多糖的分离纯化
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植物多糖提取与纯化方法的步骤与技巧植物多糖是一类具有广泛生物活性的天然产物,具有抗肿瘤、抗炎、抗氧化、免疫调节等多种药理作用。
因此,植物多糖的提取与纯化方法备受关注。
本文将介绍植物多糖提取与纯化的步骤与技巧,以帮助读者更好地了解和应用这些方法。
首先,植物多糖的提取需要选择适当的溶剂。
常用的提取溶剂包括水、醇类和酸碱溶液。
水是最常用的提取溶剂,因为植物多糖多为水溶性。
但有些植物多糖在水中溶解度较低,此时可以选择醇类溶剂如乙醇、丙醇等。
酸碱溶液的选择要根据不同的植物多糖来确定,一般来说,酸性条件有利于提取酸性多糖,碱性条件有利于提取碱性多糖。
其次,植物多糖的提取需要注意样品的准备。
样品的选择要根据植物多糖的来源来确定,可以是植物的根、茎、叶、果实等部位。
样品在提取前需要经过粉碎处理,以增加提取效果。
此外,样品的质量也会影响提取效果,因此要选择新鲜、干燥、无霉变的样品。
接下来是植物多糖的提取步骤。
一般而言,提取步骤包括浸提、过滤、浓缩和沉淀等。
浸提是将样品与提取溶剂接触一段时间,使植物多糖溶解到溶剂中。
过滤是将提取液中的固体颗粒去除,以获得澄清的提取液。
浓缩是将澄清的提取液进行浓缩,以减少体积。
沉淀是通过加入沉淀剂使植物多糖从溶液中沉淀出来,然后通过离心等方法将沉淀物收集。
在提取过程中,还需要注意一些技巧。
首先是浸提时间的控制,过短的浸提时间可能导致多糖未能充分溶解,过长的浸提时间可能导致多糖的降解。
因此,需要根据不同的植物多糖来确定合适的浸提时间。
其次是提取溶剂的选择和用量,溶剂的选择要根据植物多糖的特性来确定,用量要适量,既能保证提取效果又能节约溶剂。
此外,还可以采用超声波辅助提取、微波辅助提取等方法来提高提取效率。
提取完成后,还需要对提取液进行纯化。
纯化的目的是去除杂质,提高植物多糖的纯度。
常用的纯化方法包括醇沉、蛋白酶处理、离子交换层析、凝胶过滤层析等。
醇沉是将提取液中的植物多糖用醇类溶剂沉淀出来,然后通过离心等方法将沉淀物收集。
写一种植物多糖的分离纯化实验流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成,希望大家下载以后,能够帮助大家解决实际的问题。
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一、实验目的1. 掌握多糖纯化的基本原理和方法。
2. 学习并运用DEAE-Sephadex A-50柱层析技术对多糖进行纯化。
3. 通过比色法测定纯化前后多糖的浓度,评价纯化效果。
二、实验原理多糖是一类重要的生物大分子,具有广泛的生物活性。
然而,天然多糖往往伴随着一些蛋白质、脂肪和色素等杂质,这些杂质会干扰多糖的结构鉴定和活性分析。
因此,对多糖进行纯化是研究多糖生物活性的关键步骤。
多糖的纯化主要包括以下步骤:1. 提取:采用热水浸提法或超声波辅助提取法等从植物、动物或微生物中提取多糖。
2. 净化:去除提取液中的蛋白质、脂肪和色素等杂质。
3. 纯化:利用DEAE-Sephadex A-50柱层析技术对多糖进行纯化。
4. 测定:通过比色法测定纯化前后多糖的浓度,评价纯化效果。
三、实验材料1. 实验药品:DEAE-Sephadex A-50柱层析材料、氨水、盐酸、无水乙醇、葡萄糖标准品等。
2. 实验仪器:层析柱、紫外可见分光光度计、离心机、移液器、容量瓶等。
四、实验方法1. 提取:称取一定量的多糖样品,加入适量蒸馏水,用超声波辅助提取法提取多糖。
提取液离心分离,取上清液作为待纯化样品。
2. 净化:将待纯化样品加入适量的氨水,调节pH值至7.0,静置一段时间。
离心分离,取上清液作为待纯化样品。
3. 纯化:将DEAE-Sephadex A-50柱层析材料预处理后,装入层析柱。
将待纯化样品上柱,用蒸馏水进行梯度洗脱。
收集洗脱液,利用紫外可见分光光度计检测洗脱液中的多糖含量。
4. 测定:配制葡萄糖标准溶液,绘制标准曲线。
将纯化后的多糖样品按照比色法进行测定,计算纯化前后多糖的浓度。
五、实验结果1. 提取:超声波辅助提取法提取多糖,提取率约为70%。
2. 净化:氨水处理去除蛋白质、脂肪和色素等杂质,纯化率约为90%。
3. 纯化:DEAE-Sephadex A-50柱层析纯化,纯化率约为95%。
4. 测定:纯化前后多糖浓度分别为1.5 mg/mL和0.7 mg/mL,纯化效果良好。
多糖的提取和纯化目前,真菌多糖的提取可从子实体和采用深层培养发酵液的菌丝中分离获得,但以从子实体中提取多糖为主。
首先是将子实体粉碎,加入甲醇或乙醇乙醚1:1混合液,水浴加热搅拌1一3小时除去表面脂肪。
其次是用残渣提取多糖,常用的方法有不同温度下的水提法、稀酸提法、冷热稀碱提法。
水提法采用的较多,适合于提取水溶性多糖。
稀酸提取法适用于提取酸溶性多糖、时间宜短,温度不超过50℃,以防止糖昔键断裂。
稀碱法适合于提取碱溶性糖。
然后除去小分子杂质,常采用透析法,将多糖提取液置于半透膜透析袋中,逆向流水透析1一3天。
第四步是沉淀多糖。
大部分多糖在有机溶剂中的溶解度极小,所以可用有机溶剂来沉淀。
常用4一5倍低级醇、丙酮,一般在pH=7.0左右沉淀多糖,制得粗多糖。
最后是除去蛋白质。
除去多糖中的蛋白质常用的方法是三氯醋酸法。
得到的溶液基本上是没有蛋白质与小分子杂质的多糖混合物或单一多糖。
多糖的纯化是将多糖混合物分离为单一的多糖。
纯化方法很多,主要纯化方法有:(l)分步沉淀法根据不同多糖在不同浓度的低级醇或酮中具有不同溶解度的性质,逐次按比例由小而大加入这些醇或酮分步沉淀。
此法适用于分离各种溶解度相差较大的多糖。
(2)盐析法根据不同多糖在不同浓度盐中具有不同溶解度而分离。
纯度鉴定和分子量测定多糖纯度标准不能用通常化合物纯度标准来衡量,因为我们所说的多糖纯品实质上是一定分子量范围内的均一组成。
因此,测得的分子量一般为平均分子量。
过去常用粘度法、蒸气压渗透计法、沉降法、超速离心法、光散射法等测定高分子化合物分子量的方法测定真菌多糖的分子量,但由于这些方法测定起来比较麻烦,且误差较大,现多数已不采用。
目前实验室常用的方法为凝胶过滤法和高压液相色谱法,对于分子量小于1百万的多糖用高压液相法为最好。
1.2.1发酵、提取取香菇465菌株斜面菌种接人摇瓶培养基中振荡培养,逐级扩大培养至10O0L,25℃下通气培养72h,压滤,得香菇深层培养菌丝体。
多糖分离纯化一、概述多糖是一类高分子化合物,具有复杂的结构和多样的功能,广泛存在于生物体内。
多糖的分离纯化是研究其结构和性质、开发应用的前提和基础。
本文将介绍多糖分离纯化的方法及其优缺点。
二、多糖分离纯化方法1. 溶液沉淀法溶液沉淀法是一种常用的多糖分离纯化方法。
该方法基于不同多糖在不同浓度下溶解度不同的原理,通过控制溶液中某些成分(如盐类)浓度来使目标多糖沉淀。
该方法操作简单,但需要对目标多糖在不同条件下的溶解度有较为准确的了解,并且会受到其他成分影响。
2. 离子交换色谱法离子交换色谱法是一种利用固定在固相上带电基团与目标多糖间相互作用实现分离纯化的方法。
该方法适用于具有明显电荷差异或含有特定官能团(如硫酸基、羧基等)的多糖。
该方法分离效果好,但需要对固相的选择和操作条件进行优化。
3. 凝胶过滤色谱法凝胶过滤色谱法是一种利用多孔凝胶作为分离介质,目标多糖根据其大小在凝胶中进行分离的方法。
该方法适用于具有不同分子量的多糖,且操作简单、分离效果较好。
但由于凝胶孔径大小限制,对于较小或较大的多糖可能无法有效分离。
4. 亲和层析法亲和层析法是一种利用目标多糖与特定配体间相互作用实现分离纯化的方法。
该方法适用于具有特定结构或功能的多糖,如具有特异性结合蛋白质、抗原表位等。
该方法操作简单、分离效果较好,但需要对配体选择和操作条件进行优化。
5. 聚焦电泳法聚焦电泳法是一种利用电场作用将目标多糖在pH梯度中移动并实现分离纯化的方法。
该方法适用于具有不同等电点或带电性质的多糖。
该方法分离效果好、可同时实现高效分离和纯化,但需要对pH梯度的选择和操作条件进行优化。
三、多糖分离纯化方法的优缺点1. 溶液沉淀法优点:操作简单,无需昂贵设备。
缺点:需要对目标多糖在不同条件下的溶解度有较为准确的了解,并且会受到其他成分影响。
2. 离子交换色谱法优点:分离效果好,适用于具有明显电荷差异或含有特定官能团(如硫酸基、羧基等)的多糖。
多糖分离纯化简介多糖又称多聚糖,是由10个以上的单糖通过苷键连接而成的,具有广泛生物活性的天然大分子化合物。
多糖是由多个单糖分子缩合、失水而成,是一类分子结构复杂且庞大的糖类物质。
凡符合高分子化合物概念的碳水化合物及其衍生物均称为多糖。
多糖在自然界分布极广,亦很重要。
其广泛分布于自然界高等植物、藻类、微生物与动物体内。
多糖是细胞中一类非常重要的大分子物质。
糖类是细胞膜上受体分子的重要组成成分,是细胞识别和信息传递等功能的参与者,是一类非特异性广谱免疫调节剂和重要的生命物质材料,广泛参与各项生命活动。
近年来的研究表明,多糖在免疫调节、抗肿瘤、抗病毒、抗氧化和降血糖等方面显示出良好的应用前景,是现代医学和食品功能化学共同关注的焦点。
天然多糖来源广泛且化学成分复杂,粗多糖中通常伴随着一些蛋白质、脂肪和色素等物质,不利于多糖的结构鉴定及后续活性分析,因此需要进行分离纯化:即除杂和组分分离。
多糖类物质结构复杂,由不同分子质量的中性或酸性糖混合组成,具有微观不均一性,其分析和结构解析一直是糖组学和糖生物学研究的重点。
多糖分离纯化的核心是获得低分散性、电荷均一的多糖,以适宜后续结构解析和活性功能的深入分析,故多糖需分离纯化才能得到均一性多糖。
百欧泰经过多年技术积累,建立了完善的多糖提取和纯化平台。
样本经研磨粉碎后、热水提取、醇沉、除蛋白、脱色、脱脂等一系列成熟的工艺后得到粗多糖,粗多糖经离子交换色谱及凝胶色谱分离纯化后可获得对应单一、均一的多糖组分。
此外根据原料中多糖特性,针对性地选择预处理和分离纯化方法(柱层析、膜分离法或者分级沉淀法等),可高效分离纯化各种中性多糖、酸性多糖和黏多糖以及糖复合物等。
多糖分离纯化服务多种方法1 柱色谱法纤维素柱层析法:实现分级解离;但流量小、耗时长阴离子交换柱层析法:可用于中性和酸性多糖的分离,以及不同中性多糖的分离凝胶柱层析法:实现连续进样、在线监测、重复性好,样品收集和纯化效率高2 分级沉淀法操作原理:不同的多糖组分在低醇或酮中有不同的溶解度3 盐析法操作原理:不同分子量的多糖组分在一定浓度的盐溶液中其溶解度不同4 超声波辅助提取法利用超声波的机械效应和空化作用破坏细胞壁、细胞膜等生物组织。
多糖的提取和纯化Company Document number:WUUT-WUUY-WBBGB-BWYTT-1982GT多糖的提取和纯化→粉碎→脱脂→粗提(2-3次)→吸滤或离心→沉淀→洗涤→干燥首先除去表面脂肪。
原料经粉碎后加入甲醇、乙醚、乙醇、丙酮或1:1的乙醇乙醚混合液,水浴加热搅拌或回流1-3小时,脱脂后过滤得到的残渣一般用水作溶剂(也有用氢氧化钾碱性水液、氯化钠水液、1%醋酸和1%苯酚或-1M氢氧化钠作为提取溶剂)提取多糖。
温度控制在90-100℃,搅拌4-6小时,反复提取2-3次。
得到的多糖提取液大多较粘稠,可进行吸滤。
也可用离心法将不溶性杂质除去,将滤液或上清液混合(得到的多糖若为碱性则需要中和)。
然后浓缩,再加入2-5倍低级醇(甲醇或乙醇)沉淀多糖;也可加入费林氏溶液或硫酸铵或溴化十六烷基三甲基铵等,与多糖物质结合生成不溶性络合物或盐类沉淀。
然后依次用乙醇、丙酮和乙醚洗涤。
将洗干后疏松的多糖迅速转入装有五氧化二磷和氢氧化钠的真空干燥器中减压干燥(若沉淀的多糖为胶状或具粘着性时,可直接冷冻干燥)。
干燥后可得粉末状的粗多糖。
微波辅助提取法:其原理为利用不同极性的介质对微波能的不同吸收程度,使基体物质中的某些区域和萃取体系中的某些组分被选择性加热,从而使萃取物质从基体或体系中分离出来,进入到介电常数小,微波吸收能力较差的萃取剂中[14]。
由于微波能极大加速细胞壁的破裂,因而应用于中草药中有效成分的提取能极大加快提取速度,增加提取产率。
而且由于其选择性好,提取后基体能保持良好的性状,提取液也较一般的提取方法澄清[15]。
聂金源等在柴胡多糖和黄酮化合物的提取[18]中对微波辅助提取法、超声辅助法和索氏提取法进行比较,发现微波辅助提取法所需时间最短(10min),多糖的提取率最高(%)。
超声辅助法:其原理是利用超声波的空化作用加速植物有效成分的浸出提取,另外超声波的次级效应,如机械振动、乳化、扩散、击碎、化学效应等也能加速欲提取成分的扩散释放并充分与溶剂混合,利于提取[16]。
多糖的分离纯化及其纯度鉴别与分子量测定以多糖的分离纯化及其纯度鉴别与分子量测定为题,本文将介绍多糖的分离纯化方法、纯度鉴别和分子量测定的原理和技术。
一、多糖的分离纯化方法多糖是一类由多个糖基组成的生物大分子,其结构复杂多样。
为了研究多糖的性质和功能,需要将多糖与其他杂质分离开来并纯化。
常用的多糖分离纯化方法包括离心沉淀、凝胶层析、离子交换层析、亲和层析等。
离心沉淀是一种简单有效的多糖分离纯化方法。
通过调节离心速度和时间,可以使多糖与其他杂质沉淀分离,然后将上清液取出,即可得到相对纯净的多糖溶液。
凝胶层析是一种常用的多糖分离纯化方法。
凝胶层析根据多糖分子的大小和形状,利用凝胶的孔隙大小选择性地分离多糖。
常用的凝胶材料有琼脂糖、聚丙烯酰胺凝胶等。
离子交换层析是一种利用多糖与离子交换树脂之间的电荷相互作用进行分离的方法。
树脂表面带有正负电荷,多糖分子根据其电荷性质与树脂发生吸附和解吸作用,从而实现分离纯化。
亲和层析是一种利用多糖与特定的亲和配体之间的特异性结合进行分离的方法。
常见的亲和配体有金属离子、抗体、受体等。
通过与亲和配体结合,多糖可以被选择性地吸附在亲和树脂上,其他杂质则被洗脱,从而实现纯化。
二、多糖的纯度鉴别多糖的纯度鉴别是判断多糖溶液中是否存在杂质的过程。
常用的纯度鉴别方法包括聚丙烯酰胺凝胶电泳、紫外-可见光谱、红外光谱等。
聚丙烯酰胺凝胶电泳是一种常用的多糖纯度鉴别方法。
通过在凝胶中施加电场,多糖分子根据其大小和电荷性质在凝胶中迁移,从而实现分离和鉴定。
紫外-可见光谱是一种常用的多糖纯度鉴别方法。
多糖溶液在紫外-可见光谱范围内有特征性的吸收峰,通过测量多糖溶液在不同波长下的吸光度,可以判断多糖溶液中是否存在杂质。
红外光谱是一种常用的多糖纯度鉴别方法。
不同多糖具有特征性的红外吸收峰,通过测量多糖溶液的红外光谱,可以判断多糖溶液中是否存在杂质。
三、多糖的分子量测定多糖的分子量是衡量多糖结构大小的重要指标。
多糖分离纯化1. 概述多糖是由许多重复单元组成的生物大分子,具有广泛的生物功能和应用价值。
多糖的分离纯化是从混合物中分离出目标多糖并提高纯度的过程。
本文将介绍多糖分离纯化的常用方法和技术,以及其在食品、药品和生物工程等领域的应用。
2. 多糖的分离方法多糖的分离方法主要包括溶剂沉淀、离子交换、凝胶过滤、超滤、逆流层析、电泳和气相色谱等。
下面将分别介绍这些方法的原理和应用情况。
2.1 溶剂沉淀溶剂沉淀是利用溶剂的物理性质,如极性和温度等,使多糖在溶液中发生相分离的方法。
通常采用醇类溶剂,如乙醇或异丙醇。
溶剂沉淀适用于多糖与其他溶质的溶解度差异较大的情况,但纯度较低。
2.2 离子交换离子交换是利用离子交换树脂上的功能基团与多糖分子间发生离子交换反应的方法。
树脂的功能基团可以选择性吸附或释放多糖分子。
离子交换适用于多糖的分子量差异较大的情况,例如海藻酸和壳聚糖的分离。
2.3 凝胶过滤凝胶过滤是利用凝胶的孔隙结构将分子按大小分离的方法。
多糖分子较大,可以被凝胶孔隙排除,而小分子可以通过凝胶透过。
凝胶过滤常用于多糖与其他小分子的分离,如蛋白质和核酸。
2.4 超滤超滤是利用超滤膜的孔隙结构将溶液分离的方法。
超滤膜的孔径可以根据需要选择,通常是分子量截留范围在1 kDa至100 kDa之间。
超滤适用于多糖与其他大分子的分离,如蛋白质和核酸。
2.5 逆流层析逆流层析是利用多糖与填料间的亲和作用进行分离的方法。
填料可以是具有特定亲和性的配体,如亲和树脂。
逆流层析适用于分子间相互作用较强的多糖分离。
2.6 电泳电泳是利用电场作用将分子按电荷和大小进行分离的方法。
多糖可根据电荷差异选择合适的电泳方法,如聚丙烯酰胺凝胶电泳和毛细管电泳。
电泳在多糖的分子量分析和负载量测定中广泛应用。
2.7 气相色谱气相色谱是利用样品在气相载体中的分配和迁移以实现分离的方法。
多糖需要经过甲硅烷衍生化处理后才可以进行气相色谱分析。
气相色谱适用于多糖的含量测定和结构分析。
多糖的提取分离纯化及分析鉴定方法研究多糖是由多个单糖分子通过糖苷键连接而成的高分子化合物。
多糖具有广泛的应用价值,包括食品、医药、化妆品和生物材料等领域。
因此,对多糖的提取、分离纯化以及分析鉴定方法的研究具有重要意义。
一、多糖的提取方法1.物理法物理法主要包括热水提取法、酸碱提取法和微波提取法等。
热水提取法是最常用的提取方法之一,通过加热使细胞壁破烂,有利于多糖的溶出。
酸碱提取法则是利用酸碱反应将多糖从细胞壁中释放出来。
微波提取法则是利用微波辐射对样品进行加热,加速多糖的溶解和释放。
2.化学法化学法主要包括酶解法、酶解分离法和酸碱水解法等。
酶解法是利用特定的酶对样品进行处理,将多糖分解为单糖,然后进行分离和纯化。
酸碱水解法则是通过酸碱反应将多糖水解为低聚糖和单糖。
3.生物法生物法是利用微生物或植物产生的酶对多糖进行酶解和分离。
生物法具有选择性强、工艺简单等优点,在多糖提取中得到了广泛的应用。
二、多糖的分离纯化方法多糖的分离纯化方法主要包括离子交换色谱法、凝胶渗透色谱法和亲和色谱法等。
1.离子交换色谱法离子交换色谱法是利用离子交换树脂对多糖进行分离的方法。
通过控制溶液pH值和离子强度等条件,使不同电荷的多糖在树脂上发生吸附反应,实现多糖的分离纯化。
2.凝胶渗透色谱法凝胶渗透色谱法是根据多糖分子量的大小来进行分离的方法。
多糖分子量越大,越容易在凝胶渗透色谱柱的孔隙中滞留,分离得到纯度较高的多糖。
3.亲和色谱法亲和色谱法是利用多糖与一些特定配体之间的相互作用进行分离的方法。
例如,可以利用亲和色谱柱上的特定配体与多糖的特定结构之间的结合作用,实现多糖的分离和纯化。
三、多糖的分析鉴定方法多糖的分析鉴定方法主要包括红外光谱法、紫外光谱法、核磁共振波谱法、高效液相色谱法和气相色谱法等。
1.红外光谱法红外光谱法能够通过检测样品吸收、散射或透射特定波长的红外光来分析多糖的结构和功能。
2.紫外光谱法紫外光谱法是利用多糖分子在紫外可见光区域的吸收特性进行分析。
1.2.2 离子交换层析鹿茸多糖初级分离纯化采用DEAE-52 离子交换柱。
称取鹿茸多糖80mg,溶于10mL 蒸馏水中,4000r /min 离心10min,取上清液样,依次用蒸馏水,0.3、0.5、0.7、1mol /L NaCl 溶液梯度洗脱,流速控制为0.5mL /min,分管收集,每管5mL,苯酚硫酸法跟踪检测多糖含量,绘制洗脱曲线,合并同一吸收峰的洗脱液,蒸馏水透析24h,减压浓缩,冷冻干燥,即得DEAE-52 纯化多糖。
1.2.3 凝胶排阻层析鹿茸多糖进一步分离纯化采用Sepharose CL-6B 凝胶排阻层析柱。
将经DEAE-52 分离后的多糖溶于蒸馏水,浓度为10mg /mL,以2mL /次上样,蒸馏水洗脱,流速控制为30mL /h,每管5mL,苯酚硫酸法跟踪检测,绘制洗脱曲线,收集、合并相同洗脱组分,透析,冷冻干燥即得SepharoseCL-6B纯化多糖。
1.2.4 鹿茸多糖紫外扫描将Sepharose CL-6B 纯化后精制多糖配
成一定浓度溶液,190~400nm 下进行紫外光谱扫描,以蒸馏水作空白。
2.2.4粗多糖的分离纯化
2.2.4.1粗多糖的离子柱层析
取水提粗多糖样品和碱提水溶性多糖样品溶于蒸馏水中,配制成20mg/mL的溶液,4000印m离心10min,取上清液用DEAE一SepharoseFastFlow离子柱层析(2.6-40cm)进行初步分离,上样量为25mL"首先以蒸馏水洗脱,再用0.1,0.2,0.4,0.6,2mol几的NaCI进行梯度洗脱,自动部分收集仪分步收集流分,洗脱液每10mL收集一管,苯酚硫酸法检测,根据糖显色反应结果合并相同流分"
2.2.4.2多糖的凝胶柱层析
采用AK认explorer层析系统,Sephaeryl S100一1000凝胶柱层析对样品进行纯化"洗脱条件:凝胶柱Sephacryl S100-1000(2.6X100cm);洗脱液:蒸馏水;流速:1mL/min;样品浓度:10m留mL,上样体积5mL;洗脱液以5mL/管收集,示差折光检测器和苯酚硫酸法检测,以吸光度对洗脱体积作图。