【三维设计】2012高考生物一轮复习 第二讲 微生物的培养与应用课件 选修1

5．课题延伸 由于分离分解尿素的细菌的选择培养基上可能生长着以 尿素细菌代谢产物为氮源的其他微生物， 尿素细菌代谢产物为氮源的其他微生物，因此还需借助 生物化学方法对分离细菌作进一步鉴定。 生物化学方法对分离细菌作进一步鉴定。 (1)原理：细菌合成的脲酶将尿素分解成NH3，使培养基碱 原理：细菌合成的脲酶将尿素分解成 原理 性增强， 升高 因此，可通过检测 的变化来判断 升高， 检测pH的变化 性增强，pH升高，因此，可通过检测 的变化来判断 该化学反应是否发生。 该化学反应是否发生。 (2)方法：在以尿素为惟一氮源的培养基中加入酚红指示剂， 方法：在以尿素为惟一氮源的培养基中加入酚红指示剂， 方法 酚红指示剂 培养某种细菌，若指示剂变红， 升高， 培养某种细菌，若指示剂变红，则pH升高，说明该种菌 升高 能分解尿素。 能分解尿素。
方法
平板划线法

稀释涂布平板法
在培养基上形成由单个菌种繁殖而来的子细胞群体 在培养基上形成由单个菌种繁殖而来的子细胞群体 单个菌种 目的 ——菌落 菌落 平板冷凝后倒置培养， 平板冷凝后倒置培养，使培养基表面的水分更好地 倒置培养 培养 挥发，防止皿盖上水珠落入培养基造成污染 挥发，
1．微生物与人类关系密切。虽然有些微生物能使动植物患 微生物与人类关系密切。 病，但多数微生物对人类是有益的。请回答下列问题。 但多数微生物对人类是有益的。请回答下列问题。 (1)培养微生物的培养基配方中一般含有水、碳源、 (1)培养微生物的培养基配方中一般含有水、碳源、氮 培养微生物的培养基配方中一般含有水 源和无机盐。从土壤中分离分解尿素的细菌时，培养基 源和无机盐。从土壤中分离分解尿素的细菌时， 中加的惟一氮源为____________， 中加的惟一氮源为____________，这种培养基称为 ____________ ____________培养基。 ____________培养基。 培养基
(2)三种常用灭菌方法的比较 (2)三种常用灭菌方法的比较 灭菌 适用材料或用具 方法 灼烧 灭菌 接种环、 接种环、接种针 酒精灯火焰的充分 直至烧红 或其他金属工具 玻璃器皿(吸管、 玻璃器皿 吸管、 吸管 干热 培养皿)和金属用 培养皿 和金属用 灭菌 具等 高压蒸 培养基等 汽灭菌 100 kPa,121℃ ℃ min 高压蒸汽灭菌锅内 15 min～30 ～ 160℃～170℃ ℃ ℃ 干热灭菌箱内， 干热灭菌箱内， 1 h～2 h ～ 燃烧层 灭菌条件 灭菌时间
(3)统计的菌落往往比活菌的实际数目低。因为当两个或多 统计的菌落往往比活菌的实际数目低。 统计的菌落往往比活菌的实际数目低 个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。 个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。 (4)为使结果接近真实值，要设置重复组，取其平均值。可 为使结果接近真实值，要设置重复组，取其平均值 平均值。 为使结果接近真实值 将同一稀释度的样品加到三个或三个以上的平板上， 将同一稀释度的样品加到三个或三个以上的平板上，经 涂布、 养计算出菌落平均数。 涂布、培养计算出菌落平均数。
2．(2009·安徽高考)下列是关于“检测土壤中细菌总数” (2009·安徽高考)下列是关于“检测土壤中细菌总数” 安徽高考 实验操作的叙述， 实验操作的叙述，其中错误的是 ( )
A．用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌 用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、 后倒平板 倍的土壤稀释液和无菌水各0.1 mL， B．取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1 mL，分 别涂布于各组平板上 C．将实验组和对照组平板倒置，37℃恒温培养24～48小时 将实验组和对照组平板倒置，37℃恒温培养24～48小时 恒温培养24 D．确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组平 确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组平 300 板进行计数
答案：(1)尿素 答案：(1)尿素 选择
(2)培养皿盖上会凝有水珠， (2)培养皿盖上会凝有水珠，防止 培养皿盖上会凝有水珠
水珠落入培养皿造成污染， 水珠落入培养皿造成污染，还可使培养基表面的水分更好 (3)稀释涂布平板 地蒸发 (3)稀释涂布平板 第一次灼烧接种环是防止接种
环上有其他微生物而污染培养基。 环上有其他微生物而污染培养基。每次划线前灼烧接种环 是为了杀死上次接种时留下的菌种， 是为了杀死上次接种时留下的菌种，使下一次划线时接种 环上的菌种直接来自上次划线的末端， 环上的菌种直接来自上次划线的末端，以便通过多次划线 需要， 后，得到单个的菌落。 (4)需要，避免菌种对环境造成污 得到单个的菌落。 (4)需要 染和感染操作者
1．微生物的营养：碳源、氮源、水、无机盐和生长因子。 微生物的营养：碳源、氮源、 无机盐和生长因子。 2．微生物培养的无菌技术 进行无菌操作主要是为了防止外来杂菌的入侵， 进行无菌操作主要是为了防止外来杂菌的入侵，重点 是消毒和灭菌。 消毒和灭菌。
(1)消毒和灭菌的区别 (1)消毒和灭菌的区别 使用方法 结果 仅杀死物体表面或 较为温和 内部一部分对人体 消毒 的物理或 有害的微生物(不包 药剂消毒法、 有害的微生物 不包 药剂消毒法、紫 化学方法 括芽孢和孢子) 括芽孢和孢子 杀死物体内外所有 杀死物体内外所有 强烈的理 灭菌 化因素 孢和孢子 灭菌 的微生物， 的微生物，包括芽 灭菌、 灭菌、高压蒸汽 外线消毒法等 灼烧灭菌、 灼烧灭菌、干热 氏消毒法、 氏消毒法、化学 常用的方法 煮沸消毒法、 煮沸消毒法、巴
解析：从土壤中分离出分解尿素的细菌， 解析：从土壤中分离出分解尿素的细菌，需用选择性培养 基，惟一的氮源是尿素。接种过程中，最常用的是平板划 惟一的氮源是尿素。接种过程中， 线法和稀释涂布平板法两种方法。 线法和稀释涂布平板法两种方法。第一次灼烧接种环是为 了杀死接种环上的微生物，防止其他微生物污染培养基。 了杀死接种环上的微生物，防止其他微生物污染培养基。 每次划线前都要灼烧接种环的目的是杀死上次接种时留下 的菌种，使下一次划线时接种环上的菌种直接来自上次划 的菌种， 线的末端，以便通过多次划线后，得到单个的菌落。 线的末端，以便通过多次划线后，得到单个的菌落。最后 一步需灼烧接种环的目的是灭菌， 一步需灼烧接种环的目的是灭菌，以免菌种对环境造成污 染和感染操作者。 染和感染操作者。
解析：确定对照组无菌后，选择菌落在30～300的平板进行 解析：确定对照组无菌后，选择菌落在30～300的平板进行 30 计数，D错；A是培养基的灭菌方法，B设置了一系列对照实 计数， 是培养基的灭菌方法， 验，C是细菌的培养方法，均为正确做法。 是细菌的培养方法，均为正确做法。 答案： 答案：D
(2)在制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的倒平板操作时，平板 (2)在制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的倒平板操作时， 在制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的倒平板操作时 冷凝后，为什么要将平板倒置？ 冷凝后，为什么要将平板倒置？ __________________________________________________。 __________________________________________________。 (3)微生物接种的方法很多， (3)微生物接种的方法很多，最常用的是平板划线法和 微生物接种的方法很多 ______________法 在用平板划线法接种时， ______________法。在用平板划线法接种时，为什么在操 作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种杯？_________ 作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种杯？ ___________________________________________________ __________________________________________________。 __________________________________________________。 (4)在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？ (4)在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？ 在划线操作结束时 __________________________________________________。 __________________________________________________。
3．设置对照 可排除实验组中非测试因素对实验结果的影响， 可排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实 验结果的可信度。 验结果的可信度。 4．实验流程 (1)以尿素为惟一氮源的培养基作为实验组，制备牛肉膏蛋 以尿素为惟一氮源的培养基作为实验组， 的培养基作为实验组 白胨培养基作为对照组， 白胨培养基作为对照组，用来判断选择培养基是否具有 选择作用。 选择作用。 (2)以培养基加土壤样品进行培养为实验组，培养基不加土 以培养基加土壤样品进行培养为实验组， 以培养基加土壤样品进行培养为实验组 壤样品进行培养为对照组，判断培养基是否被污染。 样品进行培养为对照组，判断培养基是否被污染。
3.微生物的纯化培养— 3.微生物的纯化培养—平板划线法与稀释涂布平板法 微生物的纯化培养 方法 平板划线法 稀释涂布平板法 (1)接种环的灼烧 接种环的灼烧 第一次划线前： 稀释操作时： ①第一次划线前：接种环上的 (1)稀释操作时：每支试管及其中 稀释操作时 微生物， 微生物，避免污染培养物 的9 mL水、移液管等均需灭菌； 水 移液管等均需灭菌； 每次划线前： 操作时， ②每次划线前：杀死残留菌 操作时，试管口和移液管应在离 火焰1 种，保证每次划线菌种来自上 火焰 cm～2 cm处 ～ 处 (2)涂布平板时 次划线末端 涂布平板时 划线结束后： 涂布器用体积分数为70%酒精 ③划线结束后：杀死残留菌 ①涂布器用体积分数为 酒精 避免污染环境和感染操作 消毒，取出时， 注意 种，避免污染环境和感染操作 消毒，取出时，让多余酒精在烧 杯中滴尽， 事项 者 杯中滴尽，然后将沾有少量酒精 (2)灼烧接种环之后，要冷却后 的涂布器在酒精灯火焰上引燃 灼烧接种环之后， 灼烧接种环之后 再进行操作， 再进行操作，以免温度太高杀 ②不要将过热的涂布器放在盛放 酒精的烧杯中， 酒精的烧杯中，以免引燃其中的 死菌种 (3)划线时最后一区域不要与第 酒精 划线时最后一区域不要与第 酒精灯与培养皿距离要合适， 一区域相连 ③酒精灯与培养皿距离要合适， (4)划线用力要大小适当，防止 移液管管头不要接触任何物体 划线用力要大小适当， 划线用力要大小适当 用力过大将培养基划破