第一篇 微生物检验基本技术

微生物检验(完整版)微生物检验是一种用于检测和鉴定微生物的方法，它在医学、食品安全、环境保护等领域都有着重要的应用价值。

微生物检验可以帮助人们了解微生物的种类、数量、分布以及对人类和环境的影响，从而采取相应的控制和预防措施。

本文将从微生物检验的基本原理、常见方法和应用领域等方面进行介绍。

一、微生物检验的基本原理。

微生物检验的基本原理是通过对样品中的微生物进行分离、培养、鉴定和计数，从而得到微生物的种类和数量。

其主要包括以下几个步骤：1. 取样，首先需要从待检样品中取得适当的样品，如食品、水、空气、土壤等。

取样的方法和条件需根据具体的检验要求和标准来确定。

2. 分离，将样品中的微生物分离出来，通常采用的方法有稀释涂布法、滤膜法、过滤法等。

分离出的微生物可以进行后续的培养和鉴定。

3. 培养，将分离出的微生物进行培养，提供适当的营养物质和环境条件，促使微生物的生长和繁殖。

培养的时间和温度等条件需根据不同的微生物种类来确定。

4. 鉴定，对培养出的微生物进行形态学、生理学和生物化学特性等方面的鉴定，确定其种属和数量。

常用的鉴定方法有显微镜观察、生化试验、分子生物学方法等。

5. 计数，对培养出的微生物进行计数，得到微生物的数量。

常用的计数方法有平板计数法、膜过滤法、涂片计数法等。

二、微生物检验的常见方法。

微生物检验的常见方法主要包括传统方法和现代方法两大类。

1. 传统方法，传统方法主要包括涂布法、滤膜法、过滤法、薄层法等。

这些方法简单易行，成本低廉，适用于一般的微生物检验需求。

但传统方法通常需要较长的培养周期，且对微生物的种类和数量有一定的限制。

2. 现代方法，现代方法主要包括PCR法、蛋白质质谱法、流式细胞术等。

这些方法具有高灵敏度、高特异性和高通量的特点，能够快速准确地检测和鉴定微生物。

但现代方法的设备和技术要求较高，成本较高，适用于对微生物检验有较高要求的领域。

三、微生物检验的应用领域。

微生物检验在医学、食品安全、环境保护等领域都有着重要的应用价值。

微生物检验的基本操作技术一、样品的制备与处理1.样品的选择与采集：根据检验目的和要求，选择适当的样品，并根据采样规范进行取样。

比如，对食品的微生物检验，可以选择不同部位的样品，如表面、内部等；对饮用水的微生物检验，可以选择源头水、管网水等；对环境的微生物检验，可以选择空气、地表水等。

2.样品的保存与运输：为了避免样品中微生物的生长和变化，需要将样品保存在适当的条件下（如低温、暗处等）。

同时，在运输过程中，需要避免样品的污染和损坏。

3.样品的处理：样品处理过程通常包括样品的搅拌、过滤、稀释等。

搅拌可以均匀样品中的微生物分布；过滤可以去除样品中的固体颗粒；稀释可以将样品中微生物的浓度调整到适宜的浓度范围，以便后续的检测操作。

二、微生物的分离与纯化1.微生物培养基的选择：根据待检微生物的特性和对检测结果的要求，选择适当的培养基。

常用的培养基有通用培养基、选择性培养基和特殊培养基。

2.菌落计数：将经过处理的样品按照一定的稀释倍数进行均匀悬浮，并于培养基平板上进行接种。

经过一段时间的培养，可通过菌落的外观、形状、大小、颜色等来初步判断微生物的种类和数量。

3.纯化子菌株：从菌落中选取代表性菌落，通过反复传代培养，最终得到纯种菌株。

三、微生物的鉴定与鉴别1.形态学观察：通过显微镜观察微生物的形态特征，如细胞形状、大小、结构等，可以初步鉴定微生物的类别。

2.生理生化试验：通过微生物的代谢特性进行鉴定。

常用的生理生化试验包括氧需求性试验、酸碱反应试验、温度试验、营养需求试验、代谢产物试验等。

3.分子生物学手段：通过分子生物学技术，如聚合酶链反应（PCR）、DNA序列比对等，对微生物进行进一步的鉴定和鉴别。

例如，利用16SrRNA基因作为分子标志物，可以快速、准确地识别微生物种类。

四、微生物的计数与统计1.液体中微生物的计数：通过在培养基中逐级稀释样品，最后将稀释液接种于平板上，培养一段时间后，根据培养基中菌落的数量进行计数，以反推样品中微生物的浓度。

第一章微生物检验基本知识包括显微镜、染色技术、培养基制备技术、接种、分离纯化和培养技术等。

接种、分离纯化和培养技术一、接种将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的生物体内的过程叫做接种。

１、接种工具和方法接种和分离工具1．接种针2.接种环3.接种钩4.5.玻璃涂棒6.接种圈7.接种锄8.小解剖刀常用的接种方法有以下几种：１）划线接种这是最常用的接种方法。

即在固体培养基表面作来回直线形的移动，就可达到接种的作用。

常用的接种工具有接种环，接种针等。

在斜面接种和平板划线中就常用此法。

２）三点接种在研究霉菌形态时常用此法。

此法即把少量的微生物接种在平板表面上，成等边三角形的三点，让它各自独立形成菌落后，来观察、研究它们的形态。

除三点外，也有一点或多点进行接种的。

３）穿刺接种在保藏厌氧菌种或研究微生物的动力时常采用此法。

做穿刺接种时，用的接种工具是接种针。

用的培养基一般是半固体培养基。

它的做法是：用接种针蘸取少量的菌种，沿半固体培养基中心向管底作直线穿刺，如某细菌具有鞭毛而能运动，则在穿刺线周围能够生长。

４）浇混接种该法是将待接的微生物先放入培养皿中，然后再倒入冷却至45°C左右的固体培养基，迅速轻轻摇匀，这样菌液就达到稀释的目的。

待平板凝固之后，置合适温度下培养，就可长出单个的微生物菌落。

５）涂布接种与浇混接种略有不同，就是先倒好平板，让其凝固，然后再将菌液倒入平板上面，迅速用涂布棒在表面作来回左右的涂布，让菌液均匀分布，就可长出单个的微生物的菌落。

６）液体接种从固体培养基中将菌洗下，倒入液体培养基中，或者从液体培养物中，用移液管将菌液接至液体培养基中，或从液体培养物中将菌液移至固体培养基中，都可称为液体接种。

７）注射接种该法是用注射的方法将待接的微生物转接至活的生物体内，如人或其它动物中，常见的疫苗预防接种，就是用注射接种，接入人体，来预防某些疾病。

８）活体接种活体接种是专门用于培养病毒或其它病原微生物的一种方法，因为病毒必须接种于活的生物体内才能生长繁殖。

微生物检验的基本操作技术一、无菌操作技术1、定义是指在执行实验过程中，防止一切微生物侵入机体和保持无菌物品及无菌区域不被污染的操作技术和管理方法；无菌操作技术是微生物实验的基本技术，是保证微生物实验准确和顺利完成的重要环节。

2、内容无菌操作技术主要包括两方面：1）创造无菌的培养环境。

包括提供密闭的培养容器、培养容器的灭菌、培养基的灭菌等；2）在操作和培养过程中防止一切其它微生物的侵入的措施。

包括紫外线杀菌、甲醛熏蒸、超净台的消毒与检测、操作工具、器皿灭菌、操作方法等。

3、无菌操作原则1）在执行无菌操作时，必须明确物品的无菌区和非无菌区，接种时必须穿工作服、戴工作帽，应在进无菌室前用肥皂洗手，然后用75%酒精棉球将手擦干净；2）在操作前20～30分钟要先启动超净台和紫外灯，进行接种所用的吸管、平皿及培养基等必须经消毒灭菌，打开包装未使用完的器皿，不能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用95%酒精点燃烧灼3次后使用。

严禁用手直接拿无菌物品，如瓶塞等，而必须用消毒的钳、镊子等；3）从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位，使用吸管接种于试管或平皿时，吸管尖不能触及试管或平皿边；4）接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作，接种细菌或样品时，吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒；5）接种环或接种针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝，必须时还要烧到环和针与杆的连接处；6）吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮头吸取，不得直接用口吸。

倾倒平板应在超净台内操作，并且在开启和加盖瓶塞时需反复用酒精灯烧。

二、无菌操作的环境要求1、无菌室（1）无菌室的结构：更衣间、缓冲间、操作间；（2）无菌室的消毒和防污染•每日（使用前）紫外线照射（0.5~1小时）；•每月用新洁尔灭擦拭地面和墙壁一次的方式进行消毒；•每季度用甲醛、乳酸、过氧乙酸熏蒸（2小时），特殊情况下可增加熏蒸频次。

（3）无菌室使用要求①无菌室内应保持清洁，工作后用2%-3%煤酚皂溶液消毒，拭擦工作台面，不得存放与实验无关的物品；②无菌室使用前后应将门关紧，打开紫外线，如采用室内悬吊紫外灯消毒时，需30W紫外灯，距离在1.0m处，照射时间不少于30min，使用紫外灯，应注意不得直接在紫外线下操作，以免引起损伤，灯管每隔两周需用酒精棉球轻轻拭擦，除去上面灰尘和油垢，以减少紫外线穿透的影响；③处理和接种食品标本时，进入无菌室操作，不得随意出入，如需要传递物品，可通过小窗传递。

基础知识包括3章：一、卫生检验综合知识二、医学微生物基本知识三、传染病病原第一章卫生检验综合知识第一节：计量法规一、计量法和法定计量单位（一）计量法《中华人民共和国计量法》第五条：国务院计量行政部门负责建立各种计量基准器具，作为统一全国计量值的最高依据。

第八条：企业、事业单位根据需要，可以建立本单位使用的计量标准器具，其各项最高计量标准器具以有关人民政府计量行政部门主持考核合格后使用。

第二十二条：为社会提供公证数据的产品质量检验机构，必须以省级以上人民政府计量行政部门对其计量检定、测试的能力和可靠性考核合格。

（二）计量法实施细则中华人民共和国计量法实施细则第三十二条为社会提供公证数据的产品质量检验机构，必须经省级以上人民政府计量行政部门计量认证。

第三十三条产品质量检验机构计量认证的内容：1、计量检定、测试设备的性能；2、计量检定、测试设备的工作环境和人员的操作技能；3、保证量值统一、准确的措施及检测数据公正可靠的管理制度。

第三十四条考核合格后，由省级以上人民政府计量行政部门发给计量认证合格证书。

未取得计量认证合格证书的，不得开展产品质量检验工作。

（三）法定计量单位(1)国际单位制的基本单位(见表1);(2)国际单位制的辅助单位(见表2);(3)国际单位制中具有专门名称的导出单位(见表3);(4)国家选定的非国际单位制单位(见表4);(5)由以上单位构成的组合形式的单位;(6)由词头和以上单位所构成的十进倍数和分数单位词头(见表5)。

注:1.周、月、年(年的符号为a)为一般常用时间单位。

2.[]内的字,是在不致混淆的情况下,可以省略的字。

3.()内的字为前者的同义语。

4.角度单位度分秒的符号不处于数字后时,用括弧。

5.升的符号中,小写字母l为备用符号。

6.r为“转”的符号。

7.人民生活和贸易中,质量习惯称为重量。

8.公里为千米的俗称,符号为km。

9.104称为万,108称为亿,1012称万亿,这类数词的使用不受词头名称的影响,但不应与词头混淆。

微生物检验的基本操作技术一、无菌操作技术1、定义是指在执行实验过程中，防止一切微生物侵入机体和保持无菌物品及无菌区域不被污染的操作技术和管理方法；无菌操作技术是微生物实验的基本技术，是保证微生物实验准确和顺利完成的重要环节。

2、内容无菌操作技术主要包括两方面：1）创造无菌的培养环境。

包括提供密闭的培养容器、培养容器的灭菌、培养基的灭菌等；2）在操作和培养过程中防止一切其它微生物的侵入的措施。

包括紫外线杀菌、甲醛熏蒸、超净台的消毒与检测、操作工具、器皿灭菌、操作方法等。

3、无菌操作原则1）在执行无菌操作时，必须明确物品的无菌区和非无菌区，接种时必须穿工作服、戴工作帽，应在进无菌室前用肥皂洗手，然后用75%酒精棉球将手擦干净；2）在操作前20〜30分钟要先启动超净台和紫外灯，进行接种所用的吸管、平皿及培养基等必须经消毒灭菌，打开包装未使用完的器皿，不能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用95%酒精点燃烧灼3次后使用。

严禁用手直接拿无菌物品，如瓶塞等，而必须用消毒的钳、镊子等；3）从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位，使用吸管接种于试管或平皿时，吸管尖不能触及试管或平皿边；4）接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作，接种细菌或样品时，吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒；5）接种环或接种针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝，必须时还要烧到环和针与杆的连接处；6）吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮头吸取，不得直接用口吸。

倾倒平板应在超净台内操作，并且在开启和加盖瓶塞时需反复用酒精灯烧。

二、无菌操作的环境要求1、无菌室（1）无菌室的结构：更衣间、缓冲间、操作间；(2)无菌室的消毒和防污染■每日(使用前)紫外线照射(0.5~1小时)；•每月用新洁尔灭擦拭地面和墙壁一次的方式进行消毒；•每季度用甲醛、乳酸、过氧乙酸熏蒸(2小时)，特殊情况下可增加熏蒸频次。

(3)无菌室使用要求①无菌室内应保持清洁，工作后用2%-3%煤酚皂溶液消毒，拭擦工作台面，不得存放与实验无关的物品；②无菌室使用前后应将门关紧，打开紫外线，如采用室内悬吊紫外灯消毒时，需30W紫外灯，距离在1.0m处，照射时间不少于30min，使用紫外灯，应注意不得直接在紫外线下操作，以免引起损伤，灯管每隔两周需用酒精棉球轻轻拭擦，除去上面灰尘和油垢，以减少紫外线穿透的影响；③处理和接种食品标本时，进入无菌室操作，不得随意出入，如需要传递物品，可通过小窗传递。