bcrabl融合基因荧光定量rtpcr诊断试剂盒说明书

BcrAbl融合基因荧光定量RTPCR诊断试剂盒说明书一、试剂盒采纳荧光定量RT-PCR方法，快速、特异、灵敏、定量地检测临床白血病标本中PML/RARα融合基因的情形, 约有90%的急性早幼粒细胞白血病患者骨髓细胞和血细胞中会显现PML/RARα融合基因。

因此检测PML/RARα融合基因已成为诊断急性早幼粒细胞白血病以及治疗后追踪残余白血病细胞的要紧依据。

二、试剂盒组成(20人份)RNA提取液（20ml /瓶）1瓶Taq酶（40μl /管）1管反应液I （165μl /管）1管定量标准品（50μl /管）8管反应液II （165μl /管）1管DEPC H2O （500μl /管）1管反应液Ⅲ（350μl /管）1管去离子水（1100μl /管）1管逆转录酶（25μl /管）1管三、检测步骤1．标本采集抽取外周血5ml抗凝后密封送检，或3ml新奇骨髓标本密封送检。

2．标本处理将5ml抗凝外周血或3ml骨髓加入等体积生理盐水稀释，取10ml离心管，先加入2ml淋巴细胞分离液，再取稀释好的标本5ml沿管壁缓慢加入，4℃静置5分钟后，2,000rpm离心15分钟，小心吸取白细胞层于1.5ml离心管中，离心留沉淀，用生理盐水洗沉淀一次，沉淀加入0.5ml RNA提取液，充分混匀。

室温静置5分钟，加入0.2ml氯仿，盖上管盖，用力振摇15秒，4℃静置2-3分钟，4℃12,000rpm离心15分钟，离心后反应管分三层，底层为微黄色的氯仿层，中间层及无色水相上层，水相上层的体积一样为提取液体积的60%。

小心将上层水相转移至灭菌的离心管中，加等体积异丙醇4℃静置10分钟，然后4℃，12,000rpm离心10分钟，离心前通常看不见RNA沉淀，离心后可见胶状沉淀。

去上清，加入400μl 75%的乙醇洗涤RNA沉淀，混匀，4℃7,000 rpm离心5分钟，小心吸去大部分乙醇。

将沉淀在室温空气中干燥10分钟。

(注：75% 乙醇配制时须用试剂盒中提供的DEPC H2O）。

人癌基因蛋白质（p190/bcr-abl）ELISA检测试剂盒,ELISA试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用标本：血清或血浆上海乔羽生物专业供应：使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本癌基因蛋白质（p190/bcr-abl）含量。

试验原理：p190/bcr-abl试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知p190/bcr-abl浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。

先将p190/bcr-abl和生物素标记的抗体同时温育。

洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。

再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。

产生颜色。

颜色的深浅和样品中p190/bcr-abl的浓度呈比例关系。

试剂盒内容及其配制试剂盒成份（2-8℃保存）96孔配置48孔配置配制96/48人份酶标板1块板（96T）半块板（48T）即用型塑料膜板盖1块半块即用型标准品：80ng/ml 1瓶（0.6ml）1瓶（0.3ml）按说明书进行稀稀空白对照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）即用型标准品稀释缓冲液1瓶（5ml）1瓶（2.5ml）即用型1瓶（6ml）1瓶（3.0ml）即用型生物素标记的抗p190/bcr-abl抗体亲和链酶素-HRP 1瓶（10ml）1瓶（5.0ml）即用型洗涤缓冲液1瓶（20ml）1瓶（10ml）按说明书进行稀释底物A 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型底物B 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型终止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型标本稀释液1瓶（12ml）1瓶（6.0ml）即用型自备材料1．蒸馏水。

2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。

3．振荡器及磁力搅拌器等。

安全性1．避免直接接触终止液和底物A、B。

一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。

2．实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。

一步法RT-PCR检测慢性粒细胞白血病BCR-ABL融合基因孟文彤;贾永前;黄纯兰【期刊名称】《华西医学》【年(卷),期】2004(19)2【摘要】目的 :建立一步法RT -PCR检测CML患者BCR -ABL融合基因的实验方法。

方法 :Trizol试剂提取细胞RNA ,用特异引物一步法RT -PCR检测BCR -ABL 融合基因 ,并作灵敏度试验。

结果 :本方法的灵敏度可达到 10pg水平。

对 2 5例CML患者检测BCR -ABL融合基因 ,阳性率为 10 0 % ,并可检测出BCR -ABL融合基因各种融合方式。

结论 :一步法RT -PCR检测BCR -ABL融合基因有很好的灵敏度和特异性 ,操作简便、快速 ,特别适用于临床检测。

【总页数】2页(P224-225)【关键词】一步法RT-PCR;检测;慢性粒细胞白血病;BCR-ABL融合基因;灵敏度【作者】孟文彤;贾永前;黄纯兰【作者单位】四川大学华西医院血液科【正文语种】中文【中图分类】R733.72【相关文献】1.一步法RT-PCR检测急性早幼粒细胞白血病PML-RARα融合基因 [J], 孟文彤;刘霆;吴俣;陈心传2.RT-PCR一步法检测慢性粒细胞白血病bcr/abl融合基因 [J], 朱广荣;陈丽娟;盛瑞兰3.评价Ph染色体和BCR-ABL融合基因检测在慢性粒细胞白血病诊断、治疗及微小残余病变监测中的临床意义 [J], 余蕙君;周义文;陈茜;何海洪4.评价Ph染色体和BCR-ABL融合基因检测在慢性粒细胞白血病诊断、治疗及微小残余病变监测中的临床意义 [J], 余蕙君[1];周义文[1];陈茜[1];何海洪[1]因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

How to Avoid the Generation of Nonspecific Amplification When Using TaqMan Assays-on-Demand Gene Expression ProductsData SheetIntroductionA common concern for real-time PCR users is reactions that produce low amplification efficiency. A reaction with low amplification efficiency will result in low reproducibility ofreplicates, later or delayed Cts for lower DNA input amounts, and lower limits of detection. Pre-designed assays (like AOD) are a convenient method for testing expression levels of known genes. Some AOD targets can give rise to amplification of secondary non-specific PCR products leading to erroneous data analysis and misinterpretation of expression profiles due to decreased sensitivity of detection. The results suggest that having a more robust chemistry and superior hot start technology, as employed in Brilliant III Ultra-Fast, can improve the specificity of amplificationfor these problematic primer and probe sets.In validating Brilliant III Ultra-Fast QPCR and QRT-PCR Master Mixes over many targets and a broad template dilution range, some TaqMan ‘Assays-on Demand’ (AOD) generated primer-dimers with a competitor’s fast QPCR master mix. Such PCR artifacts were not observed with the Brilliant III Ultra-Fast reagents, suggesting the novel hot start technology of Brilliant III prevents generation of non-specific secondary products, providing the user with a greater degree of confidence in their results.2Experimental MethodsTotal RNA from Stratagene Universal Human Reference RNA (cat. # 740000) was reverse transcribed using a mix of oligo(dT) and random primers (AffinityScript QPCR cDNA Synthesis kit; cat. # 600559) to generate cDNA. PCR assays (20µl) contained 1x primer/probe mix (GUS or TBP Assays-on-Demand) and cDNA concentrations ranging from 100-0.01 ng per reaction. Thermal cycling was performed on the ABI StepOnePlus Real-Time PCR system (see Figures 1 & 3 for details of cycling parameters for Brilliant III Ultra-Fast QPCR (cat. # 600880) Master Mix andCompetitor A master mix). The resulting PCR products (5 μL) were evaluated on an Agilent Bioanalyzer 2100 instrument using a DNA 1000 Chip (cat. # 5067-1504).ResultsBrilliant III Ultra-Fast QPCR Master Mix was compared against a commercially available master mix (Competitor A) on two TaqMan AOD gene expression products (GUS and TBP) over a 4-log dilution range (100, 10, 1, 0.1, 0.01 ng/Rxn). Figures 1 & 3 (A &B) show the amplification plots and standard curves of the two fast QPCR master mixes with the GUS and TBP gene expression products respectively. The results indicated a significant difference in amplification efficiencies between the two master mixes on both AOD targets, suggesting further analysis was required to determine the nature of the disparity.Figure 1.Amplification plots and corresponding standard curve of GUS primer/probe set (ABI Assays-On-Demand) using (A) Brilliant III Ultra-Fast Master Mix and (B) using Competitor A master mix on the StepOnePlus PCR system.Reactions (20ul) contained 1x primer/probe and human universal cDNA ranging from 100-0.01 ng/Rxn. Thermal cycling conditions for Brilliant III Ultra-Fast Master Mix were 3min at 95°C initial denaturation followed by 40 cycles of 5sec at 95°C and 10sec at 60°C. Thermal cycling conditions for Competitor A master mix were 20sec at 95°C initial denaturation followed by 40 cycles of 1 sec at 95°C and 20 sec at 60°C. The standard curves span four orders of magnitude resulting in an Rsq of 0.999 and amplification efficiency of 94.3% for the Brilliant III Ultra-Fast Master Mix and an Rsq of 0.996 and amplification efficiency of 79.4% for Competitor A master mix.D R n2.502.252.001.751.501.201.000.750.500.250.002 6 10 14 18 22 26 30 34 38 40CycleAmplification Plot3634323028262422.001 .002 .01 .02 .1 .2 1 2 345 10 20 30 100 200 1000Quantity Target Target 1 GUS Slope -3.466 Y-Inter 28.746 R 0.999 Eff%94.316: : :::C TStandard Curve1.51.41.31.21.11.0.9.8.7.6.5.4.3.2.1.0-.12 6 10 14 18 22 26 30 34 38 40CycleAmplification PlotD R n38363432302826242220.001 .002 .01 .02 .1 .2 1 2 345 10 20 30 100 200 1000Quantity Target Slope Y-Inter R Eff%C TStandard Curve3Figure 2.Trace of GUS qPCR products generated using Competitor A master mix (left) or Brilliant III Ultra-Fast Master Mix (right) run on Agilent 2100 Bioanalyzer. Presence of primer-dimers/non specific amplification is evident when Competitor A master mix is used for amplification.1.81.71.51.31.10.90.70.50.30.1-0.12 6 10 14 18 22 26 30 34 38 40CycleAmplification PlotD R n3735333129272523.001 .002 .01 .02 .1 .2 1 2 3 45 10 2030 100 200 1000Quantity C TStandard CurveTarget Target 2 TDP Slope -3.328 Y-Inter 30.396 R 0.998 Eff%99.735: : :::39383634323028262422QuantityC TStandard Curve.001 .002 .01 .02 .1 .2 1 2 3 45 10 2030100 200 1000Target Target 2 TBP Slope -3.73 Y-Inter 29.979 R 0.993 Eff%85.391: : :: :2.001.002 .01 .02 .1 .21 2 34 5 10 20 30 100 200 10002 6 10 14 18 22 26 30 34 38 40CycleAmplification Plot1.51.31.10.90.70.50.30.1-0.1D R nFigure 3.Amplification plots and corresponding standard curve of TBP primer/probe set (ABI Assays-On-Demand) using (A) Brilliant III Ultra-Fast master mix and (B) using Competitor A master mix on the StepOnePlus PCR system.Reactions (20ul) contained 1x primer/probe and human universal cDNA ranging from 100-0.01 ng/Rxn. Thermal cycling conditions for Brilliant III Ultra-Fast master mix were 3min at 95°C initial denaturation followed by 40 cycles of 5sec at 95°C and 10sec at 60°C. Thermal cycling conditions for Competitor A master mix were 20sec at 95°C initial denaturation followed by 40 cycles of 1sec at 95°C and 20sec at 60°C. The standard curves span four orders of magnitude resulting in an Rsq of 0.998 and amplification efficiency of 99.7% for the Brilliant III Ultra-Fast master mix and an Rsq of 0.993 and amplification efficiency of 85.4% for Competitor A master mix.In order to investigate the cause for the amplification efficiency discrepancy, all amplification products were run on an Agilent Bioanalyzer (Figures 2 & 4). Non-specific PCR products of low molecular weight (primer-dimers) were observed for Competitor A’s fast master mix with both AOD targets. Not surprisingly, the amount of these non-specific products increases as the amountSecondary non-specific product Competitor ABrilliant III Ultra-Fast Master MixSecondary non-specific productCompetitor ABrilliant III Ultra-Fast Master MixFigure 4.Trace of TBP qPCR products generated using Competitor A (left) or Brilliant III Ultra-Fast Master Mix (right) run on Agilent 2100 Bioanalyzer.Presence of primer-dimers/non specific amplification is evident when Competitor A master mix is used for amplification.ConclusionNon-specific amplification and primer-dimer formation can greatlyreduce amplification efficiency of the target gene since theycompete for reaction components during amplification, resultingin later Cts, lower sensitivity, decreased replicate reproducibility,and reduced dynamic range. These performance attributes maydrastically impact the end result. Pre-designed assays, such asAOD, have the potential to generate primer-dimers and throwinto doubt the validity of the analysis. The data presented hereDescription Quantity Reactions*Catalog No. Brilliant III Ultra-Fast QPCR Master Mix for ABI StepOnePlus and BioRad CFX96 2 x 2 ml400600880 Brilliant III Ultra-Fast QPCR Master Mix for ABI StepOnePlus and BioRad CFX (10 pack)20 x 2 ml4000600881 Brilliant III Ultra-Fast QRT-PCR Master Mix for ABI StepOnePlus and BioRad CFX96 2 x 2 ml400600884 Brilliant III Ultra-Fast QRT-PCR Master Mix for ABI StepOnePlus and BioRad CFX96 (10 pack)20 x 2 ml4000600885 Brilliant III Ultra-Fast SYBR Green QPCR Master Mix for ABI StepOnePlus and BioRad CFX96 2 x 2 ml400600882 Brilliant III Ultra-Fast SYBR Green QPCR Master Mix for ABI StepOnePlus and BioRad CFX (10 pack)20 x 2 ml4000600883 Brilliant III Ultra-Fast SYBR Green QRT-PCR Master Mix for ABI StepOnePlus and BioRad CFX96 2 x 2 ml400600886 Brilliant III Ultra-Fast SYBR Green QRT-PCR Master Mix for ABI StepOnePlus and BioRad CFX96 (10 pack)20 x 2 ml4000600887Learn more about Brilliant III Ultra-Fast QPCR Master Mixes and how they can improve your quantification on any Real-Time PCR instrument at /brilliant3.Find an Agilent customer center in your country:/chem/contactsU.S. and Canada1-800-227-9770*****************************Asia Pacific************************Europe************************This item is intended for Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures. Information, descriptions and specifications in this publication are subject to change without notice.Agilent Technologies shall not be liable for errors contained herein or for incidental or consequential damages in connection with the furnishing, performance or use of this material.SYBR® is a registered trademark of Molecular Probes.© Agilent Technologies, Inc. 2010Printed in the USA, February 1, 20105990-5401ENillustrates the importance of the QPCR master mix on the final result. The novel Taq mutant and new hot start technology of Brilliant III Ultra-Fast Master Mixes reduces the need for more extensive assay validation and provides more reliable and consistent data across a wider range of different assays.The versatile Brilliant III Ultra-Fast QPCR reagents offer the greatest flexibility in master mixes delivering superior performance across an array of quantitative applications on any Real-Time PCR platform.。

一步法R T-P C R试剂盒使用说明书-CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1一步法RT-PCR 检测试剂盒 (一步法RT-PCR 扩增试剂盒)(目录号HS0612-2)产品包装保存条件-20℃ 产品简介本试剂盒是专为一步法RT-PCR 实验研制，逆转录和PCR 在同一反应体系中进行，反应过程中无需添加试剂，无需打开管盖，在避免污染的同时提高了检测灵敏度和实验效率。

本试剂盒包括全新高效逆转录酶、快速热启动DNA 聚合酶，同时包含适用于逆转录和PCR 扩增的反应缓冲液和实验中所必需的反应组分。

经过重组表达的SuperRT 逆转录酶RNase H 活性缺失，减少了逆转录反应中RNA 的降解，更容易获得全长的cDNA 。

该逆转酶逆转录效率高，可对少量 RNA 模板进行良好的逆转录反应。

SuperRT 逆转录酶与RNA 亲合性高，能通读GC 含量高，二级结构复杂的RNA 模板，获得高产量的cDNA 。

PCR 反应使用的DNA 聚合酶具有扩增效率高、延伸速度快的优良性能。

独特的缓冲体系使逆转录酶和聚合酶同时发挥最大功效。

使用该试剂盒能够方便快捷的在同一个反应管内完成逆转录和PCR 扩增反应。

使用本试剂盒扩增得到的目的产物3′端附有一个″A ″碱基，可直接用于T/A 克隆。

北京厚生博泰科技有限公司 Beijing Hooseen Biotech Co., Ltd.产品特点1. 效率高，可以高效转录GC含量高，二级结构复杂的RNA模板。

2. 耐热性及稳定性强。

3. 操作简单迅速,最大限度的避免污染。

4. 独特的缓冲体系使逆转录酶和聚合酶同时发挥最大功效。

使用方法（注意：1 ng ~ 5 μg总RNA可建立20 μl反应体系，如果总RNA量大3. 涡旋震荡混匀，短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。

4. 将热循环仪预热到45℃，将PCR管置于热循环仪中，进行RT-PCR反应。

反应条件：注意：1）一般PCR实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，退火时间一般为20 ~ 30秒，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。

b、按以下条件进行PCR反应94℃3m i n94℃30s25-35循环***37℃-65℃**30s72℃****45s-7min72℃5min注：*RT产物可增加至5μl 。

**退火温度根据引物Tm值调整，一般为Tm-5℃。

Control引物退火温度为55℃。

*** 当实验样品RNA特别稀少时，可将循环数增加至40-45循环。

**** 延伸时间根据PCR产物大小确定，一般1kb/min 。

Control引物延伸时间45s。

c、反应结束后，取3-5 μl PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，确认PCR反应产物。

如果此PCR产物需用于以后实验，应将PCR产物冷冻保存。

RNA control反应时，退火温度55度，30个循环，扩增片段大小为500bp。

使用提示1. RNA模板可以采用总RNA或mRNA，建议使用Biozol(BSC51M1)制备高质量RNA；2. RT实验应避免RNase污染，可采用以下措施：1）因人的皮肤表面和唾液都有RNase，因此实验中应戴一次性手套和口罩；2） RT实验应使用专门的仪器和耗材，建议在专门区域操作RNA；3） RT实验相关耗材应使用干热灭菌（180℃，60分钟）或用0.1％ DEPC(焦碳酸二乙酯)水溶液在37℃处理12小时后在121℃高压灭菌30分钟；3. AMV逆转录酶，DNA聚合酶和RNase抑制剂在取用之前应离心后再吸取，吸取时动作要慢，使用后应尽快放回-20℃；4. dNTP应避免反复冻融以免失效；5. 引物的选择可根据具体情况，Oligo-dT适用于具有PolyA尾的RNA(一般是真核生物的mRNA)，Random Hexamer Primer适用于所有RNA(包括mRNA,rRNA,tRNA等)，尤其适用于有复杂二级结构的RNA，特异性引物适用于已知模板序列的RNA；6. PCR反应中MgCl2浓度可依据不同条件进行调整，当目的片段长度大于2kb时，我们建议增加MgCl2浓度，以0.5mM间隔梯度增加。

宝生物荧光定量PCR使用说明宝生物荧光定量PCR（Quantitative Polymerase Chain Reaction）是一种基于荧光技术的PCR方法，用于测量目标DNA分子或RNA的数量。

它具有高灵敏度、广泛的动态范围和精确测量能力，被广泛应用于分子生物学研究、临床诊断和药物研发等领域。

本文将详细介绍宝生物荧光定量PCR的使用说明。

一、宝生物荧光定量PCR实验前的准备1.根据实验需要准备所需试剂，包括PCR反应体系的组分（如引物、荧光探针、酶和模板DNA/RNA），以及样品处理所需试剂（如提取试剂盒、RNA提取试剂盒等）。

2.准备实验所需的设备和耗材，如实时荧光PCR仪、离心机、PCR微孔板等。

3.检查PCR仪和离心机的工作状态，确保设备正常运行。

4.检查试剂的保存条件和有效期，确保试剂可用。

二、样品处理及转录本合成1.根据实验需要，选取适当的样本类型（如组织、细胞、血液等）进行处理。

对于RNA分析，需要进行RNA提取流程。

2.根据提取试剂盒的说明书，使用相应的提取试剂对样品进行RNA/DNA的提取。

3.对提取的RNA/DNA进行纯度和浓度检测，确保样品质量和浓度符合实验要求。

4.采用逆转录反应，将RNA转录为cDNA。

根据逆转录试剂盒的说明书进行操作。

三、引物和荧光探针设计及合成1.根据目标序列，设计引物和荧光探针。

确保引物和荧光探针与目标序列高度特异性结合，避免非特异性放大。

2.荧光探针通常是使用DNA合成技术进行合成。

确保合成的荧光探针的纯度和浓度符合实验要求。

四、PCR反应液的配制1. 根据PCR反应的需要，确定反应体系的组分和配比。

一般包括PCR引物、荧光探针、PCR酶（Taq DNA聚合酶）、反应缓冲液、模板DNA/RNA、dNTPs等。

2.按照指导手册中的配方比例，将上述试剂按需求加入PCR反应管中。

注意保持反应试剂的冷藏状态，避免反应体系中出现污染。

五、PCR反应条件的设置1. 根据目标序列的特点，设定PCR反应的温度和时间参数。

Catalog No. RT0411-01产品简介2×SYBR Green Mix（With ROX）是使用染料法（SYBR GreenⅠ）进行实时荧光定量PCR扩增反应的预混体系，包括Hotstart Taq DNA Polymerase，Buffer，dNTPs，SYBR Green I荧光染料、Mg2+和ROX校正染料。

本品含有经化学修饰的全新高效的热启动酶Hotstart Taq DNA Polymerase，在常温下没有聚合酶活性，有效避免在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增，酶的激活须在95℃下孵育10 分钟。

主要用于基因组DNA靶序列和RNA反转录后cDNA靶序列的检测。

本品所含的荧光染料SYBR Green I可以与所有的双链DNA结合，使该产品可用于不同靶序列的检测而不需合成特异性标记探针。

所含的ROX染料可校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差, 适用于以ROX作为校正染料的所有荧光定量PCR仪。

产品包装保存条件-20℃避光保存，尽量避免尽量避免反复冻融。

注意事项1 使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。

2 本产品中含有SYBR Green I 荧光染料和ROX 染料，保存本产品或配制PCR 反应液时应避免强光照射。

3 避免反复冻融本品，反复冻融可能使产品性能下降。

如果在短期内需要频繁使用，可在2-8℃保存。

使用方法以下举例为常规PCR 反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1.PCR反应体系：注：引物浓度以0.1-1.0 μM终浓度作为设定范围的参考。

扩增效率不高时，提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度; DNA模板的量以10-100 ng基因组DNA或1-10 ng cDNA为参照。

2. PCR反应程序：两步法PCR：步骤温度时间预变性95℃10 min变性95℃15 s退火/延伸60℃ 1 min融解曲线分析95℃15 s60℃ 1 min95℃15 s60℃15 s注意：1）本产品所采用的热启动酶须在预变性95℃、10 min条件下实现酶的活化。

ICS11.100C 44YY 中华人民共和国医药行业标准YY/T XXXX—XXXXB族链球菌核酸检测试剂(荧光PCR法) Group B Streptococcus DNA detection kit (fluorescent PCR)（征求意见稿）XXXX-XX-XX发布XXXX-XX-XX实施目次前言.................................................................................................................................................................... I I 1范围.. (1)2规范性引用文件 (1)3要求 (1)4试验方法 (2)5 标签和说明书 (2)6 包装、运输、贮存 (3)附录A（资料性附录） (4)参考文献 (5)前言本标准按照GB/T1.1-2009 《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》给出的规则起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。

本标准由国家食品药品监督管理总局提出。

本标准由全国医用临床检验实验室和体外诊断系统标准化技术委员会(SAC/TC 136)归口。

本标准起草单位：本标准主要起草人：B族链球菌核酸检测试剂（荧光PCR法）1 范围本标准规定了B族链球菌核酸检测试剂盒的要求、实验方法、标识、标签、使用说明书、包装、运输和贮存。

本标准适用于通过荧光PCR法原理，定性检测新生儿特定部位或女性阴道、直肠分泌物及其培养物中的B族链球菌，以快速检出B族链球菌核酸的诊断试剂盒。

2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。

凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T191 包装储运图示标志（ISO 780）YY/T 0466.1医疗器械用于医疗器械标签、标记和提供信息的符号第1部分：通用要求（ISO 15223-1）GB/T 29791.1 体外诊断医疗器械制造商提供的信息（标示）第1部分：术语、定义和通用要求3 要求3.1 外观外包装应符合制造商的要求。

R T-P C R试剂盒说明书-CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1RT-PCR试剂盒说明书公司：TIANGENOrder:0Toll-free:800-990-6057/400-810-6057TIANGEN BIOTECH (BEIJING) CO.,LTD版本号：KR121221TIANScript RT KitTIANScript cDNA第一链合成试剂盒目录号：KR104储存条件：-20℃保存。

产品介绍：TIANScript RT Kit（cDNA第一链合成试剂盒）是专为两步法RT-PCR第一步实验配制的，具有高灵敏度的RT-PCR反应系统，可以从极低量的总RNA或poly (A)+ RNA合成第一链cDNA。

与PCR反应相结合，可用于检测稀有基因的表达、从极少量细胞中定量检测特定mRNA的表达水平、克隆特定基因的cDNA 片段等。

产品特点：合理配备了与cDNA第一链合成反应相关的各种组分，该试剂盒中的TIANScript M-MLV具有高效的逆转录酶活性，对后续的PCR或定量PCR实验兼容性好，适合于各种PCR耐热聚合酶。

注意事项：1. 用于cDNA合成反应的溶液试剂尽量可能用DEPC进行处理，并在高压灭菌后使用。

有些试剂不能高压灭菌时，首先用经过灭菌的器具、水等配制溶液后，再将溶液进行过滤除菌处理。

2. RNA样品要避免基因组DNA污染。

3. 避免多次反复冻融RNA，使RNA保持在冰浴中处融化状态。

4. 试剂盒的各组成成分应在-20℃保存。

5. cDNA产物应置于-20℃保存。

操作步骤：1. 在冰浴的无核酸酶的离心管中加入如下反应混合物：1-5 μg总RNA或50-500 ng mRNA；2 μl oligo (dT)15或2 μl Random或2 pmol基因特异引物；2 μl Super Pure dNTPs mM each);补RNase-Free ddH2O定容至μl。