实验六 种子生活力的快速测定

种子生活力快速测定实验人员：候勇 2012年度国培班果蔬花卉专业试验目的：种子生活力是指种子的发芽潜力，即发芽力，是判断种子质量的重要指标；要了解种子生活力的大小，最可靠的方法是测定种子的发芽率。

种子的发芽率是指在适宜条件下种子发芽的百分数，它是鉴定种子质量的主要依据，在确定播种量以及种子生理研究中具有重要意义。

本实验的目的就是快速测定种子生活力的方法。

实验仪器及材料：1、仪器：电热恒温培养箱、培养皿、烧杯、镊子、单面刀2、试剂：3%TTC溶液、0.1%BTB溶液、1%BTB琼脂凝胶、红墨水5%3、材料：玉米、小麦吸胀种子方法一：红墨水染色法实验原理：红墨水染色法是根据活种子细胞的原生质膜具有选择性吸收物质的透性，而死种子的胚细胞原生质膜则丧失此性质，于是染料进入死细胞而染色。

操作步骤：1、浸种：取不同种子一部分用沸水煮5-10min，作为死种子；一部分用凉水浸泡一昼夜，吸涨备用。

2、染色：取已吸涨种子100粒，玉米种子可在中间阔面将胚纵切为两半将其中一半放入培养皿中，用5%红墨水染色。

3、结果观察：经过5-8min，倒出红墨水，多次用清水清洗后观察胚的颜色，凡是胚部不着色的为生活良好的种子，有略带红色的说明生活力较弱，都染红的说明无生活力。

结果：活种子%=胚不着色的种子数/供试种子*100 50%=5/10*100方法二：BTB变色法实验原理：活种子进行呼吸作用呼吸空气中的O2，放出CO2。

CO2溶于水成为H2CO3，H2CO3解离为H+和HCO3-，使得种子周围环境的酸度增加。

BTB法通过测定酸度的变化来判断种子活性。

BTB 变色范围为PH6.0—7.6,酸性呈黄色，碱性呈蓝色，中间经过绿色（变色点为PH7.1）。

色泽差异显著，易于观察。

操作步骤：1%BTB染色将吸胀的小麦种子分别整齐地埋于1%BTB琼脂凝胶两个培养皿中，胚向下，间距约1cm。

培养皿置于30C培养箱中培养0.5h，在光亮处下观察，种子附近呈现深黄色晕圈的是活种子，用沸水中杀死的种子分别进行对照。

实验六种子活力测定一、原理由于指示活力特性和指标是多种多样，而且因不同作物或种子生理发芽特性不同，幼苗生长表现各异，因此活力测定的方法也是种类很多。

大致可将这些方法分为直接法和简接法两大类：所谓直接法，是利用实验室可控制的条件，模拟田间不良的因素，观察种子田间出苗能力或幼苗生长的整齐健壮的程度。

如玉米低温试验、棉花低温发芽，及大小麦砖砂试验（低温及机械抑制力）等。

间接法是在实验室中测定与田间出苗力相关的种子特性、生理生化特性指标，如酶的活性、呼吸强度、种子浸泡液的电导率等。

如何正确选用活力测定方式是很重要的，通常应该考虑以下几点：首先是所采用的方法，其测定结果能否真正反映一批种子的活力水平；其次是所用方法要简单易行，节用费用；第三是测定方法最好能快速及时；最后是测定结果要有重演性，即不同地区、不同实验室所测结果比较一致。

二、目的要求1、了解种子活力测定原理和生产意义。

2、掌握重要种子活力测定方法和评定标准。

三、材料和器具1、材料准备不同活力的大麦、小麦、玉米、大豆和豌豆等种子样品。

2、器具培养箱、老化箱、老化盒、电导仪、天平、玻璃培养皿、发芽纸或滤纸、烧杯、镊子、尺子等。

四、方法和步骤（一）幼苗生长测定本法适用于具有直立胚芽和胚根的禾谷类和蔬菜类作物种子。

其测定方法是取试样4份，各25粒种子。

取发芽纸3张（30cm×45cm），取其中1张画线，先在纸长轴中心画一条横线，距顶端15cm。

并在其上、下每隔1cm画平行线。

在中心线上平均间隔画25点，在每点上放1粒种子，胚根端朝向纸卷底部，再盖二层湿润发芽纸，纸的基部向上折叠2cm，将纸松卷成4cm直径的筒状，用橡皮筋扎好，将纸卷竖放容器内，上用塑料袋覆盖。

置于黑暗恒温箱内培养7d，温度为正常发芽所规定温度，然后统计苗长：计算每对平行线之间的胚芽或胚根尖端的数目，按下列公式求出幼苗平均长度：式中：L 胚芽平均长度（cm）；n 每对平行线之间的胚芽尖端数；x 中点至中线之间的距离（cm）。

种子生活力快速测定一、实验原理通过本实验，掌握种子生活力快速测定的原理和方法。

二、实验原理（1）活细胞染色：脱氢辅酶（NADH或NAFPH)存在于活的细胞内，当TTC渗透进入细胞内作为受体被脱氢辅酶上的氢还原，便由无色的TTC变为红色的三苯基甲（TTE)。

当细胞死亡后，NADH会迅速被降解，不会发生相应的颜色反应，故TTC染色法可显示细胞是否存活。

（2）死细胞染色：有生命力的细胞膜是一个半透性膜，因此对内渗透的物质有选择性；而无生命力的细胞，其细胞膜已经消失，因此有的有色物质（如品红）不能进入活的细胞内，但可以进入已经死亡的细胞，从而使细胞内出现该有色成分特有的颜色，故可以据此鉴别细胞是否死亡。

三、实验材料、药品和器具1、实验材料：花生、黄豆2、实验药品和器具：品红、TTC、培养皿、吸水纸、镊子、解剖针、刀片等四、试验方法1、分别取10颗红豆和黄豆的种子，沿种子的培从中切成两半，将带胚的部分放入培养皿中，加入TTC培养1h左右，观察胚染色的情况。

胚被染色的为有活力种子，未被染色的为无活力的种子。

2、别取10颗红豆和黄豆的种子，沿种子的培从中切成两半，将带胚的部分放入培养皿中，加入品红培养10-20min，倒掉品红溶液，冲洗数次，观察胚染色的情况。

胚被染色的为无活力种子，未被染色的为有活力的种子。

五、实验结果品种测定方法测定种子总数有生活力种子粒数无生活力种子粒数种子生活率花生TTC 30 28 2 93% 品红30 28 2 93%黄豆TTC 30 30 0 100% 品红30 29 1 97% 实验结果可以得出选用TTC染色和品红染色得出的结果存在差异，用TTC染色得出的结果高于品红染色法。

结果分析：可能的原因是在清洗品红时没有清洗干净，品红粘在胚上，影响实验的观察，导致结果差异。

六、注意事项1、选取种子的时候，要尽量选取未发芽的种子，避免影响测定。

2、添加染色液时，要是然也尽量没过种胚，使种胚和染液充分接触。

实验六植物种子活力的快速测定一、实验目的1、掌握快速测定植物种子生命力的方法2、理解TTC/BTB/染料法测定种子活力的原理二、实验原理1、TTC法TTC法测定主要作物种子生活力要点2、染料（红墨水）染色法有生命力种子胚细胞的原生质膜具有半透性，有选择吸收外界物质的能力，一般染料不能进入细胞内，胚部不染色。

而丧失生命力的种子，其胚部细胞原生质膜丧失了选择吸收能力，染料可以自由进入细胞内，使胚部染色。

因此，可以根据种子胚部是否被染色来判断种子的生命力。

3、BTB（溴麝香草酚蓝）法活细胞呼吸释放CO2，CO2溶于水成H2CO3解离，使种胚周围环境酸度增加，用BTB 来反映酸度的改变。

BTB变色范围为pH6.0~7.6，酸性呈黄色，碱性呈蓝色，中间经过绿色（变色点为pH7.1）。

本实验观察种胚周围的黄色晕圈。

三、仪器与材料植物材料：小麦种子仪器设备：小烧杯；刀片；镊子；温箱实验试剂：0.12％～0.5％TTC溶液（TTC可直接溶于水，溶于水后，呈中性，pH7±0.5，不宜久藏，应随用随配）。

0.02％～0.2％靛红溶液或5％红墨水（酸性大红G）。

四、实验步骤1、TTC法（1）浸泡将待测种子在30 ～35 ℃温水中浸种（大麦、小麦6 小时，玉米 5 小时左右），以增强种胚的呼吸作用。

（2）显色取吸胀的种子200 粒，用刀片沿种子胚的中心线纵切为两半，将其中的一半置于 2 只培养皿中，每皿100 个半粒，加入适量的0.5% TTC 溶液，以覆盖种子为度。

然后置于30 ℃恒温箱中1 h 。

观察结果，凡胚被染为红色的是活种子。

将另一半在沸水中煮 5 min 杀死胚，作同样染色处理，作为对照观察。

（3）计算活种子的百分率2、红墨水染色法（1）将种子浸于30一35C温水中,5一8小时后捞出。

（2）随机取50粒种子,沿胚部切成两半,取带种胚的一半浸干5%红墨水溶液中,浸泡约半小时后用清水反复冲洗。

凡有生活力的种子,种胚无红色反应。

实验六种子生活力的快速测定一、实验目的1.加深对种子作用的理解；2.掌握种子生活力的测定方法。

二、实验原理在播种、交换和调运种子之前，都要及时了解种子的发芽率，以确定是否作为播种材料或引种种源。

因此，快速而又准确地测定种子生活力，对于及时调种和播种后确保全苗、壮苗具有极其重要的意义。

种子生活力是指种子能够萌发的潜在能力或种胚具有的生命力。

有生活力的种子进行呼吸作用，呼吸代谢途径催化产生的氢（H）有生活力的种子进行呼吸作用，呼吸代谢途径催化产种子生活力越强，代谢活动越旺盛，被染成红色的程度越深；死亡种子没有呼吸作用，不会将TTC还原成红色；种胚生活力衰退或部分丧失生活力，染成较浅或局部被染色；三、实验材料及用品材料：绿豆种子实验器皿：恒温箱、小烧杯、镊子、刀片实验试剂：0.5%TTC溶液（避光保存）四、实验步骤1. 浸种：将待测种子在 30 ～ 35 ℃温水中浸种，以增强种胚的呼吸作用。

2. 显色：a、种子处理：随即选取吸胀的种子 40 粒，小心剥去种皮，勿伤及种胚。

b、实验组处理：将处理好的20粒种子置于小烧杯中，加入0.5%TTC溶液，以刚好浸没种子为宜，恒温（32℃）中保1h。

c、对照组处理：另取20粒种子，于沸水浴中煮5min后，加入0.5%TTC溶液，以刚好浸没种子为宜，恒温（32℃）中保温1h。

3. 统计：染色结束，马上鉴定；倒出TTC溶液，用清水将种子冲洗1-2次，观察种胚乳染色情况。

有生活力种子：种胚全部或大部分被染成红色；无生活力种子：不被染色。

生活力的种子数计算种子生活力的比率= ————————X 100%实验组测定种子数五、实验现象与结果保温1h后种子染色情况：被染色的数目未被染色的数目未煮沸的种子14 6煮沸的种子 0 20表一种子染色情况记录表图1 未煮沸的种子染色情况图2 煮沸的种子染色情况生活力的种子数未煮沸的种子生活力的比率= ————————X 100% = 14/20 X 100% = 70%实验组测定种子数生活力的种子数煮沸的种子生活力的比率= ———————X 100% =0/20 X 100% = 0实验组测定种子数六、分析和讨论1.在实验中，去种皮时要小心防止伤及种胚，因为胚是种子中的活细胞，若损失可能使实验无法进行反应，造成实验的误差。