羧肽酶B

重组羧肽酶BCat.No.：RCPB01CAS:9025-24-5EC:3.4.17.2来源：基因工程生产，大肠杆菌表达1.简介羧肽酶B专一水解蛋白质C-末端碱性氨基酸（赖氨酸、精氨酸、组氨酸）；又称为肽酰-L-赖氨酸（L-精氨酸）水解酶；精蛋白酶。

分子量为33.8kD，等电点为6.0，最适pH为7-9，活性受精氨酸、赖氨酸的竞争性抑制，金属离子螯合剂如EDTA等抑制酶活。

2.优势无动物源性：重组生产，无外源性的病毒污染，如猪流感病毒、猪细小病毒等。

纯度高：无糜蛋白酶、羧肽酶A等活性，胰蛋白酶含量小于10ppm，酶切反应无其它副反应。

稳定：冻干粉，易于储存和运输。

3.特性来源重组大肠杆菌纯化HPLC产品性状白色或类白色或者淡黄色冻干粉成分Tris，NaCl和糖类蛋白含量35%-60%电泳鉴定（12.5%SDS-PAGE）单一主条带分子量33.8kD比活≥170 u/mg pro其他酶含量无糜蛋白酶、羧肽酶A等，胰蛋白酶含量小于10ppm酶活定义：25℃，pH7.65，1min催化1μmol 马尿酰-L-精氨酸水解的酶量为一个酶活单位。

4.用途重组胰岛素及其类似物的生产；蛋白质C-末端氨基酸的测定；其它重组多肽类物质的生产；某些特殊化合物的酶促合成。

5.推荐使用方法用无菌水或者25mM Tris-HCl （pH 7.65）溶解羧肽酶B,使酶液浓度为1-10mg/ml；（质量比）酶量：目的蛋白=1：50-1：1000，最适PH为7-9。

6.储存和稳定性重组羧肽酶B冻干粉存于2℃-8℃，24个月稳定；溶解以后存于-20℃，24个月稳定，反复冻融10次酶活保持在90%以上。

羧肽酶的活动的作用全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：羧肽酶是一种在生物体内扮演重要角色的酶类，其主要功能是催化羧基的水解反应。

羧基是一种众多有机分子中的常见官能团，它包含一个碳原子和一个氧原子，其中氧原子与碳原子形成一个双键。

在生物体内，羧基常常与氨基结合形成肽键或脂肪酸酯键等，而羧肽酶的作用就是将这些化学键水解，使得有机分子在代谢或合成过程中得以有效地进行。

羧肽酶具有广泛的分布和多样的种类，它们在细胞内外各个组织和器官中均有所存在，包括胃肠道、肝脏、肾脏、胰腺等。

不同种类的羧肽酶在催化反应的底物特异性、反应速度和抑制剂敏感性等方面存在差异，这使得它们能够适应不同的生物代谢需求和环境条件。

羧肽酶的活动对于生物体的正常功能和生存至关重要。

羧肽酶可以参与蛋白质和多肽的降解过程，将复杂的有机分子分解成更小的碎片，从而为细胞提供能量和原料。

羧肽酶还可以帮助调节细胞内外的物质浓度和平衡，维持生理功能的正常运作。

最重要的是，羧肽酶参与了许多生物活动的调控过程，例如细胞增殖、分化、凋亡等，对于维护机体内部稳态和适应外界环境也具有重要价值。

在一些疾病和病理状态中，羧肽酶的活动异常可能导致疾病的发生和发展。

胃肠道中的羧肽酶在胃溃疡和消化系统疾病中发挥重要作用，其异常活动可能引起胃黏膜受损和溃疡形成。

肝脏中的羧肽酶在代谢过程和药物解毒中具有关键作用，异常活动可能导致肝功能障碍和毒素蓄积。

对羧肽酶活动的监测和调节对于疾病的预防和治疗具有重要意义。

第二篇示例：羧肽酶是一类在生物体内起关键作用的酶，主要负责在蛋白质的合成和降解过程中催化反应。

它们在生物体内具有多种作用，包括对蛋白质的分解、合成和修饰等。

羧肽酶在蛋白质的降解过程中扮演了重要角色。

在生物体内，蛋白质会受到各种外界因素的影响，导致部分蛋白质变性、老化或者失去功能。

这些蛋白质通常会通过蛋白质降解途径被分解成小分子，以便于后续的代谢利用。

在这个过程中，羧肽酶会催化蛋白质的水解反应，将蛋白质分解成氨基酸和小肽。

羧肽酶a和b处理什么氨基酸
羧肽酶是催化水解多肽链含羧基末端氨基酸的酶。

酶活性与锌有关。

羧肽酶A：是水解有芳香族和中性脂肪族氨基酸形成的羧基末端。

比如酪氨酸，苯丙氨酸，丙氨酸等
羧肽酶B：主要水解碱性氨基酸形成的羧基末端。

羧肽酶A可以切割C端除了Lys、Arg、Pro的氨基酸
羧肽酶B可以切割C端的Lys或Arg
但如果倒数第二个氨基酸为Pro两种羧肽酶均不能作用
羧肽酶是一种消化酶。

可专一性地从肽链的C端开始逐个降解，释放出游离氨基酸的一类肽链外切酶。

以酶原形式存在于生物体内。

常用的有A、B、C及Y ，4种羧肽酶。

羧肽酶A能水解蛋白质和多肽底物C端芳香族或中性脂肪族氨基酸残基，释放除脯氨酸、羟脯氨酸、精氨酸和赖氨酸之外的所有C末端氨基酸，更易于水解具有芳香族侧链和大脂肪侧链的羧基端氨基酸。

比如酪
氨酸，苯丙氨酸，丙氨酸等。

羧肽酶A （carboxypeptidase A）,CPA，因其底物的首位字“A”而得名羧肽酶A 。

羧肽酶A的活性部位：精氨酸残基金属Zn 酪氨酸残基
精氨酸残基含有一个胍基，胍基是一种非常好阴离子络合点。

可在非常宽的PH范围内（pKa=13.5）都可以保持其质子化形式，并能与阴离子羧基、磷酸根、硫酸根等参与形成双氢键。

CPB酶，即羧肽酶B，是一种能够从肽链的C端逐个降解并释放游离氨基酸的肽链外切酶。

CPB酶的工作原理是通过特异性地识别肽链的C端氨基酸残基，并催化水解该残基与相邻氨基酸之间的肽键，从而释放出一个游离氨基酸分子。

这个过程会持续进行，直到整个肽链被降解为单个氨基酸或短肽链。

在实际应用中，CPB酶常用于生物化学和分子生物学实验，尤其是在蛋白质分析和修饰研究中。

例如，在抗体电荷异构体的研究中，CPB酶可以用来确定赖氨酸对碱性异构体的贡献。

通过酶切反应，可以观察到由于赖氨酸修饰导致的电荷变化，这有助于研究者了解蛋白质的结构和功能。

总的来说，CPB酶是一种重要的工具酶，它通过特异性地切割肽链的C端氨基酸，帮助科学家研究蛋白质的结构和功能，以及在生物体内的作用机制。

Worthington丨羧肽酶B说明书
羧肽酶(Carboxypeptidases, CPs)是一种专一性地从肽链的C端逐个降解、释放游离氨基酸的一类肽链外切酶。

羧肽酶A、B是一种消化酶。

可专一性地从肽链的C端开始逐个降解，释放出游离氨基酸的一类肽链外切酶。

以酶原形式存在于生物体内。

Worthington 羧肽酶 B基本信息：
来源：猪胰腺
I.UB：3.4.17.2
羧肽酶 B 催化多肽 C 末端碱性氨基酸赖氨酸、精氨酸和鸟氨酸的水解。

分子量为 34,500 道尔顿，最适 pH 值为 7.9，pI 为 6.0。

羧肽酶 B 被精氨酸、赖氨酸和鸟氨酸竞争性抑制。

该酶不受二异丙基氟磷酸盐 (DFP) 的抑制，但受金属螯合剂如 1,10-菲咯啉的抑制。

单位定义：一个单位在25°C、pH 7.65 下每分钟水解 1 微摩尔马尿酰-L-精氨酸。

Worthington 碳酸酐酶的描述说明：
羧肽酶 B
色谱纯化。

100mM 氯化钠溶液。

糜蛋白酶和胰蛋白酶 0.02%。

储存在-20°C。

需要特殊运输：冰袋
活动：≥170单位/mg 蛋白质
羧肽酶 B相关研究：
羧肽酶 Y (COY)
糜蛋白酶，TLCK 处理 (CDTLCK)
梭菌蛋白酶，Endo-Arg-C (CP)
蛋白酶，Stap，Endo-Glu-C (STAP)
胰蛋白酶，SeqENZ (TRSEQII) 和修饰 (TRSEQZ)。

人羧肽酶b的异源表达,纯化及其酶活研究全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：人羧肽酶B（carboxypeptidase B，CPB）是一种重要的胰脾酶家族成员，具有在肽链C端切除氨基酸的功能。

CPB在体内参与多种生理过程，如蛋白质降解、消化和免疫调节等。

由于其重要性，对CPB的研究已经引起了广泛关注。

CPB的异源表达、纯化和酶活研究一直是研究者面临的挑战之一。

本文将重点讨论关于人羧肽酶B的异源表达、纯化及其酶活研究的最新进展。

一、异源表达人羧肽酶B的异源表达可以利用细胞培养技术，如大肠杆菌、酵母菌、昆虫细胞和哺乳动物细胞等。

大肠杆菌是一种常用的表达系统，因为其生长快速、易于操作、表达量高等优点。

通常通过将CPB基因克隆到表达载体中，并转化至大肠杆菌中进行表达。

值得注意的是，CPB的表达量和纯度受到多种因素的影响，如表达宿主的选择、表达条件的优化等。

二、纯化表达获得的融合蛋白需要进行纯化才能得到纯净的CPB。

传统的CPB纯化方法包括亲和层析、离子交换层析、凝胶过滤层析等。

近年来，随着蛋白质工程技术的进步，一些新的纯化方法也被应用于CPB 的纯化，如亲和抓卡技术、蛋白质组学方法等。

这些新方法在提高纯化效率、减少操作步骤和成本等方面具有明显优势。

三、酶活研究人羧肽酶B的酶活研究是对其生物活性和功能的理解的关键。

酶活性通常通过对底物的降解速率进行测定来评估。

对CPB的底物特异性、抑制剂活性等也是酶活研究中的重要内容。

通过对CPB的酶活性进行研究，可以深入了解其在生理和病理条件下的作用机制，并为相关疾病的治疗提供理论基础。

人羧肽酶B的异源表达、纯化及其酶活研究是对其功能和应用进行深入探究的重要方向。

随着技术的不断进步，相信对CPB的研究将会取得更多突破，为相关领域的发展带来新的机遇和挑战。

第二篇示例：人羧肽酶B（CPB）是一种重要的内源性蛋白酶，广泛存在于哺乳动物细胞中，扮演着调控蛋白质的降解、修复和合成等生理功能的关键角色。

重组羧肽酶BCat.No.：RCPB01CAS:9025-24-5EC:3.4.17.2来源：基因工程生产，大肠杆菌表达1.简介羧肽酶B专一水解蛋白质C-末端碱性氨基酸（赖氨酸、精氨酸、组氨酸）；又称为肽酰-L-赖氨酸（L-精氨酸）水解酶；精蛋白酶。

分子量为33.8kD，等电点为6.0，最适pH为7-9，活性受精氨酸、赖氨酸的竞争性抑制，金属离子螯合剂如EDTA等抑制酶活。

2.优势无动物源性：重组生产，无外源性的病毒污染，如猪流感病毒、猪细小病毒等。

纯度高：无糜蛋白酶、羧肽酶A等活性，胰蛋白酶含量小于10ppm，酶切反应无其它副反应。

稳定：冻干粉，易于储存和运输。

3.特性来源重组大肠杆菌纯化HPLC产品性状白色或类白色或者淡黄色冻干粉成分Tris，NaCl和糖类蛋白含量35%-60%电泳鉴定（12.5%SDS-PAGE）单一主条带分子量33.8kD比活≥170 u/mg pro其他酶含量无糜蛋白酶、羧肽酶A等，胰蛋白酶含量小于10ppm酶活定义：25℃，pH7.65，1min催化1μmol 马尿酰-L-精氨酸水解的酶量为一个酶活单位。

4.用途重组胰岛素及其类似物的生产；蛋白质C-末端氨基酸的测定；其它重组多肽类物质的生产；某些特殊化合物的酶促合成。

5.推荐使用方法用无菌水或者25mM Tris-HCl （pH 7.65）溶解羧肽酶B,使酶液浓度为1-10mg/ml；（质量比）酶量：目的蛋白=1：50-1：1000，最适PH为7-9。

6.储存和稳定性重组羧肽酶B冻干粉存于2℃-8℃，24个月稳定；溶解以后存于-20℃，24个月稳定，反复冻融10次酶活保持在90%以上。

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中科院研究生考试试题汇编第一部分氨基酸肽蛋白质一是非题(112题)1 自然界的多肽类物质均由L-构型的氨基酸组成，完全没有例外。

(X )2 某一生物样品，与茚三酮反应呈阳性，用羧肽酶A和B作用后测不出游离氨基酸，用胰凝乳蛋白酶作用后也不失活，因此可肯定它绝非肽类物质。

( X )[羧肽酶A：是水解由芳香族和中性脂肪族氨基酸形成的羧基末端。

比如酪氨酸，苯丙氨酸，丙氨酸等羧肽酶B：主要水解碱性氨基酸形成的羧基末端。

胰凝乳蛋白酶（也叫糜蛋白酶。

）在酪氨酸、色氨酸和苯丙氨酸（都是芳香族氨基酸）的羧基处切断肽键，从而裂解蛋白质。

胰蛋白酶选择地水解蛋白质中所有的由赖氨酸Lys或精氨酸Arg的羧基所构成的肽键。

]3 有四个二硫键的胰脏核糖核酸酶，若用巯基乙醇和尿素使其还原和变性，由于化学键遭到破坏和高级结构松散，已经无法恢复其原有功能。

(X )4 多肽合成中往往以苄氧羰基(C6H5CH2-O-CO-)保护氨基，并可用三氟乙酸轻易的将它去除，羰基可转变成叔丁酯，并用碱皂化去除。

(√)5 细胞核内的组蛋白对阻遏基因的表达起重要作用，所以需要种类繁多的组蛋白与这些基因结合。

(√？？)6胶原蛋白中有重复的疏水性氨基酸序列出现，所以形成大面积的疏水区，相互作用使三股肽链稳定及整齐排列。

（X）7多肽类激素作为信使分子，需便于运转，所以都是小分子。

由于分子小，轻易通过靶细胞膜，可以深入内部，启动生化作用。

（X）8球状蛋白分子含有极性基团是氨基酸残基在起内部，所以能容于水。

片层结构只能存在于纤维状蛋白中，如丝心蛋白，所以不容于水。

（X）9胰岛素的生物合成途径是先分别产生A、B两条肽链，然后通过－S－桥键相连。

（X）10 血红蛋白与肌红蛋白结构相似，均含有一条肽链的铁卟啉结合蛋白，所以功能上都有与氧结合的能力，血红蛋白与氧的亲和力较肌红蛋白更强。

（X ）11 合成的多聚谷氨酸在pH7时，其r -羧基电离为－COO-，由于静电相斥，分子较松散，在pH4时并不电离，容易形成螺旋结构。

人羧肽酶b的异源表达,纯化及其酶活研究
人羧肽酶B（carboxypeptidase B，CPB）是一种重要的酶类蛋白，参与多种生物学过程。

为了研究其结构和功能，科学家进行了人羧肽酶B的异源表达、纯化和酶活研究。

研究人员选择了一种适合的宿主表达系统，将人羧肽酶B的基因导入到该宿主中。

通过优化培养条件和诱导表达，成功地实现了人羧肽酶B的异源表达。

接着，利用各种细胞破碎技术，将表达的蛋白从细胞中释放出来。

为了纯化人羧肽酶B，研究人员采用了一系列的分离和纯化技术。

首先，通过离心和过滤等方法，去除细胞残渣和杂质。

然后，利用色谱技术，如亲和层析和凝胶过滤层析，将人羧肽酶B与其他蛋白分离开来。

最后，通过浓缩和洗脱等步骤，得到高纯度的人羧肽酶B。

为了研究人羧肽酶B的酶活性，研究人员设计了一系列的实验。

首先，他们确定了适宜的反应条件，如温度、pH值和底物浓度等。

然后，通过测定反应体系中底物的消耗量或生成物的产生量，来评估人羧肽酶B的酶活。

同时，他们还研究了不同底物对人羧肽酶B的亲和力和反应速率的影响。

通过上述的异源表达、纯化和酶活研究，科学家们成功地获得了高纯度的人羧肽酶B，并对其酶活性进行了深入研究。

这些研究结果
对于理解人羧肽酶B的生物学功能和应用具有重要意义，为进一步的研究奠定了基础。

通过这些工作，我们对人羧肽酶B的异源表达、纯化和酶活研究有了更深入的认识，为进一步探索其在生物学和医学领域的应用提供了有力支持。