调ph值至中性E.质量检查12.平板划线主要目的是A.利于细菌生长B.利于观察菌落形态C.利于获得足够的单个菌落D.利于大量增殖细菌E.用于标本的细菌计数13.有关接种环的灭菌方法,错误的是A.接种环常用火焰灭菌,也可用消毒B.接种环使用前必须先灭菌C.火焰灭菌后,须待环冷却方可取菌(标本)D.染菌的接种环先于内焰加热、烤干,再移至外焰灭菌E.接种环用完后,应立即搁置于架上,勿随手弃置14.制备普通琼脂培养基,灭菌宜采用A.煮沸法B.巴氏消毒法C.高压蒸气灭菌法D.流通蒸气灭菌法E.间歇灭菌法15.关于穿刺接种法,错误的是A.可以是固体培养基,也可以是半固体培养基B.用接种针或接种环接种C.半固体培养基多用于观察细菌动力D.若细菌在半固体培养基中只沿穿刺线生长,则无动力E.若细菌有动力,穿刺线周围的半固体培养基会变混浊16.不属于细菌菌落特征的是A.湿润B.扁平C.完全溶血D.致密E.透明17.关于吲哚试验,不正确的是A.培养基为蛋白胨水B.培养基中不含葡萄糖C.加入的吲哚试剂为对四甲基对苯二胺D.阳性的细菌含有色氨酸酶E.有红色的玫瑰吲哚形成为阳性18.VP试验阳性呈红色是由于生成的双乙酰与下列物质结合A.巯基B.醛基C.羟基D.胍基E.羧基19.关于尿素酶试验,叙述错误的是A.是一种氨基酸代谢试验B.分解底物是尿素C.阳性时培养基变酸性D.常用尿素培养基E.是肠道杆菌科细菌鉴定时常用试验20.关于氧化酶试验,叙述错误的是A.氧化酶又称为细胞色素氧化酶B.氧化酶试剂常用盐酸四甲基对苯二胺C.氧化酶与氧化酶试剂接触产生颜色反应D.试验时接触含铁物质会出现假阳性E.革兰阴性杆菌均应进行氧化酶试验21.大肠埃希菌的靛基质试验阳性,请问靛基质是细菌分解什么物质产生的A.葡萄糖B.尿素C.色氨酸D.半胱氨酸E.枸橼酸盐22.甲基红试验中培养基的pH需降至多少,指示剂才指示阳性结果A.2.5B.5.OC.4.5D.6.5E.7.423.七叶苷水解试验中,七叶素与下列哪种离子反应使培养基变黑A.Cu2+B.Mn2+C.Ag+D.NH4+E.Fe2+24.细菌代谢过程中,糖类物质在酶的作用下经过一种或多种途径转变为一个共同通用的中间产物,这个产物是A.甲酸B.丙酮酸C.乙酸D.脂肪酸E.尿酸25. 利用细菌生化反应鉴定细菌是根据A.细菌酶活性差异B.细菌毒素活性差异C.细菌酶含量的差异D.细菌分解代谢产物的差异E.细菌毒素种类的差异B1型题(1~5题共用备选答案)A. 选择培养基B. 营养培养基C.特殊培养基D. 鉴别培养基E.基础培养基1.蛋白胨水是()2.克氏双糖铁琼脂是()3. 胆盐肉汤管是()4.高渗培养基是()5.巧克力琼脂培养基是()(6~11题共用备选答案)A.指示剂为甲基红,红色为阳性B. 发酵菌为2管均为黄色C.指示剂为酚红,幽门螺旋杆菌为阳性D.阳性出现玫瑰色(蛋白胨水中)E.二乙酰与培养基内的含胍基的肌酸或肌酐产生红色化合物6. O/F试验生化反应的原理或结果为()7. MR试验生化反应的原理或结果为()8. VP试验生化反应的原理或结果()9.脲酶试验生化反应的原理或结果()10.靛基质试验生化反应的原理或结果()C1型题将某种细菌接种到KIA斜面培养基中,置35℃恒温箱中培养18-24h后,培养基斜面仍为红色,底层黄色。
细菌检测方法细菌是一类微生物,它们存在于自然界的各个角落,有些对人类有益,有些则可能对人体健康造成威胁。
因此,对细菌的检测就显得尤为重要。
本文将介绍几种常见的细菌检测方法,希望能够为相关领域的研究人员和实验人员提供一些参考。
首先,常见的细菌检测方法之一是培养法。
这是一种传统的方法,通过将样品放置在适当的培养基上,利用适当的温度、湿度和气氛条件,使细菌在培养基上繁殖生长,然后观察和鉴定细菌的种类和数量。
培养法的优点是可以对细菌进行鉴定和分离,但缺点是需要较长的时间,且对于一些难以培养的细菌可能无法检测出来。
其次,PCR法也是一种常用的细菌检测方法。
PCR法利用聚合酶链式反应技术,通过扩增细菌DNA片段来检测细菌的存在和种类。
PCR法具有高灵敏度和特异性,能够快速准确地检测出细菌的存在,但需要特定的实验条件和设备,并且对样品的处理和提取要求较高。
另外,免疫学方法也是一种常见的细菌检测方法。
免疫学方法利用抗体与特定细菌抗原的结合来检测细菌的存在和种类。
这种方法具有高度的特异性和灵敏度,可以快速准确地检测出细菌的存在,但需要具备一定的实验技术和专业知识。
最后,质谱法也是一种先进的细菌检测方法。
质谱法利用质谱仪对样品中的细菌进行分析和鉴定,能够快速准确地检测出细菌的种类和数量,具有高度的特异性和灵敏度,但需要较高的设备和技术要求。
综上所述,针对不同的实验目的和要求,可以选择不同的细菌检测方法。
在实际应用中,可以根据实验条件、样品特性和实验目的综合考虑,选择合适的方法进行细菌检测。
希望本文介绍的内容能够对相关领域的研究人员和实验人员提供一些帮助和参考,促进细菌检测技术的发展和进步。
目次范围 (1) 1规范性引用文件 (1) 2术语和定义 (1) 3无菌操作及消毒灭菌技术要求 (2) 4标本处理及制片技术要求 (3) 5染色技术要求 (4) 6显微镜检查技术要求 (4) 7接种技术要求 (5) 8培养技术要求 (7) 9鉴定技术要求 (8) 10分子检测技术要求 (11) 11免疫学检测技术要求 (12) 12质量保证 (12) 13临床微生物检验基本技术标准1 范围本标准规定了医学实验室在临床微生物检验领域的基本技术要求。
本标准适用于开展临床微生物检验的医学实验室。
2 规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。
其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本标准;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本标准。
GB 19489 实验室生物安全通用要求WS/T 442 临床实验室生物安全指南WS/T 639 抗菌药物敏感性试验的技术要求WS/T 497 侵袭性真菌病临床实验室诊断操作指南3 术语和定义下列术语和定义适用于本标准。
3.1消毒 disinfection杀灭或清除物体上活的病原微生物的方法。
3.2灭菌 sterilization杀灭物体上所有微生物(包括细菌芽胞在内的全部病原微生物和非病原微生物)的方法。
3.3无菌 asepsis指不存在活菌。
3.4无菌操作 aseptic operation防止微生物进入人体或无菌物品、无菌区域的操作。
3.5接种 inoculation将目标微生物转移至适于生长繁殖的人工培养基或活的生物体内的方法。
3.6荧光淬灭 fluorescence quenching指由于荧光分子与其他分子发生作用而出现的光度降低、发光时间缩短乃至停止发光的现象。
3.7一套血培养 a set of blood culture从同一个穿刺点采集的血液,通常分别注入一个需氧血培养瓶和一个厌氧血培养瓶进行血培养。